目的 通过比较胶体金免疫层析试验(GICA)与酶联免疫吸附试验(ELISA)、光激化学发光法(LICA)、化学发光免疫分析法(CLIA)对梅毒螺旋体抗体检测的性能指标,探寻GICA法在检测梅毒螺旋体抗体的价值以及患者自检的可能.方法 选取2022年2～5月收集的合肥市滨湖医院住院患者、门诊就诊者以及体检者共143人份血清标本,同时采用GICA、LICA、ELISA、CLIA、梅毒螺旋体颗粒凝集试验(TPPA)进行梅毒螺旋体抗体检测.以TPPA结果为金标准,分析GICA与LICA、ELISA、CLIA的灵敏度、特异度、阴性预测值、阳性预测值,并与TPPA比较得出一致性以及符合率;通过绘制出GICA、LICA、ELISA、CLIA的受试者工作特征(ROC)曲线并对曲线下面积进行比较;根据计算所得最佳临界值进行分区,比较不同区间的TPPA符合率与GICA的TPPA符合率大小.结果 GICA的特异度与ELISA、LICA比较,差异有统计学意义(P<0.05);GICA的特异度和阳性预测值均高于CLIA,差异有统计学意义(P<0.05).GICA与TPPA的符合率均高于ELISA、LICA、CLIA,差异有统计学意义(P<0.05).ELISA和LICA与GICA的符合率均高于CLIA与GICA的符合率,差异有统计学意义(P<0.05).通过交叉示意图可见,GICA阳性时至少伴有其他2种方法同时阳性.GICA的ROC曲线下面积与ELISA、LICA、CLIA相比较,差异无统计学意义(P>0.05).分区后发现ELISA、LICA和CLIA的S/CO值(样本吸光值/临界值)分别在1.00～12.00、1.00～10.00、1.00～4.00时的TPPA符合率与GICA的TPPA符合率存在统计学差异(P<0.05).结论 GICA作为快速诊断梅毒的重要手段,其各项指标均优于ELISA、LICA、CLIA,还能作为此3种方法初筛梅毒抗体阳性后的复检方法,为日后患者自检模式的实现也提供了可能性.

目的 采用光激化学发光分析(LICA)技术建立快速定量检测人高迁移率族蛋白B1(HMGB1)的方法.方法 采用2株配对的HMGB1单克隆抗体(简称单抗),1株单抗包被受体微球,另1株单抗先用生物素标记,再与链霉亲合素的供体微球共同组成人HMGB1的LICA检测方法,进而优化反应体系并对方法的各项性能指标进行评价.分别测定普通肺炎患者(35例)和重症肺炎患者(25例)血清HMGB1的浓度,并与健康体检者(35名)进行比较.结果 建立的HMGB1HCA检测方法的灵敏度为0.1μL,线性测量范围为0.1～1 000 μg/L;批内和批间精密度分别为1.74％～ 2.92％和1.93％～3.73％,均低于5％;回收率范围为94.53％～ 106.37％,平均回收率为99.74％;与酶联免疫吸附测定方法有良好的相关性(r=0.888 2);与HMGB2和HMGB3重组抗原无明显交叉反应,特异性良好.普通肺炎患者和重症肺炎患者血清HMGB1的质量浓度分别为(6.76±3.13)和(19.69±9.04) μg/L,均高于健康体检者[(1.49±0.74) μg/L;t值:-5.447和-5.186,均P＜0.01],普通和重症肺炎患者间差异亦有统计学意义(t=-3.500,P＜0.01).结论 LICA法检测HMGB1灵敏度高、特异性强、结果可靠,且具有均相、快速、免清洗等特点,有良好的临床应用前景.

目的 采用电化学发光免疫分析法(ECL)与光激化学发光免疫分析法(LiCA)分别测定血清促甲状腺激素(TSH)水平,分析LiCA检测TSH的性能,以及两种方法检测的符合程度.方法 按罗氏Cobase601甲状腺功能初筛结果区间要求,选取132份临床检测标本,其中灰区标本占比＞15％,异常标本占比＞40％.分析两种方法的精密度、测定结果的相关性,以及诊断性能.结果 LiCA检测高、低水平质控品批内变异系数(CV)、批间CV均较ECL小(P＜0.05).相关性分析提示,ECL与LiCA检测TSH的线性回归方程为Y=0.889 9X-0.042 4,决定系数R2 =0.998,两种方法的测定值之间存在着高度相关性(P＜0.01).两种方法判定甲状腺功能的总体符合率为87.12％,Kappa值为0.801,具有高度一致性.两种方法对甲状腺功能亢进、甲状腺功能减退一致性判定上的差异无统计学意义(P＞0.05).结论 两种方法测定TSH的性能无明显差异,且LiCA为均相反应,具有快速、免清洗、精密度高、成本低等优点,适用于临床检测,尤其适用于大批量标本检测.

目的 基于光激化学发光技术平台初步建立血清催乳素(PRL)的分析方法,并评估其性能指标.方法 将发光纳米微球和生物素分别标记于一对人PRL单抗,两者与血清中待检PRL、链霉亲合素标记的感光微球(通用感光溶液)在均相条件下形成双抗体夹心的检测体系,对该检测体系的性能指标和相关性进行评价.结果 本方法的批内变异系数和日间变异系数分别为4.60％和5.25％;功能灵敏度为2.48μIU/mL,可报告范围为2.48～4240μIU/mL;回收试验加入浓度为42.2、424、4240μIU/mL PRL标准品时的回收率为96.25％～102.93％;胆红素<20 mg/dL、血红蛋白<200 mg/dL、三酰甘油<3000 mg/dL、生物素<20 ng/mL时,均无干扰现象发生;该方法与贝克曼Unicel Dxi 800 Access 2增强化学发光酶免疫分析法具有良好的相关性.结论 光激化学发光法检测血清PRL的方法具有良好的分析性能,可满足临床诊断需求.

目的:建立一种基于光激化学发光分析(LiCA)技术定性检测血清CMV-IgM抗体的新方法.方法:利用CMV抗原包被的发光微球,生物素标记的鼠抗人IgM抗体以及链霉亲和素包被的感光微球共同构成完整的分析体系,优化反应缓冲液、抗原抗体工作浓度和待检血清稀释比例,并进行方法学评价和临床结果比对.结果:本方法的批内和批间变异系数为5.3％～6.1％和6.9％～9.8％,均小于10％;ROC曲线分析显示,曲线下面积为0.997,灵敏度为100％,特异度为98.9％;在100例血清样本的检测中,本方法与LIAISON检测结果符合率为95.0％.结论:成功建立了LiCA间接法反应模式定性检测CMV-IgM抗体的方法.该检测方法操作简单、快速、灵敏度高,有潜在的临床应用前景.

目的 建立一种快速检测金黄色葡萄球菌肠毒素A(SEA)的均相光激化学发光免疫分析法(AlphaLISA).方法 待测样本中的SEA与偶联有羊抗SEA多克隆抗体的受体微球、生物素化的小鼠抗SEA单克隆抗体发生反应,形成双抗体夹心结构,再与包被链霉亲和素的供体微球形成复合体.680 nm波长荧光激发供体微球上的光敏剂产生单线态氧,触发受体微球发出615 nm波长荧光,多功能酶标仪检测信号值,信号值高低与待测样本中SEA的浓度呈正比.结果 缓冲液中SEA的最低检出限(LOD)为0.1 ng/ml,线性范围0.2～50 ng/ml,相关系数R2为0.9941.检测体系不易受高糖、高盐和高蛋白等样本基质的影响,牛乳等液态模拟样本和10％(w/v)稀释的奶粉、豆干、火腿肠等固态食品模拟样本的LOD均为0.1 ng/ml.检测体系与其他4种肠毒素(SEB、SEC、SED、SEE)、A型肉毒毒素、蓖麻毒素、相思子毒素均无交叉反应,特异性较好.无论是缓冲液还是模拟样本检测,变异系数均小于10％,具有较好的重复性.结论 该法操作流程简便,检测灵敏度高、特异性强,检测时间为25 min,在金黄色葡萄球菌性食物中毒的鉴别诊断中具有较好的应用前景.

目的 建立均相光激化学发光免疫分析方法(AlphaLISA)快速检测新型冠状病毒(SARS-CoV-2).方法 采用新型冠状病毒抗体偶联发光微球,生物素标记另一抗体,以及链霉亲和素偶联感光微球构建新型冠状病毒AlphaLISA检测体系.采用SARS-CoV-2真核表达抗原和灭活病毒对AlphaLISA方法进行评价,并与商业化ELISA试剂盒进行比对.结果 确定单抗1#与多抗组别作为新型冠状病毒AlphaLISA检测的抗体对,AlphaLISA对新型冠状病毒抗原的检出限为0.39 ng/ml,具有较好的重复性,批内差1.90％～8.93％,批间差1.75％～9.04％,对不同临床样本的检测具有较好的耐受性,与ELISA试剂盒相比对灭活病毒的检测敏感性更高.结论 AlphaLISA可实现对SARS-CoV-2的高效快速检测.