目的:研究五倍子酸对瘢痕疙瘩成纤维细胞的形态、增殖、细胞周期、胶原收缩程度及对转化生长因子β（TGF-β）/Sma和Mad相关蛋白（Smads）信号通路的影响，探讨五倍子酸治疗瘢痕疙瘩的作用及机制。方法:2022年8 - 12月在武汉市第一医院皮肤外科获取术中切除的经临床及病理确诊的瘢痕疙瘩组织标本3份，采用组织块培养法进行原代成纤维细胞培养，取第3 ~ 8代细胞进行实验。设置低、中、高剂量五倍子酸组（分别用0.025、0.05、0.1 mg/ml五倍子酸干预细胞）及对照组（仅用含10%胎牛血清的DMEM培养细胞）。培养24、48、72 h后，细胞计数（CCK8）法检测各组细胞增殖活性，三维培养观察胶原收缩情况。按上述分组培养细胞24 h后，在微分干涉倒置荧光显微镜下拍照并使用流式细胞仪分析各组细胞周期变化。使用0.1 mg/ml五倍子酸干预细胞作为实验组（高剂量五倍子酸组），与对照组细胞分别培养24 h后，酶联免疫吸附试验（ELISA）测定两组TGF-β1、2、3浓度变化，实时荧光定量PCR检测TGF-β1、2、3，Smad2、3、4及α平滑肌肌动蛋白（SMA）mRNA相对表达水平。统计学分析采用 t检验、单因素方差分析及两因素方差分析，两两多重比较采用LSD- t检验。 结果:与对照组相比，随五倍子酸剂量增加，镜下瘢痕疙瘩成纤维细胞形态发生改变，逐渐出现胞体缩小、细胞间距变大、萎缩、凋亡细胞增多现象。CCK8结果显示，随五倍子酸剂量增加及作用时间延长，细胞增殖活力变化显著（ F组别 = 78.31， P < 0.001； F时间 = 4.17， P = 0.037），其中高剂量五倍子酸组24、48、72 h时瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖活力均显著低于对照组（均 P < 0.05）。三维培养显示，随培养时间延长，各组胶原均发生收缩，但收缩程度不同，对照组胶原明显收缩，各浓度五倍子酸组胶原收缩程度较低；作用24、48、72 h，中、高剂量五倍子酸组胶原收缩指数均显著低于对照组（均 P < 0.05）。流式细胞仪检测显示，处理24 h后，低、中、高剂量五倍子酸组细胞凋亡率（38.68% ± 3.05%、41.82% ± 2.19%、43.56% ± 3.58%）均显著高于对照组（12.58% ± 1.56%，均 P < 0.001）；与对照组相比，中、高剂量五倍子酸组G0/G1期细胞比例显著较低（均 P < 0.01），而S期和G2/M期细胞比例则显著较高（均 P < 0.05）。ELISA结果显示，高剂量五倍子酸组TGF-β1浓度[（758.58 ± 31.42）pg/ml]显著低于对照组[（1 081.30 ± 44.72）pg/ml， t = 11.81， P < 0.001]，TGF-β2浓度[（71.05 ± 7.40）pg/ml]与对照组[（76.43 ± 6.51）pg/ml]相比差异无统计学意义（ t = 1.09， P = 0.317），而TGF-β3浓度[（5.70 ± 3.87）pg/ml]高于对照组[（0.00 ± 0.00）pg/ml， t = 2.94， P = 0.026]。实时荧光定量PCR显示，与对照组相比，高剂量五倍子酸组TGF-β1、Smad2、Smad3、Smad4、α-SMA mRNA表达量均较低（均 P < 0.05），TGF-β3 mRNA表达量较高（ t = 6.78， P = 0.002），而TGF-β2 mRNA表达量无明显变化（ t = 0.05， P = 0.962）。 结论:五倍子酸可通过改变瘢痕疙瘩成纤维细胞周期，抑制其增殖，促进其凋亡，改变细胞形态，从而减少瘢痕形成及挛缩，其机制可能与抑制TGF-β/Smads信号通路有关。

目的:观察利拉鲁肽对老年2型糖尿病(T2DM)大鼠肾脏组织转化生长因子β1(TGF-β1)/细胞内信号蛋白Smads基因通路的影响并探讨其作用机制。方法:20月龄、体重(500±100)g的健康雄性SD大鼠75只，应用随机数字表法按1∶2随机分为对照组(25只)和造模组(50只)，造模组给予高糖、高脂饲料喂养8周后，一次性腹腔内推注1%链脲佐菌素30 mg/kg，成模后剩余48只再随机分为T2DM组(24只)和干预组(24只)，干预组给予利拉鲁肽200 μg·kg -1·d -1腹腔注射，对照组和T2DM组大鼠给予等量生理盐水。各组分别于分组后第4、8、12周末随机取8只大鼠，留取24 h尿液检测24 h尿蛋白。随后麻醉采血测生化指标，留取肾脏组织，行苏木素伊红(HE)染色后光学显微镜下观察其病变，并用免疫组化法测Ⅳ型胶原蛋白(Col-Ⅳ)的表达，应用实时荧光定量聚合酶链反应法测TGF-β1、Smad3、Smad7 mRNA的表达。组间比较采用单因素方差分析，两两比较采用LSD- t检验。 结果:在各时间段，与对照组大鼠比较，T2DM组大鼠出现肾小球基底膜增厚、系膜增生及间质纤维化改变，且随时间延长逐渐加重，TGF-β1、Smad3 mRNA及Col-Ⅳ表达增加(12周：0.69±0.01比0.15±0.01、0.51±0.02比0.02±0.01、183.33±2.08比221.67±2.08， t值分别为89.22、60.87、24.52，均 P<0.05)，而Smad7 mRNA减少( t＝13.42， P<0.05)；与同期T2DM组比较，干预组大鼠肾脏纤维化程度减轻，TGF-β1、Smad3 mRNA及Col-Ⅳ表达减少( t值分别为71.70、37.58、20.04，均 P<0.05)，而Smad7 mRNA增多( t＝9.96， P<0.05)。且随利拉鲁肽干预时间延长，病变逐渐减轻，TGF-β1、Smad3 mRNA及Col-Ⅳ逐渐减少，Smad7 mRNA逐渐增多(均 P<0.05)。 结论:利拉鲁肽可能通过抑制TGF-β1/Smads通路从而减少其下游Col-Ⅳ的生成，发挥抗肾纤维化的作用，延缓老年T2DM大鼠肾脏病变的进展。

目的:探讨脊神经双侧离断神经源膀胱(NB)幼鼠模型的膀胱形态结构功能变化及转化生长因子β1(TGF-β1)通路相关蛋白的表达。方法:选取SD雌性幼鼠64只，其中32只行L 6＋S 1神经双侧离断建立NB模型，32只行假手术作为对照。神经离断和假手术3、6、12、24周后行膀胱测压检查。收集对应膀胱组织行马松染色和天狼猩红染色分析胶原纤维变化，免疫组织化学染色分析TGF-β1、Smad2、Smad6蛋白变化，采用Western blot检测TGF-β1受体Ⅰ的蛋白水平变化。 结果:各NB神经离断组膀胱不稳定，存在膀胱漏尿点压(BLPP)，膀胱无明显排尿收缩压；神经离断3、6、12周和24周鼠的膀胱基础压(22.10±2.51)、(18.20±1.52)、(31.20±2.82)、(41.10±3.41) cmH 2O(1 cmH 2O＝0.098 kPa)和膀胱容量(22.30±1.72)、(49.10±5.54)、(30.30±2.68)、(13.50±1.52) mL均明显高于假手术组[(3.51±0.45) cmH 2O和(0.52±0.04) mL]，差异均有统计学意义(均 P<0.01)。神经离断组膀胱组织横切面大小为先增大(3、6周)后变小挛缩(12、24周)，膀胱壁厚度先变薄(3、6周)后增厚(12、24周)；膀胱质量随离断时间持续增加。马松染色结果显示，神经离断大鼠的膀胱壁中正常纤维结缔组织逐渐紊乱，膀胱壁分层结构逐渐解体，平滑肌肥大增厚，肌间胶原纤维逐渐增多，染色变深。天狼猩红检测示神经离断24周的膀胱组织中Ⅲ型胶原纤维明显增多，Ⅲ型/Ⅰ型胶原纤维比例(3.14±0.71)明显高于对应的假手术组(0.88±0.21)，差异有统计学意义( t＝7.48， P<0.01)。免疫组织化学染色发现，神经离断膀胱组织中TGF-β1和Smad2表达随着离断时间逐渐升高，通路抑制性蛋白Smad6随离断时间逐渐降低。Western blot显示TGF-β1受体Ⅰ蛋白水平在12、24周的表达分别高于对应的假手术组1.3、1.6倍( t＝6.06、14.45，均 P<0.01)。 结论:脊神经双侧离断导致的幼鼠NB，收缩功能瘫痪，膀胱内压逐渐增高，膀胱正常结构逐渐解体，膀胱纤维化通路TGF-β1/Smads信号通路逐渐激活，小儿NB发展的过程为膀胱纤维化，临床治疗小儿NB应尽早预防膀胱纤维化。

目的:探讨槲皮苷通过调控转化生长因子-β1(TGF-β1)/smads信号通路抑制结肠癌细胞迁移与侵袭。方法:HCT116结肠癌细胞分为对照组、槲皮苷低、中、高剂量组，分别使用0、5、10、20 μmol/L槲皮苷处理48 h，噻唑蓝(MTT)实验检测细胞活力，迁移实验检测细胞迁移能力，Transwell实验检测细胞侵袭能力，蛋白质印迹法(Western blot)检测基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、基质金属蛋白酶抑制剂-1(TIMP-1)、波形蛋白(Vimentin)、E-钙黏蛋白(E-cadherin)、TGF-β1、p-Smad2及p-Samd3蛋白表达，采用 F检验分析组间差异。 结果:槲皮苷低、中、高剂量组细胞活力(0.48±0.01、0.41±0.01、0.34±0.01比0.54±0.02， F＝26.354， P<0.05)、细胞迁移数目[(117.62±3.49)、(43.36±2.53)、(35.56±1.32)个比(176.48±9.35)个， F＝35.624， P<0.05]、细胞侵袭数目[(86.31±3.83)、(41.28±2.26)、(30.41±1.26)个比(182.43±9.21)个， F＝36.520， P<0.05]、MMP-9 (0.98±0.05、0.46±0.02、0.32±0.01比0.35±0.01， F＝26.546， P<0.05)、Vimentin (0.53±0.03、0.41±0.03、0.20±0.01比0.08±0.00、 F＝27.649， P<0.05)、TGF-β1(0.82±0.05、0.74±0.04、0.70±0.04比0.35±0.01， F＝30.325， P<0.05)、p-Smad2(1.78±0.09、1.56±0.10、0.84±0.05比0.41±0.03， F＝33.654， P<0.05)及p-Smad3蛋白表达量(1.94±0.12、0.87±0.07、0.56±0.04比0.28±0.01， F＝35.674， P<0.05)低于对照组，槲皮苷低、中、高剂量组中TIMP-1(0.21±0.01、0.31±0.02、0.46±0.03比0.64±0.04， F＝28.413， P<0.05)、E-cadherin蛋白表达量(0.09±0.00、0.22±0.01、0.43±0.02比0.89±0.07， F＝28.561， P<0.05)高于对照组。 结论:槲皮苷能抑制HCT116细胞迁移及侵袭，可能与抑制TGF-β1/smad2/3信号通路有关。

膜蛋白CD109属于GPI联结糖蛋白，参与多种重要信号通路，如TGF-β/Smads信号通路 [1,2]、JAK-STAT信号通路 [3,4]和表皮生长因子受体通路 [5,6]。CD109最初是在急性髓系白血病（AML）细胞系KG-1a鉴定的细胞表面抗原 [7]，主要表达于胎儿和成人CD34阳性的骨髓单个核细胞亚群、激活的T淋巴细胞、激活的血小板、白血病原巨核细胞、内皮细胞、间充质干细胞亚群和一些人类肿瘤细胞系中 [8]，但不表达于人类静止的T细胞、血小板或外周血白细胞 [9]。本研究探索了CD109在初发AML（M 3除外）患者中的表达特征以及与CD34表达的相关性。

目的:研究异鼠李素对长波紫外线(ultraviolet A, UVA)损伤的人皮肤成纤维细胞雌激素受体(estrogen receptor, ER)/TGF-β1/Smads3信号通路的影响。方法:将人皮肤成纤维细胞按随机数字表法分为空白组、模型组、雌二醇组及异鼠李素100、10、1、0.1、0.01、0.001 μmol/L组，除空白组外，其余各组建立细胞光老化模型。相应药物干预后，采用MTT法检测细胞增殖率，筛选出异鼠李素有效浓度。再将细胞按随机数字表法分为空白组、模型组、雌二醇组、异鼠李素组，以及TGF-β1阻断剂组、Samd3阻断剂组、COL1A1阻断剂组。除空白组外，其余各组建立细胞光老化模型。相应药物干预后，采用实时定量PCR和Western blot方法检测各组人皮肤成纤维细胞TGF-β1、Smad3、Ⅰ型胶原α1(collagen, type Ⅰ, alpha 1, COL1A1)mRNA和蛋白表达。结果:与模型组比较，0.001 μmol/L组异鼠李素组人皮肤成纤维细胞增殖率升高( P<0.01)；异鼠李素组TGF-β1 mRNA[(0.956±0.020)比(0.718±0.036)]、Smad3 mRNA[(0.981±0.044)比(0.753±0.047)]、COL1A1 mRNA[(0.998±0.032)比(0.786±0.031)]、TGF-β1蛋白[(0.761±0.026)比(0.542±0.023)]、Smad3蛋白[(0.776±0.016)比(0.551±0.025)]、COL1A1蛋白[(0.792±0.025)比(0.584±0.012)]表达水平升高( P<0.01)。与异鼠李素组比较，TGF-β1阻断剂组、Smad3阻断剂组、COL1A1阻断剂组TGF-β1 mRNA[(0.762±0.051)、(0.802±0.012)、(0.828±0.030)比(0.967±0.026)]、Smad3 mRNA[(0.784±0.027)、(0.816±0.015)、(0.830±0.032)比(0.998±0.021)]、COL1A1 mRNA[(1.082±0.025)、(1.101±0.012)、(1.138±0.011)比(1.263±0.022)]、TGF-β1蛋白[(0.675±0.028)、(0.682±0.026)、(0.722±0.015)比(0.862±0.014)]、Smad3蛋白[(0.712±0.013)、(0.764±0.012)、(0.778±0.011)比(0.901±0.015)]、COL1A1蛋白[(0.738±0.016)、(0.770±0.038)、(0.792±0.026)比(0.964±0.017)]表达降低( P<0.05)。 结论:异鼠李素可促进UVA照射后的人皮肤成纤维细胞胶原蛋白合成，其作用机制与调控成纤维细胞ER/TGF-β1/Smad3信号通路有关。

目的:探讨山楂酸（MA）对异丙肾上腺素（ISO）诱导的小鼠心肌纤维化的影响。方法:使用ISO诱导成年雄性C57BL/6小鼠心肌纤维化，MA给药2周，检测MA对心功能和纤维化的影响。RT-PCR和免疫印迹检测纤维化标志物和信号通路分子变化。将原代培养的大鼠成纤维细胞中分别加入磷酸缓冲盐溶液（PBS）、PBS+p38 MAPK抑制剂（SB203580）、PBS+MA、ISO、ISO+SB203580、ISO+MA。48 h后收集细胞进行后续检测。结果:本研究成功制备心肌纤维化小鼠模型，ISO+MA组的左心室短轴缩短率（FS）和左心室内压最大上升速率和最大下降速率（±dp/dt）显著高于ISO组[分别为（35.1±1.8）%比（28.5±2.6）%、（7 256±153）mmHg/s比（6 402±240）mmHg/s、（7 156±163）mmHg/s比（6 319±219）mmHg/s， P<0.05]；ISO+MA组间质和血管周胶原沉积程度高于ISO组（ P<0.05），ISO+MA组的COL-1、COL-3和TGF-β mRNA相对水平显著低于ISO组（1.70±0.24比3.69±0.34、1.72±0.56比4.84±0.82、1.52±0.19比2.64±0.29， P<0.05）；ISO+MA组的p38 MAPK和Smad3的磷酸化水平和TGF-β1蛋白表达水平低于ISO组（1.67±0.35比2.61±0.58、1.68±0.23比2.52±0.19、1.56±0.15比2.48±0.26， P<0.05）；体外细胞实验结果显示，p38 MAPK特异性抑制剂（SB203580）组和MA组的COL-1、COL-3、TGF-β mRNA水平均显著低于ISO组（分别为2.25±0.51，2.16±0.48比5.29±1.21；1.58±0.34，1.69±0.29比4.97±1.32；1.41±0.31，1.55±0.38比3.53±0.56， P<0.05）；SB203580组和MA组的p38 MAPK、Smad3的磷酸化水平均显著低于ISO组，TGF-β1的蛋白表达低于ISO组（分别为1.81±0.18，1.77±0.16比2.56±0.32；1.85±0.21，1.81±0.17比2.48±0.37；1.84±0.24，1.72±0.17比2.52±0.29， P<0.05）。 结论:MA可抑制p38 MAPK的磷酸化，进而抑制经典的TGF-β1/Smads纤维化信号通路来发挥抗纤维化的作用。

目的:建立神经源性膀胱大鼠模型，分析肾脏形态功能及血管紧张素Ⅱ/转化生长因子β1/Smads（AngⅡ/TGF-β1/Smads）通路相关蛋白表达的变化。方法:48只Sprague-Dawley大鼠随机分为实验组（脊神经离断， n=36）和对照组（假手术， n=12），分别于6周、12周和24周通过尿动力学检测膀胱顺应性，B超检测肾脏形态，血肌酐和尿素氮分析肾功能变化，Masson和HE染色检测肾脏病理改变，免疫组化检测AngⅡ/TGF-β1/Smads通路蛋白在肾脏的分布，Western印迹检测AngⅡ/TGF-β1/Smads通路蛋白表达。 结果:尿动力显示，实验组大鼠基础膀胱压明显高于对照组大鼠。B超显示，与对照组相比，实验组大鼠肾盂直径逐渐增宽（ P<0.05），肾积水逐渐明显。与对照组相比，实验组大鼠BUN和Scr逐渐增加（均 P<0.01）。Masson和HE染色显示，与对照组相比，实验组大鼠胶原沉积面积和肾小管间质评分逐渐增加（均 P<0.01）。免疫组化显示，与对照组相比，实验组血管紧张素Ⅱ一型受体（AT1）、TGF-β受体1（TGF-βR1）、磷酸化Smad2表达逐渐增加（均 P<0.01），通路抑制蛋白Smad6逐渐降低（ P<0.01），且各蛋白在肾脏分布具有一致性。Western印迹显示，随神经离断时间延长，AT1、TGF-βR1、磷酸化Smad2、Ⅰ型和Ⅲ型胶原表达逐渐增加，Smad6逐渐降低（均 P<0.05）。 结论:双侧脊髓神经切断引起的神经源性膀胱，由于膀胱功能障碍，膀胱压力增加，引起肾积水，肾小球结构破坏，AngⅡ/TGF-β1/Smads通路激活，肾脏发生纤维化。该方法有效，具有临床相似性，为探索神经源性膀胱的治疗方法奠定了基础。

目的:探究巨噬细胞来源的外泌体对肝星状细胞活化的作用及其可能的机制。方法:采用差异超速离心法提取巨噬细胞外泌体，将外泌体与小鼠肝星状细胞株JS1细胞共培养，设立磷酸盐缓冲液（PBS）对照组。细胞免疫荧光观察F-actin表达情况，细胞活力检测（CCK8）法检测两组JS1细胞的存活率，western blot和RT-PCR法检测两组JS1细胞的活化指标［Ⅰ胶型原蛋白（ColⅠ）、α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）］及其关键信号通路激活指标［转化生长因子（TGF）-β1/Smads、血小板衍生生长因子（PDGF）］的表达水平。两组间数据比较采用独立样本 t检验。 结果:透射电镜观察外泌体膜结构清晰，外泌体标志蛋白CD63、CD81表达阳性，提示外泌体提取成功。外泌体与JS1细胞共培养，与PBS对照组比较，外泌体组JS1细胞的增殖率差异无统计学意义（ P＞0.05）；外泌体组细胞F-actin表达明显增多；外泌体组JS1细胞α-SMA和ColⅠ的mRNA和蛋白表达水平显著升高（ P值均＜0.05），PBS组和外泌体组α-SMA的mRNA相对表达量分别为0.25±0.07、1.43±0.19，ColⅠ的mRNA相对表达量分别为1.03±0.04、1.57±0.06；外泌体组JS1细胞PDGF的mRNA和蛋白表达水平显著升高（ P＜0.05），PBS组和外泌体组PDGF的mRNA相对表达量分别为0.27±0.04、1.65±0.12；两组细胞的TGF-β1、Smad2、Smad3的mRNA和蛋白表达水平差异无统计学意义（ P＞0.05）。 结论:巨噬细胞来源的外泌体显著促进肝星状细胞活化，其机制可能与上调JS1细胞内PDGF的表达有关。

目的:基于转化生长因子-β1(TGF-β1)/Smads信号通路探讨肉苁蓉苯乙醇总苷(CPhGs)对人增生性瘢痕成纤维细胞(HSFbs)作用的机制。方法:人增生性瘢痕组织标本来自新疆医科大学第一附属医院2019年3月至6月收治的9例需要手术的增生性瘢痕患者，采用组织块培养法分离后传代培养人增生性瘢痕成纤维细胞，随机分为空白组、模型组(TGF-β1)、阳性对照组(TGF-β1＋5-氟尿嘧啶)、实验组(TGF-β1＋CPhGs)，通过细胞计数试剂盒(CCK-8)检测不同浓度CPhGs对HSFbs增殖的影响；实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测各组中Smad2、Smad3、Smad7、Ⅰ型胶原(COL-1)和Ⅲ型胶原(COL-3)的mRNA的表达；蛋白质印迹法(Western blot)检测各组中Smad2、Smad3、磷酸化Smad2(p-Smad2)、磷酸化Smad3(p-Smad3)、Smad7、COL-1和COL-3蛋白的表达，多组间比较采用单因素方差分析。结果:60、90、120 mg/L CPhGs作用于成纤维细胞48 h后抑制率为[(36.87±0.06比43.52±0.04比78.11±0.03)%， F＝45.073， P<0.01]，CPhGs对细胞的抑制作用随干预时间的延长和药物浓度的增加而增强；RT-qPCR结果显示，实验组和阳性对照组COL-1、COL-3、Smad2、Smad3 mRNA表达低于模型组，Smad7 mRNA表达明显高于模型组，差异有统计学意义(0.21±0.04比0.3±0.25比1.56±0.01， F＝39.755， P<0.01)、(0.55±0.04比0.27±0.04比1.66±0.22， F＝61.997， P<0.01)、(0.55±0.03比0.78±0.76比1.06±0.15， F＝17.769， P<0.01)、(0.46±0.08比0.55±0.10比2.05±0.29， F＝56.796， P<0.01)、(1.77±0.59比0.11±0.02比0.04±0.04， F＝14.780， P<0.05)；Western blot结果显示：实验组和阳性对照组p-Smad2、p-Smad3、COL-1、COL-3蛋白表达低于模型组，Smad7蛋白表达明显高于模型组(0.16±0.03比0.11±0.02比0.06±0.00)、(0.12±0.02比0.07±0.01比0.04±0.01， F＝7.670， P<0.05)、(0.27±0.02比0.08±0.01比0.05±0.04， F＝34.291， P<0.01)、(0.33±0.02比0.16±0.02比0.17±0.01， F＝16.322， P<0.01)、(0.12±0.03比0.15±0.06比0.23±0.05， F＝3.936， P<0.05)，组间比较差异有统计学意义。 结论:CPhGs的可通过阻断TGF-β/Smad信号通路进而抑制HSFbs活化和增殖。