目的 基于超分子"印迹模板"理论,划分、整合六味地黄浓缩丸(Liuwei Dihuang Concentrated Pills,LDCP)指纹图谱,将其表征为物质单元并进行谱量学质量控制与评价研究.方法 采用匹配频数统计矩法划分、整合与表征50批LDCP指纹图谱物质单元,根据朗伯-比尔定律将各物质单元总峰面积与出膏率进行多元线性回归建立谱量学方程,进行谱量学研究.结果 50批LDCP的UPLC指纹图谱被划分为35个物质单元(A1～A35),经多元线性回归得到35个物质单元(A1～A35)总峰面积与出膏率的谱量学方程:PT=23.390+0.041 06A1-9.100× 10-3A2+0.01468A3+0.027 98A4-0.033 61 A5-0.042 25 A6-6.608× 10-3 A7-0.025 90 A8-0.145 60 A9+0.165 00 A10-0.027 50 A11+3.408× 10-3 A12-0.021 03 A13-1.070X 10-3 A14+2.833 × 10-5 A15-8.774 × 10-3 A16+0.018 52 A17-1.882 9× 10-3 A18+0.023 61 A19+8.566× 10-3 A20+0.013 94 A21-5.894×10-3A22-0.01227A23-0.014 91A24+1.792×10-3A25-1.571 × 10-4A26-3.942× 10-3A27-0.05480A28+0.083 15 A29+0.11930A30-0.06071 A31-0.08342A32+0.01496A33-2.989×10-3 A34+0.063 17A35(r=0.915).结论 该方法能以较高准确度划分、整合并表征LDCP指纹图谱物质单元,且保留原指纹图谱整的总量统计矩特性,其谱量学方程能较好的预测LDCP的出膏率与平均出膏率,可为LDCP的质量控制提供新思路与新方法.

目的 考察不同类型六味地黄丸的物质组释放动力学特征,并对其进行可视化表征.方法 运用中药物质组释放动力学理论,参照《中国药典》2015年版,采用桨法装置测定不同类型六味地黄丸各时间点物质组释放率,拟合释放曲线,计算释放动力学特征参数;以市售最常见的水蜜丸、浓缩丸为参比制剂,对其他类型的六味地黄丸进行f2相似因子的计算评价;并采用物质组释放图谱、释放增量图谱,以期能够定量、整体并可视化评价不同类型六味地黄丸的物质组释放动力学特征.结果 不同类型六味地黄丸的物质组释放动力学特征符合Weibull释放模型,计算各Weibull分布参数T50和Td,除浓缩丸与水泛丸外,各类型丸剂组间均有显著性差异(P＜0.05),并运用f2相似因子法对比,发现不同类型六味地黄丸物质组释放具有一定的差异和相似性,通过物质组释放图谱与释放增量图谱可直观可视化地评价各类型丸剂的释放动力学特征.结论 通过物质组释放动力学可以定量、整体并可视化地评价不同类型六味地黄丸的释放动力学特征,与古语所述“水丸取其易化,蜜丸取其缓化,糊丸取其迟化,蜡丸取其难化”基本相符.

目的:通过高效液相色谱法(HPLC)对20个不同批次同一厂家的六味地黄丸进行指纹图谱的建立,并对其主要成分进行分析.方法:所有20个批次的六味地黄丸均按照统一方法配制供试品溶液.本研究进样体积为2μL;色谱柱C18限定窄径为2.1 mm,短柱限定为100 mm,填料粒径限定为1.7μm,温控箱将色谱柱的温度限定为35℃.流动相A的主要由0.01％磷酸和超纯水混合而成;流动相B的主要由乙腈和超纯水混合而成,研究中所有高效液相色谱均采用梯度洗脱程序.前期对HPLC法进行常规的方法学考察,当所有方法学考察均可靠良好时,再对所有批次六味地黄丸进行指纹图谱的建立,然后做进一步的相似度分析和主要成分分析.结果:1)六味地黄丸中主要成分梓醇、马钱苷、山药素Ⅰ均可见良好的分离度,最重要的是这3中成分之间并不存在任何内源性的干扰物质,显示各个成分的专属性均较好.2)对照品线性回归分析结果显示:梓醇对照品回归方程:Y=4110X+798.99;马钱苷对照品回归方程:Y=4201X-6.0134;山药素Ⅰ回归方程:Y=2632X+115.38.3)梓醇、马钱苷和山药素Ⅰ精密度试验的RSD值分别为0.32％、0.51％、0.27％;稳定性试验RSD值分别为1.98％、2.13％、1.11％;重复性试验RSD值分别为1.35％、1.16％、1.02％;加样回收试验的RSD值分别为2.37％、1.54％、1.93％,均符合当RSD值<3％时,说明采用HPLC这一测定方法是可靠的.4)建立六味地黄丸HPLC指纹图谱后,经过相似度计算,从S1-S20的相似度均大于0.90,说明20个批次的六味地黄丸的样品相似度良好.5)20批不同批次的六味地黄丸中中梓醇、马钱苷和山药素Ⅰ的含量差异无统计学意义,20个不同批次的六味地黄丸中梓醇、马钱苷和山药素Ⅰ的含量的平均值分别为(2.176±0.290)mg/g、(1.875±0.119)mg/g、(1.776±0.095)mg/g.结论:采用HPLC建立六味地黄丸指纹图谱,20个不同批次六味地黄丸经过相似度良好,且各主要成分分析间未见明显差异.

该实验将指纹图谱技术和“组分结构”理论联合使用模式对六味地黄浓缩丸的质量进行控制与评价.采用Agilent 5 TC-C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5 μm),以0.1％甲酸水溶液-乙腈为流动相,流速1.0 mL·min-1,柱温30℃,检测波长242nm,进样量1O μL,建立了六味地黄浓缩丸HPLC指纹图谱,标定了17个共有峰,相似度为0.550～0.997,表明各批次六味地黄浓缩丸的质量差异比较大.表征了六味地黄浓缩丸中牡丹皮组分结构特征的构成要素,在此基础上,进一步解析六味地黄浓缩丸中牡丹皮的组分结构特征,发现不同厂家生产的六味地黄浓缩丸中牡丹皮组分结构的构成要素的含量以及量比关系差别较大,说明不同批次制剂产品内在质量的差异性.通过以上研究所建立的指纹图谱技术、“组分结构”理论联合使用模式为六味地黄浓缩丸质量评价提供了分析方法和探究基础.

目的 基于"成分反映活性,活性指向功效"的中药质量控制研究思路,以网络药理学筛选得到的活性成分为评价指标,对六味地黄系列制剂进行再评价研究.方法 采用网络药理学技术筛选出六味地黄系列制剂,如丸剂(大蜜丸、浓缩丸)、胶囊剂(胶囊、软胶囊)、颗粒剂及口服液治疗2型糖尿病、高血压和肾病综合征的共有核心活性成分,并以其中度值较高的13种活性成分(槲皮素、山柰酚、β-谷甾醇、泽泻醇B、泽泻醇B23乙酸酯、花旗松素、羟基莞花素、豆甾醇、啤酒甾醇、常春藤苷皂元、儿茶素、薯蓣皂苷元及亚麻酸乙酯)的量作为考察指标,采用HPLC法通过切换波长同时测定,色谱柱为Waters 2695 Supersil C18(250 mm×4.6 mm,5 μm),流动相为甲醇-0.08％磷酸水溶液,梯度洗脱,体积流量为1.0 mL/min,柱温为30 ℃,进样量为10 μL,检测波长:先在全波长200?400 nm下测定,后根据对照品最大吸收波长切换检测波长;并结合主成分分析(PCA)、相关性分析及聚类分析(CA)法综合评价和比较六味地黄系列制剂的质量差异.结果 相同生药量下,六味地黄系列制剂中成分的含量存在显著差异(P<0.05),且部分制剂中部分成分缺失,软胶囊未检测到槲皮素、儿茶素,仅大蜜丸和颗粒检测到β-谷甾醇;相关性分析结果中六味地黄系列制剂之间的相似度为0.170?0.897,且大部分集中在0.500?0.600,大蜜丸与颗粒剂相似度最高,浓缩丸和胶囊、软胶囊及口服液呈极显著相关(P<0.01),和大蜜丸、颗粒剂呈显著相关(P<0.05);PCA和CA结果中六味地黄系列制剂被归为2类,其中大蜜丸、颗粒被归为一类,浓缩丸、胶囊、软胶囊、口服液被归为一类.结论 六味地黄系列制剂存在一定的内在质量差异,在一定程度上揭示了六味地黄系列制剂说明书中所标示功能主治完全一致的现象可能不合理.

目的:通过对市售不同厂家的六味地黄制剂的质量进行全面评估、分析,并结合生产工艺等因素,探讨六味地黄制剂质量控制中的关键因素,为提升六味地黄方质量控制水平提供参考.方法:在HPLC测定六味地黄方中3个现行质量控制指标(莫诺苷、马钱苷、丹皮酚)基础上,参照2015年版《中国药典》所记载的检测方法,以乙腈(A)-0.3％磷酸水溶液(B)为流动相梯度洗脱(0～5 min,5％～8％A;5～20 min,8％A;20～35 min,8％～20％A;35～45 min,20％～60％A;45～55 min,60％A),丹皮酚检测波长274 nm,莫诺苷、马钱苷检测波长均为240 nm.对来源于不同厂家的5个剂型(大蜜丸、水蜜丸、浓缩丸、胶囊、软胶囊)的六味地黄产品中指标成分进行含量测定并进行统计分析;结合数据结果和生产工艺的实际情况,挖掘潜在的质量控制弱点,并探讨其质量控制策略.结果:128批六味地黄产品的指标成分含量测定结果均符合2015年版《中国药典》的相关规定,但部分剂型的现行标准的含量限度存在不合理之处,如水蜜丸与大蜜丸,其生产工艺一致,但是日服生药量大蜜丸约为水蜜丸的2倍(分别为15.00,8.57g),但其指标成分的日服含量限度却完全一样.结论:对于中成药工艺无质的改变的剂型间含量测定指标及其限度,建议应尽可能保持一致,有利于多剂型产品纵向和横向的质量一致性对比.中成药质量标准的研究应深入探索质量标准的赋存特征,充分尊重药材、饮片质量属性传递规律和中成药生产过程规律.

目的:利用Kalman滤波-紫外分光光度法考察加入辅料聚乙二醇(PEG)6 000和交联聚维酮(PVPP)的六味地黄丸(浓缩丸)物质组释放特征,并对其进行可视化评价.方法:利用Kalman滤波-紫外分光光度法对采用优化辅料处方制备的模型组、自制普通组、市售组的六味地黄丸(浓缩丸)进行物质组释放动力学研究,测定3组丸剂的物质组释放度,并绘制模型组的物质组紫外吸收图谱,可视化评价3种不同浓缩丸的物质组释放动力学特征.结果:以优化辅料处方制备的模型组单一成分丹皮酚(难溶性成分)及化合物为整体物质组,2个指标释放曲线进行f2相似因子拟合,结果为53.21(f2 ＞50),2组释放曲线无显著性差异.两指标均遵循weibull释放机制,组分释放较同步.模型组丸剂在120 min内释放量均达90％,超市售组约15％,释放量增加显著.结论:利用Kalman滤波-紫外分光光度法评价辅料处方丸剂的释放动力学特征符合实验要求,可视化的评价方法可以直观地表达出不同制剂物质组释放的差异.

目的 优化六味地黄丸(浓缩丸)现代制剂辅料.方法 在单因素试验基础上,以PEG6000与PVPP比例、辅料用量为影响因素,成型性、溶散时限、莫诺苷1h内累积溶岀度、马钱苷1h内累积溶岀度、丹皮酚1h内累积溶出度的总评"归一值"(OD值)为评价指标,星点设计-响应面法优化辅料处方.结果 最优辅料处方为PEG6000与PVPP比例35％:65％,辅料用量4.40％,所得丸剂圆润光泽,溶散时限33.11 min,莫诺苷、马钱苷、丹皮酚1 h内累积溶出度为82.67％、86.98％、82.72％,OD值为0.92.结论 该辅料处方不仅可改善六味地黄丸(浓缩丸)成型性,提高其光泽度,而且能加快该制剂崩解,改善溶散时限差异,促进有效成分溶出,从而实现其更高的生物利用度要求.

目的 基于化学模式识别和网络药理学预测不同剂型六味地黄丸潜在的质量标志物以及差异标志物的作用机制.方法 以六味地黄丸不同剂型中10个已明确化学结构的共有成分的量作为考察指标,采用超高效液相色谱-三重四极杆串联质谱(UPLC-QqQ-MS)法同时测定,色谱柱为AtlantisTM Premier BEH C18(2.1 mm×100 mm,2.5 μm);流动相为乙腈+0.01％氨水(A)-0.01％氨水溶液(B),梯度洗脱;流速:0.2 mL·min-1;柱温:35℃;进样量:5μL;正负离子模式下测定.用聚类分析(CA)、主成分分析(PCA)和正交偏最小二乘-判别分析(OPLS-DA)方法综合评价和比较浓缩丸和水蜜丸制剂的质量差异.进一步通过网络药理学分析显著差异成分相关的作用靶蛋白和通路,采用免疫组化法对富集的作用通路中一氧化氮合酶(iNOS)靶蛋白进行验证.结果 浓缩丸和水蜜丸的成分含量存在差异,CA、PCA以及OPLS-DA 3种分析方法均可对不同剂型进行划分,并确定了其中6个具有差异的化学成分为差异标志物,4个无差异化学成分为潜在的质量标志物;网络药理学分析结果表明,6个差异标志物可能通过缺氧诱导因子1(HIF-1)信号通路发挥差异性疗效;动物实验表明,与模型组比较,六味地黄丸各组iNOS表达量降低,具有显著性差异(P＜0.05).结论 六味地黄丸浓缩丸和水蜜丸之间存在一定的内在质量差异,5-羟甲基糠醛、地黄苷D、苯甲酰芍药苷可作为不同剂型间的潜在质量标志物,马钱苷、獐芽菜苷、23-乙酰泽泻醇B、丹皮酚、莫诺苷、没食子酸可作为不同剂型间的差异标志物.