目的:探讨新型五点定位法点状接触式钳型固定椎弓根导航模板在脊柱侧凸复杂椎弓根置钉中的应用。方法:回顾性收集2019年2月至2023年2月北京积水潭医院贵州医院脊柱外科收治的存在椎弓根复杂情况（椎弓根发育不良或椎板融合）的脊柱侧凸患者30例（导航模板组），男11例、女19例，年龄（16.54±6.23）岁（范围7~35岁）；匹配60例既往病例资料作为对照组（徒手置钉组），男 23例、女 37例，年龄（16.72±6.34）岁（范围6~35岁）。于脊柱侧凸矫形术中使用五点定位法点状接触式钳型椎弓根导航模板引导置钉，记录置钉时间、置钉出血量、置钉透视次数、手动改道次数，并评估Rao椎弓根螺钉置入分级及准确率、置钉并发症和主弯矫正率。结果:导航模板组30例均顺利完成手术操作，共置入354枚螺钉，徒手置钉组60例共置入727枚螺钉，手术时间分别为（279.45±57.72）、（292.54±58.87） min，术中出血量分别为（921.57±371.32）、（932.83±376.65） ml，差异有统计学意义（ t=-2.13， P=0.022； t=-1.87， P=0.024）。导航模板组置钉时间（82.87±24.46） min、置钉出血量（72.25±43.66） ml，徒手置钉组分别为（97.53±25.56） min、（106.53±61.22） ml，两组差异有统计学意义（ t=-2.66， P=0.031； t=-2.32， P=0.027）。导航模板组置钉透视次数（4.21±1.11）次、手动改道次数（0.47±0.64）次，徒手置钉组分别为（6.32±1.81）次、（0.93±0.86）次，差异有统计学意义（ t=-4.66， P<0.001； t=-2.78， P=0.018）。导航模板组Rao椎弓根螺钉置入分级Ⅰ级329枚、Ⅱ级19枚、Ⅲ级6枚，徒手置钉组Ⅰ级669枚、Ⅱ级45枚、Ⅲ级12枚、Ⅳ级1枚，两组差异无统计学意义（χ 2=4.26， P=0.547）。导航模板组置钉准确率为98.31%±3.10%、主弯矫正率为57.85%±9.46%，徒手置钉组为98.21%±4.92%、56.64%±9.22%，差异均无统计学意义（ t=0.88， P=0.384； t=0.42， P=0.663）。所有患者术中、术后均未出现神经损伤，未发生大血管损伤，无脑脊液漏、感染、死亡，未出现内固定移位、松动及断裂。 结论:五点定位法点状接触式钳型3D打印椎弓根导航模板适配各种畸形椎板关节突，可避免漂移现象，避免广泛彻底剥离后方结构，操作简便，透视次数少、置钉准确率高。

环状RNA(circular RNA，circRNA)是近些年才发现的一类具有独特闭合环状结构的非编码RNA，由前体mRNA反向剪接产生。近年来的研究表明circRNA具备多样化的生物学功能，例如吸附微小RNA、影响RNA线性剪接和作为翻译的模板等，其表达及功能异常与多种疾病的发生发展密切相关。本文在介绍circRNA的生物学属性和功能的基础之上，综述了病毒和宿主编码circRNA的表达与功能的研究进展，以期为理解病毒与宿主间复杂的相互作用提供新的视角。

目的:探索和评价数字化外科技术用于引导 125I粒子植入治疗头颈深部肿瘤的精确性、适形性和临床应用价值。 方法:回顾性选取12例行 125I放射性粒子近距离放疗的头颈深部肿瘤患者。治疗前基于CT图像设计插植针和粒子位置。根据治疗计划构建数字化定位模型将计划的插植针位置精准导入至手术导航系统，并根据患者面部外形轮廓和插植针位置方向设计打印个体化穿刺引导模板。术中在导航引导下进行模板核准就位，在导航系统的可视化针道、实时插植针位置和模板导向孔共同引导下进行插植针穿刺和放射性粒子植入。CT检查验证插植针与粒子的位置，并计算实际靶区剂量分布，观察术中及术后是否出现血肿、疼痛、感染、穿刺点不愈合、肿瘤细胞种植等不良反应。 结果:12例患者均在数字化外科技术引导下完成插植针穿刺和放射性粒子植入，实时可视化引导效果佳，插植针、粒子与治疗计划中的位置、数目相符，空间分布均匀。术后剂量验证 D90范围为83.7～131.0 Gy，平均107.5 Gy； V100范围为89.6%～99.3%，平均94.6%； V150范围为40.2%～58.9%，平均47.8%。术中术后未出现严重不良反应。 结论:采用数字化外科技术，将手术导航系统与3D打印个体化穿刺引导模板结合共同引导插植针穿刺和 125I粒子植入，提高了近距离放疗的精确性和适形性，在头颈部近距离放疗特别是深部解剖结构复杂区具有临床应用价值。

FLT3内部串联重复（ITD）突变是急性髓系白血病中常见的基因突变，具有重要的预后分层和靶向治疗指导意义。随着高通量测序技术的广泛应用和对突变序列分析能力的提升，发现超过半数的FLT3-ITD突变并不只是单纯的串联重复，还伴有非模板序列添加等复杂情况。近期的研究揭示了FLT3长度突变（FLT3-LM）的序列特征、发生机制及相关临床预后意义。伴非模板序列添加的FLT3-LM由异常活化的末端脱氧核苷酸转移酶参与形成，这部分患者在化疗、靶向治疗和异基因造血干细胞移植治疗时表现出不同的治疗反应和预后。这为更精准理解FLT3-LM提供了新的视角，同时提出了基于发生机制的FLT3-LM分型建议。新的分型规则更能体现疾病生物学特征的差异，更精准地指导FLT3-LM患者的预后分层和个体化治疗方案的制订。

目的:为解决传统临床病种库系统存在的依赖大量人工判断、缺乏辅助标注、电子病历数据可用性差等问题,设计一种基于后结构化技术的临床病种库系统.方法:先通过I2B2标准以及双向长短期记忆网络(bi-directional long short-term memory,BiLSTM)模型构建实体识别模型,形成病历模板库,然后组合病历模板库形成关系模板,抽取复杂的医学实体,实现电子病历的后结构化.之后,基于电子病历后结构化技术构建包括病历结构化、结构化评估、数据标注、常规功能和系统管理5个模块的临床病种库系统.结果:该系统可以将电子病历文本转化为结构化语言,提供更精细化的数据要素提取、更智能的结构化服务,提高了临床和科研工作的效率.结论:该系统提高了临床病种的数据可用性,减轻了用户数据加工的工作强度,保证了数据应用的高质量,为医学研究、临床辅助决策打下了坚实的基础.

空间注册是手术导航系统获得手术空间与图像空间转换关系的关键步骤.针对现有手术导航系统存在的空间注册过程操作复杂、耗时长问题,本研究提出了一种基于编码散斑结构光的空间注册方法,设计了一种包含不同半径的圆形点阵光斑的散斑模板用于重建手术空间点云,通过与图像空间进行由粗到精的点云配准完成空间注册.实验表明,该方法在提升整体注册效率的同时,保证了较高的空间注册精度,整体注册时间小于 10 s,所有靶点的平均注册精度为(0.89±0.08)mm,可满足在手术导航中的应用要求.

[目的]开发一种新型DNA测序酶,解决一代测序技术应对复杂DNA结构模板所面临的主要挑战,如测序信号中断或测序信号快速衰减.[方法]从NCBI数据库中挖掘到了Taq DNA聚合酶和单链结合蛋白SSB基因信息,利用遗传融合、定点突变及基因设计技术获得了一种新型的测序酶Sso-Sequenase.利用亲和层析和离子交换层析,获得了纯化的测序酶.利用抗体修饰技术改良了Sso-Sequenase的性能,并且利用STR技术对其热启动性能进行了表征.选取多组不同类型的复杂模板,采用一代技术对比分析了Sso-Sequenase测序酶试剂盒和传统BigDye测序试剂盒的测序表现.[结果]Sso-Sequenase在大肠杆菌中稳定表达,纯度达到 95%以上,产量高达 10.5 mg/L.当温度低于 35℃时,Sso-Sequenase表现出热启动活性.在复杂模板的一代测序反应中,如重复序列、高GC和发夹结构等样本,Sso-Sequenase测序酶成功完成了所有样本的测序,序列的平均碱基质量QV大于 20.相比而言,BigDye测序试剂盒在处理这些复杂样本时,多数样本测序信号出现了显著衰减或中断.[结论]开发了一种纯度好、产量高,兼具热启动活性的DNA测序酶Sso-Sequenase及测序试剂盒,显著提高了复杂DNA结构模板(重复序列、高GC和发夹结构)测序成功率.

背景:椎弓根导板具有多种优势,但仍然存在一些问题,例如软组织剥离不干净导致导板贴合不严密的钉道偏差;为了贴合导板仔细剥离软组织导致手术时间延长,出血量增加;导板的设计无法预知椎体旋转及体位变化影响导致贴合不严密等.目的:探讨新型5点定位法点状接触式椎弓根导航模板在脊柱侧弯复杂椎弓根情况下的效用.方法:筛选2020年2月至2023年2月北京积水潭医院贵州医院脊柱外科收治的存在椎弓根复杂情况的脊柱侧弯患者20例,行脊柱侧弯矫形术,术中使用5点定位法点状接触式椎弓根导航模板引导置钉;按纳入排除标准匹配34例既往病例资料作为经验置钉组,常规徒手置钉.对比两组患者的置钉时间、置钉出血量、置钉透视次数、手动改道次数、置钉等级及准确率、置钉并发症和主弯矫形率等指标.结果与结论:①导航模板组与经验置钉组在性别、年龄、主弯冠状面Cobb's角、主弯bending位Cobb's角、椎弓根变异、顶椎旋转、融合节段、置钉数、置钉等级、置钉准确率、主弯矫形率方面差异均无显著性意义(P>0.05);②与经验置钉组相比,导航模板组在置钉时间(P=0.034)、置钉出血量(P=0.036)、置钉透视次数(P=0.000)、手动改道次数(P=0.021)方面更具优势;③两组患者的置钉相关并发症均为0例;④提示5点定位法点状接触式3D打印椎弓根导航模板具有爪状结构,牢固适配各种畸形椎板关节突,可避免漂移现象,准确置钉;具有尖端点状接触椎板结构,避免广泛彻底剥离后方结构,可减少出血量及手术时间,减少创伤;提前设计了进钉点进钉方向,可减少透视次数及手术时间;分节段设计,避免因麻醉体位改变等不适配;操作简便,置钉准确率高.

L-苯丙氨酸(L-Phe)是重要的食品及医药中间体,但由于其生物合成途径较长且调控机制复杂,仅依靠质粒或者周期漫长的基因组逐轮改造,难以实现各个模块之间的通量平衡,在一定程度上限制了其产量的进一步提升.本研究将L-Phe生物合成途径中的 7 个携带组成型启动子PF11 及核糖体结合位点(ribosome binding site,RBS)为GGGGGGGG的关键基因ppsA、tktA、aroFfbr、aroE、aroL、pheAfbr和tyrB,整合到谷氨酸棒杆菌(Corynebacterium glutamicum)的基因组中;利用课题组前期研发的基于CRISPR/Cas系统和胞苷脱氨酶的无模板基因表达调控技术(base editor-targeted and template-free expression regulation,BETTER),对每个关键基因的RBS进行同步编辑,生成富含G/A的RBS突变文库;利用前期开发的荧光蛋白型L-Phe生物传感器结合液滴微流控系统(droplet microfluidics)对RBS突变文库进行高通量筛选.最终,从大约 7 万个RBS突变文库中筛选到 4 株L-Phe产量提升不同程度的突变菌株,其 72 h摇瓶发酵产量分别为 2.06、1.30、4.42 和 7.44 mmol/L,相比对照菌株C.g-2(0.6 mmol/L)分别提高了2.43、1.17、6.37、11.40 倍.利用碱基编辑器同时调节多基因的表达水平并筛选组合文库,可以为L-Phe工程育种提供一种可行策略.

目的:制备咖啡酸分子烙印聚合物(MIP)并特异性地去除金银花提取物中的咖啡酸,考察咖啡酸去除前后金银花提取物抑制前列腺素E2(PGE2)释放的变化,从整体上评价其抗炎活性.方法:采用溶胶-凝胶法,以粒径为 62～105 μm的二氧化硅微珠为载体、咖啡酸为模板分子、(3-氨丙基)三乙氧基硅烷为功能单体、四乙氧基硅烷为交联剂、四氢呋喃为溶剂,合成了咖啡酸MIP.以此MIP作为液相色谱固定相,以甲醇-乙酸(500∶1和 9∶1)为流动相,特异性去除了金银花提取物中的咖啡酸.通过脂多糖刺激巨噬细胞RAW264.7 释放PGE2 实验评价去除咖啡酸前后金银花提取物的抗炎作用.结果:溶胶-凝胶法制备的咖啡酸MIP能够从复杂体系中特异性地分离和富集微量的咖啡酸,对咖啡酸的容量因子和烙印效率分别为 15.8 和 9.7,最终从金银花提取物 2.6 g中分离了咖啡酸146 μg,纯度为 92%,回收率为 89%.金银花提取物和去除咖啡酸的提取物在质量浓度为 100、200、400 μg·mL-1时对脂多糖诱导的RAW264.7 细胞释放PGE2 的抑制率分别为 5.8%、35.6%、62.5%和 5.4%、13.3%、57.5%,去除微量咖啡酸以后的提取物在 3 个质量浓度时的抑制率较金银花提取物均有所降低.结论:咖啡酸是金银花提取物抗炎活性的一个重要成分,咖啡酸分子烙印聚合物可以实现金银花提取物中微量咖啡酸的特异性分离,分子烙印技术能够在保证中药完整性的前提下评价中药的药理活性.