目的:对反式转录激活因子Tat第41位赖氨酸(K41)在HIV-1转录活化过程中的作用进行探讨，并对B、C亚型HIV-1中Tat K41的作用进行比较。方法:通过荧光素酶活性实验检测野生型Tat、突变型Tat K41A、Tat K41R对HIV-1转录活性的影响，并比较B、C亚型HIV-1中Tat K41作用的差异；通过免疫沉淀(immunoprecipitation, IP)实验检测B、C亚型HIV-1中Tat K41是否影响Tat与SIRT1的结合；通过Western blot检测细胞核内B、C亚型HIV-1的Tat K41是否影响p65 K310的乙酰化水平。结果:与B亚型HIV-1不同，C亚型HIV-1的Tat K41突变后显著降低荧光素酶活性，减弱C亚型Tat与SIRT1的结合，降低细胞核内p65 K310ac的水平。结论:C亚型Tat K41在HIV-1转录中发挥重要作用。

目的:探讨叉头状转录因子O3（FOXO3）在小鼠肝脏糖代谢中的作用。方法:将雄性肝脏激活蛋白（LAP）启动子控制下且表达四环素调节的反式激活因子（tTA）的转基因小鼠（LAP-tTA小鼠）与雌性荧光素酶-tet操作元件（tetO）7-FOXO3的组成型活性等位基因小鼠［（tetO）7.FOXO3CA小鼠］杂交，获得FOXO3CA hep小鼠（tTA +/FOXO3CA +，肝脏FOXO3条件性高表达，7只）。以tTA -和（或）FOXO3CA -小鼠作为对照组（9只）。通过IVIS活体成像、实时荧光定量聚合酶链反应（RT-qPCR）、Western blotting以及免疫组化检测各组小鼠肝脏FOXO3表达情况，RT-qPCR检测相关糖异生基因［葡萄糖6-磷酸酶（ G6pc）、磷酸烯醇丙酮酸羧化激酶（ Pepck）、丙酮酸脱氢酶激酶4（ Pdk4）］的mRNA水平。监测小鼠血糖、血清胰岛素，并进行葡萄糖耐量实验以及胰岛素耐量实验。利用免疫组织化学染色评估胰腺胰岛增生、胰岛素以及胰高血糖素表达。组间比较采用 t检验。 结果:IVIS活体成像、RT-qPCR、Western blotting以及免疫组化证实FOXO3CA hep小鼠肝脏FOXO3高表达，且主要表达于肝细胞核内，FOXO3高表达导致肝细胞体积明显小于对照组肝细胞。与对照组相比，7周龄FOXO3CA hep小鼠的空腹血糖水平显著升高［分别为（165.7±24.1）和（87.4±12.1）mg/dl， P<0.001］，糖异生基因 G6pc、 Pepck、 Pdk4的mRNA水平显著增加（均 P<0.001）。与对照组相比，9周龄FOXO3CA hep小鼠空腹血糖下降［分别为（55.6±6.1）和（82.8±17.2）mg/dl， P=0.001］，胰岛素水平显著升高［分别为（10.01±1.56）和（1.50±0.82）ng/ml， P<0.001］。免疫组织化学染色结果提示，FOXO3CA hep小鼠较对照组胰岛细胞显著增生，胰岛细胞呈现胰岛素强阳性，胰岛素耐量实验提示存在胰岛素抵抗。 结论:FOXO3持续高表达可促进肝脏糖异生相关基因的上调、血糖紊乱和胰岛素水平升高、胰岛增生及胰岛素抵抗。

目的:通过检测SLE患者长链非编码RNA（lncRNA）的表达变化，初步探索差异表达的lncRNA与调节性T细胞（Treg）数量间的联系，分析Treg相关lncRNA与SLE患者临床特征间的相关性，预测lncRNA调节Treg分化发育的机制，为SLE的治疗提供新思路。方法:收取9例活动期SLE患者外周血，提取PBMCs，用全转录组测序分析PBMCs的lncRNA表达谱，以9名健康人作为对照组，筛选差异表达的lncRNA，采用Pearson检验分析lncRNA与Treg数的相关性，以及Treg相关lncRNA与SLE患者SLEDAI评分、ESR、C3、C4之间的相关性，用miRcode和Targetscan数据库及共表达网络预测Treg相关lncRNA的靶向基因。结果:与健康对照组相比，SLE患者有240个差异表达lncRNA，包括134个高表达的lncRNA（ P<0.05），106个低表达的lncRNA（ P<0.05），其中ANKRD44-AS1（ r=0.74， P=0.022）、LINC00200（ r=0.70， P=0.037）、AP001363.2（ r=0.78， P=0.014）、LINC02824（ r=0.79， P=0.011）的表达量与外周血Treg数目呈正相关，AP000640.1（ r=-0.72， P=0.028）、AC124248.1（ r=-0.77， P=0.016）、LINC00482（ r=-0.83， P=0.005）、MIR503HG（ r=-0.96， P<0.001）的表达量与外周血Treg数目呈负相关，在这8种Treg相关lncRNA中，LINC00482（ r=-0.73， P<0.05）、MIR503HG（ r=-0.76， P<0.05）的表达量与C3呈负相关。与Treg相关的LINC00200、ANKRD44-AS1、AP000640.1通过竞争性结合miRNA或反式调控机制调控信号传导及转录激活因子5（STAT5）、磷脂酶D1（PLD1）、单一顺式结构蛋白X（HOPX）、Runt相关转录因子3（RUNX3）的表达，进而调控Treg的分化发育。 结论:SLE患者lncRNA表达谱发生变化，差异表达的lncRNA与SLE患者Treg数量和功能异常有关，并且Treg相关lncRNA与SLE疾病活动相关，其可能通过竞争性结合miRNA或反式调控机制影响STAT5、PLD1、HOPX、RUNX3的表达，调节Treg功能，参与SLE的发病和疾病进展。

HIV-1可穿过血脑屏障，感染中枢神经系统，引起一系列神经系统疾病。氧化应激(oxidative stress，OS)在不同的神经退行性疾病的发病机制中具有重要作用。当机体遭受各种有害刺激时，体内氧化系统和抗氧化系统的调控水平失衡，产生大量活性氧(reactive oxygen species, ROS)，从而直接或间接导致组织损伤。HIV-1感染细胞后释放的反式转录激活因子Tat蛋白对于脑组织的损伤具有重要作用，它可诱导血管内皮细胞和神经细胞产生ROS，使机体处于慢性氧化应激状态，加重疾病的发展。本文就HIV-1 Tat蛋白对血管内皮细胞和神经细胞氧化应激影响的研究进展进行综述。

目的:探究新型脑源肽HIBDAP调节氧糖剥夺（oxygen glucose deprivation，OGD）小胶质细胞焦亡的作用。方法:将HIBDAP序列与细胞穿膜肽反式转录激活因子（transactivator of transcription，TAT）序列耦联成TAT-HIBDAP。小胶质细胞加入异硫氰酸荧光素标记的TAT-HIBDAP后，荧光显微镜下观察TAT-HIBDAP进入细胞情况。使用不同浓度TAT-HIBDAP（1、5、10、20 μmol/L）干预小胶质细胞后进行OGD，采用乳酸脱氢酶释放实验检测细胞焦亡率。选用抑制细胞焦亡效果最明显的浓度进行后续实验，根据是否进行OGD及HIBDAP处理分为对照组、OGD组、HIBDAP组，透射电镜观察细胞焦亡形态，实时定量聚合酶链反应和蛋白质印迹法检测NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3（NOD-like receptor family pyrin domain containing 3，NLRP3）炎性小体核酸及蛋白表达情况。结果:TAT-HIBDAP可成功进入小胶质细胞。与OGD组比较，低浓度（1、5、10 μmol/L）的TAT-HIBDAP干预显著降低细胞焦亡率，其中5 μmol/L的效果最明显。与对照组相比，OGD组细胞具有典型的细胞焦亡形态，而HIBDAP组的细胞焦亡形态明显改善。OGD组NLRP3炎性小体的核酸及蛋白表达水平较对照组显著上升，HIBDAP组较OGD组显著降低。结论:新型脑源肽HIBDAP通过降低NLRP3炎性小体的表达抑制OGD时的小胶质细胞焦亡。

乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)属于嗜肝DNA病毒.HBV的致病机制尚不完全清楚,临床上常用的抗病毒药物干扰素、核苷类似物等能抑制病毒复制,但不能治愈绝大多数HBV感染者[1].据估计,全球大约有3.5亿至4亿HBV慢性感染者,每年有50万至120万人死于HBV相关肝硬化、原发性肝癌等疾病[2-3].HBV基因组含4个开放阅读框(open reading frames,ORFs),即pre-S/S、pre-C/C、X、P,其中X基因是其中最小的基因[4-5],该基因编码HBV X蛋白(HBV X protein,HBx),HBx是多种病毒、细胞启动子和增强子的反式激活因子,其转录活性是HBV复制所必需的[6].了解病毒与宿主之间的相互作用,有助于揭示HBV感染的致病机制以及发现新型抗病毒治疗方法.

目的 观察熟地黄多糖(RGP)对信号转导及转录活化因子STAT3活性的调控、对凋亡抑制基因生存素Survivin的影响;观察凋亡细胞的形态学变化,探讨其促进细胞凋亡的作用及影响. 方法 将 H22肝癌腹水型瘤株移植于小鼠皮下,50只实体瘤模型小鼠随机分5组,采用不同剂量的RGP(1000,500,250 mg/kg)灌胃给药,环磷酰胺40 mg/kg腹腔注射给药.检测免疫器官指数、巨噬细胞功能及抑瘤率;应用原位末端标记法测定各组肿瘤细胞的凋亡指数,观察形态学改变;采用免疫组织化学法检测瘤体 STAT3及 Survivin 的表达情况;应用Western-blot检测STAT3及Survivin蛋白的表达情况. 结果 RGP作用于 H22肝癌细胞后,高、中、低剂量RGP组的抑瘤率分别为34.76%,45.69% 和30.32%,免疫器官指数(P<0.05)和巨噬细胞功能(P< 0.05)提示RGP可改善机体免疫力.RGP各组的凋亡指数与模型组比较均显著升高,差别均有统计学意义(P<0.01).免疫组织化学结果显示,高、低剂量RGP组的STAT3及Survivin表达水平与模型组比较明显降低(P<0.05),中剂量RGP组的STAT3及Survivin表达水平与模型组比较,差别有统计学意义(P<0.01).Western-blot检测结果表明,中剂量RGP组的STAT3及Survivin蛋白表达与模型组比较,差别有统计学意义(P<0.01). 结论 RGP可促进细胞凋亡,并有一定调节免疫的作用,其机制可能与 RGP 抑制 STAT3信号转导通路、并进一步抑制Survivin等下游靶基因的表达有关.

目的 观察在高脂饮食(HFD)条件下体内足细胞特异性过表达PTEN对小鼠肾脏的作用,并探讨体外氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)刺激环境中足细胞内PTEN调控清道夫受体A(SR-A)介导的脂质摄取的机制.方法 构建足细胞特异性PTEN敲进(PPKI)转基因小鼠,HFD诱导转基因小鼠肾损伤.小鼠分为正常饮食(ND)+对照(Ctrl)组、ND+PPKI组、HFD+Ctrl组、HFD+PPKI组.于饮食干预后第24周,检测4组小鼠临床生化指标,包括血肌酐、尿白蛋白排泄(尿白蛋白与肌酐比)等;油红O染色和肾皮质胆固醇定量观察肾脂质积聚情况;PAS染色和电镜评估肾小球硬化情况.体外ox-LDL刺激诱导足细胞损伤.Western印迹检测siRNA沉默YAP表达(si-YAP)后ox-LDL诱导足细胞SR-A蛋白表达的变化,及在siRNA沉默PTEN表达(si-PTEN)、PTEN抑制剂(Bpv-PTEN)、腺病毒过表达PTEN(ad-PTEN)的作用下ox-LDL诱导足细胞YAP磷酸化的变化. 结果 与ND+Ctrl组相比,HFD+Ctrl组小鼠的血肌酐、尿白蛋白排泄水平上升,足细胞SR-A表达及肾内脂质含量明显增加,系膜基质增生,足突融合增加及基底膜增厚(均P＜ 0.05);而与HFD+Ctrl组相比,HFD+PPKI组小鼠上述肾损伤指标均减轻(均P＜ 0.05).体外ox-LDL刺激能上调足细胞SR-A表达,与正常对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05);敲除YAP可使ox-LDL诱导的SR-A表达下降,si-YAP+ox-LDL组SR-A表达低于ox-LDL组(P＜0.05).在ox-LDL刺激下足细胞内磷酸化(p)-YAP表达增加,与正常对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05);上调PTEN的表达可抑制ox-LDL诱导的p-YAP表达上调,ad-PTEN+ox-LDL组p-YAP表达低于ox-LDL组(P＜0.05);而敲除PTEN或抑制PTEN磷酸酶活性均能进一步上调ox-LDL诱导的p-YAP的表达,si-PTEN+ox-LDL组和Bpv-PTEN+ox-LDL组p-YAP表达均高于ox-LDL组(均P＜0.05).结论 足细胞特异性过表达tPTEN对脂质肾损伤有保护作用,且PTEN可能通过使p-YAP去磷酸化进而抑制SR-A介导的脂质摄取缓解ox-LDL诱导的足细胞损伤.

目的 探讨信号转导与转录激活因子1(STAT1)信号通路在全反式维甲酸(ATRA)诱导人白血病细胞向粒细胞分化过程中的作用与机制,为白血病的临床治疗提供新的靶点与途径.方法 将人急性髓系白血病细胞HL-60随机分为两组,观察组以ATRA(2μmol/L)诱导HL-60细胞向粒细胞分化,对照组加入相同浓度DMSO;瑞氏-吉姆萨染色观察细胞形态变化,流式细胞术检测细胞表面CD11b表达,q-PCR法检测细胞STAT1、亮氨酸结构拉链转录因子ε(C/EBPε) mRNA,Western blotting法检测细胞STAT1蛋白及磷酸化(p-STAT1)水平,q-PCR法检测细胞miR-155-5p,Pearson相关性分析STAT1与miR-155-5p、C/EBPε表达的关系.结果 与对照组比较,观察组诱导96 h后细胞体积变小,形状不规则,胞质增多,核浓缩,核仁变小或消失,分叶核显著增多.观察组ATRA诱导96 h时细胞表面CD11b阳性表达率为62.97％±1.90％,高于对照组的1.87％±0.08％(P＜0.05).与对照组比较,观察组ATRA诱导后48、72、96 h细胞中STAT1 mRNA、C/EBPε mRNA、STAT1蛋白、p-STAT1蛋白表达增加(P均＜0.05),而miR-155-5p表达降低(P均＜0.05).Pearson相关性分析显示,细胞STAT1 mRNA与miR-155-5p相对表达量呈负相关(r=-0.90,P＜0.05),与C/EBPε mRNA相对表达量呈正相关(r=0.96,P＜0.05).结论 miR-1556p反向调控STAT1信号通路,进而活化粒细胞分化转录因子C/EBPε,诱导HL-60细胞向粒细胞分化;STAT1活化可能是ATRA诱导HL-60细胞向粒细胞分化的关键机制之一,靶向调控STAT1信号通路可能成为诱导HL-60细胞向粒系分化的有效靶点.

肝脏缺血再灌注损伤(HIR)的发生发展具有重要临床意义.IL-6与HIR密切相关,对下游信号传导转录和激活因子3(STAT3)间的信号通路也具有重要作用.IL-6一直被认为是一个典型的促炎性细胞因子,它通过gp130的同源二聚体化激活Janus激酶(JAK)/STAT信号转导通路参与炎症疾病的发生发展.然而,近十年的研究表明IL-6不仅可与其可溶性受体结合(反式信号通路)并介导HIR,并且还可与其膜结合受体结合(经典信号通路)介导再生与抗炎等保护性作用.本文对IL-6/STAT3信号通路在肝脏缺血再灌注损伤研究领域的最新进展进行综述.