目的:探讨miR-181a通过磷酸酶和张力蛋白同源物(PTEN)促进软骨肉瘤细胞生长的作用及其可能的调控机制。方法:收集2022年1月至12月湖南省人民医院骨科患者手术切除的新鲜软骨肉瘤及软骨瘤组织各10例，采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法分别检测miR-181a在软骨肉瘤及软骨瘤组织中的表达；体外培养软骨肉瘤细胞SW1353，分别转染miR-181a抑制剂(miR-181a抑制组)及其对照(对照miR-NC)到细胞中，通过CCK-8细胞计数实验及克隆形成实验分别检测miR-181a对SW1353细胞生长及增殖能力的影响；通过Target Scan数据库预测miR-181a与PTEN之间的结合位点，并采用双荧光素酶报告基因实验进行验证；分别转染miR-181a模拟物(miR-181a组)及其对照(miR-NC组)到软骨肉瘤细胞SW1353中，检测细胞中ATP含量、葡萄糖消耗量和乳酸生成量，分析miR-181a对SW1353细胞糖酵解的影响。结果:软骨肉瘤组织中miR-181a的表达明显高于软骨瘤组织( P<0.05)；miR-181a抑制组的细胞生长及克隆形成能力均明显低于对照组(均 P<0.05)；经Target Scan在线网站预测，miR-181a与PTEN之间可能存在结合位点，且双荧光素酶报告基因实验证实共转染野生型PTEN和miR-181a可显著降低荧光素酶活性( P<0.05)；miR-181a组的ATP含量、葡萄糖消耗量和乳酸生成量均明显高于miR-NC组(均 P<0.05)。 结论:miR-181a通过PTEN介导糖酵解促进软骨肉瘤细胞的生长。

目的:研究子痫前期胎盘中第10号染色体缺失性磷酸酶和张力蛋白同源物基因(phosphatase and tensin homologue-deleted chromosome ten gene，PTEN)、Syncytin-1与母体内皮损伤、滋养细胞损伤的相关性。方法:选择2015年2月至2017年12月在南方医科大学附属小榄医院诊断为子痫前期并分娩的46例患者及同期正常分娩的的80名孕妇，分娩前留取母体外周血并测定内皮损伤标志物的含量，分娩后留取胎盘并测定PTEN、Syncytin-1、细胞凋亡基因的表达量以及氧化应激标志物的含量。结果:子痫前期胎盘组织中PTEN的mRNA表达量显著高于正常胎盘组织( t＝32.797、 P<0.000)，Syncytin-1的mRNA表达量显著低于正常胎盘组织( t＝28.506、 P<0.000)；子痫前期患者母体血液循环中内皮素-1(endothelin-1，ET-1)、可溶性血管内皮生长因子受体-1(soluble fms-like tyrosine kinase receptor 1，sFlt-1)的含量显著高于正常妊娠孕妇( t值分别为39.884、40.243、 P均<0.001)，且与胎盘组织中PTEN的mRNA表达量呈正相关(相关系数分别为0.674、0.596， P分别为0.004、0.007)，与Syncytin-1的mRNA表达量呈负相关(相关系数分别为－0.615、－0.637， P分别为0.009、0.008)，一氧化氮(nitric oxide ，NO)、前列腺素I 2(prostaglandin I2，PGI2)、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor ，VEGF)、胎盘生长因子(Placental growth factor ，PLGF)的含量显著低于正常妊娠孕妇( t值分别为30.944、27.404、32.827、26.644、 P均<0.001)，且与胎盘组织中PTEN的mRNA表达量呈负相关(相关系数分别为－0.648、－0.592、－0.537、－0.613， P分别为0.006、0.009、0.013、0.007)，与Syncytin-1的mRNA表达量呈正相关(相关系数分别为0.632、0.572、0.537、0.654， P值分别为0.010、0.013、0.015、0.009)；子痫前期胎盘组织中还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶4(nicotinamide adenine dinucleotide phosphate-reduced oxidase 4，NOX4)、丙二醛(malondialdehyde，MDA)、8-羟基脱氧鸟苷酸(8-hydroxydeoxyguanosine，8-OHdG)的含量以及自杀相关因子(factors associated suicide ，Fas)、Fas配体(fas ligand，FasL)、Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2 associated X protein，Bax)、葡萄糖调节蛋白78(glucose regulated protein 78 ，GRP78)、C/EBP同源蛋白(C/EBP homologous protein ，CHOP)、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(cysteine-containing aspartic acid proteolytic enzymes-3，Caspase-3)的mRNA表达量显著高于正常胎盘组织( t值分别为27.714、27.704、26.786、22.622、27.964、25.496、25.893、30.837、28.975、 P均<0.001)，且与胎盘组织中PTEN的mRNA表达量呈正相关(相关系数分别为0.703、0.651、0.593、0.628、0.449、0.552、0.612、0.569、0.502， P值分别为0.003、0.007、0.004、0.006、0.016、0.010、0.006、0.012、0.018)，gn Syncytin-1的mRNA表达量呈负相关(相关系数分别为－0.615、－0.714、－0.577、－0.548、－0.512、－0.585、－0.619、－0.495、－0.662， P值分别为0.009、0.001、0.013、0.015、0.018、0.011、0.009、0.023、0.003)，Peroxiredoxin-Ⅱ蛋白(PrxⅡ)、PrxⅢ、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase ，SOD)的含量以及B淋巴细胞瘤-2基因(B-cell lymphoma-2，Bcl-2)的mRNA表达量显著低于正常胎盘组织( t值分别为26.115、23.502、21.439、17.194、 P均<0.001)，且与胎盘组织中PTEN的mRNA表达量呈负相关(相关系数分别为－0.713、－0.657、－0.591、－0.642， P值分别为<0.001、0.006、0.009、0.007)，与Syncytin-1的mRNA表达量呈正相关(相关系数分别为0.562、0.711、0.682、0.608， P值分别为0.013、<0.001、0.002、0.008)。 结论:子痫前期胎盘中PTEN的高表达以及Syncytin-1的低表达能够加重母体内皮损伤以及胎盘滋养细胞损伤。

目的:探讨miR-26a介导磷脂酰肌醇3激酶(phosphatidylinositol 3-kinase, PI3K)/蛋白激酶B(protein kinase B, AKT)信号通路对脑缺血大鼠血管生成的影响。方法:将100只雄性SD大鼠按随机数字表法分为假手术组、模型组、miR-NC组和miR-26a组。miR-NC组和miR-26a组分别侧脑室注射5 μl miR-26a模拟物阴性质控品和miR-26a模拟物，假手术组和模型组注射等量生理盐水。采用改良线栓法制作大脑中动脉闭塞模型，假手术组只插线不结扎。各组大鼠各取5只腹腔注射5-溴脱氧尿苷(bromodeoxyuridine, BrdU)，1次/d，连续7 d。将体外培养并转染的大鼠脑微血管内皮细胞(brain microvascular endothelial cells, BMECs)分为对照组、氧葡萄糖剥夺(oxygen-glucose deprivation, OGD)组、miR-NC组和miR-26a组。双荧光素酶实验验证miR-26a对第10号染色体同源丢失性磷酸酶张力蛋白基因(phosphatase and tensin homolog deleted on chromosome 10, PTEN)的调控作用。应用Longa评分检测大鼠神经功能损伤。氯化三苯四氮唑(triphenyltetrazolium chloride, TTC)染色法测定脑梗死体积。分别使用四甲基偶氮唑蓝(methyl thiazolyl tetrazolium, MTT)染色法、膜联蛋白Ⅴ-异硫氰酸荧光素/碘化丙啶双染法和小管形成实验测定BMECs增殖、凋亡和血管生成。应用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应检测缺血脑组织及BMECs miR-26a表达。免疫荧光双标记法[BrdU/von Willebrand因子(von Willebrand factor, vWF)]检测大鼠血管内皮细胞增殖。蛋白质印迹分析检测缺血脑组织血管内皮生长因子(vascularendothelial growth factor, VEGF)、碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor, bFGF)、血管生成素-2(angiopoietin-2, Ang-2)、PTEN、PI3K、AKT表达。结果:生物信息学及双荧光素酶实验验证了miR-26a对PTEN的靶向调控。与假手术组比较，模型组和miR-NC组缺血脑组织miR-26a、VEGF、bFGF、Ang-2、PI3K、AKT表达和BrdU +/vWF +细胞数量增加，而PTEN表达降低( P均<0.05)；与模型组比较，miR-26a组各项指标效果更加显著( P均<0.05)。与对照组比较，OGD组和miR-NC组BMECs增殖和血管生成能力显著增强，细胞凋亡显著减少( P均<0.05)；与OGD组比较，miR-26a组各项指标效果更加显著( P均<0.05)。 结论:miR-26a能靶向抑制PTEN表达，通过激活PI3K/AKT信号通路上调血管生成相关因子(VEGF、bFGF和Ang-2)，促进脑梗死大鼠血管内皮细胞增殖和血管生成。

目的:探究膀胱尿路上皮癌中长链非编码RNA(lncRNA)母系表达基因3(MEG3)的表达情况以及MEG3调控膀胱尿路上皮癌细胞增殖活性的分子机制。方法:通过实时荧光定量PCR检测膀胱尿路上皮癌组织及癌旁正常组织中lncRNA MEG3的表达水平；通过Western blot检测过表达lncRNA MEG3后T24细胞内第10号染色体同源丢失性磷酸酶一张力蛋白基因(PTEN)蛋白水平；CCK8试剂盒检测细胞活性。结果:MEG3的RNA水平在膀胱尿路上皮癌组织中表达显著下调( P<0.01)，PTEN的表达水平也明显降低( P<0.01)。T24中过表达MEG3后，PTEN水平上调，细胞活性降低( P<0.01)；而过表达MEG3并给予PTEN抑制剂时细胞活性则上升。 结论:过表达lncRNA MEG3可通过上调PTEN抑制人膀胱尿路上皮癌T24细胞的细胞增殖活性，有可能成为临床治疗的潜在靶点。

目的:探讨自噬相关基因Beclin-1、第10号染色体缺失的磷酸酶和张力蛋白同源物基因(PTEN)蛋白在甲状腺癌中的表达变化及与患者临床病理特征、预后的关系.方法:选取病理科收集的术后确诊甲状腺癌患者的组织标本79例(甲状腺癌组)和因外科其他原因进行甲状腺活检或手术采集的正常甲状腺组织标本40例(正常组),采用免疫组织化学法检测两组中的Beclin-1、PTEN蛋白表达情况并进行分析.结果:甲状腺癌组Beclin-1蛋白的阳性率与PTEN蛋白阳性率均明显低于正常组(31.7%vs.87.50%;29.1%vs.90.00%,均P<0.05);Beclin-1、PTEN蛋白的阳性表达与患者是否发生淋巴结转移、TNM分期明显有关(均P<0.05);Beclin-1、PTEN蛋白阳性表达患者术后生存率与各自阴性表达患者无明显差异(均P>0.05).结论:Beclin-1、PTEN蛋白在甲状腺癌组织中表达下调,且与甲状腺癌发生发展有一定的关系,但是对患者的预后影响并不明显.

目的 观察在高脂饮食(HFD)条件下体内足细胞特异性过表达PTEN对小鼠肾脏的作用,并探讨体外氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)刺激环境中足细胞内PTEN调控清道夫受体A(SR-A)介导的脂质摄取的机制.方法 构建足细胞特异性PTEN敲进(PPKI)转基因小鼠,HFD诱导转基因小鼠肾损伤.小鼠分为正常饮食(ND)+对照(Ctrl)组、ND+PPKI组、HFD+Ctrl组、HFD+PPKI组.于饮食干预后第24周,检测4组小鼠临床生化指标,包括血肌酐、尿白蛋白排泄(尿白蛋白与肌酐比)等;油红O染色和肾皮质胆固醇定量观察肾脂质积聚情况;PAS染色和电镜评估肾小球硬化情况.体外ox-LDL刺激诱导足细胞损伤.Western印迹检测siRNA沉默YAP表达(si-YAP)后ox-LDL诱导足细胞SR-A蛋白表达的变化,及在siRNA沉默PTEN表达(si-PTEN)、PTEN抑制剂(Bpv-PTEN)、腺病毒过表达PTEN(ad-PTEN)的作用下ox-LDL诱导足细胞YAP磷酸化的变化. 结果 与ND+Ctrl组相比,HFD+Ctrl组小鼠的血肌酐、尿白蛋白排泄水平上升,足细胞SR-A表达及肾内脂质含量明显增加,系膜基质增生,足突融合增加及基底膜增厚(均P＜ 0.05);而与HFD+Ctrl组相比,HFD+PPKI组小鼠上述肾损伤指标均减轻(均P＜ 0.05).体外ox-LDL刺激能上调足细胞SR-A表达,与正常对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05);敲除YAP可使ox-LDL诱导的SR-A表达下降,si-YAP+ox-LDL组SR-A表达低于ox-LDL组(P＜0.05).在ox-LDL刺激下足细胞内磷酸化(p)-YAP表达增加,与正常对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05);上调PTEN的表达可抑制ox-LDL诱导的p-YAP表达上调,ad-PTEN+ox-LDL组p-YAP表达低于ox-LDL组(P＜0.05);而敲除PTEN或抑制PTEN磷酸酶活性均能进一步上调ox-LDL诱导的p-YAP的表达,si-PTEN+ox-LDL组和Bpv-PTEN+ox-LDL组p-YAP表达均高于ox-LDL组(均P＜0.05).结论 足细胞特异性过表达tPTEN对脂质肾损伤有保护作用,且PTEN可能通过使p-YAP去磷酸化进而抑制SR-A介导的脂质摄取缓解ox-LDL诱导的足细胞损伤.

目的 探讨PTEN基因表达对大细胞肺癌H661细胞生物学行为的影响.方法 合成PTEN基因的siRNA,构建PTEN基因过表达质粒.采用Lipofectamine 2000转染H661细胞,采用Western-blot方法检测PTEN蛋白在肺大细胞癌H661细胞中的表达;采用划痕实验检测PTEN基因对肺大细胞癌H661细胞迁移能力的影响;采用Trans-well小室实验检测PTEN基因对肺大细胞癌H661细胞侵袭能力的影响;采用平板克隆形成实验检测PTEN基因对H661细胞增殖的影响.结果 Western-blot方法检测结果显示,转染pPTEN(过表达PTEN基因)质粒组中PTEN表达增加,PTEN RNAi组PTEN表达降低.划痕实验结果显示,PTEN RNAi组H661细胞迁移能力增强,细胞计数较阴性对照组增多(t=2.05,P＜0.05);pPTEN质粒组细胞迁移能力较对照组和PTEN RNAi组明显降低,差异有显著性(t=3.30,P＜0.05).Trans-well小室实验结果显示,PTEN RNAi组细胞侵袭能力较对照组增强(t=2.03,P＜0.05);pPTEN质粒组较对照组侵袭能力降低(t=2.95,P＜0.05).平板克隆形成实验结果显示,PTEN RNAi组细胞增殖能力较对照组增强(t=3.15,P＜0.05);PTEN质粒组较对照组增殖能力降低(t=2.07,P＜0.05).结论 PTEN基因表达与肺癌的侵袭迁移能力密切相关,PTEN基因有望成为治疗肺癌侵袭迁移的潜在靶点.

目的 探讨Tipα、PTEN与胃癌的相关性.方法 RT-qPCR技术检测胃癌、癌旁组织、正常胃组织中肿瘤坏死因子α诱导蛋白(Tipα)、第10号染色体丢失的磷酸酶基因(PTEN)相对定量.结果 (1)Tipα、PTEN在胃癌、癌旁组织、正常胃组织中的表达量分别为0.83±0.07、0.16±0.10、0.10±0.12及0.23±0.05、0.92±0.07、1.84 ±0.13;胃癌与癌旁以及正常胃黏膜组织相比较,差异均有统计学意义(P＜0.05).(2)Tipα、PTEN在低、高分化胃癌组织中表达量分别为1.10±0.04、0.36±0.05及0.08±0.05、0.36±0.04,二者表达量与胃癌的分化程度有关(P＜0.05);Tipα、PTEN在有、无淋巴结转移胃癌组织中表达量分别为0.18±0.12、0.82±0.09及0.10±0.12、0.38±0.10,二者表达量与胃癌有无淋巴结转移有关(P＜0.05);PTEN在胃癌TNM Ⅰ～Ⅱ期、Ⅲ～Ⅳ期表达量为0.25±0.04、0.06±0.07,PTEN表达量与胃癌TNM分期有关(P＜0.05).(3)Tipα与PTEN在胃癌组织中的表达呈负相关(r=-0.883,P＜0.05).结论 (1)Tipα可能为促癌因子;PTEN为抑癌因子;(2)胃癌中Tipα与PTEN表达存在负相关.

目的 探讨 miR-21对急性胰腺炎(AP)腺泡细胞凋亡的影响及其机制.方法 以雨蛙素处理大鼠胰腺腺泡AR42J细胞,构建AP模型;酶联免疫吸附(ELISA)法检测细胞中淀粉酶(AMY)、肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-6检测造模情况.采用RT-PCR检测miR-21的表达;以脂质体转染miRNA-21 inhibitor后,流式细胞仪检测AR42J细胞凋亡,Western印迹检测活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(酶切caspase)-3与第10号染色体缺失的磷酸酶和张力蛋白同源基因(PTEN)蛋白的表达.结果 雨蛙素处理后,AR42J细胞中AMY、TNF-α和IL-6的表达均升高,建模成功.miR-21在AP环境下低表达,转染miR-NA-21 inhibitor后,由雨蛙素诱导的细胞凋亡明显受到抑制,PTEN蛋白表达上调,酶切caspase-3蛋白表达下调.结论 miR-21在AP腺泡细胞中低表达,可能通过上调PTEN和下调酶切caspase-3蛋白表达抑制胰腺腺泡细胞凋亡,进而加重胰腺炎的发展.

目的:探讨第10号染色体同源缺失性磷酸酶-张力蛋白(PTEN)在动脉粥样硬化中的表达及对血管内皮细胞(VEC)增殖凋亡的影响.方法:构建动脉粥样硬化小鼠模型,Real-time PCR和Western blot检测动脉粥样硬化组织中PTEN水平;用不同浓度的氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)处理大鼠VEC,噻唑蓝(MTT)检测细胞增殖活性.VEC转染PTEN过表达载体(pSicoR-PTEN),用ox-LDL处理细胞,Real-time PCR和Western blot检测PTEN水平,MTT检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot检测磷酸化的STAT3(p-STAT3)、信号转导与转录因子3(STAT3)、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved Caspase-3)水平.结果:动脉粥样硬化组织中的PTEN水平明显低于正常的动脉组织(P<0.05).不同浓度的ox-LDL处理后的VEC存活率明显降低,并且细胞存活率随着ox-LDL浓度的升高而降低.ox-LDL作用后的VEC中PTEN表达水平下降,而转染 pSicoR-PTEN 后可以提高 VEC 中 PTEN 表达水平.ox-LDL 处理后的 VEC 凋亡率增加,细胞中 Cleaved Caspase-3水平升高,p-STAT3水平下降,与正常培养的VEC相比差异具有统计学意义(P<0.05).转染pSicoR-PTEN后VEC经过ox-LDL处理后细胞存活率、p-STAT3水平明显升高,而细胞凋亡率、Cleaved Caspase-3水平明显降低,与单纯ox-LDL处理后的细胞相比差异具有统计学意义(P<0.05).结论:PTEN在动脉粥样硬化组织中表达下调,PTEN可以逆转ox-LDL对VEC增殖抑制和凋亡促进作用,作用机制可能与STAT3信号通路的激活有关.