目的:了解2002-2018年浙江省病毒性脑膜炎病原学及分子流行病学特征。方法:从设立的监测点医院采集疑似病毒性脑膜炎患者样本2 173份，其中脑脊液1 718份、粪便455份，用荧光定量PCR方法检测脑脊液中人类肠道病毒（HEV）、腮腺炎病毒（MuV）、单纯疱疹病毒（HSV）、巨细胞病毒（CMV）和乙型脑炎病毒（JEV）核酸，粪便样本只检测HEV；用ELISA方法检测脑脊液中上述5种病毒IgM抗体；对HEV核酸阳性样本扩增病毒VP1基因和测序，确定病毒型别并进行进化分析。结果:在2002-2018年2 173份样本中检出HEV核酸阳性871份（40.1 %），其中脑脊液1 718份、阳性654份（38.1 %），粪便455份、阳性217份（47.7 %）；871份HEV核酸阳性样本，VP1扩增测序阳性670份，其中HEV-A 5份、HEV-B 665份，涉及23个病毒血清型，分别为柯萨奇病毒（CV）A组CVA4、CVA6、CVA9、CVA10，CVB组1~5，埃可病毒（EchoV；E）E3、E4、E6、E7、E9、E11、E14、E16、E18、E21、E25、E30、E33和肠道病毒（EV）-71，位于前3位的分别为E30、E6和CVB5，该3个血清型间隔若干年呈现病毒活动性增强的趋势。从2012-2015和2018年795份脑脊液中检出HEV核酸阳性374份、MuV 6份、HSV和CMV均为5份，对其中的368份脑脊液同时检测5种病毒IgM抗体，HEV抗体阳性2份、JEV 6份、MuV 1份。670份HEV中除1份EV-71外，EchoV 517份、CV 152份，两者之比为3.4∶1，两类病毒间隔3~5年存在优势株交替变化的趋势。VP1进化树显示，浙江省HEV位于HEV-A和HEV-B分支上，E30存在h和i基因亚型。 结论:浙江省病毒性脑膜炎的主要病原为HEV-B；EchoV检出率明显高于CV，两类病毒存在交替变化的趋势；优势血清型E30、CVB5和E6间隔若干年呈现病毒活动性增强的趋势；监测点HEV活动强度与病毒性脑膜炎暴发疫情的发生两者之间在时间上有较好的相关性。

患者，男，49岁，于2020年2月12日因双眼红、右眼视物变暗，夜间急诊就诊于我院眼科，当时诊断为双眼结膜炎，给予左氧氟沙星滴眼液点眼治疗。2月14日自觉双眼视力下降、视物变暗，再次就诊我院眼科。当时眼部查体：裸眼视力（UCVA）右眼0.12，左眼0.1，矫正视力右眼+3.0=0.9，左眼+3.0=0.8。双眼结膜轻度充血，其余前节未见明显异常。眼底彩照见图1，当时就诊医师认为眼底未见明显异常。诊断双眼结膜炎，给予妥布霉素地塞米松滴眼液，每日4次点双眼治疗，4 d后自觉视力好转，继续妥布霉素地塞米松滴眼液点眼治疗。2月22日患者出现头痛，头皮针刺感，自行口服羊角片，布洛芬胶囊对症治疗。2月24日自觉头痛及头皮针刺感加重，不能触摸头皮，当时患者就诊神经内科行头部CT检查未发现明显异常，患者继续间断口服布洛芬胶囊对症治疗。3月2日患者出现视力下降再次就诊我院眼科，UCVA：双眼0.1，矫正视力：右眼+3.0 D=0.2，左眼+3.0 D=0.12。双眼结膜轻度充血，角膜下方灰白色的角膜后沉积物（Keratic precipitate，KP），前房清，瞳孔光反射灵敏，晶状体透明，玻璃体呈颗粒样混浊（见图2），眼底：右眼视盘边界不清，视盘周围线状出血，视网膜动静脉大致正常，后极部视网膜局部水肿，黄斑区反光消失。左眼视盘边界不清，视网膜动静脉大致正常，后极部视网膜局部水肿，黄斑区反光消失。辅助检查：光学相干断层成像（OCT）检查（见图3）提示：双眼黄斑区浆液性视网膜脱离，视网膜色素上皮（Retinal pigment epithelium，RPE）层呈波浪样改变。双眼荧光素眼底血管造影（FFA） （见图4）提示：双眼视盘区毛细血管扩张，晚期视盘周围荧光素渗漏，荧光增强，后极部局部视网膜可见针尖样高荧光。根据患者双眼全葡萄膜炎和头痛的症状和体征，初步诊断为福格特-小柳-原田综合征（Vogt-Koyanagi-Harada syndrome，VKHS）。给予口服醋酸泼尼松片60 mg/次，1次/日，晨起口服。3月4日患者晨起后出现眩晕、耳鸣、恶心、无呕吐、双下肢无力、走路不稳收入眼科住院治疗。既往身体健康，否认家族眼病史，偶有吸烟、饮酒。否认糖尿病史、屈光不正史。全身情况：秃发，未发现白发和皮肤改变。眼部查体：UCVA：右眼0.1，左眼0.1，矫正视力：右眼+1.5 D=0.2，左眼+1.5 D=0.12，右眼眼压16 mmHg（1 mmHg=0.133 kPa），左眼15 mmHg。眼前节及后节同2 d前查体情况。眼球运动检查：第一眼位时双眼水平震颤，向左侧注视时水平震颤较第一眼位时加重，向右侧注视时水平震颤较轻。颅脑磁共振成像（MRI）检查：轻度缺血性脑白质病变，左侧上颌窦、筛窦、蝶窦炎（见图5）。化验：血常规正常，结核分枝杆菌抗体阴性，肝肾功能正常，血糖正常，梅毒特异性抗体阴性，钾离子3.47 mmol/L，超敏C反应蛋白正常，抗"O"正常，血沉正常，抗核抗体谱均阴性，抗单纯疱疹病毒I型IgG阳性，抗巨细胞病毒IgG阳性。

目的:了解1例新型冠状病毒肺炎(Coronavirus Disease 2019, COVID-19)确诊病例的病原学构成。方法:将1例COVID-19确诊病例的口咽拭子、血清、鼻咽拭子的标本接种到Vero-E6细胞管进行病毒分离，每日观察细胞病变(cytopathic effect, CPE)情况，待CPE达75%以上收获细胞分离物，反复冻融3次后离心取上清液，应用透射电镜观察获取病毒电镜图片，同时提取病毒核酸，采用二代测序技术进行全基因组序列测序。通过序列进化分析，对获得的病毒株进行鉴定分型。结果:本研究从1例COVID-19患者的鼻咽拭子中分离到1株新型冠状病毒(2019 novel coronavirus, 2019-nCoV)，同时在该患者的1份口咽拭子中分离到1株单纯疱疹病毒I型(herpes simplex virus type 1, HSV-1)。结论:COVID-19病例存在2019-nCoV和HSV-1合并感染的可能性。

目的:评价锇-硫代碳酰肼-锇（osmium-thiocarbohydrazide-osmium，OTO）及还原锇-硫代碳酰肼-锇（ferrocyanide-reduced-osmium-thiocarbohydrazide-osmium，ROTO）两种块染技术对病毒样品超薄切片的染色效果。方法:收集四种病毒（人5型腺病毒、I型单纯疱疹病毒、人肠道病毒、呼吸道合胞病毒）感染的细胞样品，分别用OTO及ROTO技术进行块染，并以常规超薄切片染色为对照，通过透射电子显微镜观察并拍照，统计分析OTO及ROTO技术制备的病毒样品染色效果。结果:OTO及ROTO法对病毒感染细胞样品的染色效果良好，病毒结构清楚，与常规染色效果相比无显著差异。结论:OTO及ROTO技术可适用于多种类型病毒样品的块染处理，为病毒感染细胞样本的连续超薄切片、大尺度样品制备及电镜观测提供了依据。

目的:探索单纯疱疹病毒性角膜炎(HSK)复发模型的建立及鉴定方法。方法:选取12只BALB/c健康小鼠，采用随机数字表法按照紫外灯照射时间不同分为紫外灯照射3 min组、2 min45 s组和2 min30 s组，每组4只，观察角膜损伤情况以确定最适紫外灯照射参数。另取72只BALB/c健康小鼠，采用随机数字表法将其分为空白对照组、模型组和复发组，每组24只。所有小鼠均用手术刀片在右眼角膜划开#字，空白对照组滴入5 μl生理盐水，模型组和复发组均滴入Ⅰ型单纯疱疹病毒(HSV-1)悬液，感染后不予腹腔内注射HSV-1异种血清抗体。初次感染病毒后5周，对复发组采取紫外灯照射法诱导小鼠模型眼疾病复发；评价眼表病变症状评分和角膜擦拭液相对应的非洲绿猴肾(Vero)细胞培养后细胞的形态学改变。结果:照射时长2 min45 s为紫外灯照射最适条件。模型组和复发组小鼠在初次感染后1周内出现HSK表现，1周后症状逐渐消失。诱导复发前裂隙灯显微镜检查模型组和复发组小鼠HSK均未自发性复发，经紫外灯照射后复发组小鼠1周内复发，出现HSK表现。诱导复发后1 d，空白对照组、模型组和复发组眼表病变症状评分分别为0.333±0.471、1.500±0.764和2.667±0.943；3 d时分别为0.000±0.000、0.833±0.373和5.167±2.267；7 d时分别为0.167±0.373、1.000±0.577和3.000±1.155；诱导复发后3 d，复发组眼表病变症状评分均高于空白对照组和模型组，差异均有统计学意义(均 P<0.05)。Vero细胞培养小鼠角膜擦拭液后发生漂浮、聚拢等形态学改变(CPE病变)，复发组小鼠角膜擦拭液细胞培养CPE病变阳性率为71%(17/24)，明显高于模型组的8%(2/24)，差异有统计学意义( P<0.01)。综合2个指标计算建模复发成功率可达71%。 结论:紫外灯照射可成功诱导未注射中和血清抗体的HSK小鼠复发。

患儿，男，9岁，28 kg，因“发热伴咳嗽11 d，加重伴呼吸困难3 d”于2021年7月29日入院。11 d前患儿出现发热，体温39.5 ℃，伴轻微咳嗽，1~2声/次，当地诊所诊断为支气管肺炎，给予头孢曲松静脉滴注及布地奈德雾化治疗5 d，患儿仍有发热伴咳嗽，遂联合阿奇霉素抗感染治疗3 d，亦未见好转。3 d前咳嗽较前加重，伴呼吸困难，遂就诊于当地医院，完善胸部CT提示右侧液气胸，给予右侧胸腔闭式引流，同时予无创呼吸机辅助通气，头孢哌酮舒巴坦钠联合青霉素抗感染等治疗，呼吸困难未见改善，改为有创呼吸机辅助通气，后仍有呼吸困难，遂转入本院。入院查体：体温38.0 ℃，脉搏110 次/min，呼吸40 次/min，血压91/55 mmHg（1 mmHg=0.133 kPa），面色口唇发绀，三凹征阳性，左肺呼吸音粗，可闻及广泛痰鸣音，右肺呼吸音低，未闻及干湿啰音，余查体未见异常。入院诊断：（1）急性呼吸窘迫综合征；（2）重症肺炎。入院后给予亚胺培南西司他丁钠联合利奈唑胺抗感染，呼吸机辅助通气［AC-VC模式 FIO 2 70%，PEEP 6 cmH 2O（1 cmH 2O=0.098 kPa），RR 20 次/min，VT 90 mL，吸呼比（I∶E）1∶2］等治疗。辅助检查：血常规：白细胞（WBC）19.94×10 9/L，中性粒细胞（NE）13.27×10 9/L，淋巴细胞（LY）2.47×10 9/L，血红蛋白（Hb）93 g/L。肝肾功能、电解质、心肌酶大致正常。C反应蛋白（CRP）2.14 mg/L。降钙素原（PCT）：8.84 μg/L。曲霉菌半乳甘露聚糖、（1，3）-β-D葡聚糖、肺炎支原体抗体、HIV均阴性。体液免疫三项（IgA、IgG、IgM）、淋巴细胞（T细胞、B细胞、自然杀伤细胞）免疫分析均正常。双份血培养、深部呼吸道分泌物培养均阴性。胸部CT可见右侧液气胸，右肺膨胀不全，左肺大片状模糊影（见图1 A~C）。胸腔彩超：右侧胸腔积液，最大深度42 mm，内可见机化黏连。入院第2天行纤维支气管镜检查，左肺可见少量稀白分泌物附着，右肺中下叶可见较多白色黏稠分泌物，灌洗后送检支气管肺泡灌洗液（bronchoalveolar lavage fluid，BALF）及血液宏基因二代测序（metagenomics next-generation sequencing，mNGS），30 h后BALF mNGS回报结果：单纯疱疹病毒1型（herpes simplex virus type 1，HSV1），序列数4 495（见图2），沃氏嗜胆菌，序列数1 383（见图3）。血液mNGS结果回报：HSV1，序列数644。考虑单纯疱疹病毒1型肺炎（herpes simplex virus type 1 pneumonia，HSV1P），遂调整抗感染策略为阿昔洛韦联合头孢哌酮舒巴坦钠，治疗3 d后患儿体温正常，呼吸机参数较前下降（AC-VC模式FIO 2 45%，PEEP 5 cmH 2O，RR 20次/min，VT 90 mL，I∶E 1∶2），治疗第5 d复查胸部CT提示右肺仍可见大面积实变影（见图1 D~F），遂行第2次纤维支气管镜检查，术中右肺可见较多稀白分泌物，再次送检BALF培养阴性。抗病毒治疗2周后复查胸部CT提示双肺肺炎较前好转，右侧液气胸局部可见包裹（见图1 G~I），撤离呼吸机，改为鼻导管吸氧。抗感染治疗3周后复查胸部CT：双肺肺炎较前明显吸收、好转（见图1 J~L），复查BALF培养及mNGS均阴性，遂停用阿昔洛韦抗病毒治疗。共住院27 d后好转出院，出院后建议胸外科随诊，必要时手术治疗，但患儿并未遵嘱随访。出院后原发性免疫缺陷病相关基因筛查回报阴性。患儿治疗参数变化。见表1。

目的 探讨真核翻译延伸因子1A1(eEF1A1)对水疱性口炎病毒(VSV)和单纯疱疹病毒(HSV-1)复制的影响,以确定一个广谱抗病毒新靶点.方法 在人皮肤成纤维细胞(BJ-5ta)中转染小干扰RNA(si-eEF1A1)抑制eEF1A1表达,同时设置阴性对照组,用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)与Western印迹法检测转染效率,制备eEF1A1基因沉默的细胞模型.用VSV感染细胞模型,检测细胞内VSV的基因拷贝数和蛋白水平;用HSV-1感染细胞模型,检测细胞内HSV-1的mRNA水平和蛋白水平.用聚胞苷酸[poly(I:C)]或脱氧核糖核酸钠盐(HT-DNA)分别转染细胞模型,RT-qPCR检测干扰素β(IFN-β)、趋化因子10(CXCL10)和干扰素刺激基因56(ISG56)的mRNA水平,Western印迹法检测干扰素调节因子3(IRF3)和TANK结合激酶1(TBK1)蛋白磷酸化水平.结果 与阴性对照组相比,eEF1A1基因沉默组eEF1A1的mRNA水平和蛋白水平显著降低(P<0.01),eEF1A1基因沉默的细胞模型构建成功.与阴性对照组相比,eEF1A1基因沉默组的VSV基因拷贝数下降70%～80%,VSV蛋白水平显著降低(P<0.01);HSV-1的mRNA水平下降50%～60%,HSV蛋白水平显著降低(P<0.01).poly(I:C)或HT-DNA刺激后,与阴性对照组相比,eEF1A1基因沉默组的IFN-β、ISG56和CXCL10的mRNA水平以及IRF3与TBK1的蛋白磷酸化水平无显著差异.结论 eEF1A1调控VSV和HSV-1病毒复制,提示eEF1A1对RNA病毒和DNA病毒具有潜在的广谱调控作用,且可能不通过胞内核酸识别激活的免疫通路.

1 型单纯疱疹病毒(HSV1)是一类最为常见的人类传染病原体,感染后可导致一系列程度不同的疾病.HSV1 在中枢神经系统的潜伏感染及偶发重激活是其病理发生的关键,也为抗病毒治疗带来了巨大的挑战.目前,关于HSV1 感染的建立、维持和重激活的机制并未完全阐明,但普遍认为表观遗传调控可能在其中扮演重要作用.越来越多研究表明,病毒裂解期和潜伏感染期的基因组呈现不同的染色质结构,其富含的多种翻译后修饰组蛋白赋予病毒基因转录激活或抑制特征.此外,病毒潜伏相关转录本LATs也可能参与基因组表观遗传修饰调控.

目的:探讨参芪止疱颗粒体外抗HSV-2的作用.方法:利用HFF感染HSV-2,用参芪止疱颗粒予以干预,以ACV做对照药,采用CPE法和M T T法进行实验.结果:实验发现HSV-2的TCID50为104;参芪止疱颗粒对HFF的CC50值大于10mg/ml,表明其对HFF的毒性作用小;在药物直接抗病毒复制实验中,参芪止疱颗粒对感染细胞EC50为0.30 mg/ml,T I>36表明其对HSV-2感染HFF具有一定保护作用;在HSV-2感染HFF的治疗实验中,参芪止疱颗粒EC50值为0.60 mg/ml,TI>25,提示其对病毒感染后复制有一定的抑制作用;其对HSV-2复制的抑制作用时相主要在感染后0 h、2 h、4 h.但是,其对HSV-2感染细胞无预防作用.结论:参芪止疱颗粒在体外试验中具有较好的抗HSV-2的作用,值得临床进一步推广.

溶瘤病毒通过感染癌细胞,引起病毒性细胞病变并诱发宿主抗肿瘤免疫反应,从而选择性感染和杀死癌细胞.美国食品药品监督管理局(FDA)和欧洲药物管理局(EMA)最近批准了世界上第一个用于治疗恶性黑色素瘤的溶瘤病毒制剂,命名为Imlygic.Imlygic为表达人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)的单纯疱疹病毒I型(HSV-1)活病毒颗粒,经直接注射入肿瘤组织引起肿瘤细胞裂解和机体抗肿瘤免疫双重效应.除了HSV-1外,尚有许多不同类型的病毒已经进入临床试验,评估其生物安全性和抗肿瘤疗效.这些正在临床试验的溶瘤病毒包括腺病毒、痘病毒、麻疹病毒和呼肠孤病毒等.治疗的肿瘤包括卵巢癌、腹膜癌、肝癌、胶质瘤和黑色素瘤等.目前,溶瘤病毒治疗肿瘤的临床试验约有67项,一些临床试验已经取得了有希望的结果,从而进展到第三期临床试验.该文重点讨论目前正在临床试验中用于治疗各类癌症的溶瘤病毒,并讨论这些溶瘤病毒作为一类新的癌症治疗药物的机遇和挑战.