亚洲兰茂牛肝菌Lanmaoa asiatica为云南珍稀的食药用真菌,属于外生菌根类真菌,在纯培养基上其部分菌丝能扭结形成原基.为了揭示调控原基发育的潜在物质,本研究运用核磁共振(1H-NMR)、气相质谱(GC-MS)和液相质谱(LC-MS)3 种代谢组学技术,结合 SMICA-P 软件,定性及定量分析了纯培养 35 d后菌丝体与原基的差异物质.结果表明,菌丝体与原基比较,3 种方法共检测到谷氨酸、天冬氨酸、色氨酸、4-氨基丁酸、甜菜碱和海藻糖等 96 个显著或极显著上调的差异物质;调控通路分析表明,这些差异物质在原基发育中可能涉及丙氨酸、天冬氨酸和谷氨酸、精氨酸和脯氨酸、丁酸等 22 个通路;KEGG富集分析表明,谷氨酸涉及P＜0.05 的所有调控通路,推测谷氨酸在原基发育中起着重要的调控作用;在培养基中加入 0.16 g/L谷氨酸可促进原基的萌发与生长.上述研究为亚洲兰茂牛肝菌的人工繁育技术研发奠定了基础.

珠芽是滴水珠(Pinellia cordata)的营养繁殖结构,为揭示滴水珠珠芽发育过程中的特征,该研究以野外采集材料进行盆栽观察试验,通过形态观察法和石蜡切片方法,探索滴水珠叶片和叶柄处珠芽发育过程中的形态学和解剖学结构特征.结果表明:滴水珠珠芽发育过程在形态上分为叶柄无现象时期、早期珠芽结构分化和珠芽膨大成熟时期三个时期;相应的解剖学发育时期为珠芽原基启动期和形成期、原基分化期和膨大成熟期四个阶段.叶片和叶柄珠芽起始细胞均由叶柄腹面表皮下层薄壁细胞组织脱分化形成,起始细胞不断分裂形成细胞团最后发育成珠芽原基;在原基分化期的特征是生长点形成,最终分化形成芽原基和鳞片叶;膨大成熟期的特征是珠芽结构不断生长,生长点侧生分化鳞片叶增多.叶片和叶柄处珠芽成熟脱落时期为灰色椭圆形结构,测得平均直径分别为(2.79 ± 0.40)mm和(2.69 ± 0.36)mm,外部有鳞片包裹,内部含大量营养物质.在环境适宜条件下,珠芽遇土萌发,萌发率达75%.这表明滴水珠珠芽与同属植物半夏珠芽发育过程差别不大,都是无性克隆营养繁殖体结构.

以马铃薯2个开花品种YS205和 HZ88以及未开花品种YS304为材料,采用石蜡切片法观察花芽分化的解剖学特征,并用酶联免疫吸附法(ELISA)测定开花与未开花品种不同时期叶内4种内源激素———生长素(IAA)、赤霉素(GA3)、玉米核苷素(ZR)、脱落酸(ABA)含量的动态变化,探讨成花过程中叶片内源激素含量和比值的变化与成花的关系,为马铃薯花期调控、栽培和杂交育种提供理论依据.结果显示:(1)马铃薯花芽内部发育与外部形态之间有相对稳定的时序性对应关系,从花芽分化初期生长锥逐渐向上凸起,到雌雄蕊原基形成,完成整个花芽分化仅用了1周左右的时间,此阶段YS205和HZ88的花芽分化过程无明显差异,而YS304未成花.(2)随着花器官的不断发育,HZ88子房形成2室,每室多个胚珠,而YS205的子房在发育过程中发生了变异,形成完整的3室;YS205和 HZ88都先后经历了授粉受精过程,HZ88具有一定的自交结实率,YS205无坐果率.(3)马铃薯3个品种的IAA、GA3、ZR和ABA含量在花芽分化前期均较低,且无明显差异性;随后,3个品种的IAA和GA3含量均呈先升后降的单峰变化曲线,但YS304上升和下降的速度较2个开花品种快,而且YS205和 HZ88的ZR和ABA含量则始终高于YS304.(4)开花品种YS205和 HZ88的ABA/IAA、ABA/GA3、ZR/IAA、ZR/GA3比值均高于未开花品种YS304,且随生育期变化趋势不同.研究表明,较低水平的IAA、GA3和高水平的 ABA、ZR均有利于促进马铃薯花芽分化,反之则抑制花原基形态的建成.

对芳香醇氧化酶编码基因vvaao1序列特征及差异表达进行分析,以期为研究vvaao1在草菇基质降解与子实体发育中的生物学功能提供依据.应用ZOOM软件分析基因结构与序列准确性;通过生物信息分析网站预测氨基酸序列的信号肽、亚细胞定位及三级结构;采用MEGA 5.1构建系统发育树;结合数字基因表达谱(DGE)、荧光定量PCR(RT-qPCR)、蛋白质组(iTRAQ)分析进行差异表达分析.结果显示,vvaao1全长3091 bp,含有9个外显子、8个内含子,开放阅读框长1803 bp,编码600个氨基酸;生物信息分析结果显示:VvAAO1具备信号肽,为分泌蛋白;其三级结构由20个 α-螺旋和19个 β-折叠组成,与模式蛋白3FIM的一致性(Identity)达到48％.进化树结果显示,VvAAO1属于AAO家族,与侧耳属菌株Pleurotus.eryngii和P.pulmonarius的AAO序列最为接近.DGE、RT-qPCR及iTRAQ的分析结果表明,vvaao1在可孕异核体菌丝上的表达量分别是两个同核体菌株之和的51.0、49.8和2.13倍;进一步对不同发育阶段的子实体样品进行RT-qPCR检测,结果显示vvaao1在原基时期的表达量均显著高于其他时期的样品.VvAAO1具备信号肽,为分泌蛋白,其编码基因在异核体菌株H1521的表达水平显著高于两个同核体菌株之和,存在协同增效表达,且在原基时期表达量最高,vvaao1的高表达可能有利于草菇子实体的形成.

食用菌的原基形成受到环境因子和内源基因的共同调控,转录因子在其生长发育过程中能够起到关键作用.本研究在已测序金针菇单核菌株L11全基因组中鉴定到29个高速泳动蛋白(high-mobility-group box,HMG-box)转录因子编码基因.基于金针菇双核菌株H1123各发育时期转录组数据,筛选到一个与金针菇原基形成相关的HMG-box转录因子基因Fv-hmg.通过同源比对发现Fv-hmg的DNA序列在6个不同金针菇菌株中十分保守,一致性为98.38％,有92个SNP位点.克隆分析表明,该基因长度为1 517bp,含有一个内含子.该基因编码489个氨基酸残基的蛋白序列,含有一个HMG-box结构域.通过实时荧光定量PCR和转录组测序共同分析表明,该基因在金针菇原基时期的表达量比双核菌丝时期高达4倍以上,具有显著性差异(P＜0.01),由此推测该转录因子参与调控金针菇的原基形成.HMG-box转录因子Fv-Hmg在金针菇原基形成过程中的作用仍需进一步研究.

为了充分开发利用菌核多孔菌Polyporus tuberaster资源,对采自吉林省露水河东升林场的野生菌核多孔菌进行分离纯化获取纯菌株作为实验材料,采用十字划线法研究固体培养条件下不同碳源、氮源、pH和温度对其菌丝生长的影响,从以上4个单因素实验中选出3个最优水平进行正交实验.结果表明,菌核多孔菌P.tuberaster的最适培养条件为:碳源糊精粉(20mg/mL)、氮源酵母浸粉(2mg/mL)、pH 5.0、温度25℃.在最适培养条件下采用试剂盒测定液体培养条件下菌株的产酶活力,结果表明,菌核多孔菌产漆酶能力较强,酶活力最高可达386.96U/L;木质素过氧化物酶活力仅为5.23U/L;未检测到锰过氧化物酶.出菇实验中,二级种选用麦粒菌种,500mL罐头瓶装干料160g,每瓶接种蚕豆大小菌块3-4块,25℃培养,菌丝满瓶时间为20d;栽培种配方为阔叶树木屑78％、麦麸20％、石灰粉1％、石膏1％、含水量65％左右,17cm×33cm×0.05cm栽培袋装干料520g,每袋接种蚕豆大小二级种3-4块,菌丝发菌时间为26d;在92％-95％空气湿度、一定散射光和20-21℃低温刺激下培养13d后原基分化形成菇蕾,此后加大空气湿度至97％-98％并保持温度24-25℃培养32d后子实体成熟.

为研究皂角刺发育过程中形态特征变化规律与槲皮素、总多酚积累动态,采用游标卡尺、直尺和天平测量其发育过程中形态指标,并利用HPLC及比色法测定分析其槲皮素和多酚含量.结果表明,皂角刺发育过程分为形成期(8月初-11月初)、休眠期(11月初一次年3月下旬)、萌芽期(3月下旬-4月中旬)、速生期(4月中旬-7月中旬)、褐变期(7月中旬-8月底)和成熟期(9月初-12月底)6个时期.形成期刺原基分裂,形成鳞芽;休眠期鳞芽处于休眠状态;萌芽期鳞芽芽鳞片脱落,皂角刺开始发育;速生期迅速生长直至最大;褐变期由尖端开始发生褐化直至整体变为褐色;成熟期早期富有光泽,逐渐颜色加深光泽褪去.皂角刺槲皮素积累动态呈现先逐渐增加后逐渐降低的趋势,总多酚积累动态呈现先大幅降低后逐渐增加再逐渐降低的趋势.速生期槲皮素质量分数从0.0004％缓慢增加至0.002 6％,多酚先从0.761 9％降低至0.049 1％又缓慢增加至0.286 9％;褐变期槲皮素持续增加至0.004 3％、总多酚持续增加至0.421 6％;成熟期槲皮素9月增至0.009 6％后开始大幅降低,多酚10月增至0.723 5％后开始降低.采用主成分分析结果:9月第一,10月第二,11月第三.该研究明确了皂角刺发育的形态特征变化规律和槲皮素、总多酚积累动态,将皂角刺发育划分了6个时期,确定了皂角刺最佳采收期为成熟前期,为皂角刺开发利用和采用丰产栽培技术提供理论支撑.

人类性别的决定和分化是多个基因参与的有序调控的复杂过程,主要包括性别决定和性分化两个步骤.性别决定是具双潜能的胚胎生殖腺嵴发育成睾丸或卵巢,胚胎第5～6周,在中胚层生肾索的中肾内侧形成生殖嵴,为生殖腺的原基.胚胎第7周出现原始睾丸,第3个月出现原始卵巢;性分化是指在中肾管、中肾旁管原始生殖管道的基础上内生殖器的发育及外生殖器的形成.先天性发育异常通常表现为染色体、性腺和外生殖器解剖结构不典型,是一种先天遗传性异常,一般发病率为1‰～3‰[1].本研究报道济南市中心医院新生儿科收治的1例46,XX,SRY(一),外生殖器男性化的新生儿.并探讨影响性别分化的疾病及相关文献分析.

粗毛纤孔菌(Inonotus hispidus)是一种珍稀的药用真菌,野生资源非常匮乏,目前人工栽培粗毛纤孔菌技术尚未成熟,为了提高粗毛纤孔菌栽培生物转化率和缩短生产周期,首先对采集的野生粗毛纤孔菌菌丝培养条件进行分析,然后进一步探究采用大米栽培粗毛纤孔菌的方法.在分析菌丝培养条件过程中,以菌丝长速为指标来筛选菌株菌丝生长适宜的温度、pH、碳源和氮源;在子实体栽培研究过程中,以生物转化率为指标来筛选适合菌株子实体生长的栽培培养基.菌丝生长培养条件筛选结果表明,寄生枣树的野生粗毛纤孔菌菌丝生长的最适培养条件为温度25℃、初始pH 6.0、碳源葡萄糖、氮源酵母提取粉.驯化栽培结果显示,粗毛纤孔菌在以大米为主要基质的培养基中生物转化率较高,优化后的最优栽培条件为营养液中酵母提取粉含量0.2％、大米与营养液的料液比1∶1.6、液体菌种接种量4 mL,在该条件下,菌丝长满栽培培养基需4d左右,原基分化形成子实体需20 d左右,生物转化率可达到28.70％±5.05％.本研究结果表明以大米为主要基质栽培粗毛纤孔是可行的,同时也可为其他珍稀药用真菌寻找新的栽培基质提供思路.

木质素降解酶是糙皮侧耳Pleurotus ostreatus分解木质素的关键酶.本文以糙皮侧耳栽培菌株New 831为试验材料,通过固体培养法和液体培养法测定了不同浓度锰离子Mn(Ⅱ)对其菌丝生长、偶氮染料橙黄Ⅱ降解率、木质素降解酶活性和原基形成的影响.结果表明,添加Mn(Ⅱ)可促进糙皮侧耳菌丝生长,GP-Orange液体培养时的最适Mn(Ⅱ)浓度为50μmol/L,GP-Urea-Orange固体培养时的最适Mn(Ⅱ)浓度为70μmol/L;添加Mn(Ⅱ)可加速橙黄Ⅱ的降解,Mn(Ⅱ)浓度为70μmol/L时,橙黄Ⅱ降解率最高、脱色圈最大;漆酶和锰过氧化物酶活性均随Mn(Ⅱ)浓度增加呈现“先升后降”的趋势,而木质素过氧化物酶活性则随Mn(Ⅱ)浓度的增加而降低;添加Mn(Ⅱ)可诱导原基形成,Mn(Ⅱ)浓度为70μmol/L时,原基数量最多.此外,平板培养结果揭示木质素降解酶活性与菌丝生物量之间无相关性,其主要是在营养限制条件下表达.