目的:探讨叉头状转录因子O3（FOXO3）在小鼠肝脏糖代谢中的作用。方法:将雄性肝脏激活蛋白（LAP）启动子控制下且表达四环素调节的反式激活因子（tTA）的转基因小鼠（LAP-tTA小鼠）与雌性荧光素酶-tet操作元件（tetO）7-FOXO3的组成型活性等位基因小鼠［（tetO）7.FOXO3CA小鼠］杂交，获得FOXO3CA hep小鼠（tTA +/FOXO3CA +，肝脏FOXO3条件性高表达，7只）。以tTA -和（或）FOXO3CA -小鼠作为对照组（9只）。通过IVIS活体成像、实时荧光定量聚合酶链反应（RT-qPCR）、Western blotting以及免疫组化检测各组小鼠肝脏FOXO3表达情况，RT-qPCR检测相关糖异生基因［葡萄糖6-磷酸酶（ G6pc）、磷酸烯醇丙酮酸羧化激酶（ Pepck）、丙酮酸脱氢酶激酶4（ Pdk4）］的mRNA水平。监测小鼠血糖、血清胰岛素，并进行葡萄糖耐量实验以及胰岛素耐量实验。利用免疫组织化学染色评估胰腺胰岛增生、胰岛素以及胰高血糖素表达。组间比较采用 t检验。 结果:IVIS活体成像、RT-qPCR、Western blotting以及免疫组化证实FOXO3CA hep小鼠肝脏FOXO3高表达，且主要表达于肝细胞核内，FOXO3高表达导致肝细胞体积明显小于对照组肝细胞。与对照组相比，7周龄FOXO3CA hep小鼠的空腹血糖水平显著升高［分别为（165.7±24.1）和（87.4±12.1）mg/dl， P<0.001］，糖异生基因 G6pc、 Pepck、 Pdk4的mRNA水平显著增加（均 P<0.001）。与对照组相比，9周龄FOXO3CA hep小鼠空腹血糖下降［分别为（55.6±6.1）和（82.8±17.2）mg/dl， P=0.001］，胰岛素水平显著升高［分别为（10.01±1.56）和（1.50±0.82）ng/ml， P<0.001］。免疫组织化学染色结果提示，FOXO3CA hep小鼠较对照组胰岛细胞显著增生，胰岛细胞呈现胰岛素强阳性，胰岛素耐量实验提示存在胰岛素抵抗。 结论:FOXO3持续高表达可促进肝脏糖异生相关基因的上调、血糖紊乱和胰岛素水平升高、胰岛增生及胰岛素抵抗。

乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)属于嗜肝DNA病毒.HBV的致病机制尚不完全清楚,临床上常用的抗病毒药物干扰素、核苷类似物等能抑制病毒复制,但不能治愈绝大多数HBV感染者[1].据估计,全球大约有3.5亿至4亿HBV慢性感染者,每年有50万至120万人死于HBV相关肝硬化、原发性肝癌等疾病[2-3].HBV基因组含4个开放阅读框(open reading frames,ORFs),即pre-S/S、pre-C/C、X、P,其中X基因是其中最小的基因[4-5],该基因编码HBV X蛋白(HBV X protein,HBx),HBx是多种病毒、细胞启动子和增强子的反式激活因子,其转录活性是HBV复制所必需的[6].了解病毒与宿主之间的相互作用,有助于揭示HBV感染的致病机制以及发现新型抗病毒治疗方法.

目的 观察熟地黄多糖(RGP)对信号转导及转录活化因子STAT3活性的调控、对凋亡抑制基因生存素Survivin的影响;观察凋亡细胞的形态学变化,探讨其促进细胞凋亡的作用及影响. 方法 将 H22肝癌腹水型瘤株移植于小鼠皮下,50只实体瘤模型小鼠随机分5组,采用不同剂量的RGP(1000,500,250 mg/kg)灌胃给药,环磷酰胺40 mg/kg腹腔注射给药.检测免疫器官指数、巨噬细胞功能及抑瘤率;应用原位末端标记法测定各组肿瘤细胞的凋亡指数,观察形态学改变;采用免疫组织化学法检测瘤体 STAT3及 Survivin 的表达情况;应用Western-blot检测STAT3及Survivin蛋白的表达情况. 结果 RGP作用于 H22肝癌细胞后,高、中、低剂量RGP组的抑瘤率分别为34.76%,45.69% 和30.32%,免疫器官指数(P<0.05)和巨噬细胞功能(P< 0.05)提示RGP可改善机体免疫力.RGP各组的凋亡指数与模型组比较均显著升高,差别均有统计学意义(P<0.01).免疫组织化学结果显示,高、低剂量RGP组的STAT3及Survivin表达水平与模型组比较明显降低(P<0.05),中剂量RGP组的STAT3及Survivin表达水平与模型组比较,差别有统计学意义(P<0.01).Western-blot检测结果表明,中剂量RGP组的STAT3及Survivin蛋白表达与模型组比较,差别有统计学意义(P<0.01). 结论 RGP可促进细胞凋亡,并有一定调节免疫的作用,其机制可能与 RGP 抑制 STAT3信号转导通路、并进一步抑制Survivin等下游靶基因的表达有关.

目的 观察在高脂饮食(HFD)条件下体内足细胞特异性过表达PTEN对小鼠肾脏的作用,并探讨体外氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)刺激环境中足细胞内PTEN调控清道夫受体A(SR-A)介导的脂质摄取的机制.方法 构建足细胞特异性PTEN敲进(PPKI)转基因小鼠,HFD诱导转基因小鼠肾损伤.小鼠分为正常饮食(ND)+对照(Ctrl)组、ND+PPKI组、HFD+Ctrl组、HFD+PPKI组.于饮食干预后第24周,检测4组小鼠临床生化指标,包括血肌酐、尿白蛋白排泄(尿白蛋白与肌酐比)等;油红O染色和肾皮质胆固醇定量观察肾脂质积聚情况;PAS染色和电镜评估肾小球硬化情况.体外ox-LDL刺激诱导足细胞损伤.Western印迹检测siRNA沉默YAP表达(si-YAP)后ox-LDL诱导足细胞SR-A蛋白表达的变化,及在siRNA沉默PTEN表达(si-PTEN)、PTEN抑制剂(Bpv-PTEN)、腺病毒过表达PTEN(ad-PTEN)的作用下ox-LDL诱导足细胞YAP磷酸化的变化. 结果 与ND+Ctrl组相比,HFD+Ctrl组小鼠的血肌酐、尿白蛋白排泄水平上升,足细胞SR-A表达及肾内脂质含量明显增加,系膜基质增生,足突融合增加及基底膜增厚(均P＜ 0.05);而与HFD+Ctrl组相比,HFD+PPKI组小鼠上述肾损伤指标均减轻(均P＜ 0.05).体外ox-LDL刺激能上调足细胞SR-A表达,与正常对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05);敲除YAP可使ox-LDL诱导的SR-A表达下降,si-YAP+ox-LDL组SR-A表达低于ox-LDL组(P＜0.05).在ox-LDL刺激下足细胞内磷酸化(p)-YAP表达增加,与正常对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05);上调PTEN的表达可抑制ox-LDL诱导的p-YAP表达上调,ad-PTEN+ox-LDL组p-YAP表达低于ox-LDL组(P＜0.05);而敲除PTEN或抑制PTEN磷酸酶活性均能进一步上调ox-LDL诱导的p-YAP的表达,si-PTEN+ox-LDL组和Bpv-PTEN+ox-LDL组p-YAP表达均高于ox-LDL组(均P＜0.05).结论 足细胞特异性过表达tPTEN对脂质肾损伤有保护作用,且PTEN可能通过使p-YAP去磷酸化进而抑制SR-A介导的脂质摄取缓解ox-LDL诱导的足细胞损伤.

目的 探讨结肠癌组织中Ⅱ型人回肠脂肪酸结合蛋白(Ⅱ型FABP6)mRNA表达及其与癌细胞增殖、迁移的相关性.方法 选择2015年1月至2018年3月间在本院接受结肠癌根治术治疗的原发性结肠癌患者89例作为结肠癌组,同期在本院经结肠镜切除息肉的结肠息肉患者127例作为结肠息肉组.采用荧光定量PCR法检测结肠病灶组织中Ⅱ型FABP6mRNA表达量及结肠癌增殖、迁移相关基因表达量的差异,采用Pearson检验评估结肠癌组织中Ⅱ型FABP6mRNA表达量与癌细胞增殖、迁移活力关系.结果 结肠癌组病灶中Ⅱ型FABP6的mRNA表达量低于结肠息肉组;癌细胞增殖相关基因MS4A12 mRNA表达量低于结肠息肉组,GTPBP4、EZH2、livin、SphK1 mRNA表达量高于结肠息肉组;癌细胞迁移相关基因Numb mRNA表达量低于结肠息肉组,Lumican、PTTG1、CHD1L mRNA表达量高于结肠息肉组.结肠癌组织中Ⅱ型FABP6 mR-NA表达量与癌细胞增殖、迁移活力均呈负相关.结论 Ⅱ型FABP6在结肠癌组织中的mRNA表达量明显低于结肠良性病变,且其表达量与结肠癌细胞的增殖、迁移能力呈负相关.

目的:探讨转录反式激活因子-Rab鸟嘌呤核苷酸交换因子1 (Tat-RabGEF1) 融合蛋白对小鼠肝脏缺血再灌注 (IR) 所致肺损伤的作用及其可能的机制.方法:选用雄性C57BL/6小鼠24只, 按随机数字表法分为假手术 (sham) 组、IR组和Tat-RabGEF1组, 每组8只.采用肝脏缺血90 min再灌注4 h制备肺损伤模型, Tat-Rab-GEF1组于再灌注即刻经尾静脉注射Tat-RabGEF1 (10 mg/kg) .再灌注4 h后处死小鼠, 收集支气管肺泡灌洗液 (BALF) , 采用ELISA法检测BALF中肿瘤坏死因子α (TNF-α) 、白细胞介素6 (IL-6) 和白细胞介素1β (IL-1β) 的含量;取肺组织进行病理学检测, 测定湿/干重比、β-氨基己糖苷酶 (β-Hex A) 和髓过氧化物酶 (MPO) 水平, 并采用Western blot法测定肺组织类胰蛋白酶的表达水平.结果: (1) 肝缺血90 min再灌注4 h肺组织病理损伤明显, 湿/干重比增高, Tat-RabGEF1尾静脉注射明显减轻肺脏病理损伤. (2) 与IR组比较, Tat-RabGEF1组BALF中TNF-α、IL-6和IL-1β浓度, 以及肺组织β-Hex A、MPO水平和类胰蛋白酶表达显著降低 (P <0.05) .结论:体内蛋白转导Rab GEF1减轻肝IR所致的肺损伤, 减少肺组织炎症反应和细胞因子水平, 其机制可能与抑制肥大细胞激活有关.

反式激活因子(classⅡtransactivator,CⅡTA)是调控MHCⅡ类基因表达水平的限速因子,故将CⅡTA作为慢性乙型肝炎(chronic hepatitis B,CHB)候选基因,分析其单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)与CHB易感性的关联.以福建医科大学附属闽东医院汉族患者为基础进行病例对照研究,其中596例CHB患者为病例组,313例HBV自限性感染者为对照组.采用Haploview 4.2软件筛选出CⅡ TA基因的15个标签SNP,再用多重高温连接酶检测反应对所选标签SNP进行基因型检测.结果 显示,CⅡ TA基因内含子rs13333382[TT+TA℃s AA:P=0.003,OR=0.65,95％可信区间(confidence interval,CI)为0.49～0.87]和rs4780335(CC+CG vs GG:P=9.40×10-5,OR=0.55,95％CI为0.41～0.74)多态性与HBV自限性感染呈正相关,而3非翻译区rs1139564 (TT+TCvsCC:P=0.002,OR=1.61,95％CI为1.19～2.16)多态性可增加CHB风险.因此,作者认为CⅡTA基因多态性与HBV感染结局存在关联.

黏膜相关淋巴组织(mucosa-associated lymphoid tissue lymphoma,MALT)淋巴瘤是起源于淋巴结外边缘带黏膜相关淋巴组织的一类B细胞淋巴瘤,可广泛发生于胃肠道、呼吸道、唾液腺、腮腺、甲状腺、乳腺和口咽淋巴环等器官或组织[1].肠MALT淋巴瘤是起源于肠淋巴结外缘带黏膜淋巴组织的恶性淋巴瘤,发病率较低.近期兰州军区兰州总医院全军血液病中心收治1例以肠梗阻为首发症状,临床表现Ⅱ类主要组织相容性复合物反式转录激活因子(classⅡ major histocompability complex transactivator,CⅡTA)阳性的乙状结肠黏膜相关淋巴组织淋巴瘤,治疗效果良好,现报道如下.

主要组织相容性复合物Ⅱ类分子反式激活因子(CⅡTA)为一种反式转录激活因子,是主要组织相容性复合物(MHC)Ⅱ类分子表达的主要调控因子.CⅡTA基因通过影响MHCⅡ类分子的转录水平,调控机体的免疫功能.黏膜相关淋巴组织(MALT)淋巴瘤,是起源于MALT结外边缘区的B细胞淋巴瘤.MALT淋巴瘤细胞表面的MHCⅡ类分子表达缺失,导致MALT淋巴瘤细胞逃避机体免疫监视,其为MALT淋巴瘤的重要发病机制.笔者拟就CⅡTA基因在MALT淋巴瘤中表达的意义及研究进展进行综述.

MHC Ⅱ类分子反式激活蛋白（CⅡTA，class Ⅱ transactivator）的发现是近年来国际免疫学研究的一项重大突破，CⅡTA及其突变体在免疫调节和免疫治疗中具有诱人前景。本文对CⅡTA的结构、功能及其反式激活MHC Ⅱ类分子的机制作一综述，并对CⅡTA及其突变体的应用前景作一简要介绍。