通过粪便代谢组学方法研究何首乌改善阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)认知障碍的作用机制,并比较不同蒸晒程度何首乌在改善AD模型小鼠认知功能上的作用差异,探讨其炮制原理.选取48只5月龄APP/PS1小鼠随机分为模型组、阳性组、生品组、三蒸三晒组、六蒸六晒组、九蒸九晒组,另取7只同窝阴性对照小鼠作为空白组.灌胃给药150 d后,采用巴恩斯迷宫和避暗实验评估各组小鼠的学习记忆能力,并采集粪便样本进行广泛靶向代谢组学检测,结合主成分分析(PCA)和正交偏最小二乘判别分析(OPLS-DA)等多元统计方法对小鼠粪便中的代谢物进行分析.通过对比模型组和不同炮制品组的行为学结果显示,六蒸六晒组在巴恩斯迷宫定位航行测试中潜伏期显著缩短(P＜0.05),空间探索实验中错误次数显著减少(P＜0.05);避暗实验中第一次进入暗箱的潜伏期显著延长(P＜0.05),其综合改善AD模型小鼠的学习记忆能力最佳.代谢组学结果显示,与模型组相比,筛选出其他各组差异代谢物的数量排列顺序:六蒸六晒组＞九蒸九晒组＞生品组＞三蒸三晒组,分别包含146、120、95和81种潜在生物标志物.其中,与AD疾病相关的差异代谢物共有16种.基于炮制程度的进一步比较,发现六蒸六晒何首乌组在总代谢通路的调节数量最多,主要回调戊糖和葡萄糖醛酸相互转化和调节氨基酸合成代谢等途径.综上,何首乌经炮制后改善APP/PS1小鼠的学习记忆能力的作用机制可能与改善氨基酸代谢以及提高机体能量代谢水平有关,以六蒸六晒炮制程度最佳.

目的 探讨何首乌在九蒸九晒和九蒸九烘干燥工艺中,其外观性状、浸出物和化学成分的变化规律.方法 分别采用九蒸九晒和九蒸九烘炮制工艺制备样品,观察外观性状;参考 2020 年版《中国药典(四部)》通则 2201 浸出物测定法测定醇溶性浸出物;建立不同炮制样品的高效液相色谱指纹图谱,以二苯乙烯苷峰为参照峰,导入中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2012.130723 版),鉴定其中的化学成分.结果 何首乌炮制后饮片颜色逐渐加深,显黑褐色或棕褐色,质硬,断面角质样,第 9 次炮制后有明显蜡样光泽,晒干品和烘干品无明显差异;醇溶性浸出物在 2 种炮制过程中均逐渐减少并趋于平稳.生品和炮制品的高效液相色谱图中共检出 22 个峰,其中 7 个共有峰,指认出没食子酸、5-羟甲基糠醛、二苯乙烯苷、大黄素、大黄素甲醚,发现 7 个新成分.3 批炮制品中,第 1 批烘品中 5 种成分的含量比晒品稍高,第 2 批和第 3 批晒品中 5 种成分的含量比烘品稍高.结论 何首乌经上述 2 种工艺炮制后的结果无显著差异,可考虑用九蒸九烘的现代工艺代替传统的九蒸九晒工艺.

目的 比较何首乌不同炮制品水提物的急性毒性大小,为何首乌不同炮制品的临床安全用药提供毒理学实验数据.方法 按照2015版《中国人民共和国药典》标准和安徽省、浙江省、河南省、上海市及北京市的地方炮制规范,分别制备何首乌黑豆煮组,黑豆汁蒸6h组,隔水炖组,清蒸组,黑豆汁蒸18h组五种炮制品.根据经典急性毒性实验法测定其各自的灌胃给药的半数致死量(LD50)、最大耐受量(MTD)和最大给药量(MFD),连续观察14天,比较不同炮制品水提物急毒大小和表现差异.结果 何首乌不同炮制品水提物除生品为MTD外,其余各组均为MFD,主要毒性表现为腹泻、怠动、毛色不华,死亡前表现是震颤、呼吸困难.生品组MTD:107.10 g·kg-1·d-1,相当于临床70 kg人每kg体重日用量的1249.50倍;黑豆煮组、黑豆汁蒸6h组、隔水炖组、清蒸组、黑豆汁蒸18h组的MFD实验结果按生药量计算分别为309.60、328.32、336.96、345.60和354.24g·kg-1·d-1,分别相当于当于临床70kg人每kg体重日用量的1 806.00、1915.20、1 965.60、2 016.00和2 066.40倍.结论 何首乌对小鼠急毒强度依次为:生品组＞黑豆煮组＞黑豆汁蒸6h组＞隔水炖组＞清蒸组＞黑豆汁蒸18 h组.炮制对何首乌确有减毒作用,炮制方法不同,减毒效果也存在差异.

目的 比较何首乌不同炮制品醇提物对小鼠急性毒性的大小.方法 采用60％乙醇提取的方法,按照《中华人民共和国药典》2015年版和上海、北京、安徽、浙江与河南地方炮制规范,分别制备何首乌黑豆煮组,黑豆汁蒸6h组,隔水炖组,清蒸组,黑豆汁蒸18 h组的五种炮制品,运用小鼠经典急性毒性的半数致死量LD50最大耐受量MTD、最大给药量MFD实验方法,分别进行何首乌不同炮制品醇提物对小鼠急性毒性比较研究.结果 何首乌生品及不同炮制品醇提物的急毒结果均为最大耐受量(MTD),毒性表现主要为俯卧、怠动,死亡前表现为全身颤抖、呼吸困难,并且在药后5h内出现死亡.生品组、黑豆汁蒸6h组、黑豆汁蒸18 h组、黑豆煮组、隔水炖组、清蒸组MTD值分别为101.08、140.76、227.52、122.04、141.48和163.88 g·kg-1,分别相当于临床70.0 kg成人每kg体重日用量的1 175.3、823.2、1 330.5、713.7、827.4与958.4倍.结论 何首乌不同炮制品醇提物毒性强度依次为:生品组＞黑豆煮组＞黑豆汁蒸6组＞隔水炖组＞清蒸组＞黑豆汁蒸18 h组,提示何首乌不同炮制方式可影响其醇提物的急性毒性大小.

目的:通过Box-Behnken响应面法优化高压蒸法炮制何首乌工艺,并与传统炮制工艺进行比较.方法:以蒸制温度、蒸制时间和干燥温度作为考察因素,以多糖含量、二苯乙烯苷含量和两指标归一化值作为评价指标,采用Box-Behnken响应面法考察了各个因素对高压法炮制工艺何首乌中多糖和二苯乙烯苷含量的影响,并比较高压蒸法炮制品与传统炮制品中多糖和二苯乙烯苷含量的差异.结果:高压蒸法炮制何首乌的最佳工艺为:蒸制温度为125.4℃、蒸制时间为3.1 h、干燥温度为52℃.优化的高压蒸法炮制的何首乌中多糖和二苯乙烯苷含量分别为传统炮制法的1.24和5.26倍.结论:利用Box-Behnken响应面法优化高压法炮制何首乌,方法简便,预测性良好.

目的 观察在常规剂量下使用何首乌不同炮制品的水煎液、醇提液、配方颗粒对大鼠肾脏的损伤情况及对肾细胞凋亡及相关蛋白表达的影响.方法 SD大鼠雌雄各半,分别按照体重随机分为7组,即正常对照组(CG)、生首乌水提组(SW组)、制首乌水提组(ZW组)、生首乌醇提组(SA组)、制首乌醇提组(ZA组)、生首乌配方颗粒组(SK组)、制首乌配方颗粒组(ZK组).其中正常组给予蒸馏水灌胃,其余各组给予相应药液灌胃[生药6 g/(kg·d)],连续给药30 d.实验结束时,检测血清尿素氮(BUN)、肌酐(Crea)、尿酸(UA)、β2-微球蛋白(β2-MG)的含量变化,并观察肾脏病理组织形态变化、细胞凋亡情况.结果 血清尿素氮含量各给药组均较正常对照组显著降低(P< 0.05,P< 0.01);肌酐、尿酸、β2-微球蛋白含量各给药组均较正常对照组有升高趋势,制首乌醇提药液组β2-微球蛋白含量显著升高(P< 0.05).TUNEL染色结果表明,各给药组平均光密度值相对于正常对照组均有显著升高(P< 0.01),生首乌醇提药液组BAX蛋白表达水平升高最明显(P < 0.05,P < 0.01).结论 何首乌以生药6 g/kg的剂量长期给药对肾脏有一定的损伤,其损伤程度为醇提法>配方颗粒>水提法.建议临床治疗需谨慎应用何首乌,宜采用水煎剂,需定期检测肾功能(特别是β2-MG),以免对病人引起不可逆的肾损伤.

目的:研究不同炮制方法及不同提取溶剂对何首乌中主要成分含量的影响.方法:采用黑豆汁蒸法和清蒸法对生何首乌进行炮制,分别用水、50％乙醇、70％乙醇、90％乙醇对生何首乌、黑豆汁制何首乌、清蒸制何首乌和市售制何首乌4种饮片进行提取,采用高效液相色谱法同时测定各样品中4种主要成分没食子酸、二苯乙烯苷、大黄素、大黄素甲醚的含量.结果:3种何首乌炮制品的4种提取液中4种主要成分的含量均较生品中更高;没食子酸以水提时含量最高,二苯乙烯苷以90％乙醇提取时含量最低,大黄素和大黄素甲醚以50％和70％乙醇提取时含量较高.结论:不同炮制方法和提取溶剂能明显影响何首乌中主要成分的含量;各炮制品中各成分的含量变化未呈现一定的规律性.

目的:研究何首乌炮制品(一蒸一晒到九蒸九晒)中6个主要有效成分与抗衰老功效之间的相关性,初步探讨何首乌炮制品抗衰老的作用机制.方法:采用超高效液相测定不同何首乌炮制品中6个主要有效成分的含量,色谱柱为ACQUITY UPLC(R)HSS T3 C18色谱柱(100mm×2.1 mm,1.8 μm),流动相为乙腈-0.1％磷酸水(梯度洗脱),检测波长为280 nm,进样量1μL,流速0.4 mL· min-1,柱温30℃.通过秀丽线虫实验,验证首乌炮制品抗衰老的功效.最后采用灰度关联分析法,得出各有效成分对抗衰老作用的贡献大小.结果:在一定范围内,2,3,5,4-四羟基二苯乙烯葡萄糖苷、大黄素等6个主要有效成分的进样浓度与峰面积线性关系良好,且具有良好的精密度、稳定性、重复性以及加样回收率.何首乌炮制品中除大黄素、大黄素甲醚外,其他成分所占比例逐渐减少.通过灰度关联分析法得出,何首乌炮制品中6个主要有效成分对抗衰老贡献大小的顺序:大黄素＞大黄素-8-O-β葡萄糖苷＞大黄素甲醚＞儿茶素＞2,3,5,4-四羟基二苯乙烯葡萄糖苷＞没食子酸.结论:何首乌炮制品抗衰老的功效是内部众多有效成分共同作用的结果,各有效成分与抗衰老作用关联度虽有所不同,但均发挥着相应的作用.

目的 通过测定黑豆汁制何首乌中大豆苷元的含量对其质量进行评价.方法 采用薄层色谱法对黑豆汁制何首乌、生何首乌、清蒸制何首乌及对照品中的大豆苷元进行定性分析;采用高效液相色谱法对其大豆苷元含量进行定量分析.结果 黑豆汁制何首乌薄层色谱中的荧光斑点与大豆苷元对照品色谱的荧光斑点位置对应;而生何首乌、清蒸制何首乌色谱中,与大豆苷元对照品相应的位置上不显相同颜色的荧光斑点.通过高效液相色谱测定得到大豆苷元进样量X(μg)与其对应的峰面积值Y的回归方程为:Y=12.647X+197.35(r=0.9999),线性范围为1.65～16.56μg,平均回收率98.72％(n=5,RSD=1.54％).黑豆汁制何首乌大豆苷元含量为(12.34±1.26)mg/g;在生何首乌、清蒸制何首乌中未检测出大豆苷元.结论 通过对黑豆汁制何首乌中大豆苷元的鉴定,可有效区分黑豆制何首乌与其它炮制品,从而达到对制何首乌质量评价及鉴别的目的.

目的:研究何首乌生品、炮制品及其主要成分的体外抗氧化活性,探讨何首乌的炮制机理及其抗氧化作用物质基础.方法:采用2,2-二苯基-1-苦肼基(DPPH)自由基清除实验及铁离子还原(FRAP)法抗氧化能力检测方法评价何首乌炮制前后及其主要化学成分的体外抗氧化活性.结果:DPPH自由基清除实验中,何首乌生品(S),随着乙醇浓度的增加,对DPPH自由基的清除率也增加,制品(Q/H/Z)中,以90％乙醇提取所得样品的平均清除率为最高,其次是水、70％乙醇和50％乙醇提取物;FRAP法检测结果显示何首乌生品(S)、黑豆汁制品(H)、清蒸制品(Q)及市售制品(Z)的FRAP值范围分别为2.23～9.27 mmol·L-1,5.94～9.66 mmol·L1,5.74～10.49 mmol·L-1,3.99～10.40 mmol· L-FeSO4,不同溶剂提取物的FRAP值由大到小为70％醇＞50％醇＞水＞90％醇;何首乌的组成成分中虎杖苷、白藜芦醇、槲皮苷、槲皮素、芦丁、儿茶素、金丝桃苷、二苯乙烯苷和没食子酸有明显的清除DPPH自由基的作用,没食子酸、槲皮素、槲皮苷、儿茶素、芦丁和白藜芦醇的FRAP值较高,具有较强的抗氧化作用.结论:何首乌炮制前后均有较强的抗氧化作用,虎杖苷、白藜芦醇、槲皮苷、槲皮素、芦丁、儿茶素、金丝桃苷、二苯乙烯苷和没食子酸对何首乌的抗氧化活性有一定的贡献作用.