目的 建立一种同时测定患者血浆中雌二醇(E2)及雌酮(E1)浓度的超高效液相色谱-质谱联用(UPLC-MS/MS)法.方法 用液液萃取法对样品进行前处理,内标为17β-雌二醇-D3.色谱柱:ACQUITY UPLC BEH C18(2.1 mm × 100.0 mm,1.7 μm),流动相:100％水含 0.2 mmol 氟化铵(NH4F)-100％甲醇含0.2 mmol NH4F,流速:0.30 mL·min-1,柱温:30 ℃,自动进样器温度:15 ℃,进样量:6 μL.用电喷雾离子化源,负离子模式,多反应监测.考察该方法的专属性、标准曲线与定量下限、精密度与回收率、基质效应及稳定性.结果 雌二醇和雌酮均在20～1 000 pg·mL-1内,线性关系良好,其标准曲线雌二醇为 y=1.87 ×10-3x+3.71×10-2(R=0.999 27);雌酮为 y=8.48 × 10-3x+6.46 × 10-2(R=0.998 90),定量下限均为20 pg·mL-1,雌二醇和雌酮批内和批间相对标准偏差均小于9.46％,回收率在97.64％～107.35％,基质效应在93.29％～109.87％.结论 本方法专属性强、灵敏度高,适用于雌二醇和雌酮的治疗药物监测研究.

环境水样中非甾体抗炎药(NSAIDs)的长期存在不仅会影响水生生物的生命安全,扰乱生态系统环境,而且会对人类健康构成严重威胁.采用溶剂热法首先制备了氨基功能化Fe3O4 纳米粒子(Fe3O4-NH2).随后,通过室温下水溶液中的席夫碱反应,以戊二醛为交联剂,将具有支链结构的聚乙烯亚胺(PEI)成功地接枝到Fe3O4 纳米粒子上,合成了一种可回收的PEI接枝磁性纳米吸附剂(Fe3O4@PEI)并将其应用于环境水中NSAIDs的检测.通过各种表征手段研究了Fe3O4@PEI的组成特性,并对影响NSAIDs萃取效果的参数进行了优化.Fe3O4@PEI对 4种NSAIDs具有高吸附性,与高效液相色谱联用可对环境水样中的酮洛芬、萘普生、双氯芬酸和托芬那酸 4种NSAIDs进行定量分析,在 1～500μg/mL范围内,色谱峰面积与质量浓度呈良好的线性关系,样品在 3种不同添加水平下的加标回收率在 85.6%～107.8%,日内精密度均小于 7.8%(n=6),日间精密度均小于9.5%(n=3).该方法操作简单、准确高效,可用于环境水样中非甾体抗炎药的测定.

目的:建立液相色谱串联质谱法快速测定尿液中全氟辛烷磺酸和全氟辛酸含量的方法。方法:于2022年11月，将尿液样品经酸性甲醇提取，WAX固相萃取柱净化，甲醇水洗脱后，采用Waters ACQUITY UPLC BEH C18柱（100 mm×2.1 mm，1.7 μm），以1.0 mmol/L乙酸铵溶液和甲醇为流动相，进行梯度洗脱；以电喷雾负离子多反应监测模式进行检测，内标法定量。结果:全氟辛酸和全氟辛烷磺酸在0.5~50.0 μg/L浓度范围内均具有良好的线性关系，相关系数均>0.999，方法的检出限为0.017 μg/L，定量限为0.005 μg/L，平均加标回收率分别为96.3%和101.8%，日内精密度分别为3.5%~6.2%和3.1%~7.4%，日间精密度分别为4.3%~6.8%和4.7%~8.1%。结论:液相色谱串联质谱方法灵敏度高、准确度好，可用于人体尿液中全氟辛烷磺酸和全氟辛酸的测定。

目的:建立尿中2-硫代噻唑烷-4-羧酸（TTCA）的高效液相色谱测定方法。方法:尿样以盐酸酸化，加过量氯化钠作盐析剂，用乙酸乙酯萃取尿中TTCA，经反相C18色谱柱梯度条件洗脱分离，二极管阵列检测器检测，外标法工作曲线定量。结果:尿中TTCA在0.03~10.00 mg/L的浓度范围内线性关系良好，相关系数 r为0.999 9，方法检出限为0.008 mg/L，最低定量下限为0.027 mg/L。尿中TTCA浓度为0.8、2.0和8.0 mg/L时，方法的批内精密度为0.9%~1.4%，批间精密度为1.3%~3.5%，加标回收率为85.0%~92.7%（ n=6）。 结论:该梯度洗脱高效液相色谱测定方法操作简单、灵敏度高，适用于二硫化碳接触人群尿中TTCA低浓度含量的测定。

目的:通过质性研究深度了解日间手术患者取消手术的原因及内心体验，旨在加强日间手术患者的管理。方法:本研究采用现象学研究法。采用目的抽样法，选取2019年6—12月在浙江省宁波市第一医院取消日间手术的12例患者进行半结构式访谈。应用Colaizzi 7步分析法进行资料分析。结果:通过对访谈资料的反复提炼、分析和萃取，最终将日间手术患者取消手术的原因及内心体验概括为5个主题：对日间手术产生恐惧心理；对日间医生不信任；受基础疾病和生理因素影响；对社区医疗缺乏信心；术前准备不充分。结论:日间手术患者取消手术的原因包括对手术产生恐惧心理、对医生不信任、基础疾病和生理因素、对社区医疗缺乏信心、术前准备不充分等。建议日间手术医护人员加强日间病房管理，提升专业水平和与患者沟通的能力，同时推进医院-社区一体化建设以保障患者出院后医疗安全，进一步降低日间手术手术取消率。

目的:探讨基于软骨脱细胞外基质微载体体外构建具有功能化和自我更新能力的软骨类器官。方法:取新鲜的猪关节软骨，将部分仅粉碎处理的软骨微粒设置为天然软骨组；利用物理离心化学萃取相结合的脱细胞方法，制备粒径合适的细胞外基质（ECM）微载体，设置为微载体组。通过旋转式生物反应器将人脐带干间充质干细胞（hUCMSCs）和人软骨细胞（hCho）按照3∶1的比例与微载体负载，体外构建软骨类器官，将诱导不同时间的类器官分为诱导0、7、14及21 d组。4′，6-二脒基-2-苯基吲哚（DAPI）荧光染色观察、DNA定量评估微载体组和天然软骨组细胞残留情况；番红O、甲苯胺蓝染色观察微载体ECM保留情况，二甲氨基苯甲醛比色法测定微载体组和天然软骨组胶原蛋白含量；二甲基亚甲蓝（DMMB）比色法测定微载体组和天然软骨组糖胺聚糖（GAGs）含量。扫描电镜及能谱分析对微载体进行进一步表征；将添加体积分数10%胎牛血清（FBS）的杜尔伯克改良伊戈尔低糖培养基（DMEM）培养的hUCMSCs作为对照组，将微载体浸提液培养的hUCMSCs作为实验组，两组分别设置培养1、3、5 d共3个时间点的亚组，细胞增殖及毒性检测试剂盒（CCK-8）检测两组生物相容性。活死染色检测诱导0、7、14及21 d组的软骨类器官细胞活性，Ki67荧光染色鉴定诱导14 d软骨类器官的自我更新能力。RT-PCR测定诱导7、14、21 d组的软骨类器官，包括软骨形成相关标记物聚蛋白聚糖（ACAN）、Ⅱ型胶原（COL2A1）、性别决定区Y框蛋白9（SOX9）及软骨肥大、矿化相关标记物Ⅰ型胶原（COL1A1）、Runt相关转录因子2（RUNX2）、骨钙素（OCN）的表达水平；比色法和DMMB法测定诱导0、7、14及21 d组的类器官分泌胶原蛋白和GAGs能力。结果:DAPI荧光染色结果显示，天然软骨组具有大量细胞核，而微载体组则基本无细胞核。微载体组DNA含量为（7.8±1.8）ng/mg，较天然软骨组的（526.7±14.7）ng/mg显著降低（ P<0.01）。番红O、甲苯胺蓝染色可见微载体着色较深且均一，保留大量软骨ECM成分。微载体组胶原蛋白含量为（252.9±1.4）μg/mg，GAGs含量为（173.4±0.8）μg/mg，均显著低于天然软骨组的（311.9±2.2）μg/mg、（241.3±0.7）μg/mg（ P<0.01）。扫描电镜显示，微载体表面有凹凸不平相互交错的胶原纤维网络。能谱分析结果显示，C、O、N元素均匀分布在微载体，表明该微载体成分组成均匀。微载体生物相容性良好，培养1、3 d时，对照组和实验组CCK-8实验结果比较，差异均无统计学意义（ P>0.05）；培养5 d，实验组 A值为0.53±0.02，优于对照组的0.44±0.03（ P<0.05）。诱导0、7、14及21 d组中，hUCMSCs和hCho贴附在微载体表面且细胞活性好，活死比例分别为（70.6±1.1）%、（80.5±0.6）%、（94.5±0.9）%、（90.8±0.5）%（ P<0.01）；诱导14 d时，软骨类器官有大量Ki67阳性细胞。RT-PCR显示，诱导7 d组ACAN、COL2A1、SOX9、COL1A1、RUNX2、OCN表达水平分别为1.00±0.09、1.00±0.24、1.00±0.18、1.00±0.03、1.00±0.06、1.00±0.13；诱导14 d组ACAN、COL2A1、SOX9、COL1A1、RUNX2、OCN表达水平分别为4.16±0.28、5.09±1.25、5.65±1.05、0.47±0.01、1.68±0.02、0.21±0.06；诱导21 d组ACAN、COL2A1、SOX9、COL1A1、RUNX2、OCN表达水平分别为13.42±0.92、3.07±0.21、1.84±1.08、2.72±0.17、2.91±0.18、3.32±1.20。与诱导7 d组比较，诱导14 d组ACAN、COL2A1、SOX9、RUNX2表达水平均升高（ P<0.05），COL1A1表达水平降低（ P<0.05），OCN表达水平差异无统计学意义（ P>0.05）；与诱导7 d组比较，诱导21 d组ACAN、COL1A1、RUNX2表达水平均显著升高（ P<0.01），COL2A1、SOX9、OCN表达水平差异均无统计学意义（ P>0.05）；与诱导14 d组比较，诱导21 d组ACAN、COL1A1、RUNX2、OCN表达水平均升高（ P<0.05或0.01），COL2A1表达水平差异无统计学意义（ P>0.05），SOX9表达水平降低（ P<0.05）。诱导0、7、14及21 d组胶原蛋白含量分别为（219.15±0.48）μg/mg、（264.07±1.58）μg/mg、（270.83±0.84）μg/mg、（280.01±0.48）μg/mg，GAGs含量分别为（171.18±1.09）μg/mg、（184.06±1.37）μg/mg、（241.08±0.84）μg/mg、（201.14±0.17）μg/mg。与诱导0 d组比较，诱导7、14、21 d组胶原蛋白和GAGs含量均显著升高（ P<0.01）。在诱导7、14、21 d组中，诱导7 d组胶原蛋白含量最低（ P<0.01），诱导21 d组胶原蛋白含量最高（ P<0.01）；诱导7 d组GAGs含量最低（ P<0.01），诱导14 d组GAGs含量最高（ P<0.01）。 结论:物理化学方法结合制备的微载体脱细胞成功，其基质保留较多，成分均一且无细胞毒性。基于微载体负载hUCMSCs与hCho体外成功构建软骨类器官，具有细胞活性好、自我更新能力、软骨形成相关基因表达强及分泌胶原蛋白和GAGs等特点，诱导14 d时构建的软骨类器官成软骨活性最佳。

目的:建立并验证一种基于液相色谱串联质谱（LC-MS/MS）同时测定脑脊液Aβ1-42、Aβ1-40和Aβ1-38的检测方法，并评价该方法与3种主流检测方法间的一致性。方法:方法建立、验证与一致性评价。以 15N标记的β-淀粉样蛋白作为内标，采用Waters MCX 96孔固相萃取板进行抽提和萃取，收集洗脱液至QuanRecovery MaxPeak 700 μl收集板。在正离子模式下，基于电喷雾离子化的多反应监测模式实现脑脊液Aβ1-42、Aβ1-40和Aβ1-38的同时测定。参考CLSI C62-A和EP-15A3指南对定量限、线性、回收率、精密度、正确度等性能进行方法学评价。收集57例临床检测剩余的脑脊液样本，采用INNOTEST ELISA试剂盒及Lumipulse G和Roche Elecsys全自动化学发光检测系统测定Aβ1-42和Aβ1-40的浓度，采用Passing-Bablok和Bland-Altman法进行不同检测系统间的比对及偏倚评估。 结果:该方法的分析时长为8 min，测定Aβ1-42、Aβ1-40和Aβ1-38的定量限分别为0.1、0.5、0.1 ng/ml，线性范围可覆盖临床实际样本浓度分布；回收率分别为86.2%~93.8%、100.9%~103.9%和103.3%~107.1%；总不精密度分别为4.7%~7.4%、3.5%~4.6%和5.2%~10.9%；Aβ1-42有证参考物质的测定值均在允许不确定度的范围内；携带污染率均≤0.11%。此外，基于该LC-MS/MS法测定的脑脊液Aβ1-42和Aβ1-40的结果与基于INNOTEST ELISA方法和Lumipulse G及Roche Elecsys全自动生化分析仪检测的结果相关性较好，相关系数 r为0.920~0.970，但测定值间存在明显不同。 结论:本研究建立了一种基于LC-MS/MS同时测定脑脊液Aβ1-42、Aβ1-40和Aβ1-38的检测方法，该方法准确、简便，可应用于临床检测。质谱法检测Aβ1-42和Aβ1-40，特别是Aβ1-42，与其他检测系统间的相关性较好但测定值存在显著差异，提示阿尔茨海默症经典标志物检测的一致化和标准化有待改进。

目的:建立尿中甲基汞的溶剂提取-直接测汞仪测定方法。方法:尿样水解后，甲基汞经甲苯萃取，再由L-半胱氨酸溶液反萃取出来，直接加入到直接测汞仪中测定。结果:尿中甲基汞浓度在0.2~ 50.0 μg/L线性关系良好，相关系数为0.999 9。方法批内精密度相对标准偏差（ RSD）为5.04%~ 6.64%，批间精密度 RSD为5.65%~8.11%，平均回收率分别为85.4%~95.5%，检出限为0.048 2 μg/L，定量下限为0.160 7 μg/L。 结论:直接测汞仪测定尿中甲基汞的检出限低、灵敏度高、稳定性好、操作简便，可用于尿中甲基汞的测定。

目的:评估流动注射-串联质谱法(FIA-MS/MS)应用于溶酶体贮积症(LSDs)筛查的可行性。方法:病例对照研究。使用含酸性β葡糖脑苷脂酶(ABG)、酸性鞘磷脂酶(ASM)、β半乳糖脑苷脂酶(GALC)、α-L-艾杜糖苷酸酶(IDUA)、α半乳糖苷酶A(GLA)和酸性α葡糖苷酶(GAA)6种酶的底物及化学结构与相应产物类似的同位素内标准品缓冲液孵育，经液液萃取，氮气吹干，复溶后串联质谱分析酶反应产物和内标，计算酶活性。评价精密度、准确度、回收率、稳定性和携带污染。使用2022年7月至2023年3月上海市儿童医院2 845份新生儿筛查样本和10例明确诊断的LSDs患儿样本进行临床验证。结果:6种低浓度酶活性检测值，批内变异系数(CV%)为4.650%～9.020%，批间CV%为6.990%～11.350%，高浓度酶活性检测值批内CV%为6.553%～8.690%，批间CV%为6.590%～12.850%；6个酶活性检测值与靶值的偏倚在－20.59%～20.45%；不同稀释浓度酶活性检测回收率为46.00%～136.67%，实测值与系列理论值间相关系数( R2)为0.986～0.997；稳定性评价6种酶活性差异均<15.00%；携带污染评价6种酶活性差异均<20.00%；6种酶活性在人群呈偏态分布，10例LSDs患儿酶活性明显低于切值，能有效检出相应疾病。 结论:FIA-MS/MS检测ABG、ASM、GALC、IDUA、GLA和GAA有较高的精确性和准确度，有临床应用价值，可作为戈谢病、尼曼-皮克病A/B、克拉伯病、黏多糖贮积症Ⅰ型、法布里病和糖原贮积症Ⅱ型的筛查技术。

目的:建立用同位素稀释液相色谱串联质谱（ID-LC/MS/MS）测定人血浆中血管紧张素Ⅱ的候选参考方法，并对方法性能进行评价。方法:以［ 13C 6- 15N］-血管紧张素Ⅱ为内标，重量法准确称取血浆及一定量内标混合，同时加入酶抑制剂，经硫酸锌溶液蛋白沉淀、反相固相萃取板处理，用液相色谱串联质谱分析，质谱选择多反应离子监测模式检测血管紧张素Ⅱ及内标的特定离子碎片。按照ISO15193要求对所建方法进行线性、灵敏度、精密度、回收率等性能评估及不确定度的评价。 结果:血管紧张素Ⅱ在10~1 000 pg/g范围内线性良好（ r=0.999 5），检测下限7.68 pg/g，加标回收率范围为97.14%~102.85%，批内不精密度≤3.21%，批间不精密度≤2.96%，总不精密度≤3.67%。 结论:用同位素稀释液相色谱串联质谱建立了血浆血管紧张素Ⅱ的检测方法，该方法准确可靠，有望成为血浆中血管紧张素Ⅱ测定的参考方法。