化疗是肿瘤治疗的常用手段,在肿瘤治疗前期具有积极作用,但随着化疗疗程的增加,肿瘤细胞对化疗药物的敏感性逐步减弱,从而产生化疗耐药性.肿瘤耐药是多因素介导的复杂过程,目前认为其与肿瘤细胞干性、异质性、肿瘤免疫微环境和化疗药物转运与外排增加等有关,但具体的机制尚不清楚.多倍体肿瘤巨细胞(polyploid giant cancer cell,PGCC)是一类体积增大、胞核丰富的特殊肿瘤细胞亚群.研究发现PGCC普遍存在于结直肠癌、乳腺癌、卵巢癌等多种肿瘤中,与肿瘤的发生、转移、耐药和复发有着密切联系.阐述PGCC在肿瘤中的形成及意义,并从PGCC所具有的特殊机制、自噬、衰老和DNA修复等角度阐述PGCC引起耐药发生的可能机制,从而为改善肿瘤耐药提供可能策略.

临床相关剂量的抗癌药物均可以导致恶性肿瘤及细胞系发生细胞衰老和凋亡。衰老逃逸是细胞存活和耐药的重要机制，通过逃避凋亡和死亡，细胞重新进入到细胞周期的S期。近年来的研究表明多倍体肿瘤巨细胞（polyploid giant cancer cells，PGCC）有助于肿瘤的发生、侵袭、转移和治疗抵抗，这些PGCC的形成是肿瘤细胞发生衰老逃逸的前提，通过去多倍体化的方式，它们能够产生具有增殖活性的子代细胞，进而逃脱细胞衰老。本文就PGCC与细胞衰老和治疗抵抗之间的相关研究进展以及靶向PGCC的治疗策略进行概述，为探索致命性癌症的治疗干预提供一个全新的模式。

目的:探讨应用荧光原位杂交（FISH）检测MDM2扩增辅助诊断低级别骨肉瘤（low-grade osteosarcoma，LGOS）的价值及判读标准。方法:收集北京积水潭医院病理科2009年4月1日至2022年8月10日应用FISH检测MDM2扩增辅助诊断骨肉瘤的病例，以骨旁骨肉瘤（parosteal osteosarcoma，POS）30例、低级别中心性骨肉瘤（low-grade central osteosarcoma，LGCOS）14例为病例组，以其他骨病变58例（包括纤维结构不良28例，骨巨细胞瘤5例，普通型骨肉瘤4例，骨膜骨肉瘤2例，骨折后修复性改变2例，多形性未分化肉瘤2例，低度恶性肌纤维母细胞肉瘤2例，纤维结构不良恶变2例，平滑肌肉瘤1例，硬化性上皮样纤维肉瘤1例，恶性外周神经鞘瘤1例，骨的促结缔组织增生性纤维瘤1例，孤立性纤维性肿瘤1例，动脉瘤样骨囊肿1例，透明细胞软骨肉瘤1例，骨性纤维结构不良1例，梭形细胞肿瘤未分类3例）为对照组，分析应用FISH检测MDM2扩增对于辅助诊断LGOS的价值并结合文献探讨判读标准。结果:组织学诊断为POS的病例30例，男性15例，女性15例；年龄10~59岁，平均年龄35岁，中位年龄30.5岁。除1例检测失败外，27例（27/29，91.3%）FISH检测MDM2扩增结果为阳性。组织学诊断为LGCOS的病例14例，男性4例，女性10例；年龄15~56岁，平均年龄37岁，中位年龄36岁。8例（8/14）FISH检测MDM2扩增结果为阳性。对照组58例，FISH检测MDM2扩增结果均为阴性。MDM2扩增率在POS组、LGCOS组与对照组相比差异均有统计学意义（均 P<0.05）。FISH检测MDM2扩增诊断POS的灵敏度和特异度分别为93.1%和100.0%，诊断LGCOS的灵敏度和特异度分别为57.1%和100.0%，诊断LGOS（POS与LGCOS）的灵敏度和特异度为81.3%和100.0%。在MDM2扩增阳性病例中，MDM2扩增信号均呈簇状。9例（9/35，25.7%；6例POS和3例LGCOS）可见不同于多倍体的CEP12信号增多，表现为增加的小的、微弱的信号点或呈云絮状、团簇状的信号。 结论:FISH检测MDM2扩增对LGOS有较高的诊断价值，FISH检测MDM2扩增的判读标准目前尚不统一，结果判断时要关注信号特点，部分病例中可见CEP12信号增多。

目的:探究休眠的多倍体巨大肿瘤细胞（polyploid giant cancer cells，PGCC）对鼻咽癌（nasopharyngeal carcinoma，NPC）复发的影响，明确抑制自噬在阻止NPC复发中的作用。方法:利用紫杉醇（paclitaxel，PTX）诱导NPC细胞来源的PGCC（NPC-PGCC）形成，并利用光学显微镜、细胞免疫荧光、活/死细胞双染色实验对PGCC形态、多倍体特性、细胞活性等进行鉴定。采用转录组测序（RNA-seq）检测NPC-PGCC和二倍体NPC细胞CNE2的差异表达基因。采用基因本体论（gene ontology，GO）、京都基因与基因组百科全书（Kyoto encyclopedia of genes and genomes，KEGG）对差异基因进行功能富集和通路注释分析。利用免疫蛋白印迹与细胞透射电镜实验评估NPC-PGCC细胞中的自噬水平。利用临床高度相关的裸鼠NPC复发模型研究自噬在NPC-PGCC形成中的作用及NPC-PGCC对NPC复发的影响。所有数据采用GraphPad Prism 6进行统计学分析，以 P<0.05为差异具有统计学意义。 结果:紫杉醇诱导形成的NPC-PGCC具有休眠后爆炸性分裂的特征。NPC-PGCC和二倍体NPC细胞CNE2的差异基因GO富集、KEGG通路注释主要集中在自噬及其相关通路。NPC-PGCC细胞中的自噬水平显著增强。临床高度相关裸鼠NPC复发模型中，进行顺铂治疗的裸鼠原发肿瘤中PGCC数量高于其余各组；自噬抑制剂预处理后与顺铂联合治疗的裸鼠原发肿瘤中PGCC数量少，同时复发率显著低于其余各组。结论:休眠多倍体巨大肿瘤细胞的形成机制与自噬有关，抑制自噬可通过抑制PGCC形成进而抑制NPC复发。

目的:探讨CoCl 2诱导卵巢癌细胞株SKOV3产生的多倍体瘤巨细胞（PGCC）的形态及生物学特性。 方法:采用300 μmol/L CoCl 2模拟缺氧环境诱导培养人卵巢癌细胞株SKOV3 36 h，活细胞继续常规培养、传代，20 d后收集细胞，即为PGCC组细胞；以常规培养的SKOV3细胞为对照组细胞。采用倒置显微镜观察PGCC的形成过程及形态学特点；采用免疫细胞化学法检测两组细胞肿瘤干细胞标志物OCT4、CD117的表达；采用人骨髓间质干细胞成脂诱导分化试剂盒、人骨髓间质干细胞成骨诱导分化试剂盒检测PGCC的脂肪分化及骨分化潜能；划痕实验检测PGCC的细胞迁移能力。采用1 μmol/L紫杉醇分别处理PGCC组和对照组SKOV3细胞，分别在0、24、48 h用显微镜观察两组细胞形态，检测PGCC对化疗药物的抗性。 结果:显微镜下观察，常规培养液培养的SKOV3细胞中有极少量PGCC；CoCl 2可以诱导SKOV3细胞形成PGCC，其形态近似圆形、缺乏分枝，体积为SKOV3细胞的3倍及以上，细胞核多为巨核或多核，PGCC可以出芽方式产生子代细胞。免疫细胞化学染色结果显示，部分PGCC中OCT4阳性表达，无CD117阳性表达；SKOV3细胞中OCT4和CD117均未表达。使用人骨髓间质干细胞成脂诱导分化培养液培养，在第3个周期时可观察到PGCC胞质内有较大的空泡形成，油红O染色显示为橙红色、类圆形的脂滴；使用人骨髓间质干细胞成骨诱导分化培养液培养20 d，茜素红染色可观察到PGCC组细胞较对照组细胞有明显的钙结节形成。细胞划痕实验结果显示，划痕后24、48 h，使用无血清培养液培养PGCC的迁移率[（59±1）%、（66±3）%]均高于对照组细胞的迁移率[（11±3）%、（14±5）%]（ t值分别为32.20、19.55，均 P<0.001）；使用10%血清培养液培养PGCC的迁移率[（92±3）%、（100±0）%]均高于对照组细胞的迁移率[（20±6）%、（59±9）%]（ t值分别为16.19、8.00，均 P<0.001）。1 μmol/L紫杉醇处理48 h后，PGCC组细胞仍大部分存活，对照组SKOV3细胞大部分死亡。 结论:PGCC以出芽方式产生子代细胞；PGCC具有肿瘤干细胞的特性：表达肿瘤干细胞标志物，具有多向分化潜能和较强的化疗药物抗性。

目的 探讨中枢神经系统H3和IDH野生型弥漫性儿童型高级别胶质瘤的临床病理学及分子特征.方法 收集上海交通大学医学院附属新华医院病理科诊断的6例H3和IDH野生型弥漫性儿童型高级别胶质瘤的临床病理资料,采用免疫组化(全自动免疫组化染色仪)检测GFAP、Olig2、Syn、NeuN、IDH1、H3K27M等蛋白的表达,FISH法检测EGFR、MYCN基因扩增,Sanger测序检测IDH、H3F3A、TERT基因突变,并复习相关文献.结果 本组6例患者年龄范围5～11岁,中位年龄7.5岁.其中男性2例,女性4例,男女比1∶2.临床症状表现为肢体乏力、偏瘫、呕吐、抽搐、视物模糊等.肿瘤发生部位:5例位于幕上,1例位于幕下脑干和小脑.组织学形态:3例表现为高级别胶质瘤形态学特征,其中2例伴有瘤巨细胞;2例表现为胚胎性肿瘤样特征,1例同时具有高级别胶质瘤及胚胎性肿瘤样形态学特点.5例伴有微血管增生和(或)坏死;1例间质黏液变/微囊形成.免疫表型:肿瘤细胞GFAP(6/6)和Olig2(6/6)部分或局灶阳性,Syn(3/6)和NeuN(1/6)局灶或散在阳性,IDH1、H3K27M、H3G34V 和 H3G34R 均阴性,ATRX、H3K27me3、INI1、BRG1 均弥漫阳性(6/6).p53 阳性 5％～95％不等,Ki67 增殖指数40％～90％.分子检测示6例均为IDH1/2和H3F3A野生型;2例MYCN扩增;2例EGFR扩增伴多倍体;1例同时伴有EGFR扩增和MYCN扩增;1例PDGFRA扩增.治疗及随访情况,术后放疗和(或)替莫唑胺化疗;3例于术后1～5个月死亡;2例存活,随访截至2024年1月,分别随访4个月和7个月;1例失访.结论 H3和IDH野生型弥漫性儿童型高级别胶质瘤是一种高度恶性肿瘤,组织学表现为胶质母细胞瘤样或胚胎性肿瘤样特征,根据分子遗传学特征分为RTK1、RTK2、MYCN三种分子亚型,其中 MYCN亚型预后最差.诊断时应注意与其他儿童型或成人型高级别胶质瘤及胚胎性肿瘤鉴别.

大多数的二倍体细胞通常通过G1期(DNA合成前期)、S期(DNA合成期)、G2期(DNA合成后期)和M期(分裂期)经典细胞周期完成细胞增殖.然而,在动、植物中也广泛存在着一种与有丝分裂不同的细胞周期过程,即内复制.在内复制过程中,G期和S期交替出现,细胞并不发生分裂,导致产生多倍体细胞.内复制在人体的正常发育、器官形成、创伤愈合过程中必不可少.近年来,越来越多的研究关注内复制与肿瘤发生、演进的关系.本文就内复制的生理作用做一概述,并讨论内复制在肿瘤发生、发展中的可能作用及相关分子机制.

目的:探讨多烯紫杉醇(Docetaxel,Doc)诱导的卵巢癌SK-OV-3多倍体肿瘤巨细胞增殖、迁移和凋亡的特性.方法:0.8μmol/L Doc处理SK-OV-3细胞16 h,更换为完全培养液继续培养细胞至第3天和第5天.免疫荧光染色法观察细胞形态和增殖,流式细胞术检测细胞倍性、周期和凋亡,划痕实验检测细胞迁移能力,Western blot检测凋亡相关蛋白表达.结果:Doc处理后SK-OV-3细胞体积变大,细胞核增多,细胞增殖能力降低.Doc(3 day)组和Doc(5 day)组多倍体细胞(>4 N)百分比高于对照组(P<0.01).Doc诱导Doc(16 h)组发生细胞周期阻滞.Doc(5 day)组细胞迁移能力低于对照组(P<0.01).Doc(3 day)组和Doc(5 day)组早期凋亡细胞百分比高于对照组(P<0.05).Doc(16 h)组、Doc(3 day)组和Doc(5 day)组促凋亡蛋白表达逐渐上调,抗凋亡蛋白表达下调.结论:Doc诱导卵巢癌SK-OV-3细胞形成多倍体肿瘤巨细胞,SK-OV-3多倍体肿瘤巨细胞增殖和迁移能力降低,早期凋亡增加,这为探索多倍体肿瘤巨细胞特性提供了研究基础.

目的:观察紫杉醇(PTX)对乳腺癌异质性的影响,探讨乳腺癌多倍体巨细胞(PGCC)的特征及对肿瘤复发的影响.方法:观察经PTX处理后乳腺癌4T1、MDA-MB-231细胞的形态变化.运用免疫荧光、免疫组化方法、Western blot方法检测了PTX处理后乳腺癌细胞的干性标志物表达.收集新辅助化疗(NACT)后的手术患者资料,运用HE染色、免疫组化等方法进一步验证NACT后乳腺癌组织内出现的异质性变化.结果:PTX能诱导乳腺癌4T1、MDA-MB-231细胞产生PGCC,并能维持存在较长时间,且PGCC表达干性标志物.相对未治疗乳腺癌,经NACT后手术切除标本中能观察到较多的PGCC存在,同时表达干性标志物及Ki67.结论:PTX会诱导乳腺癌发生异质性变化,产生的PGCC是导致肿瘤复发的细胞学基础.

目的 探讨SPTBN1在结直肠腺癌细胞及其多倍体肿瘤巨细胞(polyploid giant cancer cells,PGCCs)中的作用及分子机制.方法 应用CPTAC数据库分析结直肠腺癌组织和癌旁正常组织中SPTBN1蛋白表达水平;应用Kaplan-Meier Plotter、PrognoScan和UALCAN数据库分析SPTBN1蛋白表达与结直肠腺癌患者生存率的关系;应用Western blot法检测SPTBN1在结直肠腺癌组织和PGCCs中的表达量;应用平板克隆实验和划痕实验检测细胞的增殖与迁移能力;利用siRNA沉默PTPRN2和SPTBN1蛋白的表达.结果 CPTAC数据库分析显示,SPTBN1蛋白在结直肠腺癌中的表达明显降低,其低表达与结直肠腺癌临床分期呈正相关;生存分析结果显示,SPTBN1低表达组患者的总生存率显著低于高表达组;应用奥沙利铂诱导的HCT116-PGCCs及LOVO-PGCCs,其增殖和迁移能力强于对照组HCT116和LOVO细胞;Western blot结果显示,SPTBN1蛋白在结直肠腺癌组织和PGCCs中的表达明显下降;SPTBN1敲低组HCT116-PGCCs及LOVO-PGCCs细胞的增殖和迁移能力增强;GEPIA数据库结果显示,SPTBN1蛋白表达与PTPRN2、E-cadherin蛋白表达呈正相关;敲低SPTBN1后,HCT116-PGCCs及LOVO-PGCCs 细胞中E-cadherin蛋白表达水平下降;敲低PTPRN2后,HCT116-PGCCs及LOVO-PGCCs细胞中SPTBN1、E-cadherin蛋白表达水平明显降低.结论 SPTBN1在结直肠腺癌和PGCCs中低表达,敲低SPTBN1可促进HCT116-PGCCs及LOVO-PGCCs 细胞的增殖与迁移,其机制可能与PTPRN2/SPTBN1/E-cadherin通路相关.