目的:比较荧光染色和过碘酸希夫染色对真菌性角膜炎(FK)的诊断效果。方法:收集2017年1月至2019年5月于山东第一医科大学附属眼科医院就诊且角膜刮片或真菌培养阳性的FK患者147例角膜标本147份，其中行穿透角膜移植术(PKP)患者84例，板层角膜移植术(LKP)患者42例，病灶切除患者21例；选取11例单纯疱疹病毒性角膜炎活检组织作为阴性对照。对角膜组织标本分别行真菌荧光染色和过碘酸希夫染色。将染色完成的切片分别置于荧光显微镜和光学显微镜下查找真菌菌丝或孢子。比较2种染色方法的阳性率、不同手术方式获得的FK角膜组织以及不同真菌菌株标本间2种染色方法的阳性例数。结果:过碘酸希夫染色的阳性率为60.5%(89/147)，真菌荧光染色的阳性率为79.6%(117/147)，荧光染色法诊断FK的阳性率明显高于过碘酸希夫染色法，差异有统计学意义( χ2＝28.00， P<0.01)，2种染色方法的特异性均为100%。PKP手术切除标本荧光染色的阳性率为85.7%(72/84)，明显高于过碘酸希夫染色的阳性率65.5%(55/84)，差异有统计学意义( χ2＝17.00， P<0.01)；LKP手术切除标本荧光染色的阳性率为71.4%(30/42)，明显高于过碘酸希夫染色的52.4%(22/42)，差异有统计学意义( χ2＝8.00， P<0.01)；病灶切除标本分别采用荧光染色和过碘酸希夫染色法进行检查，阳性率分别为71.4%(15/21)和57.1%(12/21)，差异无统计学意义( χ2＝1.30， P＝0.25)。不同真菌菌株标本间2种染色的阳性例数不同，其中茄病镰刀菌复合群、谲诈腐霉菌、烟曲霉复合群、季也蒙假丝酵母、木霉和铺叶沼兰褐莺真菌行荧光染色的阳性例数分别为19、5、5、1、1和1例，行过碘酸希夫染色的阳性例数分别为11、0、3、0、0和0例。11例阴性对照均为阴性结果。 结论:荧光染色技术应用于石蜡包埋角膜组织检查真菌成分较过碘酸希夫染色法敏感性高，可显著提高真菌检测的阳性率。

目的 研究战骨叶甲醇部位的化学成分及其抗炎活性.方法 战骨叶甲醇部位采用薄层色谱、柱色谱和HSCCC进行分离纯化,根据理化性质及波谱数据鉴定所得化合物的结构.采用RAW264.7模型评价其体外抗炎活性.结果 从中分离得到12个化合物,分别为鉴定为牡荆素(1)、balanophonin(2)、桦褐孔菌二糖(3)、4-allyl-2,6-dimethoxyphenol-β-D-glucopyranoside(4)、去氢催吐萝芙木醇(5)、地芰普内酯(6)、(E)-4-((1S,3R,4R)-1-hydroxy-4,5,5-trimethyl-7-oxabicyclo[4.1.0]heptan-1-yl)but-1-en-3-o-ne(7)、(E)-4-hydroxyphenylprop-7-ene 4-O-β-D-glucopyranoside(8)、4-羟基苯甲酸4-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(9)、vicenin(10)、齐墩果酸(11)、芝麻素(12).化合物 1、2、5、7、10、12 对 NO 均具有良好的抑制活性,IC50值分别为(26.42±2.5)、(21.24±2.2)、(25.88±1.9)、(29.72±2.1)、(8.90±1.1)、(9.73±0.7)μmol/L.结论 化合物2、4～8为首次从豆腐柴属植物中分离得到.化合物1、2、5、7、10、12具有抗炎活性.

目的:分离、鉴定长叶轮钟草根腐病病原,并研究其生物学特性.方法:采用PDA培养基,从感染了根腐病的长叶轮钟草根系进行病原菌分离纯化及致病力测定,同时进行形态和分子生物学鉴定,并测定两株病原菌的生长曲线、产孢量和镰刀菌酸产量.结果:从发病的长叶轮钟草根系分离鉴定到两株病原菌,将两株菌回接后都能引发长叶轮钟草根系病变,发生褐变干枯,菌株 ClF02 的致病力强于ClF01.经形态学和分子生物学鉴定,菌株ClF01、ClF02 分别为尖孢镰刀菌Fusarium oxysporum和芬芳镰刀菌Fusarium redolens.两株菌的外观、菌丝、孢子等形态特征存在差异,易区分.在相同培养条件下,尖孢镰刀菌和芬芳镰刀菌的生长速率和孢子产量无显著差异,而尖孢镰刀菌镰刀菌酸的产量为芬芳镰刀菌的 2.55 倍.结论:分离到的两株病原菌分别为尖孢镰刀菌和芬芳镰刀菌,均为导致长叶轮钟草根腐病的病原菌,并了解了这两株菌的生物学特性,为长叶轮钟草根腐病的防治奠定了理论基础.

从户外腐朽木塑复合材料中分离并纯化得到两株真菌,分别命名为WPC-11及WPC-12.通过对菌株的平板菌落、显微形态特征的观察,以及ITS序列和 18S rDNA序列的分析,确认WPC-11 属于白腐菌多年卧孔菌属(Perenniporia sp.)菌株,而WPC-12 则属于褐腐菌拟层孔菌属(Fomitopsis sp.)菌株.为评估这两株真菌的腐朽性能,进行了木材天然耐腐性试验,并使用扫描电镜(SEM)及傅里叶红外光谱(FTIR)对腐朽前后木材试样的微观结构和化学成分的变化进行了分析.结果表明,WPC-11 和WPC-12分别对黄瑾木材造成了39.06%及 47.39%的质量损失.在腐朽后的SEM图像中可观察到木材试样的表面和内部均已被大量降解.而FTIR则表明,木材试样中的多种化学组分在受到腐朽真菌作用后发生了降解.

[背景]木霉是自然界中常见的纤维素和半纤维素降解菌,在农业废弃物降解中具有重要应用潜力.[目的]筛选可在低温环境降解玉米秸秆的木霉菌株.[方法]测定 31 种木霉 111 个菌株在低温下的生长状况、水解纤维素和木聚糖产生的透明圈直径及部分菌株对玉米秸秆的相对降解率(relative degradation rate,RDR);利用DNS法测定不同RDR代表菌株的纤维素滤纸酶(filter paper cellulase,FPase)、羧甲基纤维素酶(carboxymethyl cellulase,CMCase)和木聚糖酶(xylanase)活性,并分析它们在不同发酵阶段的酶活与秸秆降解率的关系.[结果]在 10℃和 5℃培养分别有100 株和 42株供试菌株能够生长,在 15℃均能生长,其中 19个菌株培养 6 d产生的水解纤维素和木聚糖产生的透明圈直径大于 60 mm、培养 10 d对玉米秸秆的RDR为 0.45%-8.09%;菌株 9145、TC425、TC505 和 8987 的FPase、CMCase和xylanase活性随着培养时间呈现动态变化,其中前两者的活性变化趋势基本一致,与 RDR 的关系密切.[结论]钩状木霉、西蒙斯木霉、深绿木霉和深褐木霉菌株在低温条件下对玉米秸秆具有较高的降解能力,将为后续玉米秸秆腐熟剂开发、降解机理研究及秸秆资源化利用提供种质资源.

目的 考察二氧化氯对桃褐腐病主要致病菌褐腐菌(Monilinia fructicola)、酵母菌(Kazachstania exigua)以及大肠埃希菌(Escherichia coli)的抑制效果.方法 以褐腐菌、酵母菌、大肠埃希菌为实验对象,采用固体培养法测定菌斑直径和细菌存活率;测定胞外培养液电导率,蛋白质和DNA含量,检测胞内丙二醛浓度和脱氢酶活性,并采用扫描电镜进行形态学观察.结果 随着二氧化氯浓度升高,菌斑直径和细菌存活率逐渐降低,胞外培养液电导率、蛋白质、DNA含量和胞内丙二醛含量增加,脱氢酶活性显著下降;二氧化氯对褐腐菌的抑菌效果显著高于酵母菌和大肠埃希菌(P＜0.05).电镜扫描下可见细菌细胞膜边界模糊,有明显渗出液.结论 二氧化氯能有效抑制褐腐菌的生长,其机制与破坏细菌细胞膜,使细菌代谢酶失活有关.

通过液—液萃取、硅胶和凝胶柱层析法,从佛甲草(Sedum lineare)分离出一种可以抑制水稻细菌性条斑病菌(Xanthomonas oryzae pv. oryzicola,Xoc)生长的单体化合物,经质谱分析,确定该化合物为没食子酸(gallic acid,GA).在30 mg·mL?1浓度下,GA能抑制一些植物病原细菌如桃细菌性穿孔病菌(X. campestris pv. pruni)、水稻细菌性条斑病菌(X. oryzae pv. oryzicola)、水稻白叶枯病菌(X. oryzae pv. oryzae)、柑橘溃疡病菌(X. axonopodis pv. citri)、大豆细菌性斑点病菌(Pseudomonas syringae pv. glycinea)、番茄细菌性斑点病菌(P. syringae pv. tomato)和胡萝卜软腐果胶杆菌(Pectobacterium carotovora subsp.carotovora)的生长;GA还对11种植物病原真菌如烟草疫霉(Phytophthora nicotianae)、指状青霉(Penicillium digitatum)、滇刺枣褐腐病菌(Streptobotrys strepto?thrix)、瓜果腐霉(Pythium aphanidermatum)、芒果拟盘多毛孢(Pestalotiopsis mangiferae)、新月弯孢霉(Curvularia lunata)、立枯丝核菌(Rhizoctonia solani)、(Fusarium oxysporum f. sp. niverum)、西瓜专化型尖孢镰刀菌(F. oxysporum f. sp. nicotianae)、番茄灰霉病菌(Botrytis cinerea)和齐整小核菌(Sclerotium rolfsii)的生长具有一定的抑制作用.在300 mg·mL?1浓度下,GA对水稻细菌性条斑病的田间防治效果达到64.62%.该研究结果表明没食子酸具有开发成为一种防治水稻细菌性条斑病的杀菌剂的潜力.

对芳香醇氧化酶编码基因vvaao1序列特征及差异表达进行分析,以期为研究vvaao1在草菇基质降解与子实体发育中的生物学功能提供依据.应用ZOOM软件分析基因结构与序列准确性;通过生物信息分析网站预测氨基酸序列的信号肽、亚细胞定位及三级结构;采用MEGA 5.1构建系统发育树;结合数字基因表达谱(DGE)、荧光定量PCR(RT-qPCR)、蛋白质组(iTRAQ)分析进行差异表达分析.结果显示,vvaao1全长3091 bp,含有9个外显子、8个内含子,开放阅读框长1803 bp,编码600个氨基酸;生物信息分析结果显示:VvAAO1具备信号肽,为分泌蛋白;其三级结构由20个 α-螺旋和19个 β-折叠组成,与模式蛋白3FIM的一致性(Identity)达到48％.进化树结果显示,VvAAO1属于AAO家族,与侧耳属菌株Pleurotus.eryngii和P.pulmonarius的AAO序列最为接近.DGE、RT-qPCR及iTRAQ的分析结果表明,vvaao1在可孕异核体菌丝上的表达量分别是两个同核体菌株之和的51.0、49.8和2.13倍;进一步对不同发育阶段的子实体样品进行RT-qPCR检测,结果显示vvaao1在原基时期的表达量均显著高于其他时期的样品.VvAAO1具备信号肽,为分泌蛋白,其编码基因在异核体菌株H1521的表达水平显著高于两个同核体菌株之和,存在协同增效表达,且在原基时期表达量最高,vvaao1的高表达可能有利于草菇子实体的形成.

竹生薄孔菌是一种褐腐真菌,可产生具有重要应用价值的纤维素酶.以纤维素酶为响应值,通过响应面Plackett-Burman设计、最陡爬坡设计、Box-Behnken设计建立数学模型,获得竹生薄孔菌产纤维素酶的最适液体培养基为:葡萄糖7.44 g/L、蛋白胨5.0 g/L、麸皮35.31 g/L、Tween 809.57 mL/L、KH2PO41.0 g/L、MgSO4·7H2O 0.5 g/L、CoCl2·6H2O 0.06 g/L、FeSO4·7H2O 0.03 g/L、CaCl20.5 g/L、ZnSO4·7H2O 0.05 g/L、维生素B10.01 g/L.在此优化培养基条件下得到的纤维素酶活性为53.17 U/mL,与理论值52.65 U/mL相近,且比优化前提高了2.84倍,说明响应面设计对于优化液体培养基以提高纤维素酶活性切实可行.

自桃树根部组织中分离能够防治桃褐腐病害的内生拮抗真菌,并从细胞学水平对其抑制机理进行了初步的探究.采用两点对峙法筛选抑制桃褐腐病菌Monilinia fructicola的内生拮抗真菌,通过菌落形态学特点观察及ITS基因测序分析,初步鉴定内生拮抗真菌的系统发育学地位;采用果实离体实验检测内生拮抗真菌的抗菌效果;使用电子显微镜观察被内生拮抗真菌抑制的桃褐腐病菌丝、孢子的形态以及细胞结构的变化.分离得到的内生真菌ZJ-4对桃褐腐病防效高且稳定,初步鉴定为篮状菌属Talaromyces;果实离体试验表明,内生真菌ZJ-4明显降低了桃褐腐病的发病率;通过电子显微镜观察到被内生真菌zJ-4抑制的桃褐腐病菌丝及孢子表面粗糙凹陷,畸形现象严重,胞质溶胶收缩凝聚,细胞内部出现大量的空腔.本研究筛选的ZJ-4对桃褐腐病原菌的生长有明显的抑制作用,为开发应用该菌株提供参考.