本研究以产自安徽的鲍姆桑黄、产自浙江和吉林的瓦尼桑黄、产自山东的粗毛纤孔菌以及采自山西的野生桑树桑黄为研究对象,检测桑黄子实体乙醇提取物中的总多酚、三萜及麦角甾醇含量.结果表明:不同物种和不同来源的桑黄子实体中总多酚、三萜、麦角甾醇含量存在差异,其中总多酚含量最高的是产自浙江的瓦尼桑黄(1.99％),三萜含量最高的是产自山东的粗毛纤孔菌(产孢前,1.32％),麦角甾醇含量最高的是产自吉林的瓦尼桑黄(0.19％).以丙二醛(MDA)为指标比较不同来源桑黄子实体乙醇提取物的抗氧化活性.结果表明,4种桑黄子实体提取物对大鼠肝微粒体脂质过氧化酶MDA的产生均表现出良好的抑制能力,其中浙江桑黄抗氧化活性最佳,MDA抑制率达到96.53％.应用液相色谱-离子阱-飞行时间质谱联用(LC-IT-TOF-MS)技术从桑黄子实体的乙醇提取物中鉴定了 19种化合物,其中浙江的瓦尼桑黄、吉林的瓦尼桑黄和安徽的鲍姆桑黄子实体的化合物组成较为相似,主要为hispidin的衍生物;野生的桑树桑黄子实体主要产物也为hispidin衍生物,但结构类型不同于上述3种桑黄;山东的粗毛纤孔菌子实体中则含有大量的hispidin单体,hispidin衍生物含量很少.综上所述,不同来源桑黄的化合物组成、活性产物含量和抗氧化活性存在较大差异,特别是不同种属桑黄样品所含活性产物的种类以及含量差异较大.本研究为桑黄抗氧化产品的开发提供了科学参考.

香豆雌酚和补骨脂素作为香豆素的重要衍生物,主要存在于植物中,在抗癌和抗炎方面发挥着重要作用,但在真菌中却少有报道.我们成功分离并培养了一株含有大量多糖和黄酮类化合物的粗毛纤孔菌L-1 Inonotus hispidus L-1.通过代谢组学分析,我们发现在粗毛纤孔菌L-1子实体中香豆雌酚和补骨脂素作为主要成分,其含量明显高于菌丝体和原基.基于转录组学和代谢组学联合分析,阐明了香豆雌酚和补骨脂素在粗毛纤孔菌L-1中的合成途径及其调控基因.研究发现粗毛纤孔菌L-1中香豆雌酚和补骨脂素在合成过程中有一个共同的前体L-苯丙氨酸,而L-苯丙氨酸的合成受糖酵解/葡萄糖生成途径和苯丙氨酸途径的共同调控,其含量在原基和子实体中显著升高.而且以L-苯丙氨酸为前体的P-香豆酸合成途径的两条下游合成途径中的代谢物显著升高,分别为异黄酮类生物合成途径中的2,7,4'-三羟基异黄酮和香豆雌酚,以及香豆素类生物合成途径中的7-羟基香豆素和补骨脂素.而香豆雌酚和补骨脂素的下游代谢物未检测到.通过转录组学进一步证实香豆雌酚和补骨脂素在合成过程中受到APL、APL1和ECM4这3个基因的调控.这项研究结果证实了粗毛纤孔菌L-1作为一种有价值的香豆雌酚和补骨脂素来源在营养保健品开发和应用方面的潜力.

本研究对不同发育时期粗毛纤孔菌子实体水提物的安神作用进行探究.采用腹腔注射对氯苯丙氨酸(PCPA)(300 mg/kg)3 d建立小鼠失眠模型,随机分为空白组、模型组、阳性组(地西泮1.5 mg/kg)、菌蕾组(69.36、138.71、277.42 mg/kg)、成熟组(256.04、512.07、1 024.14 mg/kg)、老化组(143.20、286.39、572.78 mg/kg),连续给药 7 d后,记录小鼠睡眠潜伏期、睡眠时长,酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测小鼠海马组织中五羟色胺(5-HT)、谷氨酸(Glu)、γ-氨基丁酸(GABA)、多巴胺(DA)和去甲肾上腺素(NE)的含量,苏木精-伊红染色法(HE)观察小鼠海马组织的病理变化,并采用蛋白质印迹法(Western blotting)检测小鼠海马组织中 5-HT1AR、cAMP蛋白激酶催化亚单位和PKA的相对表达量.结果显示:与模型组相比,成熟和老化的粗毛纤孔菌子实体水提物能明显增加小鼠入睡率、缩短睡眠潜伏期、延长睡眠时长(P<0.01);HE染色法观察小鼠海马组织发现,不同发育时期的粗毛纤孔菌子实体水提物对对氯苯丙氨酸(PCPA)致失眠小鼠的海马组织神经元有一定的修复作用;酶联免疫吸附测定法检测小鼠海马组织发现,老化组能显著提高单胺类神经递质五羟色胺(5-HT)水平、降低去甲肾上腺素(NE)水平;提高氨基酸类神经递质谷氨酸(Glu)水平,对 γ-氨基丁酸(GABA)水平无影响;蛋白质印迹法(Western blotting)结果表明,与模型组相比,成熟和老化各剂量组均能极显著提升对氯苯丙氨酸(PCPA)致失眠小鼠海马组织中 5-HT1AR、cAMP 蛋白激酶催化亚单位、PKA的相对表达量(P<0.01),并呈现一定的量效关系,其中老化组的效果最为显著.其作用机制是通过提高五羟色胺(5-HT)、多巴胺(DA)和谷氨酸(Glu)的水平和降低去甲肾上腺素(NE)水平以及增加5-HT1AR蛋白表达量,上调cAMP-PKA信号通路起到安神作用.

从分子水平上探究粗毛纤孔菌与桑黄孔菌属菌株的差异,同时以人乳腺癌MDA-MB-231细胞筛选粗毛纤孔菌深层发酵液抗乳腺癌活性部位,并对其成分进行初步分析.基于rDNA ITS序列分子系统发育树和拆分网络(splits network)分析研究粗毛纤孔菌与桑黄孔菌属菌株的差异;采用MTT法检测发酵液不同提取物抗乳腺癌活性;通过细胞形态观察进一步了解活性提取物对细胞生长的影响;采用LC-MS/MS对活性提取物的成分进行分析.系统发育树表明粗毛纤孔菌与桑黄孔菌属菌株存在一定的遗传差异,粗毛纤孔菌GC含量较桑黄孔菌属菌株低,同时拆分网络分析法能更好地区分粗毛纤孔菌与桑黄;粗毛纤孔菌深层发酵液正丁醇提取物对MDA-MB-231细胞生长的抑制作用最强且呈量效和时效关系(P＜0.05),作用24h的lCso值为245.44μg/mL;细胞形态观察显示正丁醇提取物浓度在250μg/mL时,对MDA-MB-231细胞的凋亡作用随着时间的延长而加强;LC-MS/MS检测到正丁醇萃取部分的物质有2个,这2个物质均首次在粗毛纤孔菌中鉴定得到.结果表明,拆分网络分析法可较好地用于粗毛纤孔菌与桑黄孔菌属菌株的分子甄别,正丁醇提取物是粗毛纤孔菌深层发酵液抗乳腺癌MDA-MB-231细胞的主要活性部位,为进一步开发利用粗毛纤孔菌药用资源提供科学依据.

目的:观察粗毛纤孔菌子实体对寒凝血瘀证大鼠血液流变学的影响,探讨粗毛纤孔菌的活血化瘀作用.方法:Wistar大鼠随机分为正常对照组、血瘀模型组、阳性对照组和低、高剂量粗毛纤孔菌子实体(S1～S6)组,共15组,每组12只.各组大鼠连续灌给药7d(正常对照组和模型组大鼠给予蒸馏水),除正常对照组外,其余各组大鼠均注射盐酸肾上腺素和浸入冰水中造成寒凝血瘀证模型.检测大鼠血液流变学指标,并进行谱效分析.结果:寄生于不同树种的粗毛纤孔菌的黄色子实体(S3～S6)均具有改善寒凝血瘀证模型大鼠血液流变学作用,与模型组比较,高剂量粗毛纤孔菌黄色子实体组大鼠血浆黏度和全血黏度均降低(P＜0.05).粗毛纤孔菌的黑色子实体(S1和S2)具有与黄色子实体相似的功效,但与模型组比较,粗毛纤孔菌黑色子实体组大鼠血液流变学指标无明显变化(P＞0.05).谱效分析,11个色谱峰对应的成分与大鼠血浆黏度变化密切相关,相关系数均＞0.8;经鉴定,其中4个化合物为phellibaumin A、phelligridin C(反式)、phelligridin D和3'4'-dihydroxy-5-[(11-hydroxyphenyl)-6,7-vinyl]-3,5-dioxa-fluoren-5-one.结论:寄生于不同树种的粗毛纤孔菌的黄色子实体均可以降低大鼠血浆黏度和全血黏度,具有活血化瘀作用.

用H22荷瘤小鼠对6种“桑黄”类真菌的水提取物进行了抗肿瘤活性研究.结果表明,除鲍姆木层孔菌水提取物低剂量组外,粗毛纤孔菌、椭圆嗜蓝孢孔菌、山野木层孔菌的水提取物高、低剂量组以及火木层孔菌、鲍姆木孔菌、瓦尼木层孔菌的水提取物高剂量组均具有显著抑瘤作用,抑瘤率均大于40％,其中;椭圆嗜蓝孢孔菌水提取物高剂量组(1 000 mg,/kg)的抑瘤效果最佳.与阳性组和生理盐水组相比,粗毛纤孔菌高剂量组小鼠的胸腺指数均有极显著性差异(P＜0.01),其余各组小鼠胸腺指数无显著性差异.6种“桑黄”类真菌水提取物均对提高小鼠肿瘤细胞中Bax的表达起到了促进作用;对Bcl-2的表达起到了抑制作用.

粗毛纤孔菌是一种常见的药用真菌,具有医疗保健价值,多糖作为其主要活性成分之一,在生物活性中发挥着重要的作用.本文从粗毛纤孔菌子实体和菌丝体中提取了多糖成分,探讨了子实体多糖(IHFPS)和菌丝体多糖(IHMPS)对小鼠急性酒精肝损伤的保护作用.采用灌胃的方式给予C57BL-6小鼠多糖,连续灌胃3周,最后一次给药4h后,给予乙醇造成小鼠急性酒精肝损伤,通过记录小鼠醉酒、醒酒的时间,测定血清和肝脏相关生理生化指标以及病理切片来评价子实体和菌丝体多糖对急性酒精肝损伤小鼠的作用效果.结果表明,子实体与菌丝体多糖均能够显著延长小鼠的醉酒时间和缩短醒酒时间(P＜0.05),并降低了由酒精引起的肝指数、谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)和丙二醛(MDA)的升高,提高了乙醇脱氢酶(ADH)、过氧化氢酶(CAT)和超氧化物歧化酶(SOD)的活性,病理切片结果进一步证实了子实体多糖与菌丝体多糖可以减轻由酒精引起的细胞损伤,总体来说,子实体多糖比菌丝体多糖对急性酒精损伤小鼠的保护作用更强.该研究表明了粗毛纤孔菌子实体与菌丝体多糖对急性酒精肝损伤小鼠具有一定的保护作用,研究结果丰富了粗毛纤孔菌多糖的药理药效,为其功能食品的开发提供了新思路.

目的:探讨不同树种粗毛纤孔菌黄色子实体对寒凝血瘀证大鼠血液流变学的影响.方法:选取SPF级大鼠60只,雌雄各30只,为正常对照组、寒凝血瘀模型组(简称模型组)、阳性对照组、及高、低剂量粗毛纤孔菌子实体组(A1～A5),每组12只.正常对照组和模型组给予相同体积的蒸馏水,阳性对照组按服用说明每天给予复方丹参片1次,连续一周灌胃给药.模型组、阳性对照组、及高、低剂量粗毛纤孔菌子实体组每只大鼠均经皮下注射1mg? kg-1的盐酸肾上腺素注射液,浸入4℃的冰水中制作大鼠寒凝血瘀模型.采用血液流变检测仪检测血液黏度、血浆黏度、红细胞沉降率(ESR)、血红细胞比容(Hct)及红细胞沉降率K值.结果:模型组与正常对照组相比,模型组全血黏度、血浆黏度、红细胞沉降率(ESR)、血红细胞比容(Hct)及红细胞沉降率K值明显高于正常对照组,比较差异有统计学意义(P＜0.05);与模型组相比,寄生于桑树(s1)、杨树、(s3)、蒙古黄榆(s4)、水曲柳(s6)的高剂量组全血黏度、血浆黏度、红细胞沉降率(ESR)、血红细胞比容(Hct)及红细胞沉降率K值均低于模型组,比较差异有统计学意义(P＜0.05);而黑色的粗毛纤孔菌子实体(s2、s5)与模型组相比全血黏度和血浆黏度无明显差异,无统计学意义(P＞0.05).结论:不同树种粗毛纤孔菌黄色子实体可降低寒凝血瘀证大鼠全血黏度和血浆黏度,有一定的活血化瘀功效.

粗毛纤孔菌(Inonotus hispidus)是一种珍稀的药用真菌,野生资源非常匮乏,目前人工栽培粗毛纤孔菌技术尚未成熟,为了提高粗毛纤孔菌栽培生物转化率和缩短生产周期,首先对采集的野生粗毛纤孔菌菌丝培养条件进行分析,然后进一步探究采用大米栽培粗毛纤孔菌的方法.在分析菌丝培养条件过程中,以菌丝长速为指标来筛选菌株菌丝生长适宜的温度、pH、碳源和氮源;在子实体栽培研究过程中,以生物转化率为指标来筛选适合菌株子实体生长的栽培培养基.菌丝生长培养条件筛选结果表明,寄生枣树的野生粗毛纤孔菌菌丝生长的最适培养条件为温度25℃、初始pH 6.0、碳源葡萄糖、氮源酵母提取粉.驯化栽培结果显示,粗毛纤孔菌在以大米为主要基质的培养基中生物转化率较高,优化后的最优栽培条件为营养液中酵母提取粉含量0.2％、大米与营养液的料液比1∶1.6、液体菌种接种量4 mL,在该条件下,菌丝长满栽培培养基需4d左右,原基分化形成子实体需20 d左右,生物转化率可达到28.70％±5.05％.本研究结果表明以大米为主要基质栽培粗毛纤孔是可行的,同时也可为其他珍稀药用真菌寻找新的栽培基质提供思路.

本文研究了粗毛纤孔菌的化学成分及抗肿瘤活性成分.对粗毛纤孔菌的甲醇提取物进行石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取,采用Sephadex LH-20凝胶色谱法,反相C18柱色谱法及高效液相色谱法对不同萃取组分进行分离纯化.分离得到8个化合物,经鉴定分别为麦角甾醇、齿孔酸、4-(3,4-二羟苯基)-3-丁烯-2-酮、phellibaumin A、3,3'-亚甲基双[6-[2-(3,4-二羟苯基)乙烯基-4-羟基-2H-吡喃-2-酮](MBP)、肌苷、原儿茶酸和原儿茶醛.其中化合物MBP为首次从自然界中分离得到,对其进行了MTT抗肿瘤筛选和细胞凋亡分析.结果表明此化合物对人肝癌细胞HepG2的细胞增殖具有抑制作用,IC50值为2.3μg/mL,并且可以诱导HepG2细胞凋亡,且呈一定的剂量依赖关系.本研究明确了MBP的提取方法,初步断定该化合物抗肿瘤活性是通过诱导细胞凋亡实现的.