目的:观察密蒙花颗粒剂对去势雄兔泪腺细胞肿瘤坏死因子α(TNF-o)、白细胞介素-1β (IL-1β)表达的影响,探究其治疗干眼症的机制.方法:将30只雄兔随机分为空白组、模型组、密蒙花颗粒剂组、安慰剂组和睾酮组.空白组除外均行双侧睾丸及附睾切除术建立干眼症模型.密蒙花颗粒剂组予密蒙花颗粒剂灌胃;安慰剂组予0.9％氯化钠溶液灌胃;睾酮组注射丙酸睾酮注射液.给药4周后免疫组化法检测泪腺细胞炎性因子TNF-α、IL-1β表达.结果:与空白组比较,模型组和安慰剂组TNF-α、IL-1β的表达显著升高(P＜0.01);与模型组比较,密蒙花颗粒剂组和睾酮组TNF-α、IL-1β的表达显著降低(P＜0.01).结论:密蒙花颗粒剂可通过抑制泪腺细胞炎性因子TNF-α、IL-1β表达而治疗干眼症.

目的:观察不同浓度密蒙花滴眼液对去势雄兔泪腺细胞炎症因子TNF-α、IL-1β的影响,探讨不同浓度密蒙花滴眼液对去势雄兔干眼症模型的疗效.方法:将密蒙花原药材制备成低、中、高3种浓度滴眼液.将42只健康成年新西兰长耳白兔(雄性),随机分为A:空白组;B:模型组;C:低浓度密蒙花滴眼液组;D:中浓度密蒙花滴眼液组;E:高浓度密蒙花滴眼液组;F:安慰剂滴眼液组;G:睾酮组等7组,每组6只.除A组外其余6组实验用兔行双侧睾丸及附睾切除术.从术后第3天开始C、D、E、F组分别予相应滴眼液滴双眼.各组实验用兔,分别于术前和术后第4wk各进行一次Schirmer I试验(SIT)和泪膜破裂时间(BUT)测定.采用免疫组化法对泪腺细胞炎症因子TNF-α和IL-1β的表达进行检测.结果:1)SIT与BUT值比较:术后C组与D、E、G组比较,有统计学意义(P<0.01);D、E、G组间相比较,无统计学意义(P>0.05);2)术后各组炎症因子TNF-α、IL-1β比较:C组与D、E、G组比较,有统计学意义(P<0.05);D、E、G组间相比较,无统计学意义(P>0.05).结论:1)密蒙花滴眼液具有与雄激素相似的抑制细胞炎症因子表达的作用,但其作用弱于雄激素;2)中、高浓度密蒙花滴眼液对TNF-α和IL-1β的抑制作用要强于低浓度密蒙花滴眼液,但中、高浓度密蒙花滴眼液的抑制作用差别不明显.

目的 观察不同生理盐水(NS)复苏策略联合去甲肾上腺素(NE)对脓毒性休克早期兔肺内皮多糖包被的影响.方法 按随机数字表法将30只雄性新西兰大白兔分为假手术(Sham)组、模型组、30 mL和60 mL及时复苏组(30 mL、60 mL及时组)及30 mL延迟复苏组(30 mL延迟组),每组6只.采用盲肠结扎穿孔术(CLP)复制脓毒性休克动物模型;Sham组只开腹探查后关腹,不进行盲肠结扎、穿孔.30 mL、60 mL及时组和30 mL延迟组于制模后即刻或1 h静脉输注NS 30 mL/kg或60 mL/kg,持续1 h,联合NE 0.02～0.05μg·kg-1·min-1静脉泵入,维持平均动脉压(MAP)>75 mmHg(1 mmHg=0.133 kPa),以5 mL/h NS维持至实验结束;Sham组和模型组仅给予5 mL/h NS.观察3个液体复苏组复苏前及复苏后即刻动脉血气变化.各组分别于制模0、3、6 h取颈内静脉血,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血浆多糖包被标志物多配体蛋白聚糖-1(syndecan-1)水平;于制模6 h处死动物取肺组织,采用蛋白质免疫印迹试验(Western Blot)检测肺组织细胞间黏附分子-1(ICAM-1)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)及syndecan-1的蛋白表达;采用免疫组化法观察肺组织syndecan-1阳性表达.结果 ① 血气分析:与复苏前比较,3个液体复苏组复苏后血乳酸(Lac)水平均明显降低,以30 mL及时组更加显著;中心静脉血氧饱和度(ScvO2)均明显升高,以30 mL延迟组更加显著;30 mL及时或延迟复苏对氧合指数(PaO2/FiO2)均有改善作用,但60 mL及时组PaO2/FiO2反而下降.② 血浆标志物:与Sham组比较,模型组血浆syndecan-1水平明显升高,并呈一定时间依赖性.采取30 mL及时或延迟复苏策略后,血浆syndecan-1水平在3 h即较模型组明显降低(ng/L:138.0±2.4、139.7±15.7比161.5±4.1,均P<0.05),但30 mL延迟组6 h syndecan-1水平较模型组明显升高(ng/L:213.1±19.4比206.4±15.5,P<0.05);60 mL及时组3 h和6 h血浆syndecan-1水平反而较模型组升高(ng/L:233.0±28.9比161.5±4.1,252.3±27.2比206.4±15.5,均P<0.05).③ 肺组织蛋白表达:与Sham组比较,模型组肺组织ICAM-1、MMP-2蛋白表达明显升高,而syndecan-1蛋白表达明显降低.采取30 mL及时或延迟复苏策略后,肺组织ICAM-1、MMP-2蛋白表达明显降低,syndecan-1蛋白表达明显升高,以30 mL及时组变化最为显著,与模型组比较差异有统计学意义(ICAM-1蛋白:0.56±0.09比1.04±0.05,MMP-2蛋白:0.83±0.15比1.06±0.06,syndecan-1蛋白:2.09±0.08比0.99±0.03,均P<0.05);而60 mL及时组各蛋白表达变化趋势与其他两个复苏策略组相反.④ 免疫组化:Sham组syndecan-1阳性表达明显;模型组syndecan-1阳性表达强度明显减弱;30 mL及时或延迟复苏后syndecan-1阳性表达增强,但60 mL及时组syndecan-1阳性表达较模型组进一步减弱.结论 脓毒性休克时NS复苏剂量和时机均可影响肺血管内皮多糖包被的功能,以30 mL及时复苏对多糖包被的保护作用相对更好;NS复苏不及时或复苏过量都可使多糖包被降解更加明显,导致内皮通透性增加,微循环受损,加重肺损伤.

目的:观察膝骨关节炎(KOA)兔模型以及针刀治疗前后体重与软骨病理形态的改变及相关性,预期初步揭示针刀治疗KOA的相关机制.方法:40只6月龄雄性新西兰兔,按随机数字表法分成空白组、模型组、针刀组和电针组,每组10只.以改良后Videman左后肢伸直位固定制动法制备KOA模型.针刀组针刺同侧股内侧肌肌腱止点、股外侧肌肌腱止点进行松解,每周2次,连续3周;电针组针刺同侧“血海”“梁丘”“内膝眼”和“外膝眼”,每次20 min,每周3次,连续3周.分别于造模前1天、造模后1天及治疗结束后1天监测体重,随即取材进行HE染色光镜观察关节软骨病理形态学改变.结果:解剖及HE染色显示:模型组关节软骨明显失去原有光泽,甚至缺损,关节边缘纤维性粘连,关节液量明显增多;电针及针刀组均明显改善关节炎性症状;且针刀组较电针组改善更明显;其中与空白组比较,模型组、针刀组、电针组病理改变的Mankin评分显著升高(P＜0.01);与模型组对比,针刀组、电针组的Man-kin评分均显著降低(P＜0.01);与电针组对比,针刀组Mankin评分显著降低(P＜0.05).体重比较:与造模前比较,各组造模后体重均显著升高(P＜0.01);而各组造模期体重增长率组问比较未见显著差异(P＞0.05);与干预前比较,各组体重干预后均显著升高(P＜0.01);其中,与空白组比较,模型组、电针组及针刀组的体重增长率显著降低(P＜0.05);与模型组比较,针刀组的体重增长率显著降低(P＜0.05);造模期与干预期比较:空白组、模型组期间均未见显著统计学差异(P＞0.05),电针组、针刀组干预期增长率均比造模期显著降低(P＜0.05或P＜0.01).体重比较:膝关节炎模型体重与病理形态改变存在相关趋势(P＞0.05).结论:针刀和电针均可改善KOA兔模型膝关节早期炎性病理改变,该效应可能与其对体重增长的控制有关.

目的 研究桑色素滴眼液对雄兔去势所致干眼症的预防作用.方法 在36只雄性新西兰白兔中(36眼,均为右眼),选取24只制作去势雄兔干眼症模型,随机分为实验(A)组、对照(B)组各12眼,A组使用桑色素滴眼液滴眼,B组使用磷酸盐缓冲液(PBS)滴眼.连续滴眼6 w,4次/d.另12只雄兔只切开阴囊去除睾丸造模后不滴眼液,作为模型组.分别于干预前和干预后2 w、4 w及6 w进行Schirmer I试验(SIT)检查、角膜荧光素染色(FL),并进行泪液总蛋白含量、淀粉酶活性、乳铁蛋白、溶菌酶含量检测及角膜共聚焦显微镜扫描.结果 干预前A、B两组SIT、FL评分、泪液总蛋白量、乳铁蛋白、溶菌酶及淀粉酶活性差异均无统计学意义(P>0.05);干预2 w、4 w及6 w后,模型组和B组SIT、FL评分泪液蛋白检测和角膜上皮基底膜下神经分布较干预前明显恶化(P<0.05);A组SIT、FL评分、泪液蛋白检测和角膜上皮基底膜下神经分布均有不同程度显著改善(P<0.05);在每个干预的时间点上,A、B两组的SIT、FL评分、泪液总蛋白量、乳铁蛋白、溶菌酶及淀粉酶活性均存在显著差异(P<0.05).干预6 w后,A组上皮基底细胞和炎症细胞密度分别为(3121±224)个/mm2和(43±16)个/mm2,而B组上皮基底细胞和炎症细胞密度分别为(4321±216)个/mm2和(265±102)个/mm2,模型组上皮基底细胞和炎症细胞密度分别为(4522±255)个/mm2和(281±113)个/mm2.与模型组和B组比较,A组上皮基底细胞和炎症细胞密度差异有统计学意义(P<0.05).结论 预防性使用桑色素滴眼液能够有效改善雄激素水平降低所致兔干眼症.

目的 观察不同浓度密蒙花滴眼液对雄兔干眼泪腺组织中炎性细胞因子:细胞间黏附因子-1(intercellular cell adhe-sion molecule-1,ICAM-1)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、白细胞介素-17(interleukin-17,IL-17)表达的影响,从而探讨其疗效.方法 将36只成年新西兰雄兔随机分为空白组(A),模型组(B),密蒙花滴眼液低(C)、中(D)、高(E)浓度组,睾酮组(F)组,每组6只.除A组外,其余各组均切除双侧睾丸及附睾,造模成功后,C、D、E组开始双眼滴用滴眼液,F组注射丙酸睾酮注射液.术前及治疗后第4周各组雄兔均测定1次泪膜破裂时间(tear break-up time,BUT)和泪液分泌功能(SchirmerⅠtest,SIT).治疗后第4周处死实验用兔,并摘取其双侧泪腺,采用免疫组化的方法检测ICAM-1、IL-6与IL-17的表达.结果 (1)SIT和BUT:B组自身前后对比,治疗后第4周:B组与C、D、E、F组相比,E组与C、D组相比,F组与C、D、E组相比,差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01);(2)ICAM-1、IL-6与IL-17电镜下表达的结果:A、F组未见明显表达;B组可以见到大量棕黄色颗粒存在细胞浆与细胞膜中;C、D、E组可见散在的表达;(3)治疗后第4周,组间ICAM-1、IL-6与IL-17的表达相比较:B组与其余各组相比,E组与C、D组相比,差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01).结论 密蒙花滴眼液具有拟雄激素的作用,可以抑制炎性细胞因子ICAM-1、IL-6与IL-17的表达,疗效弱于雄激素.不同浓度的密蒙花滴眼液中,高浓度的疗效最佳.

目的 观察密蒙花颗粒对去势雄兔泪腺细胞白细胞介素6(IL-6)及白细胞介素12(IL-12)表达的影响.方法 30只新西兰长耳白兔随机平均分为5组:正常组、模型组、密蒙花颗粒组、生理盐水组、睾酮组.通过切除双侧睾丸及附睾造模.给药30 d后,进行基础泪液分泌试验(SIT)和泪膜破裂时间(BUT)检测,然后将所有兔处死,摘取泪腺组织行HE染色,观察泪腺组织结构,免疫组化法检测各组兔泪腺组织中IL-6、IL-12的表达.结果 正常组兔泪腺组织排列整齐,结构清晰,未见IL-6、IL-12表达;模型组及生理盐水组泪腺组织排列不整齐,结构大片变性,IL-6、IL-12大量表达于细胞膜和细胞浆中;密蒙花颗粒组及睾酮组泪腺组织排列整齐,结构较清晰,仅见少量IL-6、IL-12表达于细胞膜和细胞浆中.与正常组比较,模型组、生理盐水组SIT值及BUT值减少(P<0.05),密蒙花颗粒组、睾酮组SIT及BUT值差异无统计学意义(P>0.05).结论 密蒙花颗粒可以通过抑制泪腺组织中IL-6、IL-12的表达减轻泪腺组织的炎症,达到治疗干眼症的目的.

目的:探究羊膜泪小管支架对手术阉割雄兔干眼症的影响.方法:将36只成年雄性兔分组,其中A组行假阉割手术,B组假植入泪小管支架,C组植入泪小管支架.分别于植入前和植入后2、4、6wk行角膜荧光素染色(FL)和泪液分泌试验(SⅠt)检查,共聚焦显微镜观察角膜神经变化.结果:A组角膜光滑、清晰,FL染色不明显;B组角膜粗糙,角膜上皮见点染色斑点;C组角膜较假手术组更为光滑、清晰,无明显点状染色.各组植入后2、4、6wk时FL染色评分和SⅠt比较,差异有统计学意义(均P<0.05).共聚焦显微镜下可见A组为相对直的神经丛,量多,清晰可见;B组角膜上皮细胞下神经可见弯曲,数量有所减少;C组角膜上皮下神经相对直,与正常雄兔角膜上皮下神经相比,数量略有减少.结论:羊膜泪小管支架可显著改善阉割去势雄兔干眼症的症状和体征,具有治疗作用.

目的 观察密蒙花颗粒剂对去势雄兔泪腺组织细胞半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶1(cysteine aspartic protease-1,Caspase-1)和白细胞介素-18(interleukin-18,IL-18)表达的影响.方法 将30只新西兰长耳白兔随机分为5组,分别为空白组(不灌胃)、模型组(不灌胃)、密蒙花颗粒剂组(灌胃药物为密蒙花颗粒剂)、安慰剂组(灌胃药物为生理盐水)、睾酮组(在兔大腿肌肉处注射丙酸睾酮注射液).除空白组外,所有兔子的造模方式均为双侧睾丸及附睾切除术.干预30 d后,将所有兔子处死,摘取泪腺组织进行免疫组化染色观察泪腺组织细胞结构并检测泪腺组织中Caspase-1和IL-18的表达.结果 免疫组化染色显示:模型组兔子泪腺组织排列不整齐,细胞破碎;密蒙花颗粒剂组与睾酮组兔子泪腺组织排列整齐,细胞结构清晰.与空白组相比,模型组Caspase-1、IL-18平均光密度差异有统计学意义(P<0.05).与模型组相比,安慰剂组Caspase-1、IL-18平均光密度差异无统计学意义(P>0.05);密蒙花颗粒剂组与睾酮组Caspase-1、IL-18平均光密度值降低,差异均有统计学意义(P<0.05).与睾酮组相比,密蒙花颗粒剂组Caspase-1、IL-18平均光密度差异无统计学意义(P>0.05).结论 密蒙花颗粒剂对去势雄兔泪腺细胞Caspase-1、IL-18表达具有抑制作用,密蒙花颗粒剂可能通过抑制泪腺组织中Caspase-1、IL-18的表达,减少泪腺组织细胞的焦亡,从而达到治疗干眼的目的.

目的:观察不同浓度的密蒙花滴眼液对去势雄兔干眼结膜炎性因子IL-1β、黏蛋白5AC(MUC5AC)及P38MAPK表达的影响,从而探讨密蒙花滴眼液对干眼的疗效.方法:将36只雄兔随机分为:空白组、模型组、密蒙花滴眼液低浓度组(1mg/mL)、中浓度组(1.5mg/mL)、高浓度组(3mg/mL)、睾酮组.除空白组外各组均行睾丸及附睾切除建立干眼动物模型,造模成功后,空白组和模型组不予以处理,密蒙花滴眼液低浓度组(1mg/mL)、中浓度组(1.5mg/mL)、高浓度组(3mg/mL)给予密蒙花不同浓度滴眼液,3次/d,睾酮组按0.5mL/kg剂量在大腿肌肉处注射丙酸睾酮,每3d 1次,各组分别于造模前和用药4wk后在全身麻醉下检测荧光素染色、SchirmerⅠ试验(SⅠt)和泪膜破裂时间(BUT).用药4wk后处死兔子,取其双眼球结膜组织,采用免疫组织化学染色法检测结膜中IL-1β、MUC5AC、P38MAPK的表达.结果:密蒙花滴眼液低浓度组、中浓度组、高浓度组用药4wk后,SⅠt值明显高于模型组,BUT值明显长于模型组,角膜荧光素染色阳性较模型组有明显改善(均P<0.01).密蒙花滴眼液低浓度组、中浓度组、高浓度组结膜IL-1β、P38MAPK的阳性表达低于模型组,MUC5AC的表达高于模型组(P<0.01),密蒙花滴眼液高浓度组优于低浓度、中浓度组.结论:密蒙花滴眼液具有类雄激素效果,对于去势雄兔干眼可以下调干眼结膜组织中IL-1β、P38MAPK的表达,增加MUC5AC的表达,从而减少干眼结膜组织的炎症浸润,维持泪膜稳定性,但其作用弱于雄激素.密蒙花滴眼液中、高浓度组对于干眼治疗作用强于低浓度组,高浓度组优于中浓度组.