目的:探讨Prader-Willi综合征（Prader-Willi Syndrome，PWS）的临床特征及遗传学特点。方法:回顾性分析2例于河北省人民医院确诊为PWS患儿的临床资料及基因学特点，并对相关文献进行讨论复习。结果:病例1，男，年龄6岁3个月，因身材矮小就诊，智力轻度低下，构音障碍，脊柱侧弯，隐睾，小阴茎，长颅、窄面、杏仁眼、小嘴，薄上唇、嘴角向下，皮肤白皙。婴儿期肌张力低下、喂养困难，后逐渐食欲亢进，1.5岁行双侧隐睾手术，但效果不佳。病例2，男，年龄4岁，主因肥胖就诊，食欲亢进，体质量增长过快，语言、认知功能落后，构音不清，脊柱侧弯。婴儿早期曾有喂养困难，2岁行双侧隐睾手术效果不佳。分别采用甲基化特异性聚合酶链反应及甲基化特异性多重链接探针扩增技术进行了基因检测：结果均检测到PWS关键区域（15q11-13）的父源片段丢失，确诊为 PWS。结论:PWS是一种较为罕见的遗传性疾病，临床表现复杂多样，各年龄段特点不同，对不明原因婴儿期肌张力低下、喂养困难；儿童期矮小、肥胖患儿，需警惕该病，可通过分子遗传学技术明确诊断。

目的 对一例国人罕见的缺失型β地中海贫血及其家系进行基因分析,以期为地中海贫血的预防、临床诊断及遗传咨询提供科学的参考依据.方法 采用血细胞分析仪及全自动快速电泳分析系统进行血液学分析;采用导流杂交法进行常规α和β地中海贫血基因检测;采用多重链接探针扩增技术(multi-link probe amplification technology,MLPA)、DNA测序、缺口PCR(Gap-PCR)及血红蛋白持续增多症缺失型电泳等技术分析其罕见基因型.结果 通过血红蛋白持续增多症缺失型电泳技术检测到先证者为中国人罕见的越南型缺失型β地中海贫血;通过导流杂交法检测到先证者母亲为中国人常见的CD41/42基因突变;通过血红蛋白持续增多症缺失型电泳技术检测到先证者父亲及其胞弟为罕见的越南型缺失型β地中海贫血.先证者及胞弟的罕见越南型缺失型β地中海贫血遗传来源是其父亲.结论 越南型缺失型β地中海贫血是一种罕见的β珠蛋白基因缺失,血常规有小细胞低色素的表现,血蛋白电泳血红蛋白F(hemoglobin F,HbF)常常增高明显.当出现血液学表型与基因型不符时,应注意进一步做罕见基因型的检测以避免漏诊或误诊,这有助于指导临床诊断、人群筛查和遗传咨询.

目的 对1例输注阳性血液的D变异型患者进行Rh血型血清学及分子生物学鉴定,并对其进行不规则抗体检测,探讨该D变异型的输血策略.方法 采集患者标本,用2种不同的单克隆抗-D试剂鉴定D抗原,并用试剂盒检测D变异体抗原表位,RhCE抗原分型,红细胞直接抗球蛋白试验,不规则抗体筛查;采用多重链接酶依赖的探针扩增(MLPA)方法检测RHD及RHCE基因型,对于MLPA检测不到的RHD突变型等位基因,对RHD基因全部10个外显子进行PCR扩增及产物直接测序分析.结果 该患者初步D抗原鉴定结果显示为D抗原弱表达,且直接抗球蛋白试验阴性;D抗原表位检测结果显示其红细胞与D抗原epD5.4、epD2.1和epD3.1表位特异性单克隆抗体产生弱凝集反应,与其余表位抗体均无凝集反应,大量输注D阳性血液后的168 d及232 d抗体筛查结果均为阴性;RhCE抗原分型为ccEe,MLPA结果显示其基因型为RHD/d,RHCE基因MLPA基因分型结果与血清学表型一致;RHD基因外显子直接测序发现其第3外显子携带纯合的c.341G＞A(p.Arg114Gln)错义突变.结论 患者为弱D25变异型,对弱D25型的D抗原进行表位分析的显示其部分抗原表位缺失.该患者大量输注阳性血液后未产生抗-D,为制定该血型患者的临床输血策略提供数据.

目的 对1例临床症状疑似假肥大型肌营养不良(DMD/BMD)的患儿进行基因诊断,并进行携带者筛查及产前诊断.方法 使用多重链接探针扩增技术(MLPA)进行DMD基因79个外显子缺失或重复检测,同时应用高通量测序技术(NGS)对神经肌肉相关基因进行靶向测序,并通过Sanger测序对先证者及家系成员进行验证.结果 MLPA检测未发现患儿DMD基因外显子发生缺失或者重复突变,NGS测序发现DMD基因第39号外显子c.5544-5548delGATAA半合子突变.Sanger测序验证发现患儿母亲、弟弟(胎儿)均存在c.5544-5548delGATAA突变.结论 本研究发现一种尚未病例报道的新发突变,该缺失突变是导致患儿发病的原因,MLPA结合NGS技术可有效提高疾病的诊断效率,为产前诊断提供准确信息.

目的 对临床诊断为Duchenne型肌营养不良(DMD)的患儿进行基因检测,分析抗肌萎缩蛋白基因(DMD基因)突变类型及变异大小,探讨DMD分子遗传学诊断策略.方法 对临床诊断为DMD的28例患儿采用多重链接探针依赖扩增技术(MLPA)进行DMD基因检测,然后随机选择MLPA检测阳性的5例和阴性的1例采用DMD全基因捕获探针进一步行全基因组新一代测序(NGS),最后采用PCR和Sanger测序法对所得结果验证.结果 采用MLPA技术对28例患儿进行检测,发现22例阳性结果,包括外显子大片段缺失突变16例,重复突变4例,同时合并缺失和重复突变2例；随机选择MLPA检测阳性的5例和阴性的1例采用NGS技术检测,发现3例外显子缺失突变(exon51 del,chrX:31779857-31795289;exon53 del,chrX:31685440-31747548;exon51-55 del,chrX:31632504-31827732),及2例外显子重复突变(exon45 dup,chrX:31970766-32023816;exon55 dup,chrX:31540860-31649750),与MLPA结果一致,且精确定位了断裂点区域和片段大小,同时发现MLPA检测阴性的1例为点突变(exon54,chrX:31676176,c.7948delG,p.D2650IfsX12),该点突变经PCR扩增和Sanger测序验证,所得结果与NGS检测结果一致.结论 DMD基因突变类型多样,包括外显子缺失和(或)重复、点突变等,应用MLPA技术能有效检出DMD基因外显子大片段缺失、重复以及杂合突变,应用NGS技术不仅能检出缺失和重复突变,并精确判断断裂点位置及大小,还能准确检出微小缺失和点突变,为临床DMD的早期诊断、预后判断及产前诊断提供遗传学帮助.

本文报道一例颈项透明层增厚胎儿的产前分子诊断过程及妊娠结局.孕妇孕12周+5超声检查提示胎儿颈项透明层厚度4.5 mm,无创产前检测提示低风险,孕1 8周时行羊膜腔穿刺术染色体核型分析及染色体微阵列分析.染色体核型分析未见异常,染色体微阵列比较基因组杂交结果提示胎儿2号染色体p15-16.1区域存在1.878 Mb的缺失,父母检测结果未见异常.同时利用多重链接探针扩增技术证实存在缺失.文献报道2p15-16.1微缺失综合征患儿多数表现为智力低下、语言发育障碍、小头畸型等,本例胎儿2号染色体缺失区域包含2p15-16.1微缺失综合征关键区域和关键基因,且胎儿2p15-16.1微缺失为新发突变,充分告知遗传学风险后孕妇选择终止妊娠.

目的 调查广东省惠州地区地中海贫血的基因突变类型及特征,为本地区地中海贫血的遗传咨询及产前诊断提供数据.方法 采用PCR+导流杂交法对1 588例疑似地中海地贫患者进行3种缺失型(--SEA、-α3.7、-α4.2)和3种非缺失型突变(αCSα、αQS α、αWSα),及常见16种β地贫基因突变类型检测.对常规基因型检测仍无法确诊者,采用多重链接探针扩增技术、DNA测序、缺口PCR及血红蛋白持续增多症缺失型电泳等技术进行罕见β地中海贫血基因检测.结果 1588名疑诊患者中共检出地中海贫血患者620例,其中α-地中海贫血占24.55％ (390/1588).β-地中海贫血占14.48％(230/1588),检出6例罕见缺失型β地中海贫血,阳性率为2.61％ (6/230).结论 惠州地区是地中海贫血的高发区,应积极开展地中海贫血的防治工作,还应注意罕见地贫的筛查和诊断,明确基因型,给临床提供确切的诊断依据.

目的 总结分析经甲基化特异性多重链接探针扩增技术(MS-MLPA)确诊的Russel Silver综合征(RSS)患儿的临床特征、基因型(表观突变)以及表型和基因型的相关性,旨在提升对该病的认识.方法 收集2015年1月1日至2019年6月30日复旦大学附属儿科医院(我院)分子医学中心经MS-MLPA确诊的RSS连续病例的临床资料.MS-MLPA行11p15区域甲基化和拷贝数变异(CNV)情况检测,应用GeneMarker软件对实验数据进行均一化处理及结果判读.结果 19例RSS患儿,女8例,男11例,确诊年龄中位数3.3岁(3月龄至10岁).小于胎龄儿18例,就诊时18例患儿身高均低于同龄儿童身高P3,体重均低于同龄儿童体重P10.特殊面容发生率较高的表型有前额突出9例,三角脸7例,肢体不对称和手指短或内侧弯曲6例,小下颌5例.其他表现包括眼距宽、低耳位、高腭弓、牙齿突出、胸廓畸形、脊柱侧凸和房问隔缺损等.19例RSS患儿有3例检测到携带11p15区域拷贝数重复,余16例均显示H19-DMR低甲基化且无CNV.结论 有宫内和出生后生长发育迟缓、肢体不对称和特殊面容的儿童,应注意RSS的可能,首选MS-MLPA检测,以利于及早干预和遗传咨询.

目的 探讨多重链接探针扩增(multiplex ligation-dependent probe amplification,MLPA)技术在快速产前诊断染色体非整倍体异常的临床应用.方法 选取我院2016年1月至2016年1 2月具有产前诊断指征孕妇,在适宜孕周进行穿刺取羊水、脐血或绒毛,采用MLPA技术进行21、18、13、X和Y染色体非整倍体快速检测,同时进行细胞培养后染色体核型分析双盲检测.结果 在5396例产前诊断样本21、13、18、性染色体非整倍体与染色体核型分析比较的符合率为99.9％,141例异常结果涉及21、13、18、x/Y染色体分别为81例、12例、18例、30例.结论 MLPA技术对染色体非整倍体检测具有低成本、高通量、检测周期短等优势,结合染色体核型分析可应用于快速产前诊断染色体非整倍体异常.

目的 报道一腓骨肌萎缩症(peroneal muscular atrophy)家系的临床表现、影像学特征、基因特点和遗传方式,并结合文献进行复习.方法 分析一腓骨肌萎缩症家系中患有糖尿病的先证者以进行性对称性远端肌无力和肌肉萎缩、腱反射减弱或消失、远端感觉减退为临床表现,行电生理、基因检测等检查,并对其家属行多重链接探针扩增技术(MLPA)检测周围神经髓鞘蛋白22(peripheral nervemyelinprotein 22,PMP22)基因外显子缺失/重复变异情况.结果 本家系先证者为中年男性,肌电图提示四肢多发性周围神经病,脱髓鞘继发轴索损害.患者有家族史,基因检测先证者、先证者女儿、先证者哥哥PM P22基因外显子及附近区域存在大片段重复.结论 腓骨肌萎缩症临床表现典型,有特征性电生理,PM P22基因外显子大片段重复是确诊金标准,合并糖尿病会加重腓骨肌萎缩症的周围神经损害.