目的:探讨Alisertib(ALS)对人结直肠癌HT29和Caco-2细胞(来自美国典型菌种保藏中心)的诱导细胞凋亡性程序性死亡的作用及与p53表达状态间的关系。方法:采用人结直肠癌HT29和Caco-2细胞进行实验。对照组用同浓度的二甲基亚砜(DMSO)，实验组用0.1、1.0、5.0 μmol/L ALS处理细胞。噻唑蓝(MTT)法检测细胞存活力，计算半数抑制浓度(IC 50)；流式细胞术检测细胞的凋亡率；蛋白质印迹法(Western blot)检测细胞凋亡过程中关键调节分子的蛋白表达。应用Prism软件多重比较通过单因素方差分析(ANOVA)，然后进行Tukey的多重比较。 结果:ALS作用于HT29和Caco-2细胞24、48 h后，IC 50值分别为48.4、9.9、89.2和52.1 μmol/L。用1.0、5.0 μmol/L ALS处理HT29和Caco-2细胞，Aurora A激酶(AURKA)的磷酸化(p-AURKA)水平分别减少为对照组的45.6%、6.3%( F＝100.400, P<0.01)和65.7%、30.7%( F＝26.410， P<0.01)。HT29细胞表达p53蛋白，而Caco-2细胞不表达p53蛋白。与对照组比较，1.0、5.0 μmol/L ALS处理HT29和Caco-2细胞后，细胞凋亡率升高为13.4%、14.3%( F＝11.240, P<0.05)和11.8%、10.5%( F＝9.357, P<0.05)。5.0 μmol/L ALS引起HT29细胞的B细胞淋巴瘤/白血病-2相关X蛋白(bax)、细胞色素C(Cyt-C)、裂解的半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶-3(cleaved Caspase-3)和裂解的聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(cleaved PARP)的表达水平分别升高85%( F＝7.289, P<0.05)、1.6倍( F＝9.640, P<0.05)、1.3倍( F＝12.120, P<0.05)、4.3倍( F＝56.320, P<0.05)，B细胞淋巴瘤/白血病-2(bcl-2)的表达降低为28%( F＝8.849, P<0.01)。在Caco-2细胞中5.0 μmol/L ALS引起RIP、磷酸化Fas相关死亡域蛋白(p-FADD)和cleaved PARP的表达分别增加1.5倍、83%和1.1倍。 结论:ALS分别通过线粒体途径和死亡受体途径诱导HT29和Caco-2细胞发生凋亡性程序性细胞死亡，与p53蛋白是否表达有关。

目的:对比经皮穿刺椎体后凸成形术（PKP）联合不同时机唑来膦酸治疗骨质疏松性椎体压缩骨折（OVCF）的效果。方法:回顾性分析2018年1月至2019年6月北京市顺义区医院110例OVCF患者的临床资料，其中PKP术后第2天开始唑来膦酸治疗55例（同期组），PKP术后1个月开始唑来膦酸治疗55例（非同期组）。两组患者分别于术前和术后1年行X线检查，测量压缩骨折椎体恢复相关指标，包括椎体前缘高度、椎体后缘高度、椎体后凸角及局部Cobb角；采用Oswestry功能障碍指数（ODI）评估患者的功能障碍程度；检测髋部骨密度；检测血清碱性磷酸酶（ALP）、骨钙素、Ⅰ型胶原交联C-末端肽（CTX-1）。患者随访1年，记录椎体压缩骨折的再发情况。结果:两组术前和术后1年椎体前缘高度、椎体后缘高度、椎体后凸角和局部Cobb角比较差异无统计学意义（ P>0.05）；两组术后1年椎体前缘高度和椎体后缘高度明显高于术前，椎体后凸角和局部Cobb角明显小于术前，差异有统计学意义（ P<0.01）。同期组术后1年ODI明显低于非同期组[（11.30 ± 1.53）分比（14.27 ± 1.78）分]，差异有统计学意义（ P<0.01）。同期组术后1年髋部骨密度明显高于非同期组，差异有统计学意义（ P<0.01）。同期组术后1年血清ALP和CTX-1明显低于非同期组[（74.93 ± 8.63） U/L比（78.77 ± 9.41） U/L和（0.24 ± 0.03） ng/L比（0.29 ± 0.03）ng/L]，骨钙素明显高于非同期组[（9.63 ± 1.14） ng/L比（7.97 ± 0.85） ng/L]，差异均有统计学意义（ P<0.01或<0.05）。两组患者均随访1年，未再发生椎体压缩骨折。 结论:OVCF患者采用PKP术后同期唑来膦酸治疗在改善病情和骨代谢方面更具优势。

目的:观察激素性股骨头坏死(SONFH)患者来源骨髓间充质干细胞(BMSCs)分泌的低表达微小RNA(miR)-127-5p细胞外囊泡(EVs)对正常BMSCs增殖及成骨分化的影响。方法:骨髓来源于郑州大学第一附属医院10例需行全髋关节置换手术的患者(激素性股骨头坏死5例，非股骨头坏死5例)，提取其中的BMSCs进行培养。使用差速离心法分离SONFH-BMSCs-EVs并用蛋白质印迹法(Western blot)和纳米颗粒跟踪分析(NTA)鉴定。将正常BMSCs中加入SONFH-BMSCs-EVs作为实验组，对照组加入等量磷酸盐缓冲液(PBS)，用噻唑蓝(MTT)法检测SONFH-BMSCs-EVs对BMSCs的增殖的影响。分别取两组第3代BMSCs，提取总RNA，使用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)检测miR-127-5p的表达差异。取第3代BMSCs进行成骨诱导，诱导过程中加入miR-127-5p mimic、miR-127-5p NC，分别用茜素红染色、MTT法、半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶(Caspase)-3/7活性细胞凋亡检测，来检验miR-127-5p对BMSCs增殖及成骨分化的影响。采用单因素方差分析和 t检验进行统计学分析。 结果:SONFH-BMSCs-EVs为大小不均的圆形膜性囊泡，粒径范围在40～200 nm之间且表达CD63、CD9标志蛋白。共聚焦显微镜下显示EVs可以被BMSC摄取。MTT法显示实验组(0.98±0.20)增殖活性低于对照组(0.40±0.13， t＝5.39， P<0.01)。RT-PCR显示实验组miR-127-5p的相关表达(1.03±0.21)明显低于对照组(0.58±0.12， t＝4.05， P<0.01)。茜素红染色显示SONFH＋miR-127-5p mimic(Smm)组成骨分化染出红色的阳性率远远高于SONFH(S)组。MTT法和Caspase-3/7活性细胞凋亡检测显示Smm组相较于S组，促进增殖(Smm组1.51±0.18，S组1.09±0.17， t＝3.84， P<0.01)，减少凋亡(Smm组0.59±0.12，S组1.02±0.12， t＝5.56， P<0.01)。 结论:SONFH患者来源的BMSCs分泌的低表达miR-127-5p EVs可以抑制正常BMSCs增殖及成骨分化。

目的:探讨局部及全身应用唑来膦酸治疗骨巨细胞瘤的临床效果。方法:回顾性分析2000年1月至2017年1月在山东省立第三医院关节与运动医学外科就诊的骨巨细胞瘤患者42例的临床资料，根据术中及术后是否应用唑来膦酸分为唑来膦酸组( n＝21)和非唑来膦酸组( n＝21)，比较两组患者围手术期手术相关指标、疼痛视觉模拟评分(VAS)、下肢功能国际骨与软组织肿瘤协会(MSTS)评分、不良反应及术后复发情况。 结果:唑来膦酸组和非唑来膦酸组患者的手术时间分别为(158.4±20.5)min、(169.5±19.5)min，术中出血量分别为(236.3±9.7)ml、(228.2±16.5)ml，术后引流量分别为(163.3±7.4)ml、(161.4±9.3)ml，切口愈合时间分别为(13.8±2.1)d、(14.0±2.0)d，差异均无统计学意义( t＝－1.798， P＝0.080； t＝1.936， P＝0.062； t＝0.733， P＝0.468； t＝－0.290， P＝0.774)。两组患者术前VAS评分分别为6.54±1.76、6.72±1.51，MSTS评分分别为13.56±2.35、12.79±1.98，差异均无统计学意义( t＝－0.356， P＝0.724； t＝1.148， P＝0.258)。两组患者术后4周的VAS评分分别为1.32±0.31、1.92±0.19，术后3个月的VAS评分分别为0.93±0.29、1.47±0.38，差异均具有统计学意义( t＝－7.562， P<0.001； t＝－5.177， P<0.001)；末次随访VAS评分分别为0.31±0.12、0.35±0.23，差异无统计学意义( t＝0.707， P＝0.485)。两组患者术后4周的MSTS评分分别为24.89±3.86、21.82±2.95，术后3个月的MSTS评分分别为26.78±2.57、24.62±2.62，差异均具有统计学意义( t＝2.896， P＝0.006； t＝2.697， P＝0.010)；末次随访MSTS评分分别为27.31±2.21、26.69±2.93，差异无统计学意义( t＝0.774， P＝0.443)。两组患者术后复发时间分别为(9.79±2.58)个月、(7.31±1.73)个月，差异有统计学意义( t＝3.659， P＝0.001)。两组患者复发Campanacci分级及复发瘤体位置差异均无统计学意义( U＝7.000， P＝0.860； χ2＝1.062， P>0.999)。两组患者发热发生率分别为23.81%(5/21)、4.76%(1/21)，肌痛发生率分别为19.05%(4/21)、4.76%(1/21)，流感样症状发生率分别为14.29%(3/21)、0(0/21)，胃肠道反应发生率分别为9.52%(2/21)、4.76%(1/21)，差异均无统计学意义( χ2＝1.750， P＝0.186； χ2＝0.980， P＝0.341； χ2＝1.436， P＝0.231； χ2<0.001， P>0.999)，所有患者均未出现肝肾功能损害、下颌骨坏死等严重不良反应。 结论:局部及全身应用唑来膦酸治疗骨巨细胞瘤可改善患者术后早期疼痛及患肢功能，延缓复发时间，可作为骨巨细胞瘤的辅助治疗方案。

目的:探讨缺氧复氧（hypoxia reoxygenation, HR）对H9C2心肌细胞凋亡、自噬和焦亡3种细胞死亡方式的影响。方法:将培养的H9C2心肌细胞按随机数字表法分为正常对照组（Ctrl组）和HR组，其中HR组H9C2心肌细胞在缺氧培养箱中进行氧糖剥夺8h，然后复氧12 h。通过检测细胞培养液中的乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase, LDH）含量及四甲基偶氮唑盐[3-（4,5-dimethylthiazol-2-yl）-2,5 diphenyl tetrazolium bromide, MTT]比色法检测细胞活力来评估细胞损伤情况（每组6孔），Western blot检测（每组9孔）细胞凋亡相关蛋白[天门冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶（cysteinyl aspartate-specific proteinase, caspase）-3、B细胞淋巴瘤/白血病-2(B-cell lymphoma/leukemia 2, Bcl-2）、Bcl相关蛋白（bcl-associate x protein, Bax）]、自噬相关蛋白[（轻链蛋白3(light chain 3, LC3）Ⅱ/Ⅰ、p62、Beclin-1、磷酸化哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（phosphorylated mammalian target of ra-pamycin, p-mTOR）]、焦亡相关蛋白[Nod样受体蛋白-3(nod-like receptor pyrin domain3, NLRP3）、凋亡相关斑点样蛋白（apopto-sis associated speck-like protein, ASC）、caspase-1p20、IL-1β、IL-18]。通过免疫荧光染色进一步评估细胞凋亡、自噬及焦亡情况（每组6孔）。结果:与Ctrl组比较，HR组H9C2心肌细胞HR后细胞活力降低（ P<0.05），LDH释放增加（ P<0.05），活化的cas-pase-3及Bax的表达上调（ P<0.05），Bcl-2表达下降（ P<0.05），TUNEL染色显示HR后细胞凋亡显著增加（ P<0.05），提示HR后细胞凋亡及损伤增加；而p-mTOR、p62均表达增加（ P<0.05），但LC3Ⅱ/Ⅰ和Beclin-1蛋白降低（ P<0.05），LC3Ⅱ/Ⅰ免疫荧光染色显示HR后细胞内的自噬小体增加（ P<0.05），表明HR后H9C2心肌细胞自噬受到明显抑制；同时炎性小体NLRP3、ASC、cas-pase-1p20蛋白均显著上调（ P<0.05），活化的炎症细胞因子IL-1β、IL-18表达增加（ P<0.05），提示HR后NLRP3炎性小体活化，细胞焦亡增加。 结论:H9C2心肌细胞在HR损伤过程中自噬被抑制，细胞焦亡及凋亡增加。

实体器官移植是一种挽救生命和脏器功能衰竭的治疗方法。器官移植需要使用免疫抑制治疗，完整的免疫抑制治疗分为诱导治疗和维持治疗，诱导治疗药物包括抗胸腺细胞免疫球蛋白、巴利昔单抗、阿仑单抗和糖皮质激素等；维持治疗药物包括糖皮质激素、钙调磷酸酶抑制剂，主要包括环孢素和他克莫司；哺乳动物雷帕霉素靶蛋白抑制剂主要包括西罗莫司、依维莫司和贝拉西普；抗增殖类抗代谢类药物包括硫唑嘌呤、吗替麦考酚酯。部分免疫抑制药物与移植后糖尿病（PTDM）的发生密切相关。糖皮质激素、钙调磷酸酶抑制剂和哺乳动物雷帕霉素靶蛋白抑制剂是PTDM的危险因素，而巴利昔单抗也可能是PTDM的危险因素之一；而阿仑单抗或γ-抗胸腺细胞免疫球蛋白则不增加PTDM风险等。PTDM将影响患者的预后及未来心脑血管病的发生，临床上应予重视并及时干预。该文就常用的免疫抑制剂与PTDM发病风险之间的关系进行阐述。

目的:探讨唑来膦酸(zoledronic acid, ZOL)在改善骨质疏松性髋部骨折预后和预防对侧髋部序贯性骨折发生中的应用价值。方法:回顾性分析中国医科大学附属盛京医院诊断为髋部脆性骨折，并接受手术和抗骨质疏松治疗的206例患者，通过生存率分析总结ZOL治疗组患者的预后以及急性期发热反应(acute febrile reaction, AFR)的影响因素。应用卡方检验和二元 logistic回归分析评价ZOL能否减少对侧序贯性骨折的发生。 结果:与对照组比较，ZOL治疗组患者的3年生存率更高( P＝0.026)，而AFR发生率高达53.3%，其中年龄[ OR＝0.786， P＝0.027，受试者工作特征(ROC)曲线下面积为0.724]和合并心肺疾病( OR＝0.043， P＝0.025，ROC曲线下面积为0.628)与AFR具有显著相关性。另一方面，ZOL治疗组中序贯骨折发生率明显低于对照组( χ2＝4.356, P＝0.037)，其中ZOL应用史( OR＝0.160， P＝0.007，ROC曲线下面积为0.586)和股骨颈骨折类型( OR＝0.196， P＝0.001，ROC曲线下面积为0.607)与序贯骨折的发生具有显著相关性。 结论:ZOL能够改善骨质疏松性髋部骨折患者的预后，降低髋部序贯骨折尤其是股骨颈序贯骨折的发生率。高龄和合并心肺疾病可能与ZOL应用后较低的AFR发生风险有关。

目的:探究和厚朴酚对CNE1鼻咽癌细胞周期和凋亡的影响及分子机制。方法:采用不同浓度的和厚朴酚处理CNE1细胞，噻唑蓝（methylthiazolyldiphenyl-tetrazolium bromide，MTT）法测定细胞的活性；将CNE1细胞分为空白对照组，10、20、40 μmol/L和厚朴酚处理组和10 μg/ml顺铂组。流式细胞术检测细胞周期分布，线粒体膜电位检测试剂盒检测细胞线粒体膜电位，原位末端标记（terminal deoxynucleotidyl transferase mediated dUTP nick end labeling，TUNEL）法检测细胞凋亡，免疫印迹检测细胞中增殖细胞核抗原（proliferating cell nuclear antigen，PCNA）和细胞周期蛋白D1（G 1/S specific cyclin D1，cyclin D1）蛋白表达；体外培养CNE1细胞，和厚朴酚处理后进行转录组测序，实时荧光定量反转录聚合酶链反应（quantitative reverse transcription polymerase chain reaction，RT-qPCR）检测Yes激酶相关蛋白（yes-associated protein delta，YAP）mRNA表达，免疫印迹检测磷酸化YAP蛋白（phospho-YAP，p-YAP）以及细胞核中YAP蛋白表达水平，免疫荧光检测YAP蛋白核分布；将细胞分为对照组、哺乳动物STE20样激酶1/2（mammalian STE20-like kinase 1/2 inhibitor，MST1/2）抑制剂（XMU-MP-1）组、和厚朴酚组、XMU-MP-1+和厚朴酚组，利用免疫印迹、流式细胞术和TUNEL法观察Hippo通路在和厚朴酚影响CNE1细胞周期与凋亡中的作用。采用GraphPad Prism 8.0软件对数据进行统计学分析。 结果:与对照组比较，和厚朴酚处理组CNE1细胞活力、线粒体膜电位、PCNA与cyclin D1蛋白表达水平显著降低（ P值均<0.05），G 0/G 1期细胞比例和TUNEL阳性细胞率显著增加（ P值均<0.05）。转录组分析结果发现，差异基因主要富集在Wnt信号通路、肿瘤坏死因子通路和Hippo信号通路等。和厚朴酚处理后，细胞中YAP mRNA表达和细胞核中YAP蛋白表达水平降低，p-YAP蛋白水平升高，较对照组差异有统计学意义（ P值均<0.05）。与和厚朴酚组比较，XMU-MP-1+和厚朴酚组细胞中的p-YAP蛋白表达水平降低（1.157±0.076比0.479±0.038， t=37.120， P<0.05），细胞核中YAP的蛋白表达水平升高（0.143±0.012比0.425±0.031， t=29.181， P<0.05），G 0/G 1期细胞比例降低［（72.494±3.309）%比（58.747±2.865）%， t=17.265， P<0.05］、细胞凋亡水平减少［（53.158±3.376）%比（29.621±2.713）%， t=28.584， P<0.05］。 结论:和厚朴酚能够引起CNE1鼻咽癌细胞周期阻滞，诱导细胞凋亡，这可能是通过调控Hippo/YAP信号通路来实现的。

目的:观察激素性股骨头坏死(SONFH)患者来源的骨髓间充质干细胞(BMSCs)分泌的细胞外囊泡(SONFH-BMSCs-EVs)对正常BMSCs成骨分化的影响。方法:骨髓来源于郑州大学第一附属医院的10例需行髋关节置换术的患者(激素性股骨头坏死5例，非股骨头坏死5例)，提取其中的BMSCs进行培养。采用差速离心法分离SONFH-BMSCs-EVs。将正常BMSCs中加入SONFH-BMSCs-EVs共培养作为实验组，对照组加入等量磷酸盐缓冲液(PBS)，分别用噻唑蓝(MTT)法，半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶(Caspase)-3/7活性实验检测SONFH-BMSCs-EVs对BMSCs的增殖、凋亡的影响。取第3代BMSCs进行成骨诱导，诱导过程中实验组加入SONFH-BMSCs-EVs，再进行茜素红染色，检测其对BMSCs成骨分化的影响。采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)，蛋白质印迹法(Western blot)检测Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)信号通路上成骨相关因子基因、蛋白表达。采用单因素方差分析和 t检验进行统计学分析。 结果:SONFH-BMSCs-EVs为大小不均的圆形膜性囊泡，粒径范围在40~200 nm之间，且表达CD63、CD9标志蛋白。共聚焦显微镜下显示细胞外囊泡可以被BMSCs摄取。MTT法检测BMSCs增殖能力实验组(0.5±0.1)明显低于对照组(1.0， t＝11.160， P<0.01)。Caspase-3/7活性实验检测BMSCs凋亡，实验组(1.4±0.2)明显高于对照组(1.0)，( t＝3.458， P<0.01)。茜素红染色结果显示实验组的红染染色阳性率显著小于对照组。Western blot结果显示Wnt/β-catenin信号通路上关键因子蛋白表达分别为β-catenin(实验组为0.68±0.10，对照组为1.37±0.17， t＝6.960， P<0.01)、Runt相关基因2(Runx2，实验组为0.66±0.13，对照组为1.30±0.16， t＝6.240， P<0.01)，差异均有统计学意义。RT-PCR检测实验组β-catenin、Runx2相对基因表达分别为0.59±0.12、0.66±0.08，差异有统计学意义( t＝6.960、6.240， P均<0.01)。 结论:激素性股骨头坏死患者来源的BMSCs分泌的细胞外囊泡可以抑制正常BMSCs增殖及成骨分化。

目的:探索一种操作简单、实用性强的体内构建大尺寸骨组织的方法。方法:采用大鼠双侧股骨及胫骨原代培养骨髓间充质干细胞（BMSCs），应用流式细胞仪鉴定BMSCs表面标志物、倒置显微镜观察细胞形态、Von Kossa矿化结节染色观察BMSCs成骨分化、油红O染色观察BMSCs的成脂分化情况。用CBD-BMP2（具有胶原结合区的BMP2）和微米级胶原丝结合构建分化微控单元，用大鼠骨髓间充质干细胞（BMSCs）和Cultispher-s胶原微球构建细胞单元。分别用注射器把分化微控单元-细胞单元混合组（实验组）、细胞单元组（对照组1）、分化微控单元组（对照组2）注入到11只SD雄性大鼠背部皮肤下，3组大鼠养至30 d后处死，取出皮下培养出的仿生组织。电镜及显微（Micro）CT扫描观察仿生组织表面和内部结构，对仿生组织进行HE染色、碱性磷酸酶（ALP）染色来观察组织内细胞分布及成骨成分的染色表达。采用5-溴-4-氯-3-吲哚-磷酸盐（BCIP）/四唑淡蓝（NBT）ALP显色试剂盒对仿生组织进行碱性磷酸酶活性检测；能谱分析测定仿生组织的钙离子含量；压缩模量检测仿生组织的生物力学强度。结果:P3代BMSCs表面阳性抗原CD44和CD90表达比例分别为95.11%、96.18%；造血表面标志CD11b和CD45的比例分别为1.18%、1.82%。BMSCs呈梭形、融合成片、旋涡状。BMSCs成骨诱导后可见大量的黑色矿化结节形成；BMSCs成脂诱导后可见大量的圆形红色的脂滴形成。实验组培养出大小约为1.3 cm×2.1 cm×0.6 cm、质地较硬的骨样组织，对照组1组培养出大小为1.0 cm×1.0 cm×0.4 cm、质地软的组织，对照组2未培养出成形组织。电镜及Micro-CT可见实验组仿生组织的外表为高信号的骨性结构，内部也充满大范围的高信号的骨性结构；对照组1仿生组织则未发现高信号结构。HE染色显示实验组形成大量骨组织，对照组1则未形成骨组织。实验组较对照组1产生更多的ALP，且实验组ALP活性高于对照组1[（0.023±0.005）nmol·mg -1·min -1比（0.005±0.002）nmol·mg -1·min -1， P<0.05]。实验组钙离子含量为7.42%，对照组1为0.34%。实验组压缩模量高于对照组1[（2.62±1.41）MPa比（0.03±0.01）MPa， P<0.05]。 结论:利用细胞单元和分化调节单元在体内构建出大尺寸骨组织简单可行。细胞单元和分化微控单元具有可注射性，可以直接将其注入到骨折或者骨缺损处进行治疗，为组织工程走进临床试验提供了新思路。