目的 探讨泛素结合酶E2L3(UBE2L3)对颅脑创伤(TBI)后小胶质细胞相关神经炎症的作用及其潜在机制.方法 采用SD大鼠构建TBI及假手术(Sham)组大鼠模型,通过多肽组学筛选Sham组和TBI组建模3 d时创伤病灶周围皮质脑组织差异表达的肽段,并选取下调显著的UBE2L3蛋白作为研究对象;分别通过蛋白免疫印迹法(WB)和实时荧光定量PCR(qPCR)实验验证TBI大鼠脑组织和不同BV2细胞模型中UBE2L3的表达情况.将UBE2L3质粒转染至BV2细胞中并将细胞分为阴性对照组(NC)、UBE2L3过表达组(OE-UBE2L3),采用qPCR和WB实验鉴定UBE2L3基因的过表达情况.构建脂多糖(LPS)诱导的M1型小胶质细胞神经炎症模型,将细胞分为NC组、OE-UBE2L3组、LPS组和LPS-UBE2L3组,分别通过免疫荧光染色和qPCR实验检测UBE2L3过表达对小胶质细胞极化、炎症因子表达的影响;随后通过WB实验分析UBE2L3过表达对NF-κB通路中COX2蛋白和NF-κB p65蛋白磷酸化水平的影响.结果 多肽组学质谱分析结果显示,TBI大鼠病灶周围脑皮质组织中UBE2L3蛋白的表达水平较Sham组降低,差异有统计学意义(P=0.046).WB验证实验显示,在BV2细胞神经炎症模型中,UBE2L3的表达水平在12 h时较0 h时下调,差异有统计学意义(P＜0.01);在TBI大鼠脑组织中,UBE2L3的表达水平在TBI后1 d时较Sham组下调(0.804±0.056对比1.394±0.263),在7 d时(0.558±0.024)表达趋于平缓,差异均有统计学意义(均P＜0.01).WB鉴定实验显示成功构建UBE2L3过表达细胞模型,OE-UBE2L3组UBE2L3表达水平较NC组升高(0.908±0.052对比0.362±0.080),差异有统计学意义(P＜0.01).qPCR实验显示,LPS组白细胞介素1 β(IL-1 β)、白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达水平较NC组均升高,而LPS-UBE2L3组IL-1β、IL-6、TNF-α表达水平较LPS组均下调,差异均有统计学意义(均P＜0.01).免疫荧光实验显示,LPS组小胶质细胞M1型标准物诱导性一氧化氮合酶(iNOS)的表达水平较NC组升高,差异有统计学意义(P＜0.001).通路蛋白WB检测结果显示,LPS-UBE2L3组环氧合酶2(COX2)蛋白的表达水平较LPS组降低(0.460±0.280对比1.273±0.090),差异有统计学意义(P＜0.05);LPS组磷酸化的核因子-κB(NF-κB)p65表达水平较NC组上调(1.738±0.138 对比 0.614±0.192),而 LPS-UBE2L3 组磷酸化的 NF-κB p65 表达水平(0.924±0.207)较LPS组下调,差异均有统计学意义(均P＜0.05).结论 UBE2L3可通过调控NF-κB/COX2通路抑制TBI后小胶质细胞向M1表型极化而发挥抑制神经炎症功能,可作为TBI后抑制神经炎症的潜在治疗靶点.

动脉粥样硬化是一种慢性进展性疾病，其发病机制复杂，尚未完全明了。动脉粥样硬化主要侵犯主动脉、冠状动脉、脑动脉及肾动脉等大中型动脉血管，是冠状动脉疾病、脑血管疾病和外周动脉疾病最常见的病理基础。当斑块破裂并阻塞全身主要的动脉血管时，可导致严重的急性并发症。动脉粥样硬化的治疗主要包括控制危险因素、药物治疗和外科手术，但临床现状仍任重道远。近年来，靶向超声造影技术因其无创性、精确性和实时反馈的优点，在动脉粥样硬化的精准治疗中极具前景。本文就超声造影技术在动脉粥样硬化疾病治疗中的研究进展进行综述。

目的/意义 构建人体模型,与实际人体运动数据绑定,实现对人体运动姿态的监测.方法/过程 设计一种基于Unity3D和MEMS惯性传感器的运动监测系统.利用MEMS惯性传感器获取人体的运动姿态数据,利用欧拉角进行姿态解算,通过蓝牙无线传输协议将数据发送到计算机系统,以驱动虚拟动画人物的运动,实现人体动作的3D姿态实时展现.结果/结论 经过实验测试,该模型能够准确监测和模拟人体的运动姿态,未来可为体育运动训练、肢体康复训练等应用领域提供有效的数据分析.

目的 基于实时细胞分析(real time cell analysis,RTCA)技术对中药挥发性组分的细胞毒性及抗人腺病毒3型(human adenovirus 3,HAdV-3)的作用进行毒/效整合分析,构建抗病毒药物高通量筛选的新策略.方法 采用RTCA技术动态监测不同接种密度的A549细胞48 h生长曲线及10倍梯度稀释的HAdV-3感染A549细胞生长曲线,获得A549细胞最佳接种密度及HAdV-3最佳稀释浓度用于后续实验.以利巴韦林为阳性对照,基于RTCA技术采用曲线下面积(Area Under the Curve,AUC)方法对5种中药挥发性组分的细胞毒性及抗HAdV-3的作用进行毒/效整合分析,并与传统终点法数据处理进行对比.结果 终点法中艾叶、柴胡、薄荷、荆芥、牛蒡子、酸枣仁和利巴韦林对细胞的保护率分别为0.73％、12.50％、20.99％、44.50％、27.99％、51.50％和 82.70％;AUC 法中艾叶、柴胡、薄荷的选择性指数(Selective In-dex,SI)为负数,分别为-0.57、-0.21和-0.08.荆芥、牛蒡子、酸枣仁和利巴韦林的SI值分别为0.14、0.40、0.72和5.33.以利巴韦林的抗病毒活性为参照,终点法中酸枣仁、牛蒡子和荆芥的抗病毒活性为利巴韦林抗病毒活性的62.27％、33.85％和53.81％;AUC法中酸枣仁、牛蒡子和荆芥的抗病毒活性为利巴韦林抗病毒活性的13.51％、7.50％和2.63％.结论 传统终点法与研究采用的AUC法计算结果有较大的差异.传统的抗病毒活性筛选研究多采用终点法检测受试药物对病毒感染细胞的保护作用,无法反映整个感染周期的变化,缺乏细胞毒的数据也会对结果的判断产生偏差.研究提示基于RTCA技术对中药挥发性组分开展抗HAdV-3的毒/效整合评价,采用AUC方法计算药物的选择性指数作为高通量筛选新策略,能快速、精准地判断受试药物的抗病毒活性,具有准确性高、重复性好的优势.

结直肠癌是全球第三大常见的恶性肿瘤，早期诊断能够显著改善患者的预后和生存质量，但现有筛查诊断方法仍存在局限性，急需寻找新的替代方法。外泌体作为细胞间通讯的关键介质和信息载体，在肿瘤发生和发展中具有重要作用，可作为诊断生物标志物的潜在来源。近年来，循环外泌体相关生物标志物被广泛研究，这种非侵入性检测方法通过分析外周循环中肿瘤细胞来源的外泌体相关内容物，如核酸、蛋白质、脂质和代谢物等，来反映原发肿瘤的全面信息，简便、精准、实时检测肿瘤进展，有望应用于临床，为结直肠癌的早期筛查和精确诊断提供新的思路。

目的:本研究通过分析circMFSD12在结直肠癌中的表达及对肿瘤细胞增殖、迁移、侵袭，以及对5-氟尿嘧啶（5-FU）敏感性的影响，从而分析其作为潜在治疗靶点的可行性，以期为结直肠癌治疗提供新思路。方法:检索公开数据库中有关结直肠癌组织、正常结肠组织和正常肠组织的人源RNA数据集（GSE172229，GSE166973，GSE147597），并筛选在结直肠癌中表达下调的circRNA，从而通过实时定量PCR（qRT-PCR）分析circMFSD12在结直肠癌细胞株中的表达水平。基于构建过表达circMFSD12的质粒并转染结直肠癌细胞株LoVo和SW620，通过EdU染色、划痕实验和Transwell实验评估其对细胞增殖、迁移和侵袭的影响。同时，通过CCK8实验和流式细胞术实验检测其对5-FU敏感性的影响，从而进一步通过生物信息学分析和miRNA pull down实验研究其潜在的分子机制。结果:circMFSD12在结直肠癌组织（筛选标准：logFC<-0.5）和细胞（circMFSD12表达量在人正常结肠上皮细胞NCM460为1.00±0.14，在结直肠癌细胞中分别为HCT116：0.72±0.08、LoVo：0.42±0.10、SW480：0.72±0.04和SW620：0.48±0.07）中均表达下调（P<0.05）。体外实验结果显示，过表达circMFSD12显著抑制结直肠癌细胞的增殖（LoVo：52%±5.3% vs. 22%±3.7%，P<0.001；SW620：56%±10% vs. 26%±4.0%，P<0.001）、迁移（LoVo：75%±5.5% vs. 34%±5.7%，P<0.001；SW620：54%±7.5% vs. 22%±5.6%，P<0.001）和侵袭（LoVo：104±18.6 vs. 41.7±10.2，P<0.01；SW620：86.7±16.5 vs. 34.7±4.9，P<0.01），并增强了细胞（LoVo：Control：2.5±0.7 vs. 7.4±1.0，P<0.01，5-FU：11.8±1.9 vs.28.6±1.9，P<0.001；SW620：Control：2.2±0.4 vs. 8.1±1.3，P<0.01，5-FU：10.2±1.4 vs. 23.4±2.3，P<0.001）对5-FU的敏感性。生物信息学分析及实验验证表明，通过调节靶向miR-887-3p和PPP1R12B表达，circMFSD12对结直肠癌细胞的生物行为有抑制作用。结论:circMFSD12调控miR-887-3p/PPP1R12B，从而显著影响结直肠癌细胞的生物行为，表明其作为新型分子标志物和潜在治疗靶点有良好的研究前景。

目的:探讨结核分枝杆菌复合群(Mycobacterium tuberculosis complex,MTBC)和非结核分枝杆菌(nontuberculous mycobacteria,NTM)混合感染的检测方法,为临床诊治混合感染提供参考依据.方法:使用脓肿分枝杆菌、鸟分枝杆菌、胞内分枝杆菌3种NTM和MTBC标准菌株(H37Rv)各制备3种不同初始浓度(10-2 mg/ml、10-4 mg/ml和10-6 mg/ml)的菌液,将每个浓度的NTM与MTBC采用9种不同比例(NTM标准菌株与H37Rv按照 1∶99、5∶95、10∶90、20∶80、50∶50、80∶20、90∶10、95∶5 和 99∶1)混合制成 81 种混合感染标本.3 种感染模型分别为脓肿分枝杆菌和H37Rv、鸟分枝杆菌和H37Rv、胞内分枝杆菌和H37Rv.经BACTEC MGIT 960培养,采用MPB64抗原检测、对硝基苯甲酸(PNB)生长试验、荧光PCR熔解曲线法和恒温扩增实时荧光法4种方法对培养液进行检测.结果:3种混合感染模型的81份标本均在34 d内报告阳性.其中,MPB64抗原检测阳性3份(3.7％,3/81);PNB生长试验阳性78份(96.3％,78/81);荧光PCR熔解曲线法仅检出相应的NTM 64份(79.0％,64/81),仅检出 MTBC 3 份(3.7％,3/81),同时检出相应的 NTM 和 MTBC 14 份(17.3％,14/81);恒温扩增实时荧光法检出MTBC 67份(82.7％,67/81).结论:临床标本经BACTEC MGIT 960培养,仪器报告阳性后,用MPB64抗原检测和PNB生长试验初判,若有NTM生长,建议采用分子生物学方法鉴定NTM,同时用单一检测MTBC核酸的方法对培养液进行检测,以免MTBC漏检.

目的:基于内质网应激途径探讨黄连-大黄药对改善2型糖尿病(T2DM)GK大鼠胰岛β细胞功能的作用机制.方法:将符合成模标准的自发性T2DM GK大鼠随机分为模型对照组、二甲双胍0.1 g/kg组、黄连-大黄药对2.36、4.72 g/kg组,并取正常Wistar大鼠设为正常对照组,每组各6只,干预8 w后采用HE染色观察大鼠胰腺病理形态学变化;ELISA法检测胰腺组织胰岛素(INS)水平;实时荧光定量PCR法检测胰腺组织胰十二指肠同源盒因子1(Pdx1)、葡萄糖调节蛋白78(Grp78)mRNA表达;IHC法检测胰腺组织葡萄糖转运蛋白2(GLUT2)、GRP78蛋白表达;Western blot法检测胰腺组织磷酸化肌醇依赖性激酶1α(p-IRE1α)、磷酸化真核翻译起始因子2α(p-EIF2α)蛋白表达.结果:与正常对照组比较,模型对照组大鼠胰岛形态结构紊乱,胰岛细胞数目减少,伴有炎性细胞浸润,胰腺组织中INS水平、Pdx1 mRNA及GLUT2蛋白表达均显著下调(P＜0.01),Grp78 mRNA与蛋白以及p-IRE1α、p-EIF2α蛋白表达均显著上调(P＜0.01);与模型对照组比较,黄连-大黄药对2.36、4.72 g/kg组大鼠胰岛形态结构改善,胰腺组织中INS水平、Pdx1 mRNA及GLUT2蛋白表达明显上调(P＜0.05),Grp78 mRNA与蛋白以及p-IRE1α、p-EIF2α蛋白表达均下调(P＜0.05).结论:黄连-大黄药对可能通过抑制内质网应激改善胰岛β细胞功能,发挥T2DM治疗作用.

目的 通过机器学习算法鉴定与骨肉瘤(osteosarcima,OS)双硫死亡相关的特征基因,构建诊断预测模型,为进一步探索OS早期诊断的潜在生物学标志物和分子机制提供理论支持.方法 差异表达分析用于鉴定OS双硫死亡差异表达基因(differential expression disulfidptosis-related gene,DE-DRG),通过最小绝对收缩选择算子(least absolute shrinkage and selection operator,LASSO)、支持向量机(support vector machines,SVM)和随机森林(random forest,RF)算法进一步鉴定具有诊断价值的OS双硫死亡特征基因,通过绘制受试者工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线评估其诊断价值;同时构建评估疾病风险的列线图,并通过校准曲线和临床决策曲线评估列线图的有效性能.实时荧光定量聚合酶链反应(real-time quantitative poly-merase chain reaction,RT-qPCR)检测特征基因在OS组织的表达量.结果 共鉴定出2个具有较高诊断价值的OS双硫死亡特征基因(NDUFA11、RPN1),所构建的列线图对预测疾病风险具有较高的可靠性.RT-qPCR检测结果显示,在OS组织中,NDU-FA11表达显著降低,而RPN1表达则显著升高(P＜0.01).结论 本研究构建的OS双硫死亡基因诊断模型具有一定的诊断价值.

目的:鉴定铜死亡相关的lncRNAs,并利用其构建模型预测骨肉瘤(OS)患者的生存状况.方法:从TARGET数据库下载OS患者的RNA-seq数据以及相关临床资料.从相关研究报告中获取铜死亡相关基因集.使用共表达分析以及单因素Cox回归,筛选出OS生存相关的铜死亡相关lncRNA.在LASSO-Cox回归构建OS预后模型,并通过受试者工作特征曲线(ROC)和Kaplan-Meier(K-M)生存分析评估模型效能.利用单样本基因集富集分析(ssGSEA),探讨铜死亡相关的lncRNAs模型评分与OS中信号通路的关系.通过基因本体(GO)和京都基因组百科全书(KEGG)进行不同风险组OS患者的功能与通路富集分析.通过ESTIMATE算法,推测OS患者肿瘤样本中免疫细胞浸润水平.利用实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)实验验证4个铜死亡相关的lncRNAs在不同细胞系中的表达情况.结果:在85例OS患者中,与10个铜死亡相关RNA共表达的ln-cRNA共有374个.根据Cox回归分析结果,鉴定出62个与OS患者预后相关的铜死亡相关的lncRNAs.共识聚类分析发现OS患者具有2种铜死亡相关的lncRNAs表达模式,并且2种铜死亡相关的lncRNAs表达模式的患者预后有显著差异.采用LASSO-Cox回归分析构建铜死亡相关的lncRNAs预后模型.t-ROC曲线评估模型效能,结果显示,1年、3年和5年的AUC值分别为0.78、0.83和0.85,并且高、低风险组间的K-M生存分析结果具有显著差异(P＜0.05).GSEA功能富集分析显示,抗原受体介导的信号传导途径、B淋巴细胞活化以及阳性T淋巴细胞选择在高风险组中富集.GO与KEGG富集分析发现,不同风险组中肿瘤相关通路在呈现差异.在3种铜死亡相关的lncRNAs细胞系中验证了预后模型中的铜死亡相关的lncRNAs表达水平.结论:铜死亡相关lncRNA与OS患者预后密切相关;基于铜死亡相关的lncRNAs构建的预后模型能够准确预测OS患者的预后,进一步深入研究铜死亡相关的lncRNAs在OS中的作用可能有助于开发更可靠的个性化治疗方案.