目的:探究汉黄芩素调节Hippo/Yes相关蛋白(YAP)信号通路对慢性心力衰竭(CHF)大鼠心肌纤维化的影响.方法:采用腹腔注射阿霉素的方式构建大鼠CHF模型,成功造模36只大鼠,将其随机分为模型组、汉黄芩素组(汉黄芩素100 mg/kg)、汉黄芩素+维替泊芬组(100 mg/kg汉黄芩素+100 mg/kg维替泊芬),每组12只.剩余12只大鼠作为对照组.采用彩色多普勒超声系统检测各组大鼠心功能参数:左室射血分数(LVEF)、左室短轴缩短率(LVFS)、左室舒张末期内径(LVEDD)、左室收缩末期内径(LVESD);称重并计算各组大鼠心脏质量指数(HMI)和左心室质量指数(LVMI);酶联免疫吸附法(ELISA)检测心肌组织超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)水平;Masson染色法检测大鼠心肌胶原容积分数(CVF)和血管周围纤维面积和血管管腔面积比值(PVCA/LA);苏木精-伊红(HE)染色观察大鼠心肌组织病理学变化;蛋白免疫印迹(Western Blot)法检测大鼠心肌组织Hippo/YAP信号通路相关蛋白、基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9、结缔组织生长因子(CTGF)表达.结果:与对照组相比,模型组大鼠LVEF、LVFS、心肌组织SOD水平及哺乳动物ste-20样激酶(MST)1/2、大型肿瘤抑制因子(LATS)1/2磷酸化水平明显降低(P＜0.05),LVEDD、LVESD、HMI、LVMI、心肌组织MDA水平、CVF、PVCA/LA、心肌组织YAP、MMP-2、MMP-9、CTGF蛋白表达明 显升高(P＜0.05),心肌组织出现大量胶原纤维沉积和损伤.与模型组相比,汉黄芩素组LVEF、LVFS、心肌组织SOD水平、MST1/2、LATS1/2磷酸化水平明显升高(P＜0.05),LVEDD、LVESD、HMI、LVMI、心肌组织 MDA 水平、CVF、PVCA/LA、心肌组织 YAP、MMP-2、MMP-9、CTGF 蛋白表达明显降低(P＜0.05),心肌组织胶原纤维沉积和损伤减少.维替泊芬增强了汉黄芩素对CHF大鼠心肌纤维化的改善作用.结论:汉黄芩素可能通过激活Hippo/YAP信号通路、抑制YAP表达来减轻CHF大鼠心肌纤维化.

目的:探究和厚朴酚对CNE1鼻咽癌细胞周期和凋亡的影响及分子机制。方法:采用不同浓度的和厚朴酚处理CNE1细胞，噻唑蓝（methylthiazolyldiphenyl-tetrazolium bromide，MTT）法测定细胞的活性；将CNE1细胞分为空白对照组，10、20、40 μmol/L和厚朴酚处理组和10 μg/ml顺铂组。流式细胞术检测细胞周期分布，线粒体膜电位检测试剂盒检测细胞线粒体膜电位，原位末端标记（terminal deoxynucleotidyl transferase mediated dUTP nick end labeling，TUNEL）法检测细胞凋亡，免疫印迹检测细胞中增殖细胞核抗原（proliferating cell nuclear antigen，PCNA）和细胞周期蛋白D1（G 1/S specific cyclin D1，cyclin D1）蛋白表达；体外培养CNE1细胞，和厚朴酚处理后进行转录组测序，实时荧光定量反转录聚合酶链反应（quantitative reverse transcription polymerase chain reaction，RT-qPCR）检测Yes激酶相关蛋白（yes-associated protein delta，YAP）mRNA表达，免疫印迹检测磷酸化YAP蛋白（phospho-YAP，p-YAP）以及细胞核中YAP蛋白表达水平，免疫荧光检测YAP蛋白核分布；将细胞分为对照组、哺乳动物STE20样激酶1/2（mammalian STE20-like kinase 1/2 inhibitor，MST1/2）抑制剂（XMU-MP-1）组、和厚朴酚组、XMU-MP-1+和厚朴酚组，利用免疫印迹、流式细胞术和TUNEL法观察Hippo通路在和厚朴酚影响CNE1细胞周期与凋亡中的作用。采用GraphPad Prism 8.0软件对数据进行统计学分析。 结果:与对照组比较，和厚朴酚处理组CNE1细胞活力、线粒体膜电位、PCNA与cyclin D1蛋白表达水平显著降低（ P值均<0.05），G 0/G 1期细胞比例和TUNEL阳性细胞率显著增加（ P值均<0.05）。转录组分析结果发现，差异基因主要富集在Wnt信号通路、肿瘤坏死因子通路和Hippo信号通路等。和厚朴酚处理后，细胞中YAP mRNA表达和细胞核中YAP蛋白表达水平降低，p-YAP蛋白水平升高，较对照组差异有统计学意义（ P值均<0.05）。与和厚朴酚组比较，XMU-MP-1+和厚朴酚组细胞中的p-YAP蛋白表达水平降低（1.157±0.076比0.479±0.038， t=37.120， P<0.05），细胞核中YAP的蛋白表达水平升高（0.143±0.012比0.425±0.031， t=29.181， P<0.05），G 0/G 1期细胞比例降低［（72.494±3.309）%比（58.747±2.865）%， t=17.265， P<0.05］、细胞凋亡水平减少［（53.158±3.376）%比（29.621±2.713）%， t=28.584， P<0.05］。 结论:和厚朴酚能够引起CNE1鼻咽癌细胞周期阻滞，诱导细胞凋亡，这可能是通过调控Hippo/YAP信号通路来实现的。

目的:探讨长链非编码核糖核酸ZNRD1-AS1(lncRNA ZNRD1-AS1)在胃癌多药耐药(MDR)中的作用及机制。方法:采用24孔板体外培养胃癌MGC-803细胞株，设空白对照组、MDR组、空载质粒组、lncRNA ZNRD1-AS1过表达组、微小核糖核酸-375模拟物(miR-375 mimic)组及联合干预组。除空白对照组以外，均采用阿霉素梯度浓度法建立MDR株。建立成功以后，lncRNA ZNRD1-AS1过表达组和miR-375 mimic组分别采用慢病毒转染法转染lncRNA ZNRD1-AS1过表达质粒和miR-375 mimic，空载质粒组转染空载质粒与模拟物对照(mimic NC)。共培养48 h，采用荧光定量聚合酶链反应(qPCR)检测lncRNA ZNRD1-AS1和miR-375表达，采用蛋白质印迹法(Western blot)实验检测Yes相关蛋白1(YAP1)、哺乳动物不育系20样激酶1(Mst1)、大肿瘤抑制基因-1(Lats1)的蛋白表达，采用噻唑蓝(MTT)实验和流式细胞实验检测细胞的增殖活力与凋亡率，Transwell实验检测MGC-803细胞侵袭能力。结果:各组之间的lncRNA ZNRD1-AS1、miR-375、YAP1表达水平差异均有统计学意义( F＝60.465、75.695、63.441，均 P<0.05)；细胞增殖活力、凋亡率与侵袭数目差异也有统计学意义( F＝ 26.818、63.854、16.323，均 P<0.05)。MDR组lncRNA ZNRD1-AS1和YAP1表达水平分别为1.736±0.084和0.825±0.135，高于对照组(1.025±0.036和0.155±0.02)，miR-375表达为0.054±0.018，低于对照组(0.128±0.028)；细胞增殖活力和迁移数目分别为0.855±0.026和152.5±20.5，高于对照组(0.652±0.015和85.0±15.5)，凋亡率为(3.85±1.02)%，低于对照组[(6.55±1.05)%， P<0.05]。lncRNA ZNRD1-AS1过表达组lncRNA ZNRD1-AS1和YAP1表达水平分别为6.582±1.035和1.256±0.185，均高于MDR组，miR-375表达水平为0.015±0.011，低于MDR组；细胞增殖活力和迁移数目分别为0.987±0.030和(202.5±32.5)个，高于MDR组，凋亡率为(2.03±0.62)%，低于MDRMDR组( P<0.05)。miR-375 mimic组lncRNA ZNRD1-AS1和YAP1表达水平分别为0.225±0.086和0.056±0.035，均低于MDR组，miR-375表达水平为32.524±5.254，高于MDR组；细胞增殖活力和迁移能力为0.562±0.085和(80.5±14.6)个，低于MDR组，凋亡率为(18.25±2.10)%，高于MDR组( P<0.05)。共干预组各个指标的变化水平介于lncRNA ZNRD1-AS1过表达组与miR-375 mimic组之间，与两组比较差异有统计学意义( P<0.05)。 结论:lncRNA ZNRD1-AS1能够通过miR-375调节胃癌细胞的行为学特征，从而促进MDR，其机制可能与YAP1介导的Hippo信号通路有关。

目前，在临床中仅应用自体骨已不能满足骨缺损治疗的需求。β-磷酸三钙（beta-tricalcium phosphate，β-TCP）类骨移植替代物因具有良好的修复效果和一定的骨诱导能力而受到广泛关注。可降解β-TCP植入人体后可有效调控炎症，促进血管再生，并以膜内成骨的方式形成新骨，实现骨缺损的愈合。对β-TCP诱导间质干细胞分化为成骨细胞机制的探索也从未停止，最初将骨诱导性归功于被释放钙磷离子和被吸附蛋白的功能，最近的研究热点是材料表面结构对细胞的影响（即整合素与细胞骨架被改变），以及调节信号通路的传导，包括丝裂原活化蛋白激酶/细胞外信号调节激酶（mitogen-activated protein kinase，MAPK/extracellular regulated protein kinases，ERK）通路、WNT家族分泌蛋白通路、Hippo-Yes相关蛋白/转录共激活因子（Yes-associated protein，YAP/transcriptional coactivator with PDZ-binding motif，TAZ）通路等。目前，β-TCP产品的基础结构日趋成熟，宏观与微观设计也被不断创新，相关骨移植替代物广泛用于临床，经临床研究证实具有长期的安全性和有效性。

目的:探讨紫草素在大鼠肝移植缺血再灌注损伤的作用机制。方法:采用随机数字表法将36只健康雄性SD大鼠随机分为4组：对照组(CTRL)、假手术组(SH)、肝移植组(LT)、紫草素组(SKLT)。CTRL和SH每组6只大鼠，LT和SKLT供、受体各6只大鼠。采用二袖套法建立大鼠原位肝移植模型，SKLT术后给予紫草素15 mg/kg灌胃。于术后24 h获取大鼠血清和肝脏组织。免疫组织化学法检测肝脏组织中B淋巴细胞瘤-2基因(bcl-2)、bcl-2相关X蛋白(bax)和半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶-3(Caspase-3)的蛋白表达；蛋白质印迹法(Western blot)检测肝脏组织中大肿瘤抑制因子1(LATS1)、丝氨酸苏氨酸激酶3(MST1)和Yes相关蛋白(YAP)的蛋白表达。组间比较采用独立样本 t检验。 结果:免疫组织化学显示，SKLT的bax和Caspase-3阳性面积比例显著低于LT组(bax：0.061±0.002比0.084±0.005， t＝11.470， P<0.05；Caspase-3：0.148±0.008比0.210±0.029， t＝7.328， P<0.05)，而bcl-2阳性面积比例显著高于LT组(0.127±0.036比0.069±0.014， t＝3.752， P<0.05)。Western blot结果显示，SKLT的LATS1和MST1蛋白的表达显著高于LT组(LATS1：1.56±0.14比1.11±0.30， t＝5.715， P<0.05；MST1：1.80±0.38比1.32±0.31， t＝4.190， P<0.05)，而YAP蛋白的表达显著低于LT组(1.42±0.10比1.80±0.07， t＝11.580， P<0.05)。 结论:紫草素可能通过激活Hippo信号通路来减少大鼠肝移植缺血再灌注损伤中的肝细胞凋亡。

目的:探讨五味子甲素对前列腺癌细胞增殖、凋亡的影响及其作用机制。方法:培养人前列腺癌DU145细胞并分为DU145组(正常培养)、五味子甲素L组(加入50 μmol/L五味子甲素)、五味子甲素M组(加入100 μmol/L五味子甲素)、五味子甲素H组(加入150 μmol/L五味子甲素)和辛伐他汀组(加入50 μmol/L辛伐他汀)。显微镜下观察各组细胞形态，CCK8法检测细胞增殖能力，细胞划痕实验检测细胞迁移能力，Transwell实验检测细胞侵袭能力，流式细胞术检测细胞凋亡情况，Western blotting法检测磷酸化(p)-哺乳动物STE20样蛋白激酶1(MST1)、MST1、p-大肿瘤抑制因子1(LATS1)、LATS1、p-Yes相关蛋白(YAP)及YAP蛋白表达。计量资料以均数±标准差( ± s)表示，多组间比较采用单因素方差分析，两组间比较采用 t检验。 结果:与DU145组对比，五味子甲素L、M、H组及辛伐他汀组细胞数量减少且细胞逐渐皱缩、间距变大，细胞存活率[(100.00±0.00)%、(88.41±9.36)%、(62.34±7.31)%、(42.57±5.01)%、(45.47±5.65)%]、迁移[(90.11±13.43)%、(74.16±8.08)%、(57.53±7.34)%、(41.34±6.79)%、(43.44±5.26)%]和侵袭能力[(89.01±10.31)%、(73.11±9.23)%、(55.62±7.67)%、(41.13±6.35)%、(40.36±5.68)%]及p-YAP/YAP蛋白表达水平(0.98±0.08、0.83±0.11、0.69±0.07、0.55±0.07、0.53±0.05)显著下降，凋亡率[(2.88±0.34)%、(5.20±0.57)%、(8.37±0.94)%、(12.71±1.58)%、(12.03±2.21)%]和p-MST1/MST1(0.41±0.04、0.53±0.07、0.75±0.07、0.89±0.08、0.88±0.07)、p-LATS1/LATS1蛋白表达水平(0.40±0.04、0.52±0.06、0.64±0.06、0.77±0.08、0.79±0.08)显著提高，差异均具有统计学意义( P<0.05)。 结论:五味子甲素可能通过抑制Hippo-YAP信号通路抑制前列腺癌细胞增殖，促进细胞凋亡。

经典的Hippo通路通过激酶反应导致下游效应分子Hippo-Yes相关蛋白（Yap）和转录共激活因子（Taz）丝氨酸位点的磷酸化，从而在促进细胞增生、控制细胞极性、改变细胞骨架、上皮细胞-间充质转化和细胞接触抑制等多种病理生理过程中发挥重要调控作用。研究表明，Yap/Taz会影响玻璃体视网膜疾病的进展过程，为糖尿病视网膜病变、增生性玻璃体视网膜病变、视网膜缺血再灌注损伤等发病机制研究和临床治疗开辟了新的前景。探索Yap/Taz的分子机制为未来研究治疗糖尿病视网膜病变、增生性玻璃体视网膜病变等视网膜纤维化疾病提供一个可能的治疗靶点。同时，调控视网膜局部Yap/Taz的活性也将成为视网膜缺血再灌注损伤中损伤-修复的有效治疗靶点。但Yap抑制剂有潜在的视网膜毒性，目前仍处于临床前研发阶段，进一步研究Yap抑制剂的作用机制和临床安全性将为视网膜疾病的治疗提供新方法。

目的 探究毛兰素(ERI)对多囊卵巢综合征(PCOS)大鼠卵巢颗粒细胞凋亡的影响及机制.方法 通过皮下注射脱氢表雄酮构建PCOS大鼠模型,将造模成功的大鼠随机分为PCOS组,ERI低、中、高剂量组(10、20、40 mg/kg)和ERI高剂量+维替泊芬组(40 mg/kg ERI+10 mg/kg维替泊芬),每组10只;另取10只正常大鼠作为正常组.各给药组大鼠灌胃相应剂量的ERI和/或腹腔注射维替泊芬,PCOS组和正常组大鼠灌胃等体积的1%二甲基亚砜,每日1次,连续6周.给药结束后,检测各组大鼠体重和空腹血糖(FPG),血清中雌二醇(E2)、睾酮(T)、卵泡刺激素(FSH)、黄体生成素(LH)水平,观察卵巢组织形态学变化,分析卵巢组织细胞凋亡情况,检测卵巢组织中凋亡相关蛋白[B细胞淋巴瘤2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、胱天蛋白酶3(Caspase-3)]和Hippo-YAP信号通路相关蛋白[大肿瘤抑制激酶1(LATS1)、磷酸化LATS1(p-LATS1)、Yes相关蛋白(YAP)、磷酸化YAP(p-YAP)、转录共激活子因子PDZ结合基序(TAZ)]表达水平.结果 与PCOS组比较,ERI低、中、高剂量组大鼠卵巢多囊特征减轻,闭锁卵泡数量减少,颗粒细胞层增厚,体重、FPG水平、T水平、LH水平、LH/FSH、囊性卵泡数量、细胞凋亡指数和Bax、Caspase-3、p-LATS1、p-YAP蛋白表达水平均显著降低或减少(P＜0.05),黄体数量、E2水平和Bcl-2、LATS1、YAP、TAZ蛋白表达水平均显著升高或增多(P＜0.05).与ERI高剂量组比较,ERI高剂量+维替泊芬组大鼠的上述指标变化均被抑制(P＜0.05).结论 ERI能促进PCOS大鼠卵巢颗粒细胞增殖,调节性激素水平,其作用机制可能与抑制Hippo-YAP信号通路有关.

目的 研究中药脊髓康含药血清联合SRY转录盒因子2(SOX2)诱导星形胶质细胞重编程为神经元的作用机制.方法 将30只成年SD大鼠随机分为假手术组(Sham组)、模型组(SCI组)和治疗组,10只/组.SCI组和治疗组均采用改良Allen法构建脊髓损伤大鼠模型,于术后分别给予生理盐水、脊髓康等量灌胃.在术前1 d、术后3、7、14 d进行Basso-Beattie-Bresnahan(BBB)评分和斜板实验.相同方法构建脊髓损伤大鼠模型,提取损伤部位组织进行单细胞RNA测序,再使用生物信息学对"脊髓康"、"脊髓损伤"、"糖酵解"关联基因进行靶点分析.成年SD大鼠以生药量15 g·kg-1·d-1脊髓康灌胃,连续3 d后腹主动脉采血制备脊髓康含药血清.体外培养大鼠幼仔皮层脑组织三代星形胶质细胞,分为SOX2组、SOX2+JSK组.SOX2组加入10 mmol/L SOX2;SOX2+JSK组加入10 mmol/L SOX2、2.5％脊髓康含药血清.培养21 d后,Western blot检测细胞中丙酮酸激酶M2型(PKM2)、磷酸化丙酮酸激酶M2型(p-PKM2)、Yes-相关蛋白(YAP)表达,使用免疫荧光多标染色观测PKM2与YAP共定位情况.结果 治疗组大鼠的BBB评分与斜板实验角度明显提升,且各时段均优于SCI组(P<0.05).SCI部位PKM2基因在各类细胞中均有高活性表达;生物信息学分析靶点指向HIPPO-YAP信号通路;与SOX2组比较,整个细胞中SOX2+JSK组PKM2表达增高(P<0.05)、p-PKM2、YAP表达亦升高(P<0.001),且更多PKM2磷酸化入核.SOX2+JSK组PKM2与YAP共定位情况高于SOX2组.结论 中药脊髓康含药血清联合SOX2可能通过提高糖酵解中PKM2与YAP共定位,从而将星形胶质细胞重编程诱导为神经元细胞,促进神经损伤修复.

目的 探讨小豆蔻明(Cardamonin,CAR)对脑梗死大鼠模型血脑屏障(Blood-brain barrier,BBB)及 Hippo-p-Yes 相关蛋白(Yes associated protein,YAP)/转录共激活因子(Tafazzin,TAZ)信号通路的影响.方法 建立脑梗死大鼠模型,所有大鼠分为对照组[Control(CT)组]、[模型组(Model(M)组]、CAR低剂量组(CAR L 组,5 mg·kg-1·d-1 CAR)、CAR 高剂量组(CAR H 组,20 mg·kg-1·d-1 CAR)和 CAR 高剂量+PY60组(CAR H+PY60组,20 mg·kg-1·d-1 CAR+10 mg/mL PY60);给药期间各组大鼠做神经功能评分;给药结束后苏木精-伊红(Hematoxylin-eosin,HE)染色观察脑组织病理变化,氯化三苯基四氮唑(Triphe-nyl-tetrazolium chloride,TCC)染色测定脑梗死体积,免疫组化检测脑组织闭合蛋白(Occludin)、紧密连接蛋白(Claudin-5)的表达水平,计算脑含水量和伊文思蓝(Evans blue,EB)渗透量,Western blot技术验证脑组织磷酸化(Phosphorylation,p)-哺乳动物 STE20 样蛋白激酶 1(Mammalian sterile20-like kinase1,MST1)、MST1、p-大肿瘤抑制因子 1(Large tumor suppressor factor 1,LATS1)、LATS1,p-YAP,YAP 蛋白表达水平.结果 与CT组比较,M组大鼠脑组织细胞间隙变大且有大量炎症细胞浸润及少量空泡变性,神经功能评分、脑梗死体积、脑含水量、EB渗透量及p-YAP/YAP蛋白表达水平升高,Occludin,Claudin-5,p-MST1/MST1,p-LATS1/LATS1蛋白表达水平降低(P＜0.05);与M组比较,CAR L,H组大鼠炎症细胞浸润、细胞空泡变性、细胞间隙减少,脑组织结构更完整,神经功能评分、脑梗死体积、脑含水量、EB渗透量及p-YAP/YAP蛋白表达水平降低,Occludin,Claudin-5,p-MST1/MST1,p-LATS1/LATS1 蛋白表达水平升高(P＜0.05);与CAR H组比较,CAR H+PY60组大鼠炎症细胞浸润和细胞空泡变性增加,神经功能评分、脑梗死体积、脑含水量、EB 渗透量及 p-YAP/YAP 蛋白表达水平升高,Occludin,Claudin-5,p-MST1/MST1,p-LATS1/LATS1蛋白表达水平降低(P＜0.05).结论 CAR可能通过抑制YAP/TAZ信号通路来改善脑梗死大鼠模型BBB功能.