目的:探讨冬凌草甲素(Ori)调节Hippo/Yes相关蛋白(YAP)信号通路对骨质疏松(OP)大鼠成骨细胞凋亡的影响.方法:随机选取10只大鼠为假手术组仅分离但不切除卵巢,其余大鼠通过切除双侧卵巢建立OP模型,将造模成功的大鼠随机分为OP组、不同剂量Ori(5mg/kg Ori、10mg/kg Ori、20mg/kg Ori)组、20mg/kg Ori+Hippo/YAP 激活剂-Verteporfin(10mg/kg)组.干预后,收集腹主动脉血液,ELISA检测血清中骨钙素(BGP)、碱性磷酸酶(ALP)水平;分离股骨组织,双能X射线骨密度仪检测股骨矿含量、骨密度;HE检测股骨组织形态学变化;TUNEL检测成骨细胞凋亡变化;Western blot检测YAP、转录共激活因子PDZ结合基序(TAZ)蛋白表达.结果:假手术组大鼠股骨结构变化不明显,与假手术组相比,OP组股骨组织形态发生明 显改变,BGP、ALP水平、股骨组织矿含量、骨 密度、YAP、TAZ蛋白表达显著降低(P＜0.05),成骨细胞凋亡率显著增加(P＜0.05);与OP组相比,5mg/kg Ori组、10mg/kg Ori组、20mg/kg Ori组股骨组织形态得到改善,BGP、ALP水平、股骨组织矿含量、骨密度、YAP、TAZ蛋白表达显著增加(P＜0.05),成骨细胞凋亡率显著降低(P＜0.05),不同剂量Ori间具有统计差异(P＜0.05);与20mg/kg Ori组相比,20mg/kg Ori+V erteporfin组股骨组织形态变化加重,BGP、ALP水平、股骨组织矿含量、骨密度、YAP、TAZ蛋白表达显著降低(P＜0.05),成骨细胞凋亡率显著增加(P＜0.05).结论:Ori调节Hippo/YAP信号通路减少OP大鼠成骨细胞凋亡,减轻OP大鼠症状.

目的:探讨年龄对人增生性瘢痕硬度和成纤维细胞（Fb）纤维化表型的影响及其可能的分子机制。方法:采用实验研究方法。收集2020年1—6月解放军总医院第四医学中心烧伤整形外科收治的10例瘢痕患者（男4例、女6例）手术切除的增生性瘢痕组织和10例患者（男5例、女5例，年龄7~41岁）手术后剩余的正常全层皮肤组织。根据患者年龄，将6例患者［（10.7±1.6）岁］瘢痕组织纳入年轻组，将4例患者［（40.0±2.2）岁］瘢痕组织纳入年长组。对正常皮肤和2组瘢痕组织，行苏木精-伊红（HE）染色观察组织形态，行Masson染色观察胶原形态、排列并测定胶原含量，冻干及金属镀膜后在扫描电子显微镜下观察真皮层胶原纤维微观形态。采用原子力显微镜在液相下测量2组瘢痕组织硬度。取2组瘢痕组织，分离和培养Fb，采用倒置相差显微镜观察其形态，并采用细胞免疫荧光法检测桩蛋白的表达以反映细胞形态，采用细胞免疫荧光法检测促纤维化蛋白α平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、转化生长因子β 1（TGF-β 1）和Ⅰ型胶原表达及机械力转导相关蛋白Yes相关蛋白（YAP）和增殖相关蛋白Ki67的表达，采用实时荧光定量反转录PCR法检测促纤维化基因 TGF- β 1、α- SMA和Ⅰ型胶原，抑制纤维化基因 TGF- β 3及机械力转导相关基因Rho相关激酶1（ ROCK1）和 YAP mRNA表达。对数据行单因素方差分析、LSD- t检验。 结果:HE染色可见，正常皮肤表皮层凹凸不平，真皮层可见血管和汗腺等附属器；年轻组、年长组瘢痕组织表皮层均较为扁平，真皮层血管和汗腺等附属器罕见。Masson染色和扫描电子显微镜下可见，正常皮肤胶原纤维排列松散、无序，而2组瘢痕组织胶原纤维排列均较为致密、整齐，且年轻组瘢痕组织胶原纤维较年长组更为致密。年轻组、年长组瘢痕组织胶原含量明显高于正常皮肤组织（ t=8.02、3.15， P<0.05或 P<0.01），年长组瘢痕组织胶原含量明显低于年轻组（ t=4.84， P<0.05）。年长组瘢痕组织真皮层硬度为（50.3±1.1）kPa，明显高于年轻组的（35.2±0.8）kPa（ t=11.43， P<0.05）。2组瘢痕Fb在倒置相差显微镜下及经细胞免疫荧光法观察，在形态上无明显差异。年长组瘢痕Fb细胞质中Ⅰ型胶原和TGF-β 1表达较年轻组明显升高，2组瘢痕Fb细胞质中α-SMA表达相近。年长组瘢痕Fb细胞质和细胞核中YAP表达较年轻组明显增多，2组瘢痕Fb细胞核中Ki67表达无明显差异。年长组瘢痕Fb中 TGF- β 1和Ⅰ型胶原mRNA表达量明显高于年轻组（ t=2.87、4.85， P<0.05或 P<0.01）， TGF- β 3 mRNA表达量明显低于年轻组（ t=3.36， P<0.05）， α- SMA mRNA表达量与年轻组无明显差异（ t=1.14， P>0.05）。年长组瘢痕Fb中 ROCK1和 YAP mRNA表达量明显高于年轻组（ t=2.98、7.60， P<0.05或 P<0.01）。 结论:年长者皮肤损伤后更容易发生瘢痕愈合，其分子机制可能是由于创面愈合过程中会产生硬度较高的细胞外基质成分使得组织硬度增加，从而激活 ROCK和 YAP/转录共激活因子PDZ结合基序基因的表达，进而促进促纤维化基因和蛋白的表达。

目的:探讨外源性硫化氢(H 2S)对心肌梗死(心梗)后大鼠心肌纤维化和心肌细胞凋亡的影响及其机制。 方法:43只SD大鼠按随机数字表法分为4组：对照组12只、心梗组13只、硫化氢组6只和心梗+硫化氢组12只。采用异丙肾上腺素腹腔注射法(50 mg/kg，1次/d，共2 d)建立急性心梗大鼠模型，末次给药后48 h记录心电图及肌钙蛋白变化确定造模情况。造模成功后，心梗组和心梗+硫化氢组大鼠每日腹腔注射硫氢化钠(56 μmol/kg，1次/d，持续6周)。6周后比较各组大鼠心脏彩色超声观察心功能变化情况，Masson染色观察各组大鼠心肌胶原容积分数，TUNEL染色检测各组大鼠心肌细胞凋亡率，酶联免疫吸附(Western blot)法检测Yes相关蛋白1(YAP1)、含有PDZ结合基序的转录共激活因子(TAZ)、哺乳动物STE20样激酶2(MST2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、胱天蛋白酶3(Caspase-3)、基质金属蛋白酶3(MMP3)/基质金属蛋白酶抑制剂2(TIMP2)比值、B细胞淋巴瘤因子(Bcl-2)等蛋白在各组大鼠心肌组织的表达变化情况。结果:与对照组比较，心梗组大鼠心肌胶原容积分数增加( P<0.05)，心肌细胞凋亡率升高( P<0.05)，心肌组织YAP1、TAZ、MST2、Bax、Caspase-3蛋白表达及MMP3/TIMP2比值增加(均 P<0.05)，而Bcl-2蛋白表达降低( P<0.05)；心梗+硫化氢组较心梗组大鼠心肌组织中胶原容积分数减少( P<0.05)，心肌细胞凋亡率降低( P<0.05)，心肌组织YAP1(2.406±0.024比2.830±0.063)、TAZ(0.964±0.090比1.329±0.018)、MST2(0.780±0.082比1.788±0.097)、Bax(1.500±0.008比0.613±0.003)、Caspase-3(0.620±0.024比0.780±0.012)蛋白表达及MMP3/TIMP2比值降低(均 P<0.05)，而Bcl-2蛋白表达升高( P<0.05)。 结论:硫化氢可改善心梗后心肌纤维化，该作用与抑制YAP1/TAZ信号通路表达和减少心肌细胞凋亡有关。

目的 探讨含PDZ结合基序的转录共激活因子(TAZ)基因单核苷酸多态性(SNP)rs16861985、rs1055153、rs6783790、rs12490239与幽门螺杆菌感染的关系.方法 选取2008-2020年包头医学院第一附属医院和内蒙古包钢医院正常体检者470例,通过酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测样本中幽门螺杆菌的感染情况,其中幽门螺杆菌阳性248例,幽门螺杆菌阴性222例;采用聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)技术对TAZ rs16861985、rs1055153、rs6783790、rs12490239进行基因分型,采用非条件性Logistic回归法在共显性、显性、隐性、超显性4种遗传模型下分析各SNP与幽门螺杆菌感染的关系,同时分析赤池信息准则(AIC)和贝叶斯信息准则(BIC)来判断最佳遗传模型;采用SHEsis在线软件对rs16861985、rs1055153、rs6783790、rs12490239进行单体型构建并分析单体型与幽门螺杆菌感染的关系;采用广义多因子降维方法(GMDR)分析TAZ基因SNP-SNP在幽门螺杆菌感染中的交互作用.结果 TAZ rs16861985、rs1055153、rs6783790、rs12490239与幽门螺杆菌感染无关联;TAZ rs16861985、rs1055153、rs6783790、rs12490239构建的单体型与幽门螺杆菌感染无关;TAZ rs16861985、rs1055153、rs6783790、rs12490239的四阶交互作用与幽门螺杆菌感染相关(P＜0.05).结论 TAZ基因rs16861985、rs1055153、rs6783790、rs12490239在包头汉族人群幽门螺杆菌感染中不起主要作用;TAZ基因rs16861985、rs1055153、rs6783790、rs12490239构建的单体型与幽门螺杆菌感染无关;TAZ基因rs16861985、rs1055153、rs6783790、rs12490239在包头汉族人群幽门螺杆菌感染中存在交互作用.

目的 探讨25-OH维生素D(25-OH vitamin D,25-OH-VD)对新生儿感染性肺炎(neonatal infectious pneumonia,NIP)的抗炎作用及其作用机制.方法 选取2022年1月～2023年1月成都市妇女儿童中心医院收治的65例NIP患儿,根据病情严重程度,分为轻症组(n=34)和重症组(n=31),另选取同期60例健康新生儿为对照组.通过酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清25-OH-VD,白细胞介素-2(inteleukin-2,IL-2)、γ干扰素(interferon-γ,IFN-γ)、肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)和IL-1β水平;蛋白免疫印迹法检测外周血单个核细胞中维生素 D 受体(vitamin D receptor,VDR)、细胞核转化生长因子 β(transforming growth factor β,TGF-β)/Yes相关蛋白(nucleus-Yes-associated protein,n-YAP)和细胞核转录共激活因子 PDZ 结合基序(nucleus-transcriptional co-activator with PDZ-binding motif,n-TAZ)通路相关蛋白表达.脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)刺激人肺上皮细胞构建NIP体外模型,分为Control组、LPS组和LPS+VD组;CCK-8检测细胞活力;qRT-PCR检测各组细胞中细胞色素P450家族成员28B1(recombinant cytochrome P450 27B1,CYP27B1)和VDR的mRNA表达;免疫细胞化学法检测各组细胞YAP阳性细胞核数;免疫荧光检测各组细胞YAP/TAZ复合物核转位;蛋白免疫印迹法检测各组细胞炎性因子相关蛋白表达.结果 与对照组相比,轻症组和重症组患儿血清中IL-2(1.91±0.18 μg/L,2.63±0.27 μg/Lvs 1.05±0.12 μg/L),IFN-γ(1.73±0.13 μg/L,2.18±0.19 μg/Lvs 1.03±0.07 μg/L),TNF-α(1.79±0.08 μg/L,2.38±0.13 μg/L vs 0.97±0.04μg/L)和 IL-1β(2.18±0.07 μg/L,2.59±0.11 μg/L vs 0.96±0.02 μg/L)含量以及 TGF-β(1.67±0.21,2.43±0.42 vs 1.02±0.04),n-YAP(2.08±0.11,4.23±0.37 vs 0.99±0.02)和 n-TAZ(2.47±0.42,4.21±0.58 vs 1.03±0.05)蛋白表达逐渐升高,25-OH-VD(12.57±2.21 μg/L,7.85±2.03μg/L vs 16.76±1.02 μg/L)含量和 VDR(0.73±0.09,0.51±0.06 vs 1.03±0.08)蛋白表达逐渐降低,差异具有统计学意义(F=18.983～56.782,均P＜0.001).细胞实验结果显示,与 Control 组相比,LPS 组细胞存活率在 12h(76.23％±0.73％vs 116.72％±2.14％),24 h(57.23％±0.94％vs 125.76％±1.67％)和 48 h(41.23％±0.56％vs 138.56％±1.35％)时显著降低(t=10.342,26.562,37.821);YAP 阳性细胞数(47.35±3.47 个 vs 12.46±1.34 个)和 YAP/TAZ 复合物核转位率(2.56％±0.32％vs 1.01％±0.06％)升高(t=46.362,26.921);IL-2(2.03±0.09 vs 1.03±0.08),IFN-γ(2.07±0.21 vs 1.02±0.04),TNF-α(2.18±0.11 vs 0.99±0.02)和 IL-1β(3.17±0.42 vs 1.03±0.05)的蛋白表达水平升高(t=28.341,26.713,31.235,47.823),差异具有统计学意义(均P＜0.001),而两组间CYP27B1和VDRmRNA表达差异无统计学意义(t=0.872,0.786,均P＞0.05).与 LPS 组比较,LPS+VD 组在 12 h(85.23％±0.36％),24 h(79.82％±0.63％),48 h(76.28％±0.72％)的细胞存活率和CYP27B1(4.42±0.14),VDRmRNA(5.13±0.56)表达升高,YAP阳性细胞核数(24.41±3.23个)和 YAP/TAZ 复合物核转位率(1.47％±0.26％)降 低,IL-2(1.21±0.06),IFN-γ(1.13±0.42),TNF-α(1.03±0.37)和 IL-1β(1.61±0.58)蛋白表达降低,差异具有统计学意义(t=7.263,19.892,23.145,27.872,26.982,14.762,13.623,18.273,25.314,27.873,22.134,均 P＜0.01).结论 血清 25-OH-VD 水平与 NIP 严重程度相关,外源性给予VD补充可通过调控TGF-β介导的YAP/TAZ核转位机制发挥抗炎作用,减轻NIP损伤.

观察白藜芦醇(resveratrol,Res)通过调控Hippo信号通路对卵巢低反应(poor ovarian response,POR)小鼠卵巢功能的保护作用,探析Res抑制卵巢细胞凋亡的可能机制.将筛选后动情周期规律的雌性小鼠随机分成空白组,模型组以及Res低、高剂量组(20、40 mg·kg-1),每组20只.空白组给予等体积0.9％氯化钠溶液灌胃,模型组以及Res低、高剂量组小鼠给予雷公藤多苷混悬液(50 mg·kg-1)灌胃2周,造模完成后,Res低、高剂量组小鼠连续灌胃治疗2周,空白组和模型组给予等体积0.9％氯化钠溶液灌胃,于治疗结束次日对各组雌鼠进行促排操作.最后每组随机选取12只雌鼠进行取材,将每组剩余的8只雌鼠与雄鼠1∶1合笼.采用阴道脱落细胞涂片观察小鼠的动情周期变化,检测小鼠获卵数、卵巢湿重、卵巢指数和妊娠率,通过酶联免疫吸附测定(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)法检测血清中抗缪勒管激素(anti-Mullerian hormone,AMH)、促卵泡生成素(follicle-stimulating hormone,FSH)、雌二醇(estradiol,E2)、促黄体生成激素(luteinizing hormone,LH)的含量;通过苏木精-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色和脱氧核苷酸转移酶dUTP末端标记(terminal deoxynucleotidyl transferase dUTP nick end labeling,TUNEL)染色法观察卵巢组织形态和卵巢细胞凋亡情况;通过免疫组化法检测Yes相关蛋白(Yes-asso-ciated protein,YAP)1 和带有 PDZ 结合基序的转录共激活因子(transcriptional coactivator with PDZ-binding motif,TAZ)的蛋白表达,通过Western blot法检测哺乳动物Ste-20样激酶(mammalian sterile 20-like kinase,MST)1/2、大型肿瘤抑制因子(large tumor suppressor,LATS)1/2、YAP1、TAZ、B 淋巴细胞瘤-2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)、Bcl-2 关联 X的蛋白(Bcl-2 associated X protein,Bax)蛋白表达水平的变化.结果发现,与空白组比较,模型组小鼠动情周期紊乱率升高,卵巢组织各级正常发育卵泡数量减少,闭锁卵泡增多,卵巢颗粒细胞凋亡量提高,获卵数下降,卵巢湿重与卵巢指数降低,血清中FSH和LH含量升高,AMH和E2含量下降,卵巢组织YAP1、TAZ蛋白表达水平降低,MST1/2、LATS1/2和Bax蛋白相对表达升高,YAP1、TAZ和Bcl-2蛋白相对表达降低,合笼后每胎胚胎数显著降低;与模型组比较,Res低、高剂量组小鼠动情周期紊乱率降低,卵泡数量和形态得到不同程度改善,卵泡闭锁量降低,卵巢颗粒细胞凋亡程度得到改善,获卵数升高,卵巢湿重与卵巢指数升高,血清中FSH和LH含量降低,AMH和E2含量升高,卵巢组织YAP1、TAZ蛋白表达水平升高,MST1/2、LATS1/2和Bax蛋白相对表达降低,YAP1、TAZ和Bcl-2蛋白相对表达升高,合笼后每胎胚胎数不同程度升高.综上,Res可以有效抑制小鼠卵巢细胞凋亡,改善卵巢反应性,其机制可能与调节Hippo通路中的关键分子有关.

目的 探究微小RNA-125a-5p(miR-125a)对人鼻咽癌细胞(HK-1细胞)增殖的影响及机制.方法 常规培养HK-1细胞及人胚肾细胞永生化细胞系(293T细胞),将HK-1细胞随机分为对照1组、过表达miR-125a组(转染miR-125a mimics)、沉默miR-125a组(转染miR-125a inhibitor);另取部分HK-1细胞随机分为对照2组、miR-125a过表达组(转染miR-125a mimics)及回补组[转染miR-125a mimics同时过表达含PDZ结合基序的转录共激活因子(TAZ)].转染48 h后检测miR-125a表达验证转染效率.用RT-qPCR法检测miR-125a-5p、TAZ mRNA;用Western blotting法检测TAZ蛋白;CCK-8实验、集落形成实验检测细胞增殖能力;通过预测网站TargetScan(http://www.tar-getscan.org/)和miRDB(http://mirdb.org/)预测miR-125a与TAZ的结合位点.将293T细胞随机分为4组,WT+miR-ctrl组共转染TAZ野生型(TAZ-WT)和miR-125a空载对照(miR-ctrl)、Mut+miR-ctrl组共转染TAZ突变型(TAZ-MUT)和miR-ctrl、WT+miR-125a组共转染TAZ-WT和miR-125a模仿物(miR-125a)、Mut+miR-125a组共转染TAZ-MUT和miR-125a,用双荧光素酶报告基因实验进一步验证miR-125a的下游靶点.结果 对照1组、过表达miR-125a组、沉默miR-125a组miR-125a的相对表达量比较差异有统计学意义(P均<0.05).对照1组、过表达miR-125a组、沉默miR-125a组转染后第2、3、4、5、6天增殖活力(OD450值)比较差异均有统计学意义(P均<0.05)、集落形成数比较差异有统计学意义(P均<0.05).对照1组、过表达miR-125a组、沉默miR-125a组TAZ蛋白相对表达量比较差异有统计学意义(P均<0.05).网站预测显示miR-125a与TAZ存在结合位点,设计突变型序列(TAZ-3'UTR MT),miR-125a与TAZ的非编码区结合,miR-125a的直接下游靶点为TAZ.WT+miR-125a组相对荧光强度低于WT+miR-ctrl组、Mut+miR-ctrl组(P均<0.05),Mut+miR-125a组相对荧光强度与WT+miR-ctrl组、Mut+miR-ctrl组比较差异无统计学意义(P均>0.05).对照2组、miR-125a mimics组、miR-125a mimics+TAZ组转染后第2、3、4、5、6天增殖活力比较差异有统计学意义(P均<0.05),集落形成数比较差异有统计学意义(P均<0.05).结论 miR-125a可抑制鼻咽癌细胞增殖,其作用机制与抑制其下游靶点TAZ的表达有关.

目的 研究含PDZ结合基序的转录共激活因子(TAZ)基因单核苷酸多态性(SNP)与非贲门胃癌发病风险的关系.方法 在460例非贲门胃癌病例和470例对照中,采用聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)技术对TAZ rs16861985、rs1055153、rs6783790、rs12490239进行基因分型,采用非条件性Logistic回归分析各SNP与非贲门胃癌发病风险的关系.结果 TAZ rs16861985与非贲门胃癌的发病风险关联,与携带CC基因型者相比,携带GC基因型者非贲门胃癌的发病风险增加(OR=1.547,95％CI:1.145～2.089);TAZ rs1055153与非贲门胃癌的发病风险关联,与携带GG基因型者相比,携带GT+TT基因型者非贲门胃癌的发病风险降低(OR=0.570,95％CI:0.400～0.814);TAZ rs6783790、rs12490239与非贲门胃癌的发病风险无关联;在TAZ rs16861985、rs1055153、rs6783790、rs12490239构建的单体型中,C-G-A-A单体型降低了非贲门胃癌的发生风险(OR=0.761,95％CI:0.612～0.945),G-G-A-G单体型增加了非贲门胃癌的发生风险(OR=1.894,95％CI:1.314～2.730);TAZ rs16861985、rs1055153、rs6783790、rs12490239的四阶交互作用与非贲门胃癌的发病风险相关(P<0.05).结论 TAZ rs16861985、rs1055153在非贲门胃癌发生中起到了一定的作用;TAZ rs16861985、rs1055153、rs6783790、rs12490239的C-G-A-A单体型降低了非贲门胃癌的发生风险,而G-G-A-G单体型增加了非贲门胃癌的发生风险;TAZ基因rs16861985、rs1055153、rs6783790、rs12490239的交互作用在非贲门胃癌的发生中起到了协同效应.

Hippo信号通路是在果蝇中发现的一条在进化上高度保守,参与调控器官大小及细胞增殖、凋亡的重要信号转导通路,通过一系列激酶级联反应发挥作用.目前已证实Hippo信号通路在肿瘤的发生发展中起关键作用,并且随着对Hippo信号通路的深入研究,发现其与心血管系统、神经系统、免疫系统及其他系统也有重要关系.本研究综述Hippo信号通路及其在肿瘤和各器官系统疾病中的研究进展,并展望Hippo信号通路的研究前景.

Hippo信号通路是一条存在于从低等动物到高等动物,高度保守且由蛋白激酶和转录辅助激活因子组成的级联激酶反应链,整合来自细胞微环境的物理和化学信号,调节多种细胞的形态和功能.生理条件下,Hippo通过磷酸化核心信号轴负性调控YAP/TAZ的转录活性,进而调控下游靶基因转录,参与多细胞生物的增殖、凋亡、分化等生理过程.近年来研究表明,Hippo通路的激活与失活,参与肺纤维化病理过程.本文对Hippo信号通路与肺纤维化的最新研究进展进行综述,为研究肺纤维化的治疗提供参考.