目的:观察反复惊厥持续状态后海马神经元中分子伴侣介导的自噬分子的表达及其与惊厥后脑损伤的关系。方法:取日龄7 d的SD大鼠，采用简单随机分组方法分为对照组(6只)及惊厥组(39只)，惊厥组反复吸入三氟乙醚诱导大鼠的惊厥持续状态，1次/d，30 min/次，连续诱导7 d。成功建立惊厥模型共30只(弃去建模失败9只)，采用简单随机分组方法分为末次惊厥后0 h、1.5 h、3 h、12 h、24 h组，每组6只。采用Western blot法及反转录聚合酶链反应(RT-PCR)法观察海马神经元中分子伴侣介导的自噬标记分子[热应激同源蛋白70(Hsc70)、溶酶体相关膜蛋白2a(LAMP-2a)、热休克蛋白(HSP)40及HSP90]的表达，原位末端标记法(TUNEL)检测细胞凋亡。结果:1．RT-PCR及Western blot显示：与对照组相比，分子伴侣Hsc70表达量在末次惊厥后1.5 h开始升高，持续至惊厥后24 h( P<0.05)；HSP90在末次惊厥后立即升高，持续至惊厥后24 h( P<0.01)；HSP40及LAMP-2a表达量在末次惊厥发作后也呈现高表达( P<0.05)。2.TUNEL法显示：与对照组(15.16±2.48)/40倍视野相比，惊厥组在末次惊厥后3 h(36.33±5.16)/40倍视野、12 h(44.83±4.83)/40倍视野、24 h(54.83±7.16)/40倍视野，大鼠海马CA1区凋亡细胞数明显增多(均 P<0.01)。3. Pearson相关性分析显示发育期反复惊厥持续状态后大鼠海马CA1区的细胞凋亡与分子伴侣标记分子表达呈正相关(Hsc70： r＝0.734， P＝0.001；LAMP-2a： r＝0.790， P<0.001)。 结论:发育期大鼠反复惊厥持续状态发作后，存在多个分子伴侣介导的自噬表达升高，并与细胞凋亡呈正相关，可能参与了发育期反复惊厥发作后脑损伤过程。

目的 研究齐墩果酸(OA)对发育期惊厥性脑损伤大鼠神经发育的改善作用及其作用机制.方法 将SD大鼠随机分为RS组(青霉素诱导大鼠模型)、RS+OA 组(青霉素+20 mg·kg-1 OA)、RS+OA+GPR39 CRISPR 组[青霉素+20 mg·kg-1 OA+5 × 108PFU 的 G 蛋白偶联受体 39(GPR39)CRISPR 质粒]、RS+OA+EX527 组[青霉素+20 mg·kg-1 OA+10 mg·kg-1 的沉默信息调节因子1(SIRT1)抑制剂EX527],每组均为10只大鼠.通过神经发育实验、旷场实验及新异物实验检测大鼠神经发育、学习记忆能力;用免疫荧光染色检测小胶质细胞GPR39表达水平;用试剂盒检测氧化应激相关表达;用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)实验检测相关基因mRNA表达水平.结果 RS组、RS+OA 组、RS+OA+GPR39 CRISPR 组和 RS+OA+EX527 组的 GPR39 mRNA 相对表达水平分别为 1.00±0.05、1.29±0.14、0.97±0.11 和 1.05±0.09,SIRT1 mRNA 相对表达水平分别为 1.00±0.10、1.33±0.20、1.05±0.09 和1.01±0.06,受体γ辅激活因子1α(PGC-1α)mRNA相对表达水平分别为1.00±0.16、1.34±0.15、1.03±0.07 和 0.93±0.11,核因子 E2 相关因子 2(Nrf2)mRNA 相对表达水平分别为 1.00±0.08、1.45±0.21、0.89±0.10 和0.96±0.08.RS 组的上述指标与 RS+OA 组比较,RS+OA+GPR39 CRISPR组、RS+OA+EX527组的上述指标分别与RS+OA组比较,在统计学上差异均有统计学意义(均P＜0.05).结论 OA可能通过GPR39激活SIRT1/PGC-1α/Nrf2通路抑制氧化应激途径,改善青霉素诱导的发育期惊厥性脑损伤大鼠神经发育及学习记忆能力的影响.

目的:探讨羚羊角与钩藤联合用药对热性惊厥所致发育期大鼠脑损伤的保护作用及其作用机制.方法:采用热水浴建立热性惊厥大鼠模型,实验分为5组,空白对照组、模型组、羚羊角组、钩藤组、羚羊角与钩藤联合用药组(简称联用组),每组10只,共50只.通过HE染色法观察组织病理情况;ELISA法检测各组大鼠脑组织TNF-α、IL-1β、Glu及Asp含量;免疫组化法检测大鼠海马区TNF-α、IL-1β 表达情况.结果:联用组、羚羊角组、钩藤组脑组织Asp、Glu、TNF-α 及IL-1β 及海马区TNF-α、IL-1β 含量显著低于模型组(P<0.01,P<0.05).联用组脑组织Asp、TNF-α 及IL-1β 含量较钩藤组显著降低(P<0.05).联用组海马区TNF-α 较羚羊角组、钩藤组显著降低(P<0.05),IL-1β 较钩藤组表达显著降低(P<0.05).结论:羚羊角与钩藤联合用药抑制热性惊厥所致大鼠脑损伤,效果优于羚羊角及钩藤单用,其作用机制可能与其抑制促炎症因子TNF-α、IL-1β 及兴奋性氨基酸Asp、Glu表达有关.

目的 评价非药物物理训练和生酮饮食对发育期惊厥性脑损伤神经行为的影响.方法 通过计算机检索PubMed、EMBASE、OVID MEDLINE、中国生物医学文献数据库(CBM)、中国期刊全文数据库、万方数据库、重庆维普中文科技期刊全文库(从建库至2012年8月)中的中英文文献,并按纳入、排除标准纳入合格的随机对照研究并对其进行质量评价,Meta分析采用Rev Man 5.1软件进行.结果 1.物理训练干预:符合纳入标准的文献共6篇,包括2篇中文文献和4篇英文文献.分别比较单纯惊厥组和惊厥加运动训练组、单纯对照组和对照加运动训练组之间的差异.Meta分析结果显示:单纯惊厥组与惊厥加运动训练组之间水迷宫逃避潜伏期的差异有统计学意义(WMD=13.96,95％ CI:8.46～19.46,P＜0.000 01)；单纯对照组与对照加运动训练组之间水迷宫逃避潜伏期的差异无统计学意义(WMD=-1.53,95％ CI:-6.77～3.70,P=0.57).2.生酮饮食干预:共纳入文献5篇,其中2篇中文文献,3篇英文文献.分别比较正常饮食组与正常生酮饮食组、单纯惊厥组与惊厥加生酮饮食组之间的差异.Meta分析结果显示:(1)正常饮食组与正常生酮饮食组旷场实验开场得分及水迷宫逃避潜伏期的差异均有统计学意义(WMD=18.82、8.80,95％ CI:15.64～ 22.01、1.48～16.12,P＜0.000 01、P=0.02).(2)单纯惊厥组与惊厥加生酮饮食组旷场实验开场得分及逃避潜伏期的差异均无统计学意义(WMD=-23.72、7.16,95％CI:-98.55 ～51.11、-0.52～ 14.84,P=0.53、0.07).单纯惊厥组与惊厥加生酮饮食组放电阈值的差异有统计学意义(WMD=34.57,95％ CI:16.46～52.69,P=0.0002).结论 非药物手段如物理训练和生酮饮食对发育期惊厥性脑损伤有保护作用,但生酮饮食对健康大鼠的神经行为有损害作用,目前的证据尚不能表明物理训练对健康大鼠有影响.

目的 探讨组蛋白去乙酰化酶抑制剂MS275在发育期大鼠惊厥发病中对p38 MAPK信号通路的调控机制.方法 将32只雄性大鼠随机分为对照组、戊四唑(PTZ)组、低剂量MS275组(3 mg/kg)及高剂量MS275组(6 mg/kg)(n=8).通过腹腔注射PTZ制作发育期大鼠惊厥模型,对照组仅注射生理盐水;MS275在PTZ诱导惊厥前2 h腹腔注射给药.造模成功后24 h,每组取6只大鼠,Western blot法检测海马组织p38、MK2、CREB和IL-6蛋白表达;qRT-PCR法检测p38、MK2、CREB和IL-6 mRNA表达;苏木精-伊红(HE)染色观察脑组织病理变化;Western blot法检测小胶质细胞活化标志物CD11b的表达.结果 PTZ组大鼠海马组织中p38、MK2、CREB和IL-6 mRNA及其蛋白的表达均较对照组显著增高(P<0.05);而MS275能抑制上述指标mRNA及其蛋白在发育期惊厥大鼠中的表达水平(P<0.05);6 mg/kg MS275对CREB mRNA及其蛋白、IL-6 mRNA的抑制作用比3 mg/kg MS275更显著(P<0.05).HE染色结果可见PTZ组海马组织有明显的神经元凋亡及细胞水肿,伴有较多的炎性细胞浸润;而MS275干预组能减轻发育期惊厥大鼠神经元凋亡及细胞水肿,同时减少炎性细胞浸润.PTZ组小胶质细胞活化明显增多,而MS275能抑制发育期惊厥大鼠小胶质细胞活化(P<0.05);且6 mg/kg MS275的抑制作用比3 mg/kg MS275更显著(P<0.05).结论 组蛋白去乙酰化酶抑制剂MS275能抑制发育期惊厥大鼠p38 MAPK信号通路、海马神经元的凋亡和小胶质细胞活化,从而减少炎症反应及惊厥性脑损伤;且MS275的作用可能存在剂量依赖性.

目的 通过microRNA(miRNA)表达谱芯片分析并筛选大鼠发育期热性惊厥后脑损伤相关的miRNA,探讨新的miRNA在发育期热性惊厥后脑损伤中的作用,为热性惊厥的临床诊断和治疗开辟一条新途径.方法 选取SPF级野生型14 d日龄SD大鼠,通过经典热水浴连续处理7 d诱导惊厥复制热性惊厥模型,将反复惊厥的大鼠海马作为实验组,另选取健康大鼠海马作为对照组.利用大鼠miRNA表达谱芯片筛选两组海马组织差异表达miRNA(P<0.05,FC>1.5),并利用生物信息学对芯片数据进行深入挖掘和分析;通过实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)验证差异表达miRNA.结果 基于miRNA表达谱芯片数据分析,共获得31个差异表达miRNA(P<0.05),其中包括21个上调miRNA,10个下调miRNA.qRT-PCR检测结果与miRNA表达谱芯片结果一致,证明芯片数据的可靠性;通过对所有差异表达miRNA的靶基因GO和Pathway分析发现,显著富集的GO主要包括基因转录、神经元分化、大脑及海马发育等(P<0.05);显著富集的Pathway主要包括癌症相关FoxO信号通路、PI3K/Akt信号通路、多巴胺突触通路等(P<0.05);miRNA靶基因数据库分析获得miR-148a-3p相关靶基因186个;差异miR-148a-3p的靶基因GO功能和Pathway分析主要涉及神经元保护、突触发生、大脑发育、FoxO信号通路、PI3K/Akt信号通路、Hippo信号通路等(P<0.05),与神经免疫相关;miR-148a-3p靶基因互作网络分析获得蛋白分子之间的相互关系;双荧光素酶实验表明,NCOA1是miR-148a-3p调节的靶基因.结论 神经、免疫等多种相关因素可能在热性惊厥的发生、发展中起非常重要的作用,为研究热性惊厥的发病机制提供新方向和新靶点.

目的 探讨Xyloketal B(Xyl-B)对发育期大鼠惊厥后脑损伤的保护作用及对氧化应激通路的调控.方法 40只20日龄SD大鼠随机分为Control组、海人酸(KA)组、KA+Xyl-B(25 mg/kg)组及KA+Xyl-B(50 mg/kg)组,通过腹腔注射KA制作大鼠惊厥模型,Control组注射生理盐水;KA+Xyl-B各组在KA诱导惊厥前2 h腹腔注射Xyl-B预治疗.惊厥后24 h处死大鼠,取海马组织,采用免疫荧光检测成熟神经元和活化星形胶质细胞,实时荧光定量PCR(qPCR)和Western blot分别检测Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白-1(Keap1)、核因子E2相关因子2(Nrf2)、血红素氧合酶1(HO-1)、依赖还原型辅酶/Ⅱ醌氧化还原酶1(NQO1)、caspase3、Bcl-2和白细胞介素(IL)-6 mRNA及蛋白的表达.结果 与Control组比较,KA组神经元数量明显减少,活化星形胶质细胞显著增多;Keap1 mRNA和蛋白表达水平升高,Nrf2、HO-1、NQO1 mRNA和蛋白表达水平降低;caspase3和IL-6 mRNA和蛋白表达水平升高,Bcl-2 mRNA和蛋白表达水平降低(P<0.05).Xyl-B干预可逆转惊厥后上述病理变化,且KA+Xyl-B(50 mg/kg)组的干预效果整体上优于KA+Xyl-B(25 mg/kg)组.结论 Xyl-B能激活Nrf2抗氧化应激通路,抑制星形胶质细胞活化、炎性因子及凋亡蛋白的表达,对惊厥后脑损伤发挥保护作用.

目的:探讨羚角钩藤汤对发育期大鼠热性惊厥的治疗作用及其机制.方法:SPF大鼠随机分为正常对照组、模型对照组、羚角钩藤汤8.24、16.47、32.94g/kg组,各组灌胃给予相应药液或蒸馏水,1次/d,连续21 d.给药1 h后,将大鼠置于(45±0.5)℃恒温水浴箱进行热水浴,隔日一次,连续10次,惊厥发作后,立即取出,记录惊厥潜伏时间、惊厥发作持续时间以及惊厥级别.末次给药后第2 d,取脑组织,检查脑组织病理改变;酶联免疫吸附法检测脑组织三磷酸腺苷(Adenosine triphosphate,ATP)、谷氨酸(Glutamic Acid,Glu)及γ-氨基丁酸(Gamma-aminobutyric acid,GABA)的含量;取外周血采用ELISA法检测血清NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白 3(NOD-like receptor thermal protein domain associated protein 3,NLRP3)、白细胞介素-1 β(Interleukin-1 β,IL-1β)、IL-18 含量;取海马以免疫印迹法(Western blot)测定 NLRP3、IL-1β、IL-18 及凋亡相关斑点样蛋白(apoptosis-associated speck-like pro-tein containing CARD,ASC)表达情况.结果:与正常对照组比较,模型对照组脑组织CA1锥体细胞数目减少,排列紊乱;大鼠惊厥潜伏时间明显缩短、惊厥持续时间明显延长(P＜0.01);脑组织ATP、Glu含量显著增高,GABA含量显著降低(P＜0.01);血清NLRP3、IL-1β及IL-18含量显著增高(P＜0.01);海马组织NLRP3、ASC、IL-1β及IL-18蛋白表达显著上调(P＜0.01);与模型对照组比较,羚角钩藤汤8.24、16.47、32.94 g/kg组海马CA1区神经元细胞病理损伤程度有所减轻;羚角钩藤汤32.94 g/kg组惊厥潜伏时间明显延长,且惊厥持续时间明显缩短;各剂量组Ⅳ+V级发生率呈剂量依赖性明显降低(P＜0.05或P＜0.01);各剂量组大鼠脑组织ATP、Glu含量明显降低,GABA含量明显增高(P＜0.05或P＜0.01);各剂量组血清NLRP3、IL-1β及IL-18含量均明显降低(P＜0.05或P＜0.01);各剂量组海马NLRP3、ASC、IL-1β及IL-18蛋白表达均显著下调(P＜0.01或P＜0.05).结论:羚角钩藤汤可显著抑制热性惊厥所致大鼠脑损伤,其作用机制可能与调控NLRP3/IL-1β/IL-18通路,进而修复兴奋性神经递质与抑制性神经递质的失衡有关.