目的:筛选与大鼠膝骨关节炎相关的差异代谢物及其代谢通路，为深入研究骨关节炎生物标志物提供线索。方法:60只雄性SPF级SD大鼠按体质量（300 ~ 350 g）采用随机数字表法分为模型组和对照组，每组30只。实验周期分别为4、8和12周，每个周期每组10只大鼠。模型组大鼠左侧膝关节采用改良Hulth法行造模手术，5 d后，驱赶大鼠使之活动，每天30 min。实验期间，两组大鼠均饲喂普通固体饲料、自由饮用自来水。实验期满，采集大鼠膝关节和血液样本。采用苏木素-伊红（HE）染色观察膝关节组织病理学变化，超高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱仪（UPLC-Q-TOF-MS）检测血清中小分子代谢物，并通过多元统计分析和数据库比对，筛选与骨关节炎相关的差异代谢物及其相关代谢通路。结果:模型组大鼠膝关节软骨变薄，表层粗糙、缺损或剥脱，软骨细胞变性、坏死、缺失，病变随实验周期延长而加重。筛选出11个与骨关节炎相关的血清差异代谢物，分别为硒代半胱氨酸、6-羟褪黑素、γ-谷氨酰半胱氨酸、花生四烯酸、二氢神经鞘氨醇、白三烯A4、白三烯B4、11，12-环氧-二十碳三烯酸（11，12-EpETrE）、溶血磷脂酰胆碱、神经酰胺和N-花生四烯酰甘氨酸。其中，实验4周时筛选出9个，与对照组比较，模型组5个高表达，4个低表达；实验8周时筛选出8个，与对照组比较，模型组2个高表达，6个低表达；实验12周时筛选出8个，与对照组比较，模型组5个高表达，3个低表达。筛选出2条与骨关节炎密切相关的代谢通路，分别为鞘脂代谢通路和花生四烯酸代谢通路，其中，二氢神经鞘氨醇和神经酰胺归属到鞘脂代谢通路，花生四烯酸、白三烯A4和白三烯B4归属到花生四烯酸代谢通路。结论:骨关节炎疾病进程可以影响血清代谢物谱的构成和水平。11个血清差异代谢物涉及鞘脂代谢通路和花生四烯酸代谢通路，与骨关节炎的发生发展相关。

目的:建立不同实验周期的大鼠骨关节炎（OA）模型，分析其尿中小分子代谢物，探讨具有疾病判别和/或病情指示作用的OA生物标志物和/或生物标志物簇。方法:选用60只雄性SPF级SD大鼠，体重为300 ~ 350 g，按体重采用随机数字表法分为模型组和对照组，每组30只，实验周期分别为4、8、12周。采用改良Hulth法建立大鼠OA模型。实验期满采集大鼠膝关节组织和尿液。膝关节组织常规制片、HE染色后光镜下观察造模情况，用高效液相色谱四级杆离子阱串联质谱[HPLC-（Q-TRAP）-MS/MS]定量检测大鼠尿液中候选物质。采用SPSS 20.0软件对计量资料进行数据处理和分析，组间比较采用Wilcoxon rank-sum检验；采用Python 3.0软件进行受试者工作特征（ROC）曲线检验。 P < 0.05为差异有统计学意义。 结果:组织学观察可见，模型组大鼠关节间隙变窄或消失，软骨变薄、破损或大面积剥脱，软骨细胞变性、坏死、缺失，随实验周期延长，病变加重。靶向代谢组学研究发现，4周时尿液中筛选出7种差异代谢物，分别为富马酸、琥珀酸、草酰乙酸、苹果酸、顺乌头酸、α-酮戊二酸、磺基丙氨酸，其中模型组磺基丙氨酸低于对照组，其余6种有机酸均高于对照组（ P均< 0.05）；8周时尿液中筛选出12种差异代谢物，包括组氨酸、赖氨酸、酪氨酸、色氨酸、苏氨酸、缬氨酸、亮氨酸、天冬氨酸、肌酸酐、α-酮戊二酸、草酰乙酸、丙二酰肉碱，模型组均高于对照组（ P均< 0.05）；12周时尿液中筛选出4种差异代谢物，其中模型组磺基丙氨酸、半胱氨酸和肌氨酸均低于对照组，琥珀酸高于对照组（ P均< 0.05）。 结论:模型组大鼠出现典型OA病理及病程改变，模型建立成功。不同病程大鼠尿液小分子差异代谢物谱不同，主要为有机酸和氨基酸，尿液三羧酸循环相关代谢物和必需氨基酸可作为OA生物标志物簇。

目的:调查分析基于中国罕见病注册系统中脊髓性肌萎缩症（SMA）队列人群相关基因诊断技术的应用现况和发展趋势。方法:本项横断面调查研究以2016年7月至2018年12月在首都儿科研究所注册登记的200例SMA患儿为研究对象，通过查阅注册信息、基因检测报告以及电话随访等方式获得患儿基本信息、疾病分型、基因型、基因诊断相关信息等。按照检测时间分层后，分别统计采用不同基因诊断技术的人数和构成比，采用Pearson相关分析基因诊断技术的应用与时间的相关性。结果:除3例资料不全的病例，共纳入197例SMA病例。SMAⅠ、Ⅱ和Ⅲ型的患儿分别为37例（18.8%）、115例（58.4%）和45例（22.8%），SMN1基因纯合缺失和复合杂合变异病例分别为185（93.9%）和12例（6.1%）。2004—2017年SMA基因诊断技术有7种：以多重连接探针扩增技术（MLPA）为主，占54.1%（100/185），其次是聚合酶链反应-限制性片段长度多态性（PCR-RFLP）和一代测序，分别为22.7%（42/185）和10.3%（19/185），等位基因特异性PCR（AS-PCR）、实时定量PCR（qPCR）、全外显子组测序（WES）及变性高效液相色谱分析（DHPLC）分别9、6、5和4例，占2.2%~4.9%。MLPA的应用从2010年开始逐步增加（ r=0.95， P<0.05），而PCR-RFLP从2004年开始逐步下降（ r=-0.99， P<0.05），其他检测方法应用与时间暂未发现相关性（ P>0.05）。定量检测技术（MLPA、qPCR和DHPLC）的应用从2010年开始逐渐增高（ r=0.94， P<0.05），定性检测技术（PCR-RFLP、一代测序、AS-PCR和WES）从2004年开始逐渐下降（ r=-0.94， P<0.05）。纯合缺失与复合杂合变异的基因重复检测率分别为12.4%（23/185）和41.7%（5/12），差异有统计学意义（χ2=5.86， P<0.05）。基因检测结果显示，同时提供SMN1、SMN2基因定量分析报告的构成比在2008—2015年为56.8%（21/37），2016—2017年上升至69.1%（56/81）。 结论:SMA基因检测技术从定性检测技术逐步发展为以MLPA和qPCR为主的定量检测技术。SMA定量检测报告不仅提供了 SMN1致病基因的定量结果，也提供了 SMN2修饰基因的定量结果。

目的 制备载长春新碱(VCR)且靶向结合外周神经髓鞘细胞的超声脂质微泡,观察其体外寻靶情况.方法 采用薄膜水化-机械振荡法制作载药超声微泡(VCR-MBs),生物素-亲和素桥接法制作靶向载药超声微泡(VCR-TMBs),观察 VCR-TMBs 形态、粒径、稳定性、体外显影、包封率及靶向性等理化性质.流式细胞仪检测VCR-TMBs对细胞的损伤及凋亡作用,体外通过VCR-TMBs联合超声(US)对大鼠肾动脉处理,HE染色观察脱髓鞘改变.结果 MBs、VCR-MBs 及 VCR-TMBs 光镜下均成圆形,分布均匀.MBs、VCR-MBs 及 VCR-TMBs 粒径分别为(3.22±1.07)、(3.48±1.06)及(3.22±0.79)μm,差异无统计学意义(P>0.05);与MBs、VCR-MBs相比,VCR-TMBs保存3d时浓度明显下降(P<0.05);采用高效液相色谱法测定 VCR-TMBs 的包封率及载药率分别为(82.90±9.98)%、(2.07±0.25)%;免疫荧光法测定VCR-TMBs可靶向聚集在Schwann细胞膜上;流式细胞仪检测示VCR-TMBs +US促细胞凋亡作用优于单纯VCR +US及VCR-MBs + US(P<0.05);组织HE染色示VCR-TMBs联合US可有效使体外大鼠肾动脉神经脱髓鞘及变性坏死.结论 成功制备VCR-TMBs,其可靶向识别Schwann细胞,促进细胞凋亡,使大鼠肾动脉神经脱髓鞘改变,可为后期体内VCR-TMBs实现肾动脉周围神经去交感化做前期准备.

目的 建立阿达木单抗基于高分辨质谱的肽指纹图谱表征分析方法及用于质控放行的肽指纹图谱液相鉴别方法.方法 阿达木单抗经变性、还原、烷基化和酶解后,应用高分辨质谱测定阿达木单抗氨基酸序列覆盖率,并确证互补决定区(complementarity determining region,CDR)特征肽段.建立能够有效鉴别阿达木单抗肽指纹图谱的液相色谱分析方法,并进行方法学验证和应用评价.结果 阿达木单抗经胰蛋白酶(Trypsin)和胞内蛋白酶(Lys-C)酶解后,CDR肽段均由高分辨质谱完成确证.贝伐珠单抗和利妥昔单抗用于评估方法专属性,结果表明该方法专属性强.选择Fc段保守氨基酸序列作为参比峰,以CDR特征肽段的相对保留时间(RRT)和相对峰面积(RPA)考察方法的变异程度.Trypsin酶解的样品连续5次进样各特征肽段RRT的RSD在0.008％～1.097％之间,RPA的RSD在1.212％～7.951％之间;中间精密度考察各特征肽段RRT的RSD 在 0.010％～0.985％之间,RPA 的 RSD 在 2.306％～10.939％之间;酶切比例为 1∶35～1∶45,酶切时间为 3.5～4.5 h 时,RRT和RPA的RSD均符合方法耐用性要求.Lys-C酶解的样品方法学验证结果也表明其精密度、耐用性均表现良好.不同色谱柱对肽段的选择性、保留强弱、分离效果以及峰强度等具有一定差异.结论 建立的基于Trypsin/Lys-C酶切、鉴定CDR特征肽段的高效液相肽指纹图谱鉴别方法可用于阿达木单抗的质量控制及批检验放行,同时可为企业建立单抗肽指纹图谱鉴别方法提供参考.

目的:探讨川陈皮素(nobiletin,NOB)对高脂饮食诱导的单纯性肥胖症大鼠肠道菌群及其产物短链脂肪酸(short-chain fatty acids,SCFAs)的影响.方法:将22只SD大鼠随机分为对照组(6只)和模型组(16只).采用高脂饮食喂养制备单纯性肥胖症大鼠模型,将造模成功的大鼠随机分为模型组(6只)和川陈皮素组(6只).川陈皮素组给予川陈皮素溶液(100 mg·kg-1·d-1)灌胃治疗,连续干预21 d.隔天记录各组大鼠体质量,采用苏木精-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色法观察各组大鼠肝脏和脂肪组织病理学变化,采用全自动生化分析仪检测各组大鼠血脂水平,以16S核糖体RNA(ribosomal RNA,rRNA)测序法分析各组大鼠肠道菌群的变化,应用高效液相色谱-质谱(high-performance liquid chromatography mass spectrometry,LC-MS)联用方法检测大鼠SCFAs含量.结果:与对照组相比,模型组大鼠体质量显著升高(P<0.01),脂肪细胞直径明显增大,出现肝细胞空泡化现象并伴有脂肪变性和炎症浸润,大鼠总胆固醇(total cholesterol,TC)和甘油三酯(triglyceride,TG)水平显著升高(P<0.05).在肠道菌群的变化方面,在门水平上,模型组大鼠厚壁菌门上升,拟杆菌门下降;在属水平上,模型组大鼠拟杆菌属、乳杆菌属、经黏液真杆菌属显著下降,大肠杆菌属显著升高.SCFAs中丙酸和丁酸水平下降.经治疗后,与模型组相比,川陈皮素组大鼠体质量显著下降(P<0.05),脂肪细胞直径明显缩小,肝细胞空泡现象和脂质积累减轻,大鼠TG和TC水平显著降低(P<0.05);在门水平上,川陈皮素组大鼠厚壁菌门下降,拟杆菌门上升;在属水平上,拟杆菌属、乳杆菌属、经黏液真杆菌属显著升高,大肠杆菌属显著下降;SCFAs中丙酸和丁酸含量均显著升高(P<0.05).结论:NOB能够降低肥胖症大鼠体质量,调节大鼠肠道菌群的结构以及SCFAs的含量,改善脂质代谢,从而发挥抗肥胖的作用.

目的:基于代谢组学探讨柴胡皂苷A(SSa)改善酒精饮食诱导下小鼠酒精性脂肪肝(AFL)的作用机制.方法:将C57BL/6J雄性小鼠分为饮食对照(NC)组、模型(EtOH)组、不同剂量SSa干预(Et+SA-L、Et+ SA-M、Et+SA-H,5、10、20 mg·kg-1)组,每组 6 只.除对照组外,各组小鼠使用含 5%乙醇的流质饮食诱导 10 d构建AFL模型,自乙醇饲料喂养第 4 天起给药至造模结束.应用酶联免疫吸附法检测小鼠血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、三酰甘油(TG)、总胆固醇(TC)和小鼠肝脏丙二醛(MDA)含量水平.采用苏木精-伊红(HE)染色观察肝脏组织形态学变化.采用超高效液相色谱串联四极杆静电场轨道阱质谱法(UPLC-Q-Exactive MS)建立检测NC组、EtOH组、Et-SA-H组小鼠肝脏代谢谱,以偏最小二乘法-判别分析(PLS-DA)和正交偏最小二乘法-判别分析(OPLS-DA)分析模式识别,以T检验、差异倍数筛选潜在生物标志物,并借助MetaboAnalyst数据库富集代谢通路.结果:SSa减轻AFL小鼠肝体比降低AFL小鼠血清中ALT、AST、TC、TG和MDA的含量,缓解AFL小鼠肝脂肪变性.NC组、EtOH组及Et+SA-H组的肝脏代谢组学分析显示,有 5 个与SSa调控AFL作用相关的潜在生物标志物,主要涉及甘油磷脂代谢、糖基磷脂酰肌醇(GPI)锚定生物合成、苯丙氨酸代谢、烟酸盐与烟酰胺代谢、组氨酸代谢、脂肪酸生物合成和细胞色素P450 对外源物的代谢等途径.结论:SSa调控AFL小鼠肝脏脂质代谢、降低肝脏脂肪变性、改善肝脏功能,其机制与肝脏TG代谢和肝细胞微粒体乙醇氧化代谢密切相关.

[背景]砷可引起肝脏功能紊乱、脂肪变性、炎症、纤维化等不同程度肝损伤,但其机制尚不明确且缺乏有效治疗手段.[目的]从S-腺苷甲硫氨酸(SAM)代谢角度初步探讨刺梨汁对砷致大鼠肝损伤的干预作用及机制.[方法]36只Wistar大鼠按随机数字法分为 6组,每组 6只,雌雄各半.低、中、高砷剂量组分别给予 2.5、5.0、10.0 mg·kg-1 亚砷酸钠(NaAsO2)(以体重计,后同)灌胃,对照组给予10 mL·kg-1 去离子水灌胃;刺梨汁干预组给予 10 mg·kg-1 NaAsO2 灌胃 4 h后给予 10 mL·kg-1刺梨汁灌胃;刺梨汁对照组给予 10 mL·kg-1 刺梨汁灌胃;每天灌胃 1次,每周灌胃 6 d,共处理4个月.苏木素-伊红染色(HE染色)观察大鼠肝脏组织病理学改变;酶循环法、速率法分别检测大鼠肝功能指标总胆汁酸(TBA)、谷氨酰胺转移酶(γ-GT);超高效液相色谱(UPLC-MS)检测大鼠肝脏SAM、S-腺苷同型半胱氨酸(SAH)含量;实时荧光定量逆转录PCR(RT-qPCR)检测大鼠肝脏中SAM代谢相关酶甘氨酸-N-甲基转移酶(GNMT)、烟酰胺N-甲基转移酶(NNMT)、磷脂酰乙醇胺N-甲基转移酶(PEMT)基因(Gnmt、Nnmt、Pemt)的mRNA水平.[结果]对照组大鼠肝细胞核染清晰,胞浆染色均匀,肝索呈放射状排列,无炎性细胞浸润;低、中、高砷剂量组可见不同程度的肝窦扩张、充血,炎性浸润.与对照组比较,中、高砷组TBA及高砷组γ-GT明显增加(P<0.05),且随染砷剂量增加逐渐升高(P趋势<0.05).与对照组相比,低、中、高砷剂量组SAH含量明显增高,SAM含量、SAM/SAH明显降低(P<0.05),且均与染砷剂量呈剂量-反应关系(P趋势<0.05);SAM、SAM/SAH的降低与大鼠肝功能指标TBA(SAM:r=-0.569;SAM/SAH:r=-0.607)、γ-GT(SAM:r=-0.577;SAM/SAH:r=-0.622)的增加相关(P<0.05).此外,与对照组相比,高砷剂量组Gnmt及低、中、高砷剂量组Nnmt、Pemt基因mRNA表达水平均明显上升(P<0.05),且随染砷剂量升高呈上升趋势(P趋势<0.05).Gnmt、Nnmt、Pemt基因mRNA表达与SAM(r=-0.490,r=-0.567,r=-0.593)、SAM/SAH(r=-0.433,r=-0.564,r=-0.746)均呈负相关(P<0.05).与高砷剂量组相比,刺梨汁干预组大鼠肝细胞肝窦扩张减轻,炎性浸润情况得到缓解;γ-GT、TBA明显降低,且恢复至对照组水平;Gnmt、Nnmt、Pemt基因mRNA表达明显降低,SAH含量下降,SAM含量及SAM/SAH回升(P<0.05).[结论]砷诱导的大鼠肝损伤与肝脏Gnmt、Nnmt、Pemt基因mRNA表达升高和SAM消耗密切相关.刺梨汁可能通过抑制砷诱导的Gnmt、Nnmt、Pemt基因mRNA表达异常升高及SAM过度消耗改善砷引起的大鼠肝损伤.该研究结果为从维持SAM角度防治砷中毒肝损伤提供了依据.

目的 构建高脂饮食诱导的非酒精性脂肪肝(NAFLD)大鼠模型,分析该模型大鼠肝脏的差异代谢物,探究NAFLD大鼠模型代谢特征.方法SPF级SD大鼠12只,雌雄各半,体重90～110 g,根据体重随机分为模型组和正常组.采用高脂饮食诱导法建立NAFLD大鼠模型,正常组给予普通维持饲料,模型组给予高脂饲料(配方为:78.8％基础饲料+10％猪油+10％蛋黄粉+1％胆固醇+0.2％胆酸钠),造模第8周取材,生化法检测谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)等指标;HE染色观察肝脏病理变化;运用高效液相色谱-质谱联用技术分析大鼠肝脏非靶向代谢物变化.结果 与正常组比较,模型组大鼠肝脏指数和肥胖指数显著升高(P＜0.05或0.01),血清TC、TG、LDL-C、ALT显著升高(P＜0.05或0.01),肝脏TC、TG、LDL-C显著升高(P＜0.01),HDL-C显著降低(P＜0.05).HE染色结果显示,模型组大鼠肝组织脂肪变性、气球样变和炎细胞浸润,NAS评分显著升高(P＜0.01).肝脏代谢组学共筛选出253个差异代谢物,获取了视黄醇代谢、不饱和脂肪酸的生物合成等代谢通路.结论 高脂饮食8周可成功建立NAFLD大鼠模型,其代谢组学变化涉及视黄醇代谢、不饱和脂肪酸的生物合成等多个代谢途径.

朱砂是临床上常用的镇静、安神中药,其安全性一直备受关注.该文拟研究连续给予朱砂后,大鼠体内的汞形态及组织分布.将 30 只大鼠随机分为对照组(等量 0.5%羧甲基纤维素钠)、朱砂低剂量组(0.2 g·kg-1)、朱砂高剂量组(2 g·kg-1)、伪无菌对照组(等量0.5%羧甲基纤维素钠)、伪无菌朱砂组(2 g·kg-1),连续灌胃给药30 d.通过建立超声辅助-酸提取法与高效液相色谱-电感耦合等离子体质谱(high performance liquid chromatography and inductively coupled plasma-mass spec-trometry,HPLC-ICP-MS)联用技术对大鼠不同组织、血浆、尿液和粪便中无机汞[inorganic mercury,Hg(Ⅱ)]、甲基汞(methyl-mercury,MeHg)和乙基汞(ethylmercury,EtHg)进行测定.优化确定了最佳检测条件和提取方法,各汞形态的线性(R2>0.999 3)、精密度(RSD<7.0%)及准确度(加样回收率为 73.05%～109.5%)良好,满足分析要求.汞形态检测结果显示Hg(Ⅱ)在 5 个实验组的组织中均有检出,主要蓄积脏器为肠道、胃和肾脏;MeHg在大部分组织中以较低的浓度存在;所有组别组织中EtHg均未检出.此外,病理学结果表明,朱砂高、低剂量组和伪无菌朱砂组中可见肝细胞空泡变性,细胞胞浆疏松、淡染,单核性细胞浸润,朱砂低剂量组病变程度略轻.朱砂高剂量组和伪无菌朱砂组可见肾脏肾小管上皮水样变性,其余各组与对照组比较没有明显差异.各组大鼠脑组织未见异常改变.该文研究了朱砂连续给药 30 d在正常和伪无菌大鼠体内不同汞形态和组织分布,并阐明了其对肝脏、肾脏和脑组织的影响,为朱砂的安全性评价提供了数据支撑.