目的:研究山萸肉饮片中马钱苷的浓缩工艺。方法:以马钱苷为指标，采用超滤-纳滤联用技术，在明确跨膜压力差、pH值因素影响的基础上，采用Box-Behnken中心组和设计建立数学模型，考察膜孔径、跨膜压力差、pH值，优选山萸肉提取液的浓缩工艺。结果:超滤可去除多糖，改善溶液可滤性；马钱苷纳滤浓缩工艺为膜孔径400 Da，pH值6.7，跨膜压力差1.20 MPa，马钱苷平均截留率为(91.9±1.7)%，与理论截留率93.6%相近。结论:超滤-纳滤联用精制山萸肉提取液中马钱苷，工艺稳定可行，可避免热处理引起的成分转化损失。

目的 分析山茱萸炭与山茱萸中有效成分的含量变化及山茱萸炭对止血作用的影响,为阐明山茱萸炭作用机制奠定基础.方法 通过采用高效液相测定生品和炒炭后山茱萸的马钱苷、莫诺苷、熊果酸含量变化,采用苯酚-硫酸法和干酪素-磷钼钨酸法测定山茱萸多糖和没食子酸的含量,测定不同剂量的山茱萸炭对小鼠凝血时间、活化部分凝血活酶时间(APTT)、凝血酶原时间(PT)、凝血酶时间(TT)和纤维蛋白原含量(FIB).结果 山茱萸炭中莫诺苷含量显著减少,马钱苷、熊果酸含量略有增加,没食子酸含量显著增加,山茱萸多糖含量基本不变.另外,中、低剂量组的山茱萸炭可以显著降低小鼠的凝血时间,可以显著降低小鼠的TT.结论 山茱萸炭可以在一定程度上促进小鼠的凝血,表现出一定炒炭止血的特点.本研究有效拓展了山茱萸的炮制方法和功效范围、发展了中药炭药的种类,具有重要的应用和理论价值.

目的 基于颜色-特征成分关联分析及网络药理学探讨金银花Lonicerae Japonicae Flos中潜在的质量标志物(quality markers,Q-Marker).方法 收集山东、河南和河北 3 个产地共 30 批金银花样品,建立金银花HPLC特征图谱方法,得到金银花中的非挥发性特征成分,将其与实验室前期得到的含量较高、具有产地特异性的挥发性成分相结合,作为金银花潜在的Q-Marker候选物;采用色彩分析仪测定金银花的颜色与Q-Marker进行相关性分析,筛选出与颜色相关的成分;结合网络药理学方法,从金银花的适应证和功效 2 个层面对Q-Marker候选物的药理活性进行预测,进一步确定潜在Q-Marker.结果 建立了金银花非挥发性成分 HPLC 特征图谱,指认了 9 个特征峰,结合实验室前期对挥发性成分研究结果,最终从金银花中得到了 16 种特征性成分;相关性分析结果表明,与金银花颜色具有显著相关性的成分有 10 个,包括绿原酸、当药苷、断氧马钱子苷、芦丁、(Z)-二聚断马钱苷烯醛、异绿原酸B、异绿原酸C、α-亚麻酸甲酯、正己醛、(E,E)-2,4-癸二烯醛;网络药理学研究得到 11 种与疾病和药效关联的Q-Marker,分别为当药苷、断氧马钱子苷、芦丁、(Z)-二聚断马钱苷烯醛、异绿原酸B、异绿原酸A、芳樟醇、肉豆蔻酸、α-亚麻酸甲酯、α-橙花醇、月桂醛.通路富集分析结果显示,这些成分主要通过丝裂原活化蛋白激酶1(mitogen-activated protein kinase 1,MAPK1)、丝裂原活化蛋白激酶激酶1(recombinant mitogen activated protein kinase kinase 1,MAP2K1)、丝裂原活化蛋白激酶14(mitogen-activated protein kinase 14,MAPK14)、肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)等 62 个关键靶点作用于细胞凋亡(apoptosis)、表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)、松弛素(relaxin)、C型凝集素(C-type lectin receptor)、白细胞介素17(interleukin 17,IL-17)、结合免疫球蛋白E的Fc受体(Fc epsilon RI)、T细胞抗原受体(T cell receptor)等多种信号通路.将颜色和药理活性成分取交集,最终得到 6 种与颜色关联的Q-Marker,包括当药苷、断氧马钱子苷、芦丁、异绿原酸B、(Z)-二聚断马钱苷烯醛、α-亚麻酸甲酯.因此,为提高金银花的质量标准,可以考虑在《中国药典》标准基础上,将芦丁、异绿原酸B、α-亚麻酸甲酯、芳樟醇和肉豆蔻酸纳入金银花的质量评价体系.结论 从理论层面出发,筛选出能够体现其质量的 Q-Marker,为全面控制金银花的质量提供依据,为进一步研究金银花的活性物质及其作用机制提供参考.

研究续断盐制前后指纹图谱与温补肾阳药效之间的谱效关系,寻找续断盐制前后抗肾阳虚的主要活性成分,为明确盐制对肾阳虚药效的影响提供依据.采用HPLC-DAD建立了续断盐制前后HPLC指纹图谱,得到 15 个共有峰,并指认了 11个成分.检测大鼠血清中多种成分含量的含量变化,比较续断盐制前后的药效差异.药理实验结果表明续断盐制后能够增强肾指数,同一剂量下,生续断和盐续断组间有显著差异;与模型组相比,给药组的大鼠血清中促肾上腺皮质激素(ACTH)、环磷酸腺苷(cAMP)、皮质酮(CORT)、雌二醇(E2)、生长激素(GH)、Na+-K+-ATP酶(Na+-K+-ATPase)、睾酮(T)、甲状腺素(T4)含量均有一定程度上升,环磷酸鸟苷(cGMP)、肿瘤坏死因子(TNF-α)含量均有一定程度下降,其中生续断高剂量组、盐续断中剂量组、盐续断高剂量组和阳性药组大鼠血清中以上指标均有显著性差异,整体结果表明盐续断抗肾阳虚药效强于生续断.采用灰色关联分析、熵值法和皮尔逊相关性分析法对续断药效进行评价,筛选出盐制续断抗肾阳虚药效的成分.根据关联度排序变化结果得,续断盐制前后排名上升的成分为马钱苷、绿原酸、续断苷A、川续断皂苷Ⅵ、咖啡酸、异绿原酸B,初步推测这些化合物可能是续断盐制前后治疗肾阳虚的潜在药效成分.确定了续断盐制前后变化的成分,证明了盐续断在治疗肾阳虚方面优于续断,建立了续断盐制前后与治疗肾阳虚的药效之间的谱效关系,为后续对盐制续断的药效成分及分子机制研究奠定了基础.

独一味Lamiophlomis rotata(Benth.)Kudo为藏族习用药材,药用部位为干燥地上部分.现代研究表明,独一味主要含有环烯醚萜苷类、苯乙醇苷类、黄酮类、挥发油类等化学成分,具有镇痛、止血、抗菌、抗炎、免疫调节、抗肿瘤等药理作用.在对独一味化学成分及药理作用总结的基础上,结合其质量研究现状,从药性、功效、成分可测性、药动学等方面对其质量标志物(Q-marker)进行预测,槲皮素、芹菜素、山栀苷甲酯、8-O-乙酰山栀苷甲酯、胡麻属苷、连翘酯苷B、木犀草苷、马钱苷等成分可作为独一味的主要Q-marker,以期为独一味产品开发研究及质量标准的合理建立提供参考.

目的 建立同时测定蒙药清肝玛努-4 醇提物中马钱苷酸、龙胆苦苷、芍药苷、牡荆素、甘草苷、甘草酸铵等成分的HPLC含量测定方法及指纹图谱研究.方法 采用Agilent Eclipse XDB-C18 色谱柱(250 mm×4.6 mm,5 μm),流动相为 0.1%磷酸水溶液-乙腈,梯度洗脱,流速为 1.0 mL/min,检测波长为 230 nm(芍药苷、牡荆素、甘草苷)、237 nm(马钱苷酸)、250 nm(甘草酸铵)、270 nm(龙胆苦苷),柱温为30℃,进样量为10 μL.结果 蒙药清肝玛努-4醇提物中马钱苷酸、龙胆苦苷、芍药苷、牡荆素、甘草苷和甘草酸铵的质量浓度分别在0.020 3～0.121 0、0.053 3～0.317 7、0.021 3～0.127 0、0.011 5～0.069 0、0.014 1～0.083 8 和 0.035 1～0.209 1 mg/mL范围内与色谱峰面积呈良好的线性关系(r≥0.999 8),平均回收率分别为 94.75%、99.49%、92.32%、95.82%、101.29%和98.04%,RSD分别为1.11%、0.76%、0.99%、2.75%、1.09%和 2.43%(n=6).建立了蒙药清肝玛努-4 醇提物的HPLC指纹图谱,以S1 号样品色谱图为参照图谱,通过多点校正和全谱峰匹配,生成对照指纹图谱,共确定10个共有峰,经与对照品比对指认了其中8个成分.结论 所建立的测定方法及指纹图谱准确、可靠、重复性好、专属性强,为蒙药清肝玛努-4 的质量控制及后续开发提供了依据.

目的 建立黄芪健骨胶囊的质量标准.方法 采用薄层色谱(TLC)法对制剂中黄芪、山茱萸药材进行定性鉴别;采用高效液相色谱(HPLC)法测定制剂中马钱苷、毛蕊异黄酮苷、柚皮苷的含量,色谱柱为XSelect HSS T3 柱(250 mm×4.6 mm,3.5μm),流动相为甲醇-0.3%磷酸水溶液(梯度洗脱),流速为 0.8 mL/min,检测波长为 240 nm,柱温为 25℃,进样量为 10μL.结果 黄芪、山茱萸的TLC图特征斑点清晰,分离度好,且阴性对照无干扰.马钱苷、毛蕊异黄酮苷、柚皮苷质量浓度分别在 21.54～430.80μg/mL(R2=0.999 3)、5.02～100.40μg/mL(R2=0.999 9)、20.28～405.60μg/mL(R2=0.999 7)范围内与峰面积线性关系良好;精密度、稳定性、重复性试验结果的RSD均小于 3.0%;平均加样回收率分别为100.66%,98.58%,100.17%,RSD分别为1.70%,2.36%,1.98%(n=6).结论 该方法操作简便,结果准确,重复性好,可用于黄芪健骨胶囊的质量控制.

秦艽Gentianae Macrophyllae Radix是我国重要的常用传统中药品种之一,其资源丰富,成分多样,作用广泛,具有极大的药用价值.目前发现秦艽药材中化学成分主要有环烯醚萜类、三萜、木脂素、黄酮、生物碱、甾体、多糖等类型成分,药理作用主要有抗炎、镇痛、抗菌、抗病毒、抗肿瘤、免疫调节、保护肝脏、抗氧化等药理活性.通过检索近20年国内外相关文献,对秦艽的成分和药理活性进行综述,旨在探究对秦艽成分和药理的客观认识,为其临床合理用药和质量评价等提供参考.

目的:探讨马钱苷通过调节蛋白激酶 B(AKT)/腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)/核因子-E2 相关因子 2(Nrf2)通路改善氧葡萄糖剥夺/复氧(OGD/R)诱导的神经元铁死亡的机制.方法:将神经元分为对照组、OGD/R组、OGD/R+L-马钱苷组、OGD/R+M-马钱苷组、OGD/R+H-马钱苷组、OGD/R+H-马钱苷+ML385组.透射电子显微镜观察神经元线粒体形态;检测铁含量、谷胱甘肽过氧化物酶 4(GPX4)活性、4-羟基壬烯醛(4-HNE)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、还原型谷胱甘肽(GSH)/氧化型谷胱甘肽(GSSG),还原型辅酶Ⅱ(NADPH)/辅脱氢酶Ⅱ(NADP+)及乳酸脱氢酶(LDH)含量;使用 CM-H2DCFDA、C11-BODIPY581/591 分别检测细胞内和脂质活性氧(ROS)水平;四唑盐(MTT)试剂盒检测细胞活性;蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测 B细胞淋巴瘤 2(Bcl-2)、Bcl相关 X蛋白(Bax)、剪切的半胱天冬氨酸蛋白酶 3(cleaved Caspase-3)、磷酸化的蛋白激酶 B(p-AKT)/AKT、磷酸化的腺苷酸活化蛋白激酶(p-AMPK)/AMPK、Nrf2蛋白表达.结果:OGD/R组神经元线粒体出现碎片化现象,嵴减少,线粒体膜密度有所增加.与对照组比较,OGD/R组GSH/GSSG、NADPH/NADP+、SOD、GPX4相对活性、细胞活力以及Bcl-2水平、p-AKT/AKT、p-AMPK/AMPK、Nrf2水平下降(P<0.05),Fe2+含量、细胞内ROS水平、脂质ROS水平以及 4-HNE、MDA水平、LDH释放量、Bax以及cleaved Caspase-3水平上升(P<0.05);马钱苷处理后神经元线粒体中的线粒体嵴变得较为完整,碎片化现象消失,OGD/R+L-马钱苷组、OGD/R+M-马钱苷组、OGD/R+H-马钱苷组较 OGD/R 组 GSH/GSSG、NADPH/NADP+、SOD、GPX4 相对活性、细胞活力以及 Bcl-2 水平、p-AKT/AKT、p-AMPK/AMPK、Nrf2水平上升(P<0.05),Fe2+含量、细胞内ROS水平、脂质ROS水平以及4-HNE、MDA水平、LDH释放量、Bax以及 cleaved Caspase-3水平下降(P<0.05),且随着马钱苷剂量的增加,改善效果更显著;OGD/R+H-马钱苷+ML385组以上指标与OGD/R组趋势一致.结论:马钱苷可能通过调节AKT/AMPK/Nrf2通路改善OGD/R诱导的神经元铁死亡.

目的 考察炮制对加味拱辰浓缩丸化学成分的影响.方法 采用超高效液相色谱-四极杆/静电场轨道阱高分辨质谱(UHPLC-Q-Orbitrap HRMS)法对生品组(山萸肉+当归)、炮制品组(酒萸肉+酒当归)、酒当归组(酒当归+山萸肉)、酒萸肉组(酒萸肉+当归)样品进行定性鉴别,主成分分析、正交偏最小二乘判别分析筛选差异成分,HPLC法测定莫诺苷、马钱苷、山茱萸新苷、没食子酸、阿魏酸、马钱苷酸、绿原酸、藁本内酯、5-羟甲基糠醛的含量.结果 共鉴定出 97 种成分,包括有机酸、环烯醚萜、苯肽、皂苷、核苷、氨基酸,生品组、炮制品组、酒当归组、酒萸肉组中分别鉴定出 90、88、89、86 种成分.与生品组和酒当归组比较,酒萸肉组和炮制品组中有机酸总含量升高,环烯醚萜苷总含量接近;酒萸肉组中藁本内酯含量最高.结论 酒萸肉的加入可增加加味拱辰浓缩丸组方配伍合理性,酒当归的加入也具有一定协同增效作用.