目的 为探明了解冷藏即食预包装熟肉制品中单核细胞增生李斯特菌(单增李斯特菌)污染情况及潜在风险,本研究针对短保质期的冷藏即食预包装熟肉制品开展单增李斯特菌定量污染风险调查.方法 2022年5～8月,从成都市采集样品64份,依据采用传统培养分离鉴定和RT-PCR分子检测方法进行单增李斯特菌的定性和定量检测,分离菌株提取DNA后进行二代全基因组测序并开展相关流行病学特征分析.结果 检测结果发现64份即食熟肉样品中,6份样品检出单增李斯特菌,检出份数为6/64.6份阳性样品均由某同一工厂生产,其中5份为卤肉三拼样品.定量检测结果表明,卤肉三拼的单增李斯特菌污染水平为30-200 CFU/g;单增李斯特菌阳性的猪肉样品污染水平为＜10 CFU/g.阳性样品中的6株分离菌株经全基因组测序分析鉴定为单增李斯特菌,均含有LIPI-1毒力岛相关基因,多序列位点分型发现主要的序列型(ST)为ST3(n=2)和ST121(n=2),其次是ST8和ST9.单核苷酸多态性(SNP)结果分析发现同一工厂分离到的单增李斯特菌菌株LM22071911和LM22080802之间检测到23个SNP差异,单增李斯特菌株LM22062706和LM22080806之间检测到13个SNP差异,说明在该工厂加工环节存在两种克隆群的单增李斯特菌直接传播的风险.结论 成都市部分市售冷藏即食预包装熟肉制品污染多种李斯特菌,需加强源头控制.

目的 通过全基因组测序对甘肃省市售食品中分离的单增李斯特菌和英诺克李斯特菌基因组特征进行比较分析.方法 收集2021-2022年甘肃省市售食品中分离的25株单增李斯特菌和7株英诺克李斯特菌作为研究对象,对菌株进行全基因组测序,分析其系统发育谱系、克隆复合群(CC)、序列型(ST)、毒力基因、抗性基因及泛基因组.结果 32株李斯特菌分属单增李斯特菌谱系Ⅰ和Ⅱ及英诺克李斯特菌3个群,单增李斯特菌分为10个亚群,英诺克李斯特菌分为5个亚群,与CC型保持一致,核心基因组多位点序列分型能将各谱系中不同CC型的菌株明显分开,谱系Ⅰ与英诺克李斯特菌的进化关系更近.25株单增李斯特菌均携带李斯特菌毒力岛LIPI-1和内化素基因,不携带LIPI-3,有2株ST87型菌株携带LIPI-4;7株英诺克李斯特菌均不携带LIPI-1和内化素基因,均携带LIPI-4,有5株菌携带LIPI-3.单增李斯特菌有16株携带SSI-1、3株携带SSI-2,7株英诺克李斯特菌均不携带SSI-1,有6株携带SSI-2.李斯特菌的泛基因组大小随着测序基因组数目的增加呈现线性增多,25株单增李斯特菌当菌株数量达到15后核心基因数目稳定在2 272个,占泛基因组基因数目的46.2％,25株单增李斯特菌和7株英诺克李斯特菌共同的核心基因1487个,当菌株数量达到10后数目趋于稳定.结论 核心基因组多位点序列分型可将不同谱系不同克隆复合群的李斯特菌进行区分,英诺克李斯特菌与单增李斯特菌生化特性相似与其亲缘关系相近有关,致病性差异与英诺克李斯特菌缺失单增李斯特菌特有的毒力基因相关.

单核细胞增生李斯特氏菌(Listeria monocytogenes)是重要的食源性致病菌,能引发人类的李斯特菌病,是全球公共卫生问题之一.该菌易感染孕妇,引起胎儿和新生儿的侵袭性李斯特菌病,严重威胁母婴健康.因此,建立有效的单增李斯特菌感染胎盘体内外模型,解析和探究单增李斯特菌经胎盘感染机制,是预防和控制单增李斯特菌感染母婴的关键所在.本文综述了可用于研究单增李斯特菌母婴感染的体内外胎盘模型,总结和讨论了各类模型的优势和局限性;并着重分析了体外三维胎盘屏障模型在单增李斯特菌感染方面的研究进展和未来研究方向.以期为深入解析该菌经胎盘感染的途径、发病机制提供支持,并为预防和控制母婴李斯特菌病提供科学参考.

目的 比较广西不同种类食品中单核细胞增生李斯特菌(以下简称单增李斯特菌)的流行情况、毒力特征和分子分型特征,更好地了解单增李斯特菌的遗传特点及其传播的潜力.方法 对来自2002-2020年的210株单增李斯特菌进行全基因组测序(WGS),分析其序列分型(ST)、克隆群(CC)型及毒力基因.结果 2002-2020年广西53.8％单增李斯特菌分离株来源于肉与肉制品,59.0％分离株来自于谱系Ⅱ,优势ST型为ST8和ST9.79.4％菌株携带 LIPI-1 基因(hly、prfA、plcA、plcB、mpl、actA),83.7％菌株携带 LIPI-2 基因(inlC、inlF、inlJ、inlK).17.6％菌株携带LIPI-3基因(llsA、llsB、llsD、llsG、llsH、llsP、llsX、llsY).结论 肉与肉制品是广西单增李斯特菌检出率最高的食品类型,分子分型结果证实了单增李斯特菌种群具有高度的遗传多样性,WGS的高分辨力可用于监测食源性单增李斯特菌病的暴发.毒力基因的分布表明广西单增李斯特菌存在不同程度毒力基因的缺失,应警惕高致病性的菌株引起的食源性暴发事件.

目的 探讨该院单核细胞增生李斯特菌(简称单增李斯特菌)感染发病情况及预防治疗措施.方法 回顾性选取2012-2021年该院检出的单增李斯特菌阳性病例为研究对象,统计分析其科室分布、发病及抗感染治疗情况.结果 检出的阳性病例为产妇及其分娩新生儿.产科出院患者单增李斯特菌感染率为7.63/100 000,分娩新生儿单增李斯特菌感染率为4.68/100 000.全院产妇、新生儿单增李斯特菌感染率为5.32/100 000.感染产妇分娩新生儿死亡率与正常分娩产妇的新生儿死亡率比较,差异有统计学意义(P＜0.05).经验性抗感染治疗,产妇用药选择针对单核李斯特菌敏感的青霉素类抗菌药物的病例数远少于新生儿,二者比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论 产妇单增李斯特菌感染率虽低,但危害大,经验性抗感染治疗应首选对单增李斯特菌敏感的抗菌药物.

单核细胞增生李斯特氏菌是一种食源性致病菌,易造成食品安全隐患.目前,控制单增李斯特菌生长的方法主要是物理和化学方法,但应用范围有限.近年来,乳酸菌作为新兴的生物抑菌剂被用作生物保护菌株应用于食品中,但还未有系统详尽的关于乳酸菌对单增李斯特菌生长的影响报道.本文中,笔者首先概述了在不同食品环境中乳酸菌对单增李斯特菌生长的影响,接着着重讨论了乳酸菌抑制单增李斯特菌生长机制方面的最新进展,然后探讨了应用两菌竞争模型描述乳酸菌对单增李斯特菌生长影响方面的研究进展,最后总结了利用乳酸菌控制单增李斯特菌过程中可能存在的问题并提出相应的建议,为食品工业中利用乳酸菌防控单增李斯特菌污染提供理论依据.

目的 研究乳酸链球菌素对单核增生李斯特菌生物膜的杀灭效果.方法 通过生物膜和最低杀/抑菌浓度测定方法,对乳酸链球菌素杀灭和抑制单增李斯特菌及其生物膜的效果进行观察.结果 乳酸链球菌素对单增李斯特菌最低杀菌和抑菌浓度分别为3.125 μg/mL和12.5 μg/mL;抑制单增李斯特菌形成生物膜的最低浓度为3.125 μg/mL,杀灭成熟生物膜的最低浓度为25 μg/mL.25 μg/mL乳酸链球菌素对单增李斯特菌生物膜作用9 h,生物膜形成率由6.19%减少到0.18%,降低率为97.10%.结论 乳酸链球菌素对单增李斯特菌的抑菌杀菌效果明显,能有效杀灭其形成的成熟生物膜.

目的 了解湖南省冷冻饮品生产加工过程中单核细胞增生李斯特菌(以下简称单增李斯特菌)污染状况,为食源性疾病预防和控制提供科学依据. 方法 采集湖南省2家冷冻饮品生产企业的生产加工各个环节的样品,包括食物样品75份(原料类、中间产品、终产品)和非食物样品279份(环境、仪器设备、人员、工具等),参照GB 4789.30-2010中方法进行单增李斯特菌检测,分离菌株采用脉冲场凝胶电泳法(PFGE)进行分子分型. 结果 两家企业共监测354份样品,检出28株单增李斯特菌,检出率为7.91％,均在非食品样品中检出(检出率10.04％),其中环境样品的检出率最高(16.07％),人员、仪器设备、工具检出率分别为6.35％、6.58％、10.00％;与车间前处理区(0.96％)、整箱包装区相比(4.44％),灌装区检出率较高(12.20％);O企业非食品样品的检出率(13.94％)高于P企业(4.39％)(x2=6.815,P=0.009).PFGE结果显示,O企业分离的23株单增李斯特菌,分为4个型别,其中有82.6％的菌株为同一型别,P企业分离的5株单增李斯特菌,分为2个型别,其中有4株为同一型别. 结论 两家冷冻饮品企业在生产加工过程中均检出单增李斯特菌,主要存在于车间灌装区的地面与地面接触物中,两企业检出的单增李斯特菌均存在优势型别,提示应加强消毒与监督,预防单增李斯特菌对冷冻饮品污染的潜在风险.

目的 利用叠氮溴化乙錠(EMA)实时荧光PCR技术,建立直接检测食品中单增李斯特活菌的方法.方法 根据单核李斯特菌inlA基因设计特异性引物和探针.用不同EMA浓度、不同光照次数优化样品前处理条件.用平板计数法验证该方法的检出限及对死菌的抑制率.用35株单增李斯特菌、25株非单核李斯特菌、92株非李斯特菌验证该方法特异性.用添加了不同剂量的单增李斯特死菌、活菌及金黄色葡萄球菌的15件饮料,15件熟肉制品进行模拟实样检测.结果 单增李斯特活菌EMA实时荧光PCR方法的Ct=(38.46-3.30)×log(菌量)(R2 =0.999).最低检测的活菌浓度为55 cfu/反应.对死菌DNA抑制效率≥99.98％.35株单增李斯特菌Ct值最低16.21,最高29.38,而25株非单单增李斯特菌、92株非单增李斯特菌的Ct值均大于35或无Ct值.重复试验Ct值变异系数小于5％.30件模拟实样单增李斯特菌的检测结果与常规方法完全一致.且EMA实时荧光PCR方法检出时间仅需10h左右,而常规分离培养方法需要5～7 d.结论 EMA实时荧光PCR检测技术是一种快速、简便、特异性强、灵敏度高、仅检测单增李斯特菌活菌的有效方法,可作为食品中检测单增李斯特活菌的方法推广使用.

目的 观察NIH稀毛小鼠在毛发发育周期中不同阶段的皮肤结构,并对小鼠的主要免疫指标进行检测.方法 按C57BL/6小鼠毛发生长周期节点的时间观察NIH稀毛小鼠表型的增龄性改变,并剪取小鼠背部后侧皮肤,用4％多聚甲醛固定12h,石蜡包埋切片,常规HE染色,光学显微镜观察皮肤中毛囊发育情况.选取6周龄的雌性小鼠,经小鼠眼眶静脉丛毛细管采血,血常规检测仪检测常用指标;经腹腔注射单增李斯特菌液,2×106 cfu/(100μl·只),感染48 h后,制备小鼠脾脏单细胞悬液,流式细胞术检测淋巴细胞比例.结果 随着日龄的增长,NIH稀毛小鼠出现了无毛-稀毛-无毛的转变;在出生后第7天(P7)毛发结构异常,无法正常长出体表;P42时出现周期转换异常,皮下组织中仍存在部分结构异常的毛囊,至P180时未发生改变.NIH稀毛小鼠血液指标中红细胞数(RBC)、血红蛋白(HGB)、红细胞压积(HCT)等指标明显降低(P＜0.05);淋巴细胞数及其在白细胞中的比例显著降低(P＜0.05);中性粒细胞比例明显升高(P＜0.05).NIH稀毛小鼠感染单增李斯特杆菌前后脾脏中CD3+CD4+/CD3+CD8+比值均显著降低(P＜0.05),CD3+及CD19+的比例差异无统计学意义(P＞0.05).结论 NIH稀毛小鼠毛发生长异常,生长过程中出现无毛-稀毛-无毛的表型改变,成年后会出现造血功能障碍和免疫力减弱.