运用超高效液相色谱-四极杆-静电场轨道阱质谱(UPLC-Q-Exactive-Orbitrap-MS)技术及超高效液相色谱串联三重四极杆质谱(UPLC-MS/MS)对小柴胡颗粒化学成分及大鼠口服后的入血成分进行鉴定.采用CORTECS UPLC C18+色谱柱(2.1 mm×100 mm,1.6 μm),乙腈-0.1％甲酸水溶液为流动相进行梯度洗脱,在电喷雾离子源正、负离子模式下采集数据后与对照品比较保留时间、精确相对分子质量、二级离子碎片以及参照相关文献进行化学成分鉴别;通过皮下注射干酵母建立大鼠发热模型后,灌胃给予正常组及模型组大鼠小柴胡颗粒,给药后于不同时间点眼眶静脉取血,分离血浆,在多反应监测模式(MRM)下进行扫描鉴定入血成分.从小柴胡颗粒中共初步鉴定出112种化学成分,包括63种黄酮类、31种皂苷类、6种有机酸类、4种苯丙素类、3种氨基酸类以及5种其他类化合物;从血浆中鉴定得到18个入血原型成分.该研究鉴定了小柴胡颗粒化学成分及入血成分,为进一步的药效物质基础及质量控制研究奠定了基础.

目的:建立超高效液相色谱法同时测定小儿金翘颗粒中绿原酸、葛根素、连翘酯苷A、甘草苷、苦参碱、柴胡皂苷A、柴胡皂苷D、连翘苷、甘草酸铵、靛玉红10种成分含量的方法。方法:色谱柱为ACQUITY UPLCTMC18柱(100 mm×2.1 mm，1.7 μm)；流动相为乙腈-0.05%磷酸水溶液，梯度洗脱，流速0.2 ml/min；检测波长250 nm；柱温30 ℃；进样量2 μl。结果:绿原酸、葛根素、连翘酯苷A、甘草苷、苦参碱、柴胡皂苷A、柴胡皂苷D、连翘苷、甘草酸铵、靛玉红的线性范围分别为0.789 5~15.793 4 μg ( r=0.999 6)、0.571 8~11.445 6 μg( r=0.999 4)、0.110 7~2.214 7 μg( r=0.999 3)、0.047 5~0.950 5 μg( r=0.999 2)、0.269 8~5.395 8 μg( r=0.999 7)、0.085 1~1.703 9 μg( r=0.999 5)、0.105 7~2.113 0 μg( r=0.999 4)、0.065 6~1.312 1 μg( r=0.999 3)、0.080 5~1.611 2 μg( r=0.999 5)、0.057 7~1.153 3 μg( r=0.999 4)；定量限分别为8.322、9.023、9.857、4.583、6.872、7.844、8.643、5.895、7.568、5.251 μg/ml；平均加样回收率分别为99.11%、98.87%、97.83%、98.10%、98.17%、98.30%、98.10%、98.14%、97.99%、98.02% ( RSD<2.0%)；精密度、重复性、稳定性试验的 RSD<2.0%。 结论:所建立的多成分含量测定方法快捷、准确、重复性好，可用于小儿金翘颗粒的质量控制。

目的:基于谷氨酸/γ-氨基丁酸（Glu-GABA）代谢通路探讨舒郁胶囊对经前烦躁障碍症(premenstrual dysphoric disorder, PMDD）肝气郁证的作用。方法:将36只旷场得分相近、动情周期规律的大鼠按随机数字表法分为空白组、模型组、氟西汀组、舒郁胶囊组、柴胡皂苷组和抑制剂组，每组6只。于动情周期确定后的第1个动情周期接受期进行海马立体定位手术。于第3、4个动情周期的非接受期进行束缚造模，并于造模第1天给药，氟西汀组灌胃氟西汀胶囊2.67 mg/kg，舒郁胶囊组灌胃舒郁胶囊0.408 g/kg，柴胡皂苷组灌胃柴胡皂苷0.72 mg/kg，1次/d，连续灌胃5 d；抑制剂组于造模最后1 d海马注射5 mmol/L谷氨酸脱羧酶抑制剂 L-苹果酸20 μl。给药结束后进行称重及旷场实验。采用微透析技术于大鼠第2、5个动情周期采集海马细胞外液，HPLC-FLD检测透析液中Glu、GABA含量。 结果:给药5 d后，与模型组比较，舒郁胶囊组、抑制剂组及氟西汀组大鼠体重升高( P<0.05)，旷场实验总分降低( P<0.05)；在第5个动情周期的接受期，舒郁胶囊组、抑制剂组Glu水平均降低( P<0.05)；在第5个动情周期的非接受期，舒郁胶囊组、氟西汀组及柴胡皂苷组Glu水平升高，舒郁胶囊组、抑制剂组及氟西汀组GABA水平降低( P<0.05)，舒郁胶囊组、氟西汀组及抑制剂组Glu/GABA [(1.49±0.13)、(1.32± 0.33)、(3.92±0.79)比（0.35±0.48)]升高( P<0.05)。 结论:舒郁胶囊可通过抑制PMDD肝气郁证模型大鼠Glu-GABA代谢通路中谷氨酸脱羧酶，发挥治疗作用。

目的:建立疏肝止痛片指纹图谱和多成分含量测定方法.方法:基于HPLC法建立疏肝止痛片指纹图谱,并进行相似度评价、聚类分析(CA)及正交偏最小二乘判别分析(OPLS-DA).同法测定疏肝止痛片中柴胡皂苷a、柴胡皂苷d、延胡索乙素、芍药苷、橙皮苷、木香烃内酯、去氢木香内酯、甘草苷及甘草酸铵9个成分的含量.结果:建立的疏肝止痛片HPLC指纹图谱标定了 32个共有峰,指认9个成分,15批样品的相似度＞0.960.CA和OPLS-DA将疏肝止痛片样品分为2类,且OPLS-DA筛选出12个对疏肝止痛片质量差异影响较大的成分.建立的9个成分含量测定方法稳定可靠,绝大部分样品未出现离散数据(平均值的70％～130％以外),表明15批疏肝止痛片质量较稳定.结论:HPLC指纹图谱结合多成分含量测定的方法快速、简便,重复性好,可用于疏肝止痛片的质量控制和评价.

运用高效液相色谱(HPLC)法比较柴胡-白芍单味、药对配方颗粒与传统汤剂的主要有效成分变化,建立利血平拮抗急性抑郁模型探讨药对合煎与单煎合并的抗抑郁作用差异.采用COSMOSIL5C18-MS-Ⅱ柱(250 mm×4.6 mm,5 μm);以乙腈-0.1％磷酸溶液为流动相;体积流量1.0mL/min;柱温30℃;进样量10 μL;采用双波长(210、230 nm)检测.酶联免疫吸附剂实验及对相关组织进行HE、Nissl染色分析不同剂型对小鼠抑郁效果的影响.结果表明,柴胡皂苷a、柴胡皂苷d、芍药苷和氧化芍药苷的含量在柴胡-白芍单味配方颗粒混溶中低于柴胡-白芍药对配方颗粒与传统汤剂;柴胡-白芍单味配方颗粒混溶组、柴胡-白芍药对配方颗粒组和传统汤剂组均能使小鼠脑内5-羟色胺、多巴胺水平明显提高(P＜0.05,P＜0.01);血清中白细胞介素-6、白细胞介素-1β及肿瘤坏死因子含量显著降低(P＜0.05,P＜0.01),抗炎因子白细胞介素-10显著升高(P＜0.05,P＜0.01);肝组织中超氧化物歧化酶不同程度地升高,丙二醛显著降低(P＜0.05,P＜0.01).HPLC检测方法重复性好,稳定可靠.通过抑制炎症和缓解氧化应激,柴胡-白芍药对配方颗粒与传统汤剂较柴胡-白芍单味配方颗粒混溶改善抑郁症状显著.

目的 对北柴胡质量进行控制.方法 分析采用Venusil XBP C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5 μm);流动相乙腈-水,梯度洗脱;体积流量 1.0 mL/min;柱温 35℃;检测波长210 nm.建立HPLC指纹图谱,测定柴胡皂苷A、柴胡皂苷B2、柴胡皂苷C、柴胡皂苷D、柴胡皂苷E、柴胡皂苷F、6″-O-乙酰基柴胡皂苷A 的含量,进行主成分分析.结果 12 批药材指纹图谱中有 13 个共有峰,相似度 0.970～0.995.7 种成分在各自范围内线性关系良好(R2≥0.999 8),平均加样回收率 90.75%～100.91%,RSD 1.6%～4.0%.内蒙古、山西产药材中各成分含量接近.结论 该方法精密、准确、稳定,可用于北柴胡质量评价.

目的 基于环磷酸腺苷/蛋白激酶A/环磷酸腺苷反应成分结合蛋白(cAMP/PKA/CREB)信号通路探讨柴胡皂苷(SS)对多发性抽动症(TS)模型小鼠的治疗作用.方法 将小鼠随机分为对照组、TS组、SS低剂量(SS-L)组、SS高剂量(SS-H)组、阳性药物组、SS-H+PKA抑制剂(H-89)组,每组10只.除对照组外,其他各组经腹腔注射亚氨基二丙腈溶液建立TS小鼠模型.造模后,SS-L组、SS-H组分别给予25、100 mg/kg SS腹腔注射,并以生理盐水灌胃;阳性药物组以0.5 mg/kg氟哌啶醇灌胃,并以生理盐水腹腔注射;SS-H+H-89组以100 mg/kg SS、5 mg/kg H-89腹腔注射,并以生理盐水灌胃;TS组及对照组分别以等体积的生理盐水腹腔注射、灌胃.每天1次,连续干预3周.对小鼠运动行为、刻板行为进行评分,用ELISA法检测纹状体组织中5-羟色胺(5-HT)、去甲肾上腺素(NE)以及多巴胺(DA),用苏木精-伊红法观察脑组织形态学变化,用免疫组化法检测黑质中酪氨酸羟化酶(TH)阳性神经元,用Western blotting法检测cAMP/PKA/CREB通路相关蛋白表达.结果 与对照组比较,TS组脑细胞形态被破坏,干预1、2、3周小鼠运动行为评分、刻板行为评分及纹状体组织中NE、DA水平、TH阳性神经元数量高(P均<0.05),纹状体组织中5-HT水平及cAMP、PKA、CREB蛋白表达低(P均<0.05);与TS组比较,SS-L组、SS-H组、阳性对照组脑细胞形态得到改善,干预1、2、3周小鼠运动行为评分、刻板行为评分及纹状体组织中NE、DA水平、TH阳性神经元数量低(P均<0.05),纹状体组织中5-HT水平及cAMP、PKA、CREB蛋白表达高(P均<0.05);S-H+H-89组逆转SS-H组各指标的变化(P均<0.05).结论 SS可能通过调节cAMP/PKA/CREB信号通路对TS小鼠发挥治疗作用.

目的 建立消核糖浆的高效液相色谱(HPLC)指纹图谱,并测定其中10个有效成分的含量.方法 以12批消核糖浆为对象,采用超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS)法,以Athena C18(250 mm×4.6 mm,5 μm)为色谱柱,以乙腈-0.1%磷酸水溶液为流动相进行梯度洗脱,流速为1.0 mL/min,检测波长为210 nm.色谱图导入《中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2012A版)》建立消核糖浆指纹图谱并进行相似度评价.采用ACQUITY UPLC BEH C18(100 mm×2.1 mm,1.7 μm)色谱柱,以0.01%甲酸乙腈-0.01%甲酸水为流动相进行梯度洗脱,流速为0.4 mL/min,结合高分辨质谱仪,以电喷雾离子源进行正负离子扫描,测定12批消核糖浆中各主要成分的含量.结果 12批样品共标定33个共有峰,相似度均大于0.97;确认其中10个色谱峰,分别为王不留行黄酮苷、芍药苷、阿魏酸、柚皮苷、迷迭香酸、新橙皮苷、丹酚酸B、延胡索乙素、柴胡皂苷A、柴胡皂苷D;含量测定结果显示,上述10个成分在各自的质量浓度范围内线性关系良好(R 2＞0.999),其含量分别为0.35～0.64、3.15～5.61、0.11～0.17、1.68～3.17、1.59～1.90、1.15～1.64、0.78～1.48、0.11～0.26、0.06～0.13、0.33～0.61 mg/mL.结论 12批消核糖浆的主要成分相似但含量有所差异;本研究建立的HPLC指纹图谱和UPLC-MS/MS含量测定方法可用于消核糖浆的全面质量评价.

目的 建立生、醋柴胡的指纹图谱,比较生、醋柴胡化学成分差异,考察两者抗肝纤维化作用的差异,探究其与抗肝纤维化药效之间的关联性.方法 采用UPLC法建立10批生柴胡和10批醋柴胡的指纹图谱,以TGF-β诱导肝星状细胞(LX-2)建立肝纤维化体外细胞模型,以Ⅰ型胶原蛋白(collagen Ⅰ,coll al)和 α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)蛋白表达情况为药效指标,利用MetaboAnalyst 5.0网站,以变量重要性投影(VIP)值＞1为标准筛选影响生、醋柴胡质量的差异标志物,并采用正交偏最小二乘判别分析(OPLS-DA)研究生、醋柴胡差异化学成分及与抗肝纤维化作用的谱效关系,筛选生、醋柴胡抗肝纤维化作用的主要成分.结果 生、醋柴胡样品的UPLC指纹图谱共有峰有18个,生、醋柴胡的主要差异成分有9个,其中峰9、7、6可以指认为柴胡皂苷d、柴胡皂苷a、柴胡皂苷f.药效结果发现,生、醋柴胡均有抗纤维化活性,且醋柴胡抗纤维化活性更强.通过谱效关联结果发现,柴胡抗肝纤维化作用的主要相关成分为11、12、14、15、18号峰.结论 建立生、醋柴胡的指纹图谱方法简单可行,通过谱效关系筛选出抗肝纤维化活性的重要成分,为明确生、醋柴胡抗肝纤维化作用物质基础提供依据.

目的 探讨柴胡皂苷D(saikosaponin D,SSD)联合替莫唑胺(temozolomide,TMZ)对神经胶质瘤细胞(glioblasto-ma,GBM)的协同增敏作用及分子机制.方法 CCK-8法结合HE染色分析RG-2、U251、LN-428 3种GBM细胞系对SSD、TMZ敏感性差异并筛选最佳配伍浓度.通过克隆形成实验、HE染色结合Hoechst荧光染色检测联合给药对GBM细胞增殖影响.单丹磺酰胺(monodansylcadaverine,MDC)染色观察GBM细胞自噬小体形成.Western blot结合ICC法检测内质网应激相关因子及凋亡、自噬蛋白表达与分布变化.结果 GBM细胞对TMZ敏感性顺序为RG-2＞U251＞LN-428.SSD联合TMZ给药结果显示出对GBM细胞系增殖的协同抑制作用,并经细胞克隆形成实验证实.与TMZ组相比,Hoechst荧光染色显示联合给药组细胞核亮染数目明显增加.MDC荧光染色发现SSD/TMZ组胞质出现致密浓染绿色颗粒,且较TMZ组相比明显增多.Western blot结果显示,较TMZ组相比,SSD/TMZ组内质网应激标志蛋白GRP78、CHOP、p-PERK、ATF6 表达增高(P＜0.05);凋亡蛋白 caspase-12、caspase-9、caspase-3、cleaved caspase-3、Bax 及自噬蛋白LC3、Beclin-1表达均明显增高(P＜0.05)并经ICC实验验证.结论 SSD可协同TMZ抑制GBM细胞增殖且诱导其发生凋亡与自噬,通过激活内质网应激途径提高GBM细胞对TMZ化疗敏感性.