目的:评价高浓度氢气对脓毒症小鼠心肌损伤及哺乳动物不育系20-样激酶1(Mst1)表达的影响。方法:清洁级健康雄性C57BL/6J小鼠105只，6~8周龄，体质量20~25 g，采用随机数字表法分为3组( n＝35)：假手术组(Sham组)、脓毒症组(SEP组)和脓毒症+高浓度氢气组(SEP+HCH组)。采用盲肠结扎穿孔法制备脓毒症小鼠心肌损伤模型。SEP+HCH组术后1和6 h时分别吸入高浓度(66.7%)氢气1 h。每组随机取20只小鼠，观察术后7 d生存情况。于术后24 h时深麻醉后取内眦血样，采用ELISA法测定TNF-α和IL-6浓度，随后处死取心脏组织，光镜下观察病理学结果，TUNEL法观察心肌细胞凋亡情况，Western blot法检测Mst1、动力相关蛋白1(Drp1)和线粒体融合蛋白2(Mfn2)的表达。 结果:与Sham组比较，SEP组术后7 d生存率降低，心肌病理学损伤评分、心肌细胞凋亡指数、TNF-α和IL-6浓度升高，Mst1和Drp1表达上调，Mfn2表达下调( P<0.05)；与SEP组比较，SEP+HCH组术后7 d生存率升高，心肌病理学损伤评分、心肌细胞凋亡指数、TNF-α和IL-6浓度降低，Mst1和Drp1表达下调，Mfn2表达上调( P<0.05)。 结论:吸入高浓度氢气可减轻脓毒症小鼠心肌损伤，其机制可能与下调Mst1表达，改善线粒体动力学，抑制心肌细胞凋亡有关。

目的 研究白头翁汤含药血清对口腔扁平苔藓上皮细胞生物活性及Hippo信号通路的作用机制.方法 将体外建立的口腔扁平苔藓炎症模型细胞采用数字随机法分为4组,对照组、空白组、低剂量组、高剂量组.逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测HOK细胞Toll样受体(TLR)4、肿瘤坏死因子(TNF)-α及核因子(NF)-κB mRNA表达水平.酶联免疫吸附试验(ELISA)检测HOK细胞中白细胞介素(IL)-6、IL-8水平;Western印迹检测HOK细胞中转录共激活因子相关蛋白(YAP)、哺乳动物不育系20样激酶(Mst1)、丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(Lats)1/2蛋白表达.结果 与对照组相比,空白组HOK细胞增殖明显降低,凋亡率、TLR4、TNF-α、NF-κB mRNA、IL-6、IL-8、YAP、Mst1、Lats1/2表达明显升高(P＜0.05).与空白组相比,低剂量组HOK细胞增殖明显升高,凋亡率、TLR4、TNF-α、NF-κB mRNA、IL-6、IL-8、YAP、Mst1、Lats1/2表达明显降低(P＜0.05).与低剂量组相比,高剂量组HOK细胞增殖明显升高,凋亡率、TLR4、TNF-α、NF-κB mRNA、IL-6、IL-8、YAP、Mst1、Lats1/2表达明显降低(P＜0.05).结论 白头翁汤通过降低炎性水平抑制人口腔黏膜角质形成细胞凋亡、促进其增殖,改善病情严重程度,其作用机制与调控Hippo信号通路有关.

目的 探究虎杖苷(PD)对缺氧性肺动脉高压(HPH)新生大鼠肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)增殖与凋亡的影响及其作用机制.方法 将新生大鼠随机分为6组:对照组、模型组、PD低剂量组、PD中剂量组、PD高剂量组、PD高剂量+Hippo通路抑制剂(PD高剂量+XMU-MP-1)组,每组10只.缺氧2周后,检测各组大鼠右心室收缩压(RVSP)和右心室肥厚指数(RVHI),苏木精-伊红(HE)染色观察肺组织病理学变化,并计算肺动脉管壁厚度占总厚度的百分比(WT％)和管壁面积占总面积的百分比(WA％).分离各组新生大鼠PASMCs,分为NC组、低氧(Hypoxia)组、PD低剂量组、PD中剂量组、PD高剂量组、PD高剂量+XMU-MP-1组.CCK-8和EdU检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,免疫印迹(Western blot)检测肺组织和PASMCs中Yes相关蛋白1(YAP1)、PDZ结合域的转录共刺激因子信号通路(TAZ)、哺乳动物不育系20样激酶1(MST1)、B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关蛋白(Bax)蛋白表达.结果 与对照组相比,模型组大鼠肺动脉管壁明显增厚,管腔变窄,RVSP、RVHI、WT％、WA％、YAP1、MST1、TAZ蛋白表达显著升高(均P＜0.05);与模型组相比,PD低、中、高剂量组大鼠肺动脉增厚减少,管腔变大,RVSP、RVHI、WT％、WA％、YAP1、MST1、TAZ蛋白表达显著降低,且PD各组间差异存在剂量依赖性(均P＜0.05);XMU-MP-1可逆转这一结果.与NC组相比,Hypoxia组细胞A450nm值、EdU阳性率、YAP1、MST1、TAZ、Bcl-2蛋白表达显著升高,凋亡率、Bax蛋白表达显著降低(均P＜0.05);与Hypoxia组相比,PD低、中、高剂量组细胞A450nm值、EdU阳性率、YAP1、MST1、TAZ、Bcl-2蛋白表达显著降低,凋亡率、Bax表达显著升高,且PD各组间有剂量依赖性(均P＜0.05);XMU-MP-1可逆转这一结果.结论 PD可能通过抑制YAP1/TAZ信号通路抑制HPH新生大鼠PASMCs增殖,促进凋亡.

目的 探讨Hippo通路对小鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)向Ⅱ型肺泡上皮细胞(AECⅡ)分化、增殖、迁移能力的调控效应.方法 采用直接贴壁法分离培养C57BL/6小鼠原代BMSCs,取第6～7代细胞,通过流式细胞仪检测和诱导其成骨、成软骨、成脂分化并进行鉴定,通过非接触共培养诱导BMSCs向AECⅡ细胞分化.通过2 -脱氧- D -葡萄糖(2-DG)及哺乳动物不育系20样激酶1(MST1)抑制剂9E1调节Hippo通路,用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)和蛋白质免疫印迹试验(Western Blot)检测2-DG及9E1对BMSCs表面活性蛋白(SPB、SPC和SPD)mRNA和表面活性蛋白C前体(pro-SPC)蛋白表达的影响,以评估Hippo通路对BMSCs向AECⅡ细胞分化的作用;用四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测BMSCs的数量变化(用0.1、0.5、1.0、5.0 mmol/L的2-DG干预),以评估Hippo通路对BMSCs增殖能力的影响;用划痕实验及Transwell小室迁移实验评估Hippo通路对BMSCs水平迁移及向急性呼吸窘迫综合征(ARDS)肺组织归巢能力的影响.结果 2-DG呈浓度依赖性激活Hippo通路并促进BMSCs向AECⅡ细胞分化及增殖,其效应在2-DG浓度5 mmol/L时最为明显〔SPB mRNA(2-ΔΔCT):2.42±0.28比1.89±0.11,SPC mRNA(2-ΔΔCT):8.06±0.68比6.59±0.79,SPD mRNA (2-ΔΔCT):6.45±0.37比5.27±0.28,pro-SPC/β-actin :5.80±1.86比4.93±1.18,细胞增殖:(145.46±18.18)%比(98.91±4.36)%,均P＜0.05〕;9E1可抑制BMSCs向AECⅡ细胞分化及增殖〔SPB mRNA(2-ΔΔCT):1.32±0.17比1.89±0.11,SPC mRNA(2-ΔΔCT):3.91±0.34比6.59±0.79,SPD mRNA(2-ΔΔCT):3.38±0.25比5.27±0.28, pro-SPC/β-actin:2.48±0.17比4.93±1.18,细胞增殖:(80.00±7.27)%比(98.91±4.36)%,均P＜0.05〕.2-DG活化Hippo通路能促进BMSCs的水平迁移〔划痕愈合程度:(27.17±3.53)%比(52.45±6.52)%,P＜0.05〕及向ARDS肺组织归巢〔迁移细胞数(倍,相对于对照):2.77±0.21比1.90±0.19,P＜0.05〕,而9E1抑制Hippo通路能逆转上述效应〔划痕愈合程度:(79.89±8.42)%比(52.45±6.52)%,迁移细胞数(倍,相对于对照):1.69±0.13比1.90±0.19,均P＜0.05〕.结论 活化Hippo通路能促进BMSCs向AECⅡ细胞分化、增殖、水平迁移,并增强BMSCs向ARDS肺组织归巢的能力.

目的:研究化浊解毒方对慢性萎缩性胃炎大鼠胃组织Hippo/TAZ信号通路及其相关蛋白转录共激活因子PDZ结合基序(TAZ)、肿瘤抑制激酶(LATS2)、哺乳动物不育系20样激酶(MST1)表达的影响.方法:采用联合造模法建立慢性萎缩性胃炎(CAG)大鼠模型成功后随机分为模型组、维酶素0.06 g/kg组、化浊解毒方7、14、28 g/kg组,灌胃治疗12周.采用HE染色法观察胃黏膜组织病理改变,蛋白质印记法(Western Blot)、实时荧光定量PCR技术检测胃黏膜组织中TAZ、LATS2、MST1蛋白和mRNA的表达.结果:与正常组相比,模型组大鼠胃组织TAZ mRNA和蛋白表达水平显著升高,LATS2、MST1 mRNA和蛋白表达水平显著降低;与模型组相比,化浊解毒方组和维酶素组大鼠一般状态、胃黏膜组织病理变化均改善,胃黏膜组织TAZ蛋白和基因表达水平降低,LATS2、MST1蛋白和基因表达水平升高,并且治疗组中以化浊解毒方28 g/kg组作用最为显著.结论:化浊解毒方在CAG大鼠模型中可通过下调胃黏膜组织中TAZ蛋白和基因表达水平,上调LATS2、MST1蛋白和基因的表达水平而起作用,28 g/kg化浊解毒方能显著改善胃黏膜病理情况,在Hippo/TAZ信号通路的调节过程中,下调TAZ蛋白和基因,上调LATS2、MST1均优于维酶素组.

目的:探讨PCMT1/MST1通路在甲基丙二酸血症脑损伤中的作用.方法:培养小鼠皮层神经元,用不同浓度甲基丙二酸诱导小鼠皮层神经元,观察细胞形态变化.采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测小鼠皮层神经元活力,Western blotting法检测各组(甲基丙二酸诱导组、CGP3466B治疗组和对照组)神经元蛋白异天冬氨酸甲基转移酶1(PCMT1)、磷酸化蛋白激酶(MST1)、裂解MST1(cl-MST1)、磷酸化MST1(p-MST1)、Caspase-3、B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白水平.结果:不同浓度甲基丙二酸诱导24 h显示,甲基丙二酸浓度≤8 mmol·L-1时神经元形态无明显变化;甲基丙二酸浓度为12 mmol·L-1时神经元胞内出现空泡,神经元突起缩短,胞体皱缩;甲基丙二酸浓度为16 mmol·L-1时神经元胞体脱落,突起几乎全部断裂.甲基丙二酸组神经元PCMT1、MST1蛋白相对表达量均低于对照组和CGP3466B治疗组(P<0.05),cl-MST1、p-MST1蛋白相对表达量均高于对照组和CGP3466B治疗组(P<0.05).甲基丙二酸组Caspase-3、Bax蛋白相对表达量均高于对照组和CGP3466B治疗组(P<0.05),Bcl-2蛋白相对表达量均低于对照组和CGP3466 B治疗组(P<0.05).结论:甲基丙二酸可引起皮层神经元凋亡,这可能是通过PCMT1/MST1通路来实现的.

辅助性T细胞1/辅助性T细胞2 (T helper l cells/T helper 2 cells,Th1/Th2)免疫失衡、调节性T细胞/辅助性T细胞17 (regulatory T lymphocytes/T helper 17 cells,Treg/Th17)比例下调以及树突细胞(Dendritic cell,DC)的活化等参与了变应性鼻炎(AR)的发生发展过程.Hippo通路是一种非常保守的信号传导通路,具有调节细胞增殖、凋亡的功能.新近的研究发现,Hippo信号通路中哺乳动物不育系20样激酶1/2、Yes相关蛋白和转录共激活因子PDZ结合基序等主要成员也表达于上述免疫细胞中,并在AR、哮喘等呼吸道变应性炎症的发病中发挥着重要作用.进一步研究Hippo通路有助于深入了解AR的发病机制,本文就Hippo通路的主要成员对Th1/Th2、Treg/Th17和DC的作用进行综述,以期为AR及其他呼吸道变应性疾病的临床治疗提供新的干预靶点和思路.

Hippo信号通路是在果蝇中发现的一条在进化上高度保守,参与调控器官大小及细胞增殖、凋亡的重要信号转导通路,通过一系列激酶级联反应发挥作用.目前已证实Hippo信号通路在肿瘤的发生发展中起关键作用,并且随着对Hippo信号通路的深入研究,发现其与心血管系统、神经系统、免疫系统及其他系统也有重要关系.本研究综述Hippo信号通路及其在肿瘤和各器官系统疾病中的研究进展,并展望Hippo信号通路的研究前景.

目的 探讨哺乳动物不育系20样激酶1(MST1)在小鼠肝脏糖异生途径中的作用及调节机制.方法 RT-qPCR检测MST1 mRNA在糖尿病模型db/db小鼠和对照db/m小鼠肝脏组织中的表达.通过腺病毒感染小鼠肝原代细胞,检测MST1过表达后肝细胞的糖输出能力.在HepG2细胞中,运用荧光素酶报告基因实验检测MST1对磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶(PEPCK)编码基因的启动子活性的作用.利用干扰腺病毒在小鼠肝原代细胞中敲低叉头盒转录因子O1(FOXO1),检测MST1过表达对PEPCK mRNA水平的影响.结果 MST1 mRNA在糖尿病db/db小鼠的肝脏组织中高表达(P<0.001).在小鼠肝原代细胞过表达MST1促进了葡萄糖的输出(P<0.05).在HepG2中,过表达MST1促进了PEPCK mRNA的表达(P<0.001)和启动子活性(P<0.01).进而,当敲低FOXO1表达后,MST1诱导PEPCK mRNA表达的作用消失.结论 MST1促进PEPCK表达参与调控小鼠肝脏糖异生依赖于FOXO1.

目的:研究哺乳动物不育系20样激酶1(Mst1)减轻小鼠非酒精性脂肪性肝炎(NASH)的作用及机制.方法:以野生型C57BL/6小鼠(WT)和全身性Mst1敲除小鼠(Mst1-/-)为实验对象,构建蛋氨酸-胆碱缺乏(MCD)饮食诱导的小鼠NASH模型,并以蛋氨酸-胆碱充足(MCS)饲料为对照.饲料干预4周后,取血,收集肝组织.全自动生化分析仪检测血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)水平;试剂盒检测肝组织总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、丙二醛(MDA)水平及超氧化物歧化酶(SOD)活性;行特殊染色后光镜下观察肝组织形态学变化;免疫组化检测肝组织α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达;PCR检测肝组织炎症因子白介素1 β(IL-1β)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白介素6(IL-6)、趋化因子CCL-2的mRNA表达水平;Western blot检测Nod样受体蛋白3(NLRP3)、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、剪切型天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶1(cleaved-Caspase-1)的蛋白表达.结果:MCD饮食诱导4周后,与野生型小鼠(WT+MCD)相比,Mst1敲除小鼠(Mst1-/-+MCD)血清ALT、AST水平及肝组织TC、TG含量明显降低(P＜0.01);病理染色观察显示,Mst1敲除小鼠肝细胞脂肪空泡减少,炎症细胞浸润及肝脏纤维化明显减轻;进一步检测发现,Mst1敲除小鼠肝组织SOD活性明显升高(P＜0.01),MDA含量明显下降(P＜0.01),同时肝组织炎症因子IL-1β、TNF-α、IL-6和CCL-2的mRNA表达水平明显降低(P＜0.05,P＜0.01),NLRP3、ASC 和 cleaved-Caspase-1 的蛋白表达水平显著下调(P＜0.05,P＜0.01).结论:Mst1 缺乏能够减轻MCD饮食诱导的NASH小鼠肝损伤,其作用机制可能与增强肝细胞抗氧化能力、抑制肝脏NLRP3炎症小体活化有关.