目的:观察叉头框K1(FOXK1)-卷曲螺旋结构域蛋白43(CDC43)轴对大肠癌细胞迁移和上皮-间充质转化(EMT)的影响。方法:选取2017年9月到2019年9月南阳医学高等专科学校第一附属医院收治的103例大肠癌和对应的癌旁组织作为研究对象，采用免疫组织化学分析FOXK1蛋白表达水平；采用规律间隔成簇短回文重复序列及其相关核酸酶9系统(CRISPR-Cas9)技术在SW480细胞中建立FOXK1敲除细胞系(FOXK1 KO组)和对照细胞系(对照组)，采用细胞计数试剂盒(CCK-8)检测两组细胞增殖；采用Tanswell分析两组细胞迁移；采用蛋白质印迹法(Western blot)检测两组细胞EMT。组间比较采用 t检验。 结果:与癌旁组织FOCK1表达水平(40.32±6.90)比较，大肠癌组织FOXK1蛋白表达水平显著增高(159.21±13.85)，差异有统计学意义( t＝4.918， P<0.05)。与对照组细胞FOXK1蛋白表达水平(1.09±0.21)比较，FOXK1 KO组细胞FOXK1蛋白表达水平显著下降，差异有统计学意义( t＝5.012， P<0.05)。与对照组细胞吸光度值(1.94±0.28)比较，FOXK1 KO组细胞吸光度值显著下调(1.07±0.19)，差异有统计学意义( t＝3.162， P<0.05)。Transwell结果显示，与对照组细胞迁移数量[(95.28±10.20)个]比较，FOXK1 KO组细胞迁移数量显著下降[(48.39±8.21)个]，差异有统计学意义( t＝3.091， P<0.05)。与对照组细胞上皮细胞标志物E-钙黏蛋白(E-cadherin)表达水平(0.26±0.08)比较，FOXK1 KO组细胞E-cadherin表达水平显著增高(1.05±0.11)，差异有统计学意义( t＝3.001， P<0.05)。与对照组细胞间质细胞标志物N-钙黏蛋白(N-cadherin)(0.78±0.13)和波形蛋白(Vimentin)(1.15±0.19)表达水平比较，FOXK1 KO组细胞N-cadherin(0.31±0.11)和Vimentin表达水平显著下调(0.39±0.14)，差异有统计学意义( t＝2.891、2.318， P<0.05)。与对照组细胞CCDC43表达水平(1.20±0.22)比较，FOXK1 KO组细胞CCDC43蛋白表达水平显著下调(0.57±0.18)，差异有统计学意义( t＝2.581， P<0.05)。 结论:FOXK1在大肠癌中高表达，通过调控CCDC43蛋白水平调节大肠癌细胞增殖、迁移和EMT。

目的:探讨叉头盒K1（forkhead box K1，FOXK1）在急性肾损伤（acute kidney injury，AKI）中的作用及机制，以期为AKI的防治提供新的思路和靶点。方法:构建3种AKI模型：按随机数字表法将30只雄性8～10周龄22~24 g 无特定病原体野生型C57BL/6小鼠随机分为生理盐水组（0.9%氯化钠水溶液0.1 ml/10 g，腹腔注射）、脂多糖组（脂多糖溶液10 mg/kg，腹腔注射）、顺铂组（顺铂溶液20 mg/kg，腹腔注射）、缺血再灌注（ischemia reperfusion，IR）组及假手术组，每组6只，各组小鼠均于造模24 h后处死取材。肾功能情况通过检测血肌酐、血尿素氮水平；HE染色法观察各组肾组织病理学改变；Western印迹法检测肾组织FOXK1、肾损伤分子1（kidney injury molecule 1，KIM-1）以及自噬标志物p62、Beclin1和LC3蛋白表达水平，实时荧光定量PCR法检测 Foxk1 mRNA表达水平。予以人肾小管上皮细胞（HK-2细胞）缺氧24 h、复氧6 h构建缺氧复氧（hypoxia reoxygenation，HR）诱导AKI体外模型，检测HK-2细胞上述指标表达水平。同时，在体内外构建 Foxk1基因缺失的肾小管上皮细胞小鼠或HK-2细胞，并诱导建立AKI模型，观察上述各指标表达变化。 结果:与生理盐水组相比，脂多糖组及顺铂组肾组织血肌酐、血尿素氮均较高，KIM-1蛋白表达较高（均 P<0.05），FOXK1蛋白和mRNA表达无明显改变（均 P>0.05）；与假手术组相比，IR组肾组织血肌酐、血尿素氮均较高，KIM-1蛋白表达较高，FOXK1蛋白和mRNA表达均较低（均 P<0.05）。与对照组比较，体外HR诱导的AKI细胞模型中FOXK1蛋白和mRNA表达均较低（均 P<0.05）。体内实验中，与假手术组相比，IR组肾小管损伤较重，血肌酐、血尿素氮均较高，p62蛋白表达较低，KIM-1、Beclin1和LC3蛋白表达均较高（均 P<0.05），且与 Foxk1 flox/flox IR组相比， Foxk1 cKO IR组肾小管损伤明显较轻，血肌酐、血尿素氮均较低，KIM-1、p62蛋白表达均较低，Beclin1和LC3蛋白表达均较高（均 P<0.05）。体外实验中，与shCtrl HR组比较，shFoxk1 HR组KIM-1、p62蛋白表达均较低，Beclin1、LC3蛋白均较高（均 P<0.05）。 结论:FOXK1在缺血性AKI模型中表达降低。 Foxk1基因缺失通过介导自噬激活，减轻肾小管上皮细胞损伤，保护缺血性AKI。

目的 研究温心方治疗冠心病抑郁症的分子机制,探索温阳益心调神法作用机理.方法 通过TCMSP、ETCM、化源网、PubChem、SwissTarget Prediction、Gene Cards、DrugBank、TTD 等获取中药有效成分、药物和疾病靶点.通过 STRING11.5、Cytoscape3.9.1 获取核心成分和核心靶点,构建蛋白质-蛋白质互相作用(protein-protein interaction,PPI)和"药物-成分-核心靶点"网络.通过Metascape进行富集分析,筛选通路.通过Cytoscape3.9.1 算法分析,获取蛋白受体(关键基因)和小分子配体(逆靶向化合物),由RCSB PDB、TCMSP、PubChem、AutoDockTools1.5.6、pymol等进行分子对接及可视化呈现.结果 温心方有效成分 103个,核心成分5 个,分别为五味子酯乙(gomisin B)、黄芩素(baicalein)、柚皮素(naringenin)、维生素E(vitamin E,VE)、前列腺素B1(prostaglandinB1,PGB1).作用靶点608 个,核心靶点 138 个,主要募集在磷脂酰肌醇-3-激酶(phosphatidylinositol-3-kinase,PI3K)-蛋白激酶B(protein kinase B,AKT)通路、晚期糖基化终末产物(advanced glycation end product,AGE)-晚期糖基化终产物受体(receptor for advanced glycosylation end products,RAGE)通路、叉头盒转录因子(forkhead box,FOXO)通路、两面神激酶(janus kinase,JAK)-信号转导及转录激活蛋白(signal transducer and activator of transcription,STAT)通路,涉及细胞增殖与凋亡、细胞形态调节与骨架重构、细胞周期调节、轴突运输、血管内皮生长、血管紧张度等细胞功能和生物进程.关键基因和逆靶向化合物对接构象合理,对接结果可行.结论 黄芩素、柚皮素、维生素E等可能是温心方加减治疗冠心病抑郁症的重要成分,通过VEGFA、NFKB1、MAPK1 等靶点调控AGE-RAGE通路、JAK-STAT通路、PI3K-AKT通路、FOXO通路,发挥药理作用.温阳益心调神法通过降低心肌细胞、神经元的氧化应激反应,促进抗氧化机制启动,清除氧化应激物质,抑制炎症过程,从而调节细胞增殖、凋亡的动态平衡,维持机体稳态,保护血管内皮生长、改善神经功能,达到治疗冠心病抑郁症的目的.该研究也间接表明冠心病和抑郁症的共病机制与氧化应激有关.

目的:探讨大黄素通过miR-96-5p靶向叉头蛋白K2(FOXK2)减轻狼疮性肾炎肾小球系膜细胞(MCs)损伤.方法:检测MRL/faslpr小鼠(狼疮性肾炎肾组)和MRL/MPJ小鼠(对照组)24 h尿蛋白以及血清尿素氮(BUN)和血肌酐(Scr)含量.MCs分离纯化后分为:MCs组(未做任何处理的MCs);L-EMO组(10 μmol/L 大黄素处理 MCs)、M-EMO组(25 μmol/L大黄素处理 MCs)、H-EMO组(50 μmol/L 大黄素处理 MCs)、H-EMO+miR-96-5p-NC 组(50μmol/L 大黄素处理 MCs后转染 miR-96-5p-NC)、H-EMO+miR-96-5p-minic 组(50 μmol/L 大黄素处理MCs后转染miR-96-5p-minic).双荧光素酶报告基因实验验证miR-96-5p和FOXK2的靶向关系;实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测miR-96-5p表达;蛋白质印迹法(Western blot)检测FOXK2以及凋亡相关蛋白表达;酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测MCs炎性因子水平;细胞计数试剂盒 8(CCK-8)测定 MCs 活力;Annexin-V FITC/PI 双染法检测MCs凋亡情况.结果:与对照组相比,狼疮性肾炎组24 h尿蛋白含量、血清BUN和Scr水平显著升高(P＜0.05);与MCs组相比,L-EMO组、M-EMO组、H-EMO组miR-96-5p的表达量、白介素1β(IL-1β)、白介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平、A450值、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)蛋白水平依次显著下降(P＜0.05),FOXK2水平、细胞凋亡率、Bcl-2相关的X基因(Bax)、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3(cleaved-Caspase-3)蛋白水平依次显著升高(P＜0.05),大黄素作用效果呈现剂量依赖性;与H-EMO 组、H-EMO+miR-96-5p-NC组相比,H-EMO+miR-96-5p-minic组显著升高miR-96-5p的表达量、炎性因子水平、A450值以及Bcl-2蛋白水平(P＜0.05),显著降低FOXK2水平以及细胞凋亡率(P＜0.05).结论:大黄素通过下调miR-96-5p进而上调FOXK2,从而减轻狼疮性肾炎MCs损伤.

探讨白藜芦醇(resveratrol,Res)对卵巢低反应(poor ovarian response,POR)小鼠的治疗作用和潜在机制.通过网络药理学收集Res和POR 的共有靶点基因,使用基因本体论(Gene Ontology,GO)分析和京都基因与基因组百科全书(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG)通路富集分析筛选关键的信号通路,并通过动物实验验证.将筛选后动情周期规律的小鼠随机分成正常组、POR组以及Res低、高剂量组.正常组给予等体积的 0.9%氯化钠溶液灌胃,POR组以及Res低、高剂量(20、40 mg·kg-1)组小鼠给予雷公藤多苷混悬液(50 mg·kg-1)灌胃 2 周,造模完成后,Res低、高剂量组小鼠给予连续灌胃治疗 2 周,正常组和POR组给予等体积的 0.9%氯化钠溶液灌胃.治疗结束次日各组小鼠开始促排卵并完成取材.采用阴道脱落细胞涂片观察小鼠的动情周期变化,检测小鼠的获卵数、卵巢湿重与卵巢指数,通过酶联免疫吸附剂测定(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)法检测血清中抗缪勒管激素(anti-mullerian hormone,AMH)、促卵泡生成素(follicle-stimulating hormone,FSH)、雌二醇(estradiol,E2)、促黄体生成激素(luteinizing hormone,LH)的含量;通过苏木素-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色和脱氧核苷酸转移酶dUTP末端标记(terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated dUTP nick-end labeling,TUNEL)染色法观察卵巢组织形态和卵巢颗粒细胞凋亡情况;通过 Western blot 法检测磷脂酰肌醇 3-激酶(phosphoinositide 3-kinase,PI3K)、蛋白激酶 B(protein kinase B,AKT)、叉头盒 O(forkhead box O,FOXO)3a、缺氧诱导因子(hypoxia-inducible factor,HIF)-1α、B淋巴细胞瘤-2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)、Bcl-2 关联X的蛋白(Bcl-2 associated X protein,Bax)蛋白表达水平的变化.最终收集到Res和POR交集靶点 222 个;GO富集分析发现,Res-POR参与的生物过程(biological process)主要是氧化应激反应.KEGG富集分析发现,Res可以通过PI3K/AKT、HIF-1、FOXO等信号通路参与POR治疗.动物实验表明,与正常组比较,POR组小鼠动情周期紊乱率升高,卵巢组织各级正常发育卵泡数量减少且形态较差,闭锁卵泡增多,卵巢颗粒细胞凋亡量提高,获卵数下降,卵巢湿重与卵巢指数降低,血清中FSH和LH含量升高、AMH和E2 含量下降,卵巢组织HIF-1α、FOXO3a和Bax蛋白表达水平升高,PI3K、AKT和Bcl-2 蛋白表达水平降低;与POR组比较,Res低、高剂量组小鼠动情周期紊乱率降低,卵泡数量和形态得到不同程度改善,卵泡闭锁数量降低,卵巢颗粒细胞凋亡程度得到改善,获卵数升高,卵巢湿重与卵巢指数提高,血清中FSH和LH含量降低、AMH和E2 含量升高,卵巢组织HIF-1α、FOXO3a和Bax蛋白表达水平降低,PI3K、AKT和Bcl-2蛋白表达水平升高.综上所述,Res可以抑制小鼠卵巢细胞凋亡,改善卵巢反应下降,其机制可能与调节PI3K/AKT/FOXO3a和HIF-1α通路中的关键分子有关.

目的 探讨长链非编码RNA(LncRNA)叉头盒转录基因D3 反义RNA1(FOXD3-AS1)对血管紧张素(Ang)Ⅱ诱导的血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响.方法 采用 0.001 mol/L的AngⅡ处理人主动脉VSMCs.实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测FOXD3-AS1 和miR-127-3p的表达水平.CCK-8、流式细胞术、Transwell、Western印迹检测细胞活力、凋亡、迁移、侵袭及磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)和蛋白激酶B(AKT)的磷酸化水平.双荧光素酶报告基因实验和RT-qPCR验证FOXD3-AS1 和miR-127-3p的靶向调控关系.结果 AngⅡ诱导后VSMCs细胞存活率、迁移和侵袭细胞数、FOXD3-AS1、p-PI3K和p-AKT表达显著升高,凋亡率、miR-127-3p表达显著降低(P＜0.05).抑制FOXD3-AS1 表达或过表达miR-127-3p后,AngⅡ处理的VSMCs细胞存活率、迁移和侵袭细胞数、p-PI3K和p-AKT表达显著降低,凋亡率显著升高(P＜0.05).FOXD3-AS1 靶向负性调控miR-127-3p表达.抑制FOXD3-AS1 能够逆转抑制miR-127-3p对AngⅡ处理的VSMCs细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭及p-PI3K和p-AKT表达的影响(P＜0.05).结论 抑制FOXD3-AS1 能够降低AngⅡ诱导的VSMCs细胞增殖、迁移和侵袭,促进细胞凋亡,其机制可能与上调miR-127-3p和抑制PI3K/AKT信号通路有关.

目的:探讨抑制组蛋白赖氨酸特异性去甲基化酶1(LSD1)对人诱导性多能干细胞(hiPSCs)向定型内胚层(DE)分化的调控作用.方法:利用LSD1抑制剂或shRNA抑制LSD1表达,观察hiPSCs形态变化并检测LSD1活性水平,CCK-8方法检测细胞增殖活性,qPCR检测hiPSCs多能性基因及各胚层标志基因的表达,IP-WB方法检测LSD1调控靶基因的复合体模式,ChIP-qPCR方法检测DE标志基因启动子区域组蛋白H3第4位赖氨酸二甲基化和三甲基化(H3K4me2/me3)及第9位赖氨酸乙酰化(H3K9ac)水平.结果:(1)抑制LSD1可显著下调hiPSCs多能性基因OCT4、Y染色体性别决定区域盒2(SOX2)及Nanog同源盒(NANOG)的表达水平(P<0.05);显著上调外胚层标志基因β3-微管蛋白(TUBB3),DE标志基因Y染色体性别决定区域盒17(SOX17)和叉头盒A2(FOXA2),以及中胚层标志基因骨形态发生蛋白2(BMP2)的表达水平(P<0.05);(2)当LSD1活性为正常水平的53.4％时利于DE分化;(3)LSD1在hiPSCs核内与组蛋白去乙酰化酶1(HDAC1)及阻遏物元件1沉默转录因子辅阻遏物(CoREST)以复合体的形式调控靶基因;(4)抑制LSD1后,SOX17和FOXA2基因启动子区域LSD1与HDAC1结合水平均显著下降,同时H3K4me2/me3和H3K9ac富集水平显著提高(P<0.01).结论:LSD1通过调控DE分化关键基因启动子区域H3K4me和H3K9ac水平来影响hiPSCs向DE的分化能力.

目的 探讨叉头框蛋白K1(FOXK1)在胶质瘤组织的表达及临床意义.方法 采用实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)和Western blot检测FOXK1在胶质瘤mRNA和蛋白表达水平;乘积极限法(Kaplan-Meier)分析FOXK1与患者临床病理参数关系;RNA干扰胶质母细胞瘤FOXK1的表达,Transwell迁移实验测定LN18细胞迁移能力,细胞计数试剂盒(CCK-8)细胞计数测定T98G细胞增殖.结果 RT-qPCR检测和Westem blot结果表明FOXK1在胶质母细胞瘤(GBM)组织中mRNA和蛋白高表达.FOXK1的表达与胶质瘤患者性别无明显相关(P＞0.05)、与年龄无明显相关(P＞0.05),而FOXK1表达与WHO分级明显相关(P＜0.01).Kaplan-Meier分析显示高表达FOXK1的患者预后较差(P＜0.05).Transwell迁移实验结果表明FOXK1促进癌细胞转移,CCK-8细胞计数结果表明FOXK1促进胶质瘤细胞增殖.结论 FOXK1在胶质瘤患者中高表达,与胶质瘤发生和发展、转移相关.

目的 观察胰岛素样生长因子(IGF)-1对Aβ25～35诱导的人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞损伤的保护作用,并初步探讨其可能机制.方法 将SH-SY5Y细胞随机分为对照(Control)组,Aβ25～35处理(Aβ25～35)组,IGF-1治疗(Aβ25～35+IGF-1)组,Wortmannin抑制剂(Aβ25～35+IGF-1+Wort)组,单纯渥曼青霉素(Wortmannin)组.CCK-8法检测细胞活力,检测乳酸脱氧酶(LDH)漏出率,判断细胞损伤程度,荧光探针DCFH-DA法检测细胞内活性氧(ROS)含量的变化,试剂盒测定丙二醛(MAD)含量及超氧化物气化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性,流式细胞仪分析法测定细胞凋亡率,Western印迹法检测相关蛋白表达.结果 与Aβ25～35组相比,Aβ25～35+IGF-1组细胞活力明显升高,LDH漏出率明显下降(P<0.05).IGF-1可明显减少Aβ25～35诱导SH-SY5Y细胞ROS及MDA生成,增加SOD及GSH-Px酶活性(P<0.05).与Aβ25～35组相比,IGF-1治疗还能增加蛋白激酶B(Akt)及叉头框蛋白(Fox)O3a磷酸化水平,降低Puma蛋白表达水平及细胞凋亡率(P<0.05).而加入磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)特异性抑制剂Wortmannin预处理,可阻断上述IGF-1的保护作用(P<0.05).结论 IGF-1对Aβ25～35诱导的SH-SY5Y细胞损伤的保护作用可能与激活PI3K/Akt信号通路有关.

目的 研究肺腺癌转移相关转录本1(MALAT1)对喉癌(LC)细胞增殖和侵袭的作用及其机制.方法 用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测LC细胞中M ALA T1 、微小RNA-503-5p(miR-503-5p)和叉头盒蛋白K1(FOXK1)的表达水平;用生物学软件预测M ALAT1 、miR-503-5p和FOXK1的靶向关系,双荧光素酶报告进一步验证;蛋白质印迹技术(Western blot )检测相关蛋白的表达水平,细胞计数试剂盒8(CCK8) 、侵袭小室(T ranswell)和克隆形成检测 LC 细胞的增殖、侵袭情况.结果 在 LC细胞中,MALAT 1和 FOXK1 高表达, miR-503-5p低表达;且miR-503-5p是MALAT 1的靶向调节基因之一,两者呈负相关;下调miR-503-5p可以明显促进LC细胞的增殖和侵袭( P＜ 0.01 ) ,并逆转 MALAT 1 低表达对 LC 细胞增殖和侵袭的抑制作用. FOXK1 是miR-503-5p的靶向调节基因之一,过表达 FOXK1明显促进LC细胞的增殖和侵袭能力,且逆转MALAT 1低表达对LC细胞增殖和侵袭的抑制作用.结论 MALAT 1通过靶向miR-503-5p上调FOXK1促进LC细胞的增殖和侵袭能力.