目的 分析不同配比"黄连-苦参"药对的特征性成分量-质变化相关性,为该药对的量-效相关性及临床应用提供合理的用量比例参考.方法 采用HPLC法,建立不同配比9批"黄连-苦参"药对(5∶1、4∶1、3∶1、2∶1、1∶1、1∶2、1∶3、1∶4、1∶5),建立药对HPLC特征指纹图谱及其特征性成分含量测定方法,分析9组样品成分的差异性与相关性.结果 9种配比的黄连-苦参药对共确定16个共有峰,指认苦参碱、槐定碱、氧化苦参碱、木兰花碱、非洲防己碱、表小檗碱、药根碱、黄连碱、巴马汀、小檗碱共10个共有峰.含量测定结果显示,黄连-苦参配对后相比黄连药材及苦参药材,特征性成分均有显著性差异.黄连-苦参(5∶1)时苦参碱、槐定碱、木兰花碱含量为各比例最高,相比单药材提取具有显著性差异;黄连-苦参(4∶1)时,非洲防己碱、表小檗碱、黄连碱、巴马汀、小檗碱含量为各比例最高,相比单药材提取具有显著性差异,且黄连总生物碱溶出最高;黄连-苦参(1∶1)时苦参总生物碱含量最高,且药根碱含量为各比例最高;黄连-苦参(1∶3)时氧化苦参碱含量为各比例最高.结论 黄连-苦参不同配比时,以特征性成分个数与含量为标示的"质"与配伍用"量"之间的相关差异性较明显,显示出一定的成分相互促溶作用.苦参中3种成分的溶出量随黄连比例的降低呈现"U"型分布,而黄连中7种成分溶出量随黄连比例的降低整体呈现降低趋势.与黄连、苦参各药材单提相比,各比例下苦参中总生物碱类成分的溶出均有不同程度的提升,黄连中总生物碱类成分在黄连-苦参(5∶1)及(4∶1)比例下溶出表现为提升,其他比例表现为降低.药对中生物碱类成分的溶出规律与临床验方中药对的使用配比成正相关.为进一步开展该药对的量-效关联性分析确定了物质基础,也为临床潜方时确定适宜用量提供参考.

目的:建立同时测定金果榄药材中古伦宾、蜕皮激素和生物碱类成分的含量的方法,并寻找金果榄药材中的质量差异标志物.方法:采用HPLC法同时测定古伦宾、蜕皮激素、非洲防己碱、药根碱和巴马丁的含量,并以检测出的含量为指标,结合聚类分析和偏最小二乘判别分析进一步确定金果榄药材中的质量差异标志物.结果:测定方法精密度、稳定性和重复性良好,聚类分析和偏最小二乘判别分析结果均显示20批样品可分为三大类,变量权重结果证实非洲防己碱、古伦宾、巴马汀为金果榄药材主要质量差异标志物.结论:所建方法利用DAD检测器特性,同时监测多个波长,方便快捷,能显著提高药材质量控制效率;聚类分析和偏最小二乘判别分析结果也可为金果榄药材种植、栽培提供依据.

目的:定性分析岩黄连总碱化学成分,并对其中8个含量较高的生物碱类成分进行定量分析.为研究岩黄连总碱的药效物质基础提供依据,也为岩黄连总碱质量控制提供参考.方法:采用超高效液相色谱-四级杆-飞行时间质谱联用技术(UPLC-Q-TOF-MS/MS)定性分析岩黄连总碱化学成分,并用高效液相色谱法(HPLC)同时测定岩黄连总碱中原阿片碱、非洲防己碱、延胡索乙素、黄连碱、脱氢卡维丁、巴马汀、小檗碱和白屈菜红碱的含量.结果:岩黄连总碱提取物中共鉴定出38个生物碱类成分,其中原小檗碱类13个,小檗碱类9个.此外,定量分析的8个成分在各自范围内线性良好(r＞0.999 2),加样回收率96.70％～103.8％,RSD 0.68％～1.97％.结论:该方法专属性好,准确性高,可用于岩黄连总碱提取物的定性、定量分析.

目的:采用超高效液相色谱-四级杆-飞行时间串联质谱(UPLC-Q-TOF-MS)法在正离子模式下对延寄参胶囊甲醇提取物中的生物碱类化学成分进行快速鉴定.方法:甲醇超声提取法制备延寄参醇提物,采用ACQUITY UPLCTM BEH C18(2.1 mm×100 mm,1.7μm)色谱柱为分析柱,并以乙腈-0.1％ 甲酸水为流动相,进行梯度洗脱分离各主要生物碱类成分;质谱采用电喷雾离子源,正离子模式下扫描采集数据,并对各主要色谱峰进行归属.结果:延寄参胶囊甲醇提取物中共定性鉴别出生物碱类化学成分9种,包括四氢非洲防己碱、原阿片碱、延胡索乙素、小檗碱、海罂粟碱、黄连碱、延胡索甲素、非洲防己碱、氢化小檗碱.结论:本研究采用UPLC-Q-TOF-MS在同一条件下共定性鉴别出9种生物碱类化学成分,该方法分辨率高、高效、便捷,可快速准确地鉴别延寄参胶囊中生物碱类化学成分,为延寄参胶囊止痛药效的物质基础研究提供了有力依据.

为了解鹰爪花(Artabotrys hexapetalus)的化学成分,采用各种柱层析和色谱方法从鹰爪花茎中分离鉴定了12种生物碱类化合物,分别为:光千金藤定碱 (1)、四氢非洲防己碱 (2)、四氢药根碱 (3)、前莲碱 (4)、奥可梯木种碱 (5)、华防己碱 (6)、深山黄堇碱 (7)、光千金藤碱 (8)、鹰爪花碱 (9)、lanuginolide (10)、isoscoulerine (11)和N-甲基阿西米洛宾 (12).其中化合物1~7均为首次从鹰爪花属植物中分离得到.化合物10对白色葡萄球菌(Staphylococcus albus)和蜡状芽孢杆菌(Bacillus cereus)生长都具有较好的抑制作用,MIC值分别为20和10 μ g mL–1.

目的 评价应用复合磷脂脂质体人工皮肤膜(CPLASM)测定参数表征香附四物汤(XSD)活性部位透皮吸收生物药剂学性质的可行性.方法 建立HPLC方法同时测定XSD活性部位中活性成分(阿魏酸、四氢非洲防己碱、延胡索乙素、洋川芎内酯I、洋川芎内酯H)的质量分数并测定其油水分配系数.制备CPLASM,用其测定XSD活性部位的体外透皮吸收参数,并与猪耳皮测得的透皮吸收参数进行比较.结果 XSD活性部位(pH 5.5)中阿魏酸、四氢非洲防己碱、延胡索乙素、洋川芎内酯I、洋川芎内酯H的油水分配系数分别为1.220±0.280、0.670±0.085、0.920±0.110、1.040±0.092、1.030±0.093 (n=3).应用CPLASM和猪耳皮测得的各成分透皮吸收参数显著相关,相关系数均高于0.9.与经典的油水分配系数相比,5种活性成分透过CPLASM6 h的累积透过率可以有效表征其透过猪耳皮的渗透系数.结论 应用CPLASM测定中药活性成分体外透皮吸收参数能够有效表征中药活性部位的生物药剂学性质.

目的:了解汗衣台抗HBV有效成分及对HepG2.2.15细胞HBVcccDNA和HBVDNA的影响.方法:对汗衣台分离提取及HPLC-ESI-MS/MS测定,发现6种含量较高的有效成分:古伦宾、异古伦宾、掌叶防己碱、蝙蝠葛碱、非洲防已碱、药根碱.予各有效成分标准品不同浓度作用于2.2.15细胞,孵育9天,取上清ELISA法测定HBsAg和HBeAg含量;荧光定量PCR法检测HBVDNA;提取细胞总DNA并以PSAD醇消化后选择性荧光定量PCR法检测HBVcccDNA;后两者抑制率做相关性分析.结果:全部浓度的异古伦宾(10～ 160μ mol/L)、非洲防己碱(10 ～ 160μmol/L)、蝙蝠葛碱(0.25 ～ 10μmol/L)、药根碱(20 ～ 320μmol/L)以及40～160μmol/L浓度的古伦宾、50～ 400μmol/L掌叶防己碱对HBsAg有明显抑制作用,40～ 160μ mol/L浓度非洲防己碱、5μmol/L蝙蝠葛碱、80～320μmol/L药根碱及200～400μmoL/L的掌叶防己碱对HBeAg有明显抑制作用;全部浓度的异古伦宾、药根碱,20～160μmol/L的古伦宾、160μmol/L非洲防己碱及400μmol/L浓度掌叶防己碱、5～10μmol/L蝙蝠葛碱对HBVDNA具有抑制作用,抑制率均不高;所有有效成分在较低浓度以上对HBVcccDNA均具有抑制作用,抑制率普遍较高,呈剂量依赖性,160 μmol/L的非洲防己碱抑制率39.55％超过干扰素21.44％,200μmol/L的掌叶防己碱抑制率29.55％超过干扰素及拉米夫定24.6％;HBVDNA与HB-VcccDNA相关性比较情况复杂,趋势一致但程度差异较大.结论:汗衣台6种主要成分均具有不同程度的抗HBV作用,均可视为抗HBV的有效成分.6种有效成分不同程度抑制HBVDNA复制,对HBVcccDNA的抑制呈剂量依赖性;上清HBVDNA检测并不能完全代表细胞内HBVcccDNA情况.

目的 建立同时快速测定新天泰1号制剂中19种药效成分(人参皂苷Rg1、Rb1、Rd,小檗碱、表小檗碱、药根碱、巴马汀、非洲防己碱、黄连碱、吴茱萸碱、吴茱萸次碱、去氢吴茱萸碱、柠檬苦素、金丝桃苷、姜黄素、去甲氧基姜黄素、双去甲氧基姜黄素、松果菊苷、毛蕊花糖苷)的超高效液相色谱-电喷雾三重四极杆质谱(UHPLC-ESI-QqQ-MS/MS)新方法,为产品提供全面高效的质量控制方法.方法 采用Agilent 1290Ⅱ高效液相色谱系统,Agilent Zorbax Eclipse Plus C18色谱柱(150 mm×4.6 mm,3.5 μm),乙腈-0.1％甲酸水溶液为流动相进行梯度洗脱;采用正负离子多反应监测模式对各成分特定离子对进行监测,测定新天泰1号样品中19种活性成分含量.结果 在15 min内完成19种活性成分的准确测定,极大地提高了分析效率;19种活性成分在线性范围内线性关系良好(r2＞0.999 0);19种活性成分人参皂苷Rg1、Rb1、Rd及小檗碱、表小檗碱、药根碱、巴马汀、非洲防己碱、黄连碱、吴茱萸碱、吴茱萸次碱、去氢吴茱萸碱、柠檬苦素、金丝桃苷、姜黄素、去甲氧基姜黄素、双去甲氧基姜黄素、松果菊苷、毛蕊花糖苷的回收率分别为94.80％、96.78％、95.59％、96.88％、97.74％、100.08％、96.27％、100.25％、98.32％、97.16％、95.60％、95.28％、96.81％、95.22％、96.85％、95.31％、93.86％、94.79％、95.20％;19种成分在3批样品中的定量测定结果分别为2.28～2.49 mg/g、0.82～0.90 mg/g、1.22～1.32 mg/g、14.44～15.50 mg/g、3.71～3.99 mg/g、3.26～3.49 mg/g、3.09～3.33 mg/g、4.39～4.72 mg/g、4.56～4.92 mg/g、0.52～0.57 mg/g、0.30～0.33 mg/g、4.46～4.76 mg/g、3.02～3.24 mg/g、2.59～2.76 mg/g、6.03～6.38 mg/g、1.47～1.58 mg/g、1.90～2.08 mg/g、3.40～3.88 mg/g、1.53～1.74 mg/g.结论 UHPLC-ESI-MS/MS多反应监测法可同时快速对新天泰1号中多种不同类型的活性成分进行监测,该方法快速,灵敏度高,重复性好,可用于本品质量控制,亦为中药质量研究提供参考和借鉴.

目的:采用一测多评,建立味连饮片中非洲防己碱、药根碱、表小檗碱、黄连碱、巴马汀、小檗碱6个生物碱类成分的含量测定方法.方法:采用C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以乙腈-水(含0.3％磷酸及0.2％三乙胺)为流动相,梯度洗脱,流速0.7 mL· min-1,柱温20℃,检测波长268 nm,建立小檗碱与非洲防己碱、表小檗碱、巴马汀、黄连碱、药根碱的相对校正因子,并以相对保留时间作为目标峰的定位标准.结果:色谱峰分离度良好,非洲防己碱、药根碱、表小檗碱、黄连碱、巴马汀、小檗碱进样量分别在0.118～1.18、0.176～1.76、0.190～1.90、0.272～2.72、0.198～1.98、0.98～9.80μg范围内呈良好线性关系,平均加样回收率分别为102.4％、98.1％、100.2％、102.6％、103.6％、103.3％.小檗碱对非洲防己碱、药根碱、表小檗碱、黄连碱、巴马汀的相对校正因子分别为1.351、1.094、1.304、1.361、1.451;12批味连饮片中6个生物碱类成分一测多评法计算值与实测值间均无显著性差异(RE＜5％).结论:采用一测多评法测定味连中生物碱类成分的含量准确、可行.

目的:测定黄连不同姜制品中6种生物碱的含量,采用多种统计方法对数据进行分析,找出姜制工序中影响姜黄连质量的因素.方法:采用高效液相色谱法测定黄连不同姜制品中药根碱、非洲防己碱、表小檗碱、黄连碱、巴马汀及小檗碱的含量.运用主成分分析、聚类分析、LSD (Least-Significant Difference)检验、独立t检验对结果进行分析.结果:黄连经姜炙后,表小檗碱、黄连碱含量略有上升,药根碱、非洲防己碱、巴马汀、小檗碱含量略有下降,传统姜炙品中各成分含量均高于烘制品.聚类分析发现榨汁组和煮汁组可以聚为一类;烘法和炙法具有明显不同的聚类,对黄连姜制品中的6种生物碱之和进行LSD检验,亦表明烘法与炙法具有显著性差异.对榨汁组进行独立t检验,结果表明姜汁与黄连饮片拌匀或闷润至透心在6种生物碱上无显著性差异,LSD与独立t检验的结果与聚类分析的结果一致.结论:采用同一批次黄连炮制所得的姜制品中,姜的来源、不同方法制备的姜汁及闷润过程对6种生物碱影响不大,加热方式可能是影响姜黄连质量的因素.考虑到润至透心需加入大量水稀释姜汁,炒干所需工时较长,故辅料姜汁与黄连饮片拌匀吸尽即可.