目的:建立同时测定金果榄药材中古伦宾、蜕皮激素和生物碱类成分的含量的方法,并寻找金果榄药材中的质量差异标志物.方法:采用HPLC法同时测定古伦宾、蜕皮激素、非洲防己碱、药根碱和巴马丁的含量,并以检测出的含量为指标,结合聚类分析和偏最小二乘判别分析进一步确定金果榄药材中的质量差异标志物.结果:测定方法精密度、稳定性和重复性良好,聚类分析和偏最小二乘判别分析结果均显示20批样品可分为三大类,变量权重结果证实非洲防己碱、古伦宾、巴马汀为金果榄药材主要质量差异标志物.结论:所建方法利用DAD检测器特性,同时监测多个波长,方便快捷,能显著提高药材质量控制效率;聚类分析和偏最小二乘判别分析结果也可为金果榄药材种植、栽培提供依据.

目的:研究氮钾肥配合施用对不同生长年限下青牛胆块根干重和古伦宾含量的影响.方法:采用"3414"不完全施肥方案,固定磷肥施用水平,设计不同氮、钾肥水平配施处理以开展青牛胆人工种植试验.结果:青牛胆块根干重随着生长年限的增加而增加;块根中古伦宾含量随着生长年限的增加而增加,氮肥对块根中古伦宾含量累积的促进作用大于钾肥;在同一生长年限下,块根干重、古伦宾含量均随着施用氮肥量(N1、N2、N3)或钾肥量(K1、K2、K3)的增加呈现先升高后降低的变化趋势.结论:在本试验期内采收移栽后二年生的青牛胆块根作为药材可以兼顾药材产量和品质,本试验所确定青牛胆人工种植最佳施肥处理为N2P2K2,即氮(N)、磷(P2O5)、钾(K2O)施用量分别为 12.00、8.00、8.00 kg/667 m2.

目的:了解汗衣台抗HBV有效成分及对HepG2.2.15细胞HBVcccDNA和HBVDNA的影响.方法:对汗衣台分离提取及HPLC-ESI-MS/MS测定,发现6种含量较高的有效成分:古伦宾、异古伦宾、掌叶防己碱、蝙蝠葛碱、非洲防已碱、药根碱.予各有效成分标准品不同浓度作用于2.2.15细胞,孵育9天,取上清ELISA法测定HBsAg和HBeAg含量;荧光定量PCR法检测HBVDNA;提取细胞总DNA并以PSAD醇消化后选择性荧光定量PCR法检测HBVcccDNA;后两者抑制率做相关性分析.结果:全部浓度的异古伦宾(10～ 160μ mol/L)、非洲防己碱(10 ～ 160μmol/L)、蝙蝠葛碱(0.25 ～ 10μmol/L)、药根碱(20 ～ 320μmol/L)以及40～160μmol/L浓度的古伦宾、50～ 400μmol/L掌叶防己碱对HBsAg有明显抑制作用,40～ 160μ mol/L浓度非洲防己碱、5μmol/L蝙蝠葛碱、80～320μmol/L药根碱及200～400μmoL/L的掌叶防己碱对HBeAg有明显抑制作用;全部浓度的异古伦宾、药根碱,20～160μmol/L的古伦宾、160μmol/L非洲防己碱及400μmol/L浓度掌叶防己碱、5～10μmol/L蝙蝠葛碱对HBVDNA具有抑制作用,抑制率均不高;所有有效成分在较低浓度以上对HBVcccDNA均具有抑制作用,抑制率普遍较高,呈剂量依赖性,160 μmol/L的非洲防己碱抑制率39.55％超过干扰素21.44％,200μmol/L的掌叶防己碱抑制率29.55％超过干扰素及拉米夫定24.6％;HBVDNA与HB-VcccDNA相关性比较情况复杂,趋势一致但程度差异较大.结论:汗衣台6种主要成分均具有不同程度的抗HBV作用,均可视为抗HBV的有效成分.6种有效成分不同程度抑制HBVDNA复制,对HBVcccDNA的抑制呈剂量依赖性;上清HBVDNA检测并不能完全代表细胞内HBVcccDNA情况.

目的:通过汗衣台抗HBV有效成分古伦宾、非洲防己碱对4种HBV启动子的影响研究,进一步探讨汗衣台抑制HBV病毒复制的可能机制.方法:采用CCK8法检测古伦宾、非洲防己碱对HepG2细胞的增殖毒性,以确定它们的安全浓度;人工合成法、基因扩增法分别构建经典型和突变型的4种HBV启动子(S1p,S2p,Cp,Xp)调控的含荧光素酶报告基因的表达重组质粒(pCp-Luc,pS1 p-Luc,pS2p-Luc,pXp-Luc),脂质体转染HepG2细胞8h后,分别加入不同安全浓度的古伦宾、非洲防己碱进行干预处理,于24h、48h结束干预后进行双荧光素酶检测.结果:古伦宾对经典型S1 p、S2 p、Cp、Xp分别为中度(16.4％)、轻度(10.0％)、重度(20.2％,p=0.298)、明显抑制(8.9％,p=0.047);非洲防己碱对经典型S1p、S2p、Cp、Xp分别为中度(16.8％)、中度(17.7％)、重度(25.2％,p =0.199)、明显抑制(8.6％,p=0.05);阳性对照干扰素组对经典型S1p、S2p、Cp、Xp分别为中度(15.1％)、重度(22.3％)、重度(24.0％)和中度抑制(6.2％);拉米夫定对经典型S1p、S2p、Cp、Xp分别为重度(20.7％)、中度(13.4％)、中度(12.1％)和明显抑制(9.9％,p =0.046).基因扩增法构建的4个HBV启动子S1p,S2p,Cp,Xp分别有1,1,4,4个突变点,突变后的启动子转录效率提高1.3倍～2.2倍(48 h组),但是,药物的抑制效率没有按相应比例提高,从这一角度来看,古伦宾、非洲防己碱、干扰素和拉米夫定对突变启动子的抑制作用除对Xp有明显提高外(2.3倍～3.5倍),对其余突变启动子均无明显变化甚至抑制作用下调(1/10 ～2/5).结论:汗衣台抗HBV有效成分古伦宾、非洲防己碱对经典型和突变型的4种HBV启动子Cp,S1p,S2p,Xp均有不同程度的抑制作用,与干扰素和拉米夫定类似.四种药物对Xp尤其是突变型Xp有明显抑制作用,其中以干扰素最显著,提示汗衣台除了通过抑制启动子活性抗HBV以外,可能还通过抑制Xp启动子活性,继而下调X蛋白的表达,从而对HBV相关性肝癌的发生有预防作用.

金果榄为喉科要药,民间常用于治疗炎症和胃痛等,疗效显著,为苗、壮、瑶族等少数民族习用药物;同时被《中国药典》收载,具有清热解毒、利咽止痛等功效.现代药理学研究表明金果榄具有抗炎、镇痛、抑菌、抗溃疡、抗肿瘤、降血糖、抗氧化等药理作用,化学成分以二萜类、生物碱类和甾体类为主,其中克罗烷型二萜如古伦宾、异喹啉类生物碱如巴马汀为主要活性成分.对金果榄的化学成分、药理作用和安全性评价进行综述,并从植物亲缘学及成分特异性、成分与中药有效性的关联、成分可测性等方面对金果榄的质量标志物(qualitymarker,Q-Marker)进行预测分析,并预测古伦宾、巴马汀、药根碱、非洲防己碱、木兰花碱等可作为其Q-Marker,为建立和完善其质量标准提供参考.

目的 建立小儿咽扁颗粒多指标含量测定方法,结合化学计量学分析,评价小儿咽扁颗粒质量.方法 采用Waters XTERRA C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以乙腈与0.3％磷酸水溶液为流动相,梯度洗脱,流速1.0 ml/min,切换波长220 nm及326 nm,柱温35℃,进样量10μl.结果 小儿咽扁颗粒中绿原酸、异绿原酸C、异绿原酸A、古伦宾、哈巴苷、哈巴俄苷、射干苷、次野鸢尾黄素的色谱峰分离度好,线性关系良好,平均回收率分别为100.09％,98.41％,98.88％,98.19％,98.93％,99.09％,98.99％,99.27％,RSD均小于1.5％.该方法的精密度、稳定性、重复性均较好.12批小儿咽扁颗粒中上述8个成分的含量测定结果分别为0.2076～0.2866,0.0721～0.1061,0.0712～0.1019,0.0402～0.0619,0.0817～0.1081,0.0401～0.0645,0.0314～0.0612,0.0505～0.0768 mg/g.化学计量学分析表明不同厂家小儿咽扁颗粒质量存在一定差异,区分各类样品的质量差异标志物为绿原酸、古伦宾、射干苷和次野鸢尾黄素.结论 建立的综合质量评价方法准确、专属,可用于小儿咽扁颗粒的质量控制.

目的:探索金果榄色泽与其化学成分含量间的相关性.方法:采用分光测色仪检测金果榄粉末色度值L?、a?、b?值,利用HPLC法测定蜕皮激素、非洲防己碱、药根碱、巴马汀及古伦宾的含量,使用SPSS软件分析金果榄色泽与主要化学成分含量间的相关性.结果:金果榄色度值L?与蜕皮激素呈极显著负相关,与非洲防己碱、古伦宾呈显著负相关;色度值a?与蜕皮激素、非洲防己碱呈显著正相关;色度值b?与药根碱、巴马汀及古伦宾呈极显著正相关,与非洲防己碱呈显著正相关;化学成分间存在显著正相关,含量会相互影响.结论:色度值可作为快速鉴定金果榄药材质量的指标,该研究结果可为全面评价金果榄药材质量提供参考.