目的:探讨血清补体C1q/肿瘤坏死因子相关蛋白13（CTRP13）参与高糖诱导的人肝窦内皮细胞（HLSEC）滤过功能障碍的分子机制。方法:体外培养HLSEC，构建慢病毒CTRP13过表达载体（LV-CTRP13）并感染HLSEC，依据不同处理条件将细胞分为正常对照（5.5 mmol/L葡萄糖，NC）组、高糖（25 mmol/L，HG）组、NC+LV-CTRP13组、HG+LV-CTRP13组、NC+空载对照（LV-CON）组、HG+LV-CON组、HG+LV-CTRP13+盐诱导激酶1（SIK1）抑制剂（HG-9-91-01）组、HG+LV-CON+HG-9-91-01组、HG+LV-CTRP13+环磷酸腺苷调节转录共激活因子2（CRTC2）抑制剂（GW4064）组、HG+LV-CON+GW4064组。采用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）和Western blotting法检测CTRP13、SIK1、CRTC2、P130 Crk相关底物（P130Cas）的mRNA及蛋白表达水平。采用单因素方差分析进行组间比较。结果:与NC组相比，HG组CTRP13、SIK1、P130Cas的mRNA和蛋白表达降低，CRTC2的mRNA和蛋白表达升高（ P<0.05）。与HG+LV-CON组相比，HG+LV-CTRP13组CTRP13、SIK1、P130Cas的mRNA和蛋白表达升高，CRTC2的mRNA和蛋白表达降低（ P<0.05）。与HG+LV-CTRP13组相比，HG+LV-CTRP13+HG-9-91-01组CRTC2的mRNA和蛋白表达升高，而SIK1、P130Cas的mRNA和蛋白表达降低（ P<0.05）。与HG+LV-CTRP13组相比，HG+LV-CTRP13+GW4064组CRTC2的mRNA和蛋白表达降低，P130Cas的mRNA和蛋白表达升高（ P<0.05）。 结论:CTRP13、SIK1、CRTC2、P130Cas参与了高糖诱导的HLSEC滤过功能障碍，CTRP13过表达可以抑制高糖诱导的HLSEC滤过功能障碍，这一机制是通过SIK1/CRTC2通路实现的。

目的:探究WNT1诱导信号通路蛋白1（WISP1）在非酒精性脂肪性肝炎（NASH）的功能定位及治疗作用机制。方法:60只雄性C57BL/6J小鼠购于北京维通利华公司，采取简单随机抽样法分为5组，每组10只，正常组喂养普通饲料，通过喂养高脂高胆固醇饲料14周制备NASH小鼠模型，在造模过程中分别腹腔注射IgG单克隆抗体，0.1 g/kg WISP1高亲和力单克隆抗体，0.2 g/kg WISP-1高亲和力单克隆抗体为IgG、低剂量WISP1抗体组和高剂量WISP1抗体组，每周2次，连续给药14周。检测血清丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天门冬氨酸氨基转移酶（AST）、血糖水平。苏木精-伊红（HE）、糖原（PAS）染色、油红O染色观察肝组织病理变化。实时荧光定量聚合酶链反应（Real-time PCR）检测小鼠肝组织中白细胞介素（IL）-10、IL-6、IL-1β、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）mRNA表达水平。检测肝组织总胆固醇（TC）、甘油三脂（TG）水平，酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测还原型谷胱甘肽（GSH）、丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）活性水平，活性氧（ROS）荧光染色检测肝组织中活性氧含量；免疫组织化学（IHC）检测肝组织WISP-1、乙酰辅酶a合成酶（ACS）蛋白表达，蛋白质印迹法（Western blot）检测肝组织肝组织腺苷酸活化蛋白激酶（AMPK）、磷酸化AMPK（p-AMPK）、肉碱棕榈酰转移酶-1（CPT1）、过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅激活因子-1（PCG-1α）蛋白表达水平。结果:模型组小鼠血清AST、ALT、血糖水平高于正常组[（245.01±57.57） U/L比（37.28±4.23） U/L、（218.96±55.27） U/L比（49.81±10.57） U/L、（25.73±2.29） mmol/L比（8.06±0.51） mmol/L， P<0.01]；模型组病理表现为肝细胞脂肪变性、炎性细胞浸润、多处坏死灶；模型组小鼠肝组织炎症因子（IL-10、IL-6、IL-1β、TNF-α）mRNA水平高于正常组（7.49±059比1.00±0.38、5.57±3.22比1.00±0.59、4.86±3.86比1.00±0.34、10.18±3.24比1.00±0.17， P<0.01）；MDA含量高于正常组[（3.75±0.40） nmol/ml比（2.22±0.24） nmol/ml， P<0.01]，GSH、SOD活性低于正常组[（0.22±0.06） ng/ml比（0.49±0.15） ng/ml、（2.19±0.23） pg/ml比（4.59±0.22） pg/ml， P<0.01]，ROS含量高于正常组（4.91±0.31比1.00±0.12， P<0.01）；同时PGC-1α、ACS蛋白表达高于正常组[（2.19±0.084比1.00±0.09、（62.97±2.38）%比（26.72±0.73）%， P<0.01]，CPT1表达低于正常组（0.55±0.01比1.00±0.13， P<0.01）。低、高剂量WISP1抗体组小鼠血清AST、ALT、血糖水平低于模型组[（65.53±25.85）、（53.49±12.22） U/L比（245.01±57.57） U/L，（73.93±23.670）、（60.88±23.38） U/L比（218.96±55.27） U/L，（20.07±2.03）、（16.46±3.71） mmol/L比（25.73±2.29） mmol/L， P<0.01]，低、高剂量WISP1抗体组小鼠肝脏脂肪变性、炎症细胞浸润、坏死程度降低，低、高剂量WISP1抗体组小鼠肝组织IL-10、IL-6、IL-1β、TNF-α mRNA低于模型组（2.98±0.31、2.579±0.22比7.49±1.57，1.83±0.35、2.53±0.32比5.57±1.03, 1.62±0.24、1.52±0.34比4.86±1.33，2.63±0.56、2.12±0.37比10.18±2.31， P<0.05），高剂量WISP1抗体组小鼠MDA含量低于模型组[（1.83±0.694） nmol/ml比（3.70±0.50） nmol/ml， P<0.01]，GSH、SOD活性高于模型组[（0.45±0.12） ng/ml比（0.22±0.06） ng/ml、（5.50±0.98） pg/ml比（2.19±0.40） pg/ml， P<0.01]，活性氧含量低于模型组（0.51±0.06比4.91±0.31， P<0.01）。低、高剂量WISP1抗体组PGC-1α、ACS蛋白表达低于模型组（1.22±0.16、1.07±0.05比2.19±0.08，（33.50±3.45）%、（35.38±3.65）%比（62.97±2.38）%， P<0.01），p-AMPK、CPT1表达高于模型组（2.61±0.363、2.47±0.36比1.04±0.14，1.23±0.23、1.27±0.03比0.55±0.01， P<0.01）。 结论:抗WISP1治疗能通过激活AMPK通路，介导PGC-1α/CPT1通路改善NASH小鼠肝脏脂质代谢，减少炎症和脂质过氧化，促进肝细胞修复。

目的:观察银杏叶提取物(Ginkgo biloba extract，EGb)对鱼藤酮所致大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞(PC12)损伤的保护作用及机制。方法:将PC12细胞分为空白对照组、鱼藤酮模型组(0.5 μmol/L鱼藤酮)和EGb761组(0.5 μmol/L鱼藤酮＋100 mg/L EGb761)，按照分组给予药物干预后，采用JC-1探针检测各组细胞线粒体膜电位；美国海马细胞能量代谢分析仪检测线粒体能量代谢水平，Western blot检测半胱氨酸蛋白酶3(caspase-3)和裂解caspase-3(cleaved-caspase-3)、腺苷酸活化蛋白激酶(adenosine monophosphate-activated protein kinase，AMPK)、磷酸化AMPK(phosphorylated AMPK，p-AMPK)、磷脂酰肌醇-3-激酶(posphatidylinositol 3-kinase，PI3K)、磷酸化PI3K(phosphorylated PI3K，p-PI3K)、丝氨酸/苏氨酸激酶(serine/threonine-protein kinase，AKT)、磷酸化AKT(phosphorylated AKT，p-AKT)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin，mTOR)和磷酸化mTOR(phosphorylated mTOR，p-mTOR)的蛋白表达水平。使用SPSS 20.0软件进行统计分析，多组间比较采用单因素方差分析，进一步两两比较采用LSD检验。结果:(1)3组细胞的线粒体膜电位差异有统计学意义( F＝34.89， P<0.05)，EGb761组细胞的线粒体膜电位显著高于鱼藤酮模型组[荧光强度比值：(1.30±0.16)，(0.81±0.15)]( P<0.05)。(2)3组细胞的基础呼吸水平、ATP产生能力、最大呼吸能力和呼吸储备能力均差异有统计学意义( F＝38.07，64.18，64.42，34.62，均 P<0.05)，EGb761组细胞的基础呼吸水平[(73.02±13.81)pmol/min]、ATP产生能力[(57.08±7.31)pmol/min]、最大呼吸能力[(177.70±17.14)pmol/min]和呼吸储备能力[(104.72±8.58)pmol/min]均显著高于鱼藤酮模型组[(33.69±3.91)pmol/min，(18.08±2.50)pmol/min，(113.12±13.24)pmol/min，(79.43±9.35)pmol/min](均 P<0.05)。(3)3组细胞的cleaved-caspase-3/caspase-3、p-AMPK/AMPK、p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT、p-mTOR/mTOR比值均差异有统计学意义( F＝48.05，28.68，33.73，45.81，17.39，均 P<0.05)，EGb761组细胞的cleaved-caspase-3/caspase-3比值[(1.95±0.36)，(3.56±0.37)]和p-AMPK/AMPK比值[(1.49±0.19)，(2.25±0.27)]均显著低于鱼藤酮模型组(均 P<0.05)；p-PI3K/PI3K比值[(0.75±0.07)，(0.44±0.07)]、p-AKT/AKT比值[(0.74±0.06)，(0.36±0.09)]、p-mTOR/mTOR比值[(0.90±0.06)，(0.62±0.07)]均显著高于鱼藤酮模型组(均 P<0.05)。 结论:EGb761对鱼藤酮诱导的PC12细胞损伤具有保护作用，其机制可能与其减弱了鱼藤酮对AMPK的激活和对PI3K/AKT/mTOR通路的抑制作用、增强了线粒体的能量代谢功能并抑制细胞凋亡有关。

目的:探讨中药单体贯叶金丝桃素(HPF)与氨来呫诺(AM)联合给药时，对抗肥胖及改善代谢紊乱的叠加治疗作用。方法:采用ob/ob小鼠为肥胖小鼠模型，在HPF单药(2.5 mg/kg，腹腔注射)或与AM(50 mg/kg，灌胃)联合给药4周后，监测小鼠体重、摄食，检测血清丙氨酸转氨酶(ALT)和天冬氨酸转氨酶(AST)水平，并通过小动物核磁共振、代谢笼、糖耐量和胰岛素耐量检测及HE染色等方法，观察小鼠的体重变化、能量消耗、脂肪含量、糖代谢等的变化。Western印迹和酶联免疫吸附测定(ELISA)用以检测环磷酸腺苷(cAMP)-蛋白激酶A(PKA)信号通路。结果:给药4周后，与对照组相比(平均体重54.07 g)，HPF给药组的小鼠平均体重下降至51.33 g( P＝0.042)；与AM联合给药后，小鼠平均体重进一步降低至47.61 g( P＝0.041)，表现出明显的叠加效应。小鼠核磁共振结果显示，HPF给药后小鼠脂肪含量减少( P＝0.011)，表现为腹股沟白色脂肪和附睾旁白色脂肪的细胞直径都变小( P＝0.014, P＝0.032)，产生棕色化趋势，棕色脂肪组织中白色脂肪浸润减少。然而，与HPF给药组相比，两药联合治疗并没有使白色脂肪细胞进一步变小或减少其在棕色脂肪组织的脂质积累。代谢笼实验显示，HPF处理的小鼠在光照期的氧气消耗率( P<0.001)和二氧化碳释放率( P＝0.002)都显著高于对照组小鼠，HPF与AM的组合可以进一步提高小鼠的能量消耗。此外，HPF与AM联合给药可以进一步激活白色脂肪组织中的儿茶酚胺下游cAMP-PKA信号通路。当联合用药时，肥胖小鼠的胰岛素抵抗改善，肝脏三酰甘油含量减少( P＝0.049)，肝脏损伤指标血清ALT水平下降( P＝0.008)。 结论:HPF和AM联合用药有望成为治疗肥胖、改善代谢紊乱、缓解儿茶酚胺抵抗的有效策略。

目的:观察吡咯并喹啉醌(PQQ)在氧化应激条件下对大鼠骨髓间充质干细胞(BMSC)线粒体功能和细胞存活的影响，并探讨其作用机制。方法:体外用含体积分数10%胎牛血清的DMEM/F12培养基(下称正常培养基)培养大鼠BMSC，选取对数生长期的第3～5代细胞进行实验。(1)取细胞，分为正常对照组、正常对照＋PQQ组、单纯过氧化氢组、过氧化氢＋PQQ组。正常对照组细胞用正常培养基培养24 h；正常对照＋PQQ组细胞用含终物质的量浓度为100 μmol/L PQQ的正常培养基培养24 h；单纯过氧化氢组细胞用含有终物质的量浓度为200 μmol/L过氧化氢的正常培养基培养24 h；过氧化氢＋PQQ组细胞用含有终物质的量浓度为100 μmol/L PQQ的正常培养基培养2 h后，加入终物质的量浓度为200 μmol/L的过氧化氢培养24 h。于倒置相差显微镜下观察各组细胞形态，采用细胞计数试剂盒8法检测细胞存活率。(2)取5个批次细胞，均分为正常对照组、单纯过氧化氢组、过氧化氢＋PQQ组，各组细胞处理同实验(1)中相应各组。培养24 h后，采用流式细胞术对1个批次细胞进行细胞凋亡检测，计算细胞凋亡率；采用JC-1线粒体膜电位检测试剂盒和倒置相差荧光显微镜对1个批次细胞分别进行线粒体膜电位检测和JC-1荧光染色观察；采用透射电镜观察1个批次细胞线粒体形态；采用过氧化氢酶(CAT)和超氧化物歧化酶(SOD)活性测定试剂盒对1个批次细胞分别进行CAT和SOD活性检测；采用蛋白质印迹法对1个批次细胞环磷酸腺苷活化交换蛋白1(Epac1)、腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)、磷酸化AMPK、剪切型半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(caspase-3)、caspase-3蛋白表达进行检测，计算AMPK磷酸化水平、剪切型caspase-3/caspase-3比值。除形态观察外，其余各指标每组样本数均为6。对数据行单因素方差分析、独立样本等方差 t检验。 结果:(1)培养24 h后，单纯过氧化氢组细胞出现空泡且数量较正常对照组减少，细胞存活率为(74.3±2.9)%，较正常对照组的100.0%明显降低( t＝6.39， P<0.01)；与单纯过氧化氢组比较，过氧化氢＋PQQ组细胞形态明显改善，细胞存活率明显升高至(116.9±4.2)%( t＝6.92， P<0.01)；正常对照＋PQQ组细胞存活率为(101.2±1.1)%，与正常对照组相近( t＝1.06， P>0.05)。(2)培养24 h后，与正常对照组的(13.6±1.0)%比较，单纯过氧化氢组细胞凋亡率明显增加[(37.1±2.0)%， t＝10.57， P<0.01]；与单纯过氧化氢组比较，过氧化氢＋PQQ组细胞凋亡率明显降低[(17.0±0.7)%， t＝9.49， P<0.01]。(3)培养24 h后，与正常对照组比较，单纯过氧化氢组细胞线粒体膜电位出现去极化，JC-1荧光染料主要以单体形式存在于细胞质中，发出绿色荧光，表现为膜电位明显降低( t＝4.18， P<0.01)；与单纯过氧化氢组比较，过氧化氢＋PQQ组细胞线粒体膜电位升高至正常水平( t＝4.43， P<0.01)，JC-1荧光染料顺着极化线粒体膜电位进入线粒体聚集，发出红色荧光。(4)培养24 h后，与正常对照组的规则形态比较，单纯过氧化氢组细胞线粒体结构紊乱，线粒体嵴消失，线粒体基质密度降低；与单纯过氧化氢组比较，过氧化氢＋PQQ组细胞线粒体结构规则完整，线粒体嵴清晰可见，线粒体基质密度增加。(5)培养24 h后，与正常对照组比较，单纯过氧化氢组细胞CAT活性明显升高( t＝4.54， P<0.05)，SOD活性明显降低( t＝3.93， P<0.05)；与单纯过氧化氢组比较，过氧化氢＋PQQ组细胞CAT活性明显上升( t＝8.65， P<0.01)，SOD活性无明显变化( t＝0.72， P>0.05)。(6)培养24 h后，与正常对照组比较，单纯过氧化氢组细胞Epac1蛋白表达明显降低( t＝4.67， P<0.01)，AMPK磷酸化水平、剪切型caspase-3/caspase-3比值明显升高( t＝7.88、3.62， P<0.01)；与单纯过氧化氢组比较，过氧化氢＋PQQ组细胞Epac1蛋白表达、AMPK磷酸化水平均明显升高( t＝4.34、16.37， P<0.01)，剪切型caspase-3/caspase-3比值明显降低( t＝3.17， P<0.05)。 结论:PQQ预处理能够改善氧化应激条件下大鼠BMSC的线粒体功能，降低细胞凋亡率，提高细胞存活率，且可能与Epac1蛋白表达上调、AMPK信号通路激活和剪切型caspase-3蛋白水平降低有关。

目的:评价二甲双胍预处理对糖尿病大鼠心肌缺血再灌注损伤时单磷酸腺苷激活蛋白激酶(AMPK)/PTEN诱导假定激酶1(PINK1)信号通路的影响。方法:清洁级健康雄性SD大鼠36只，6周龄，体质量120~160 g，采用随机数字表法分为3组( n＝12)：糖尿病假手术组(DS组)、糖尿病心肌缺血再灌注组(DI/R组)和糖尿病心肌缺血再灌注+二甲双胍预处理组(DI/R+Met组)。高脂高糖饲料喂养4周后，通过单次腹腔注射1%链脲佐菌素40 mg/kg制备2型糖尿病模型。采用阻断左冠状动脉前降支30 min，再灌注120 min的方法制备大鼠心肌缺血再灌注损伤模型。DI/R+ Met组于心肌缺血前1周给予每天1次二甲双胍200 mg/kg灌胃处理。于再灌注120 min时采集股静脉血样，采用ELISA法检测血清CK-MB和cTnI浓度；随后处死大鼠取心肌组织，采用HE染色法观察病理学结果；采用伊文氏蓝和TTC双重染色法确定心肌梗死体积百分比；采用Western blot法检测心肌自噬相关蛋白Beclin-1、PINK1、磷酸化AMPK(p-AMPK)的表达和微管相关蛋白1轻链3 Ⅱ/Ⅰ(LC3Ⅱ/Ⅰ)的比值。 结果:与DS组比较，DI/R组和DI/R+ Met组心肌梗死体积百分比、血清CK-MB和cTnI浓度升高，心肌Beclin-1、p-AMPK和PINK1表达上调，LC3Ⅱ/Ⅰ比值升高( P<0.05)，病理学损伤加重；与DI/R组比较，DI/R+ Met组心肌梗死体积百分比、血清CK-MB和cTnI浓度降低，心肌Beclin-1、p-AMPK和PINK1表达上调，LC3Ⅱ/Ⅰ比值升高( P<0.05)，病理学损伤减轻。 结论:二甲双胍预处理减轻糖尿病大鼠心肌缺血再灌注损伤的机制与激活AMPK/PINK1信号通路上调线粒体自噬水平有关。

目的:探讨二甲双胍对肝脏缺血再灌注损伤的影响及其机制。方法:30只C57BL/6小鼠随机分为假手术组(Sham组)、缺血再灌注组(I/R组)、缺血再灌注组＋二甲双胍组(I/R＋MET组)。I/R组和I/R＋MET组小鼠建立肝脏缺血再灌注损伤模型，Sham组小鼠不建模。I/R＋MET组小鼠术前每日二甲双胍200 mg/kg腹腔注射，术前24 h停止给药。Sham组和I/R组小鼠术前每日腹腔注射等体积生理盐水。3组小鼠在术后6 h，取静脉血，检测血清谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)浓度。原位缺口末端标记法(TUNEL)染色试剂盒分析3组肝脏组织细胞凋亡。放射免疫法检测3组小鼠氧化应激反应。酶联免疫吸附试验(ELISA)分析3组小鼠肝脏炎性因子水平变化。蛋白质免疫印迹分析3组小鼠肝脏组织腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)、UNC-51样激酶(ULK1)、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)、自噬底物p62蛋白表达水平。组间计量数据比较采用单因素方差分析。结果:I/R＋MET组小鼠血清ALT和AST水平[(62.37±8.07)、(121.51±20.45) U/L]明显低于I/R组[(140.53±13.07)、(187.19±18.73) U/L]，差异有统计学意义( t＝18.150、7.489， P<0.05)。I/R＋MET组小鼠肝脏组织炎性因子[(55.70±6.36)、(39.62±6.66)、(64.12±5.33) pg/g]低于I/R组[(99.15±7.45)、(82.73±8.90) 、(102.40±13.17) pg/g]，差异有统计学意义( t＝18.580、14.030、9.630， P<0.05)。I/R＋MET组小鼠血清MDA水平[(1.03±0.05) μmol/ml]明显低于I/R组[(1.73±0.14) μmol/ml]，差异有统计学意义( t＝14.970， P<0.05)。I/R＋MET组小鼠血清SOD水平[(129.70±7.12) U/ml]明显高于I/R组[(99.50±10.66) U/ml]，差异有统计学意义( t＝14.970， P<0.05)。I/R＋MET组小鼠肝脏组织TUNEL染色阳性率[(13.57±2.01)%]明显低于I/R组[(26.40±4.05)%]，差异有统计学意义( t＝8.967， P<0.05)。I/R＋MET组小鼠肝脏组织AMPK磷酸化和ULK1磷酸化水平(1.25±0.06、1.37±0.09)明显高于I/R组(0.65±0.07、0.96±0.06)，差异有统计学意义( t＝19.480、11.670， P<0.05)。I/R＋MET组小鼠肝脏组织自噬底物蛋白p62水平(0.67±0.08)明显低于I/R组(0.98±0.05)，差异有统计学意义( t＝10.050， P<0.05)。 结论:二甲双胍通过激活AMPK，促进细胞自噬，缓解肝脏缺氧缺血引起的氧化应激和炎性反应，对缺血再灌注损伤肝脏起保护作用。

目的:探讨腺苷酸环化酶（ADCY）2/4/5/8在皮肤恶性黑色素瘤中的表达、作用及功能机制，验证ADCY2/4/5/8对黑色素瘤细胞A375增殖和迁移的影响。方法:通过基因表达谱分析（GEPIA）和人类蛋白质图谱（HPA）数据库分析ADCY2/4/5/8 mRNA和蛋白的表达以及基因表达与预后的关联，UALCAN、DeMth和cBioPortal数据库分析ADCY2/4/5/8基因甲基化和突变状态，DAVID和STRING数据库对ADCY2/4/5/8基因进行基因富集分析和通路分析。qPCR检测黑色素瘤A375细胞及色素痣FF细胞中ADCY2/4/5/8 mRNA的相对表达。将A375细胞分为实验组和对照组分别转染ADCY2/4/5/8过表达质粒和对照空载体，采用CCK8和Transwell实验检测过表达ADCY2/4/5/8对A375细胞增殖和迁移的影响，qPCR检测过表达ADCY2/4/5/8基因对A375细胞增殖、迁移相关基因mRNA相对表达的影响，Western印迹法检测过表达ADCY2/4/5/8基因对A375细胞环磷酸腺苷（cAMP）信号通路的影响。组间比较采用单因素方差分析和重复测量方差分析，组间两两比较采用LSD- t检验。 结果:GEPIA数据库分析显示，558例正常组织中，ADCY2、ADCY4、ADCY5和ADCY8 mRNA在黑色素瘤组织（ n = 461）中表达下调（ P < 0.01）。对GEPIA数据库中黑色素瘤ADCY2/4/5/8 mRNA的表达分层分析显示，ADCY2 mRNA（ P = 0.015）和ADCY8 mRNA（ P = 0.038）的表达与肿瘤分期相关，表达越低，分期越晚。HPA数据库30例黑色素瘤临床样本和正常组织中，ADCY2/4/5/8蛋白在黑色素瘤组织较正常组织表达降低（ P < 0.001）。UALCAN和DeMth数据库分析显示，与正常组织相比，ADCY2/4/5/8在黑色素瘤组织和转移性黑色素瘤组织中甲基化水平升高（ P < 0.001）。DAVID、STRING分析示，ADCY2/4/5/8基因可能通过激活cAMP信号通路抑制细胞增殖和迁移。qPCR检测显示，A375细胞中ADCY2/4/5/8 mRNA的相对表达均低于FF细胞。CCK8实验显示，培养48、72 h时，过表达ADCY2/4/5/8实验组A375细胞存活率均低于对照组（均 P < 0.05）。Transwell实验显示，过表达ADCY2/4/5/8实验组A375细胞迁移数均低于对照组（均 P < 0.01）。qPCR结果显示，过表达ADCY2/4/5/8实验组A375细胞上皮钙黏蛋白mRNA相对表达高于对照组，Ki67、波形蛋白、神经钙黏蛋白和基质金属蛋白酶2 mRNA相对表达低于对照组（均 P < 0.001）。Western印迹实验显示，过表达ADCY2/4/5/8实验组A375细胞cAMP和磷酸化蛋白激酶A（p-PKA）表达高于对照组（ P < 0.001），实验组与对照组细胞PKA蛋白表达水平差异无统计学意义（ P > 0.05）。 结论:ADCY2/4/5/8在黑色素瘤组织中低表达，过表达时可抑制黑色素瘤细胞的增殖和迁移，可能作为潜在的抑癌基因参与黑色素瘤的进展。

目的:观察腺苷受体2a(A2aR)通过环磷酸腺苷/蛋白激酶A(cAMP/PKA)调控髓核细胞凋亡的作用。方法:培养原代大鼠髓核细胞，白细胞介素-1β(IL-1β)刺激细胞构建实验组，无菌磷酸盐缓冲液(PBS)刺激作为阴性对照组，IL-1β刺激后加入A2aR激动剂CGS-21680作用为干预组。利用酶联免疫吸附测定(ELISA)和实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)检测细胞中A2aR、腺苷酸环化酶(adenylate cyclase，AC)、cAMP和PKA表达，流式细胞术检测细胞凋亡发生率。组间比较采用单因素方差分析。结果:不同浓度的CGS-21680刺激细胞24 h后，细胞计数试剂盒(CCK-8)检测细胞增殖，结果表明CGS-21680浓度为10 μmol/L时，细胞增殖率上升为(123.67±7.09)%，此为最佳浓度。IL-1β刺激髓核细胞，腺苷受体A2aR表达低于对照组(0.24±0.01比1.24±0.23， F＝0.036， P<0.05)，这时AC表达显著低于对照组(13.21±1.01比45.68±1.55， F＝0.379， P<0.05)，cAMP和PKA表达低于对照组(1.28±0.44比19.3±1.75， F＝0.471， P<0.05；2.23±1.28比29.26±2.71， F＝0.359， P<0.05)，髓核细胞凋亡率高于对照组(30.50±3.80比14.07±1.26， F＝0.342， P<0.05)；在IL-1β刺激同时给予腺苷受体激动剂CGS-21680干预，结果显示A2aR表达高于实验组(0.61±0.05比0.24±0.01， F＝0.036， P<0.05)，AC表达显著高于实验组(32.47±0.92比13.21±1.01， F＝0.379， P<0.05)，cAMP和PKA高于实验组(5.65±0.98比1.28±0.44， F＝0.471， P<0.05；15.75±2.87比2.23±1.28， F＝0.359， P<0.05)，髓核细胞凋亡发生低于实验组(20.30±5.05比30.50±3.80， F＝0.342， P<0.05)。 结论:腺苷受体A2aR是髓核细胞受到炎症刺激后调控细胞凋亡发生的关键受体，可通过激活cAMP/PKA信号减轻髓核细胞损伤。

目的:基于单细胞转录组测序分析百草枯（PQ）诱导的帕金森病（PD）样小鼠大脑小胶质细胞亚群差异基因和相关信号通路，为阐明PQ致动物大脑PD样改变的机制研究提供线索。方法:于2021年9月，将6周龄C57BL/6雄性小鼠6只随机分为对照组和实验组（每组3只），分别以生理盐水、10.0 mg/kg PQ进行腹腔注射，每3天1次，连续10次注射造模。染毒结束后取小鼠大脑，进行10× Genomics单细胞转录组测序。根据基因表达特征筛选小胶质细胞亚群，进行基因本体（GO）富集分析和京都基因与基因组百科全书（KEGG）富集分析。进一步筛选实验组和对照组间小胶质细胞亚群的差异基因，利用生物信息学工具进行功能显著性富集分析。采用0、60、90 μmol/L的PQ溶液处理小鼠小胶质细胞（BV2细胞），通过实时荧光定量PCR实验验证差异基因己糖激酶2（Hk2）、ATPase H+转运V0亚基b（Atp6v0b）、神经调节蛋白1（Nrg1）的表达情况。结果:根据特征基因肌醇多磷酸-5-磷酸酶d（Inpp5d）和转化生长因子β受体1（Tgfbr1）将Cluster 7和Cluster 20亚群识别为小胶质细胞亚群，且该亚群反映小胶质细胞活化M2表型。生物信息学分析结果显示，所识别小胶质细胞亚群特征基因均富集到内吞作用；在分子功能方面主要富集跨膜受体蛋白激酶活性和细胞因子结合等功能。Cluster 7亚群上调基因主要富集于溶酶体通路、内吞作用等通路；下调基因主要富集于神经退行性疾病等信号通路。Cluster 20亚群上调基因主要富集于与PD相关的信号通路；下调基因主要富集于环磷酸腺苷（cAMP）信号传导途径、神经系统发育、突触功能等信号通路。实时荧光定量PCR检测结果显示，与0 μmol/L比较，90 μmol/L PQ溶液处理后BV2细胞的Hk2 mRNA和Atp6v0b mRNA表达水平升高，Nrg1 mRNA表达水平降低，差异均有统计学意义（ P<0.05）。 结论:小胶质细胞在PQ诱导的PD样小鼠模型中被激活，且向M2表型极化，其功能与溶酶体（内吞）、突触功能及PD相关信号通路的调节有关。