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长链非编码RNA DANCR在甲状腺癌中的研究进展
编辑人员丨1周前
甲状腺癌是最常见的头颈部恶性肿瘤,发病率呈逐年上升趋势。因此探究甲状腺癌的发生、发展机制,开发甲状腺癌诊断标志物和治疗靶点,对提高甲状腺癌的疗效、延长患者生存时间具有重要意义。前期研究中发现长链非编码RNA(lncRNA)DANCR在甲状腺癌中异常高表达,可通过影响miRNA-185-5p及转录因子SMARCB1来促进富含亮氨酸重复序列激酶2(LRRK2)的表达,间接参与细胞自噬而调控甲状腺癌的发展,有望成为甲状腺癌诊断及治疗的新靶点。文章就lncRNA DANCR在甲状腺癌中的调控机制进行介绍,为甲状腺癌的基础研究和临床诊疗提供新思路。
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编辑人员丨1周前
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富含亮氨酸重复序列激酶2调控自噬影响甲状腺癌可能机制的研究进展
编辑人员丨1周前
甲状腺癌是内分泌系统最常见的恶性肿瘤,且发病率逐年上升,严重威胁人们的身体健康。自噬是一种程序性死亡方式,能够作为抗肿瘤治疗潜在的作用靶点,发挥重要的调控作用。富含亮氨酸重复序列激酶2(LRRK2)是由PARK8基因编码的一种蛋白激酶。最近研究证实,细胞自噬和甲状腺癌关系密切。文章就LRRK2通过自噬影响甲状腺癌的可能调控机制进行分析,为甲状腺癌的基础研究和临床诊疗提供新思路。
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编辑人员丨1周前
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LRRK2G2019S位点突变通过抑制自噬相关蛋白诱发驱铁处理后小胶质细胞的活化
编辑人员丨1周前
目的:探讨LRRK2G2019S位点突变对驱铁处理后小胶质细胞活化的影响及其机制。方法:(1)利用人类诱导多能干细胞(IPSC)经造血祖细胞(HPC)分化产生小胶质细胞,免疫荧光染色进行鉴定,利用蛋白纯化技术获取α-突触核蛋白(α-syn)A53T突变蛋白。(2)将小胶质细胞分为对照组、α-syn组、α-syn+甲磺酸去铁胺(DFO)组,分别加入磷酸盐缓冲液(PBS)、1 μmol/L纯化的α-syn A53T突变蛋白、1 μmol/L纯化的α-syn A53T突变蛋白+30 mmol/L DFO作用24 h。采用比色法检测细胞Fe 2+浓度,Western blotting实验检测细胞Rab35蛋白的表达,流式细胞仪检测细胞内活性氧(ROS)水平,实时定量聚合酶链式反应(RT-PCR)检测细胞白细胞介素( IL) -6、肿瘤坏死因子α( TNF-α)、转化生长因子β( TGF-β)mRNA的表达。将3组小胶质细胞培养上清液(MCS)转移到SH-SY5Y细胞中,采用流式细胞仪检测SH-SY5Y细胞的凋亡情况。(3)双向DNA测序检测1 μmol/L纯化的α-syn A53T突变蛋白处理后小胶质细胞富亮氨酸重复激酶2( LRRK2)基因的突变。将小胶质细胞分为对照组、α-syn组、α-syn+GSK3357679A组,分别加入对应的药物处理24 h(LRRK2抑制剂GSK3357679A浓度为10 nmol/L),采用Western blotting实验检测细胞LRRK2蛋白的表达。将小胶质细胞分为对照组、α-syn组、α-syn+GSK3357679A、α-syn+GSK3357679A+DFO组,分别加入对应的药物处理24 h后采用Western blotting实验检测细胞Rab35蛋白的表达,流式细胞仪检测细胞内ROS水平,RT-PCR检测细胞 IL-6、 TNF-a、 TGF-β mRNA的表达。(4)将小胶质细胞分为对照组、α-syn组、α-syn+雷帕霉素(RAPA)组,分别加入对应的药物处理24 h(自噬诱导剂RAPA的浓度为50 nmol/L),采用Western blotting实验检测细胞Rab35、P62、微管相关蛋白轻链3Ⅱ(LC3Ⅱ)蛋白的表达,流式细胞仪检测细胞内ROS水平,RT-PCR检测细胞 IL-6、 TNF-α、 TGF-β mRNA的表达。(5)将小胶质细胞分为对照组、α-syn组、α-syn+Rab35组,分别加入对应的药物处理24 h(Rab35过表达质粒的浓度为1 μg/mL),采用Western blotting实验检测细胞Rab35、P62、LC3Ⅱ蛋白的表达,流式细胞仪检测细胞内ROS水平,RT-PCR检测细胞 IL-6、 TNF-α、 TGF-β mRNA的表达。 结果:(1)免疫荧光染色检测显示小胶质细胞神经元核蛋白(NeuN)表达阴性、离子钙结合适配分子1(Iba1)表达阳性、LRRK2呈高表达。成功构建PcDNA3.1-SNCA-A53T表达质粒并纯化获得α-syn A53T突变蛋白。(2)α-syn组细胞Fe 2+浓度高于对照组,α-syn+DFO组细胞Fe 2+浓度低于α-syn组,差异均有统计学意义( P<0.05)。对照组、α-syn组、α-syn+DFO组细胞Rab35蛋白、 TGF-β mRNA的表达依次降低, IL-6、 TNF-a mRNA的表达依次增加,差异均有统计学意义( P<0.05)。对照组、α-syn组、α-syn+DFO组小胶质细胞ROS水平、SH-SY5Y细胞凋亡率均依次增加。(3)双向DNA测序显示α-synA53T突变蛋白刺激后小胶质细胞LRRK2G2019S突变最明显。与对照组比较,α-syn组细胞LRRK2蛋白的表达增高;与α-syn组比较,α-syn+GSK3357679A组细胞LRRK2蛋白的表达降低,差异有统计学意义( P<0.05)。与对照组比较,α-syn组细胞Rab35蛋白、 TGF-β mRNA的表达降低, IL-6、 TNF-a mRNA的表达增高;与α-syn组比较,α-syn+GSK3357679A组细胞Rab35蛋白、 TGF-β mRNA的表达增高, IL-6、 TNF-a mRNA的表达降低;与α-syn+GSK3357679A组比较,α-syn+GSK3357679A+DFO组细胞Rab35蛋白、 TGF-β mRNA的表达降低, IL-6、 TNF-a mRNA的表达增加,差异均有统计学意义( P<0.05)。α-syn组细胞ROS水平高于对照组,α-syn+GSK3357679A组细胞ROS水平低于α-syn组,α-syn+GSK3357679A+DFO组细胞ROS水平高于α-syn+GSK3357679A组。(4)与对照组比较,α-syn组细胞Rab35、LC3Ⅱ蛋白、 TGF-β mRNA的表达降低,P62蛋白、IL-6、 TNF-a mRNA的表达升高;与α-syn组比较,α-syn+RAPA组细胞Rab35、LC3Ⅱ蛋白、 TGF-β mRNA的表达升高,P62蛋白、 IL-6、 TNF-a mRNA的表达降低,差异均有统计学意义( P<0.05)。α-syn组细胞ROS水平高于对照组和α-syn+RAPA组。(5)与对照组比较,α-syn组细胞Rab35、LC3Ⅱ蛋白、 TGF-β mRNA的表达降低,P62蛋白、 IL-6、 TNF-a mRNA的表达升高;与α-syn组比较,α-syn+Rab35组细胞Rab35、LC3Ⅱ蛋白、 TGF-β mRNA的表达升高,P62蛋白、 IL-6、 TNF-a mRNA的表达降低,差异均有统计学意义( P<0.05)。α-syn组细胞ROS水平高于对照组和α-syn+Rab35组。 结论:在驱铁处理条件下,LRRK2G2019S能通过抑制Rab35等自噬相关蛋白诱发小胶质细胞活化,Rab35有望成为干预神经炎症反应的关键因素。
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编辑人员丨1周前
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亮氨酸丰富重复激酶2对大鼠脑出血神经行为与神经元的影响
编辑人员丨1周前
目的:探讨亮氨酸丰富重复激酶2(LRRK2)对大鼠脑出血神经行为与神经元的影响。方法:SD大鼠30只随机分为假手术组、模型组、干预组,每组10只,通过向脑内注入自体动脉血制备脑出血大鼠模型,模型组按照上述方法造模,假手术组脑内注射无菌生理盐水,干预组在造模6 h前腹腔注射LRRK2抑制剂GNE-7915。造模后第3 d,采用神经行为学评分评价各组神经行为学能力,采用蛋白质印迹法检测各组脑组织中LRRK2蛋白表达量,采用尼氏染色检测各组神经元细胞大小,采用原位末端标记法(TUNEL)检测各组TUNEL阳性细胞数。结果:模型组LRRK2蛋白表达量、神经行为学评分、TUNEL阳性细胞数[(2.62±0.86)、(4.49±1.23)分、(6.22±2.48)个/视野]高于假手术组[(0.45±0.09)、(0.60±0.07)分、(0.92±0.06)个/视野]( P<0.05),干预组LRRK2蛋白表达量、神经行为学评分、TUNEL阳性细胞数[(1.53±0.45)、(2.25±0.69)分、(3.59±1.45)个/视野]低于模型组[(2.62±0.86)、(4.49±1.23)分、(6.22±2.48)个/视野]( P<0.05);模型组神经元细胞大小[(200.41±23.30)μm 2]低于假手术组[(302.48±48.87)μm 2]( P<0.05),干预组神经元细胞大小[(248.36±32.26)μm 2]高于模型组[(200.41±23.30)μm 2]( P<0.05)。 结论:抑制LRRK2能够减少脑出血大鼠神经元凋亡,改善神经行为学能力。
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编辑人员丨1周前
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富含亮氨酸重复激酶2在神经病理性疼痛大鼠痛敏中的作用及机制研究
编辑人员丨1个月前
目的 研究富含亮氨酸重复激酶2(LRRK2)对神经病理性疼痛(NP)大鼠痛觉敏感性的影响,并探讨其可能的机制.方法 将48只SD大鼠随机分成4组:假手术组(Sham组)、模型组(Model组)、LRRK2抑制剂组(MLi-2组)和LRRK2抑制剂+p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)激动剂组(MLi-2+Anisomycin组),每组12只.采用坐骨神经慢性压迫损伤(CCI)诱导NP大鼠模型,术后第8天开始鞘内注射 MLi-2(1 mg/kg,10 μl)或 Anisomycin(20 μmol/L,10μl),每天1次,连续7 d.分别于术前(第0天)及术后第7、14天进行痛觉敏感性检测,分析各组大鼠机械缩足反射阈值(MWT)和热缩足反射潜伏期(PWTL)变化;ELISA检测大鼠脊髓背角中白细胞介素(IL)-1β、IL-6和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平;尼氏染色观察大鼠脊髓组织神经元病理变化;免疫荧光染色观察大鼠脊髓中小胶质细胞标志物离子化钙结合适配分子-1(Iba-1)表达水平;Western blot检测大鼠脊髓背角中 LRRK2、p-p38 MAPK、p38 MAPK 和 Iba-1 蛋白表达水平.结果 与Sham组比较,Model组大鼠右侧后肢MWT和PWTL均明显降低(P<0.01),脊髓背角组织中IL-1β、IL-6 和 TNF-α 含量及 LRRK2、Iba-1 蛋白和 p-p38 MAPK/p38 MAPK蛋白比值水平均明显升高(P<0.01),脊髓组织中Iba-1阳性细胞比例明显升高(P<0.01),而尼氏小体明显减少(P<0.01).与Model组比较,MLi-2组大鼠右侧后肢MWT和PWTL明显升高(P<0.01),尼氏小体明显增多(P<0.01),脊髓组织中Iba-1阳性细胞比例明显降低(P<0.01),脊髓背角组织中IL-1β、IL-6和TNF-α水平及LRRK2、Iba-1 蛋白和 p-p38 MAPK/p38 MAPK 蛋白比值水平明显降低(P<0.01).然而,Anisomycin干预可激活p38 MAPK信号通路,并部分逆转MLi-2对NP大鼠痛敏、神经炎症的改善作用.结论 抑制LRRK2表达可减轻由小胶质细胞活化介导神经炎症引起的NP大鼠痛觉敏感性,其作用机制可能与调控p38 MAPK信号通路有关.
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编辑人员丨1个月前
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基于生信分析对脓毒症相关性脑病中神经炎症相关核心基因的筛选
编辑人员丨1个月前
目的:通过生信分析筛选脓毒症相关性脑病(sepsis associated encephalopathy,SAE)中小胶质细胞介导神经炎症的核心基因,并通过体外细胞学实验验证.方法:从基因表达综合数据库(gene expression omnibus,GEO)中获取脓毒症患者外周血全转录组测序数据集GSE65682以及体外脂多糖(lipopolysaccharides,LPS)诱导小胶质细胞活化模型基因芯片数据集GSE103156.采用加权基因共表达网络分析(weighted gene co-expression network analysis,WGCNA)筛选GSE65682数据集中与脓毒症临床诊断显著相关的模块,与GSE103156数据集中LPS处理前后小胶质细胞的差异表达基因(differentially expressed gene,DEG)相交,利用基因本体论(gene ontology,GO)和京都基因与基因组百科全书(Kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG)对DEG进行功能富集分析.采用STRING构建蛋白质-蛋白质相互作用网络、Cytoscape以及Lasso回归分析筛选核心基因.构建LPS诱导BV2小胶质细胞活化体外细胞模型,采用实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,RT-qPCR)检测基因表达;采用慢病毒载体法过表达组蛋白去乙酰化酶9(histone deacetylase 9,HDAC9),Western blot检测炎症相关分子表达.结果:WGCNA分析得到GSE65682数据集中与脓毒症临床诊断相关的9个模块、共332个基因,通过Limma分析得到GSE103156数据集中LPS刺激前后小胶质细胞的1 272个DEGs,二者取交集后得到18个交集基因,进一步采用Lasso回归分析筛选得到4个枢纽基因分别为七跨膜G蛋白偶联受体183(G protein-coupled receptor 183,GPR183)、HDAC9、烟酰胺腺嘌呤二核苷酸激酶(nicotinamide adenine dinucleotide kinase,NADK)、富含亮氨酸重复蛋白 25(leucine rich repeat containing 25,LRRC25).RT-qPCR结果证实在LPS刺激的小胶质细胞炎性活化模型中,Gpr183和Hdac9基因的mRNA表达下调、Lrrc25表达上调,而Nafk表达无明显变化;Western blot显示过表达HDAC9可促进LPS诱导小胶质细胞促炎因子白介素(interleukin,IL)-1β、诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)的表达、促进JAK1-STAT3磷酸化.结论:本研究利用生物信息学筛选得到SAE中小胶质细胞介导神经炎症的4个关键基因,并初步证实HDAC9对于小胶质细胞具有促炎活性,为SAE的机制研究提供了新的思路和数据.
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编辑人员丨1个月前
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LRRK2基因R1067Q和GBA基因R202Q双变异致早发型帕金森病一例
编辑人员丨2024/6/15
患者 男性,42岁.主因左手抖动18个月,左下肢抖动伴运动迟缓6个月,于2023年7月8日入院.患者18个月前(2022年1月)无明显诱因出现左上肢不自主抖动,静止时出现、持物及动作时消失,无动作迟缓、反应变慢等其他伴随症状.于
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编辑人员丨2024/6/15
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Lrrk2 R1628P转基因小鼠尿液外泌体诱导帕金森病样病理变化
编辑人员丨2024/4/27
目的:探讨Lrrk2 R1628P转基因小鼠尿液外泌体能否诱导帕金森病(PD)样病理改变.方法:提取野生型(WT)和Lrrk2 R1628P转基因小鼠尿液外泌体,使用免疫印迹法检测尿液外泌体标记物TSG101 和CD81,Y216位点磷酸化糖原合成酶激酶-3β(pGSK-3β-216)表达水平.在C57 小鼠纹状体中分别注射WT小鼠(C57-WT组,n = 8)和Lrrk2 R1628P小鼠尿液外泌体(C57-Lrrk2 组,n =8).注射前 3 天,注射后 1、3、6 个月,利用平衡木、挂线、转棒和旷场实验对小鼠进行行为学分析,免疫组化法分析脑组织中磷酸化α-突触核蛋白(pα-syn)的沉积情况,免疫印迹法检测脑组织中pα-syn的表达.结果:Lrrk2 R1628P小鼠尿液外泌体TSG101 和CD81 表达水平与WT小鼠比较,差异无统计学意义(P>0.05),pGSK-3β-216 表达水平高于WT小鼠(P<0.001).C57-Lrrk2 组小鼠出现PD样行为学表型(P<0.001),皮层、纹状体和黑质中有pα-syn沉积,脑组织中pα-syn表达水平为(0.44±0.06),C57-WT组则无表达(P<0.001).结论:小鼠纹状体中注射Lrrk2 R1628P转基因小鼠的尿液外泌体能够诱导PD样病理改变.
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编辑人员丨2024/4/27
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刺五加及其复方防治帕金森病研究进展
编辑人员丨2024/3/23
帕金森病是中老年人常见的中枢神经系统慢性进展性疾病,发病机制复杂,致残率高,西医临床主要采用左旋多巴与卡比多巴复合使用,但长期用药会引起多种不良反应,患者无法被完全治愈.中医认为肝肾不足是引起帕金森病(parkinson's disease,PD)的主要病机所在,刺五加作为传统中药,具有补肝肾、坚筋骨、强志意的作用,近年来,越来越多研究发现中药刺五加在帕金森病的治疗方面具有显著的临床价值.刺五加中所含的皂苷类、香豆素类、黄酮类等成分可通过保护多巴胺能神经元、抗氧化应激、保护线粒体、抗炎症反应、抑制神经元免疫、抑制富亮氨酸重复激酶2(leucine-rich repeat kinase 2,LRRK2)蛋白表达等多通路、多途径来防治帕金森病.该文通过检索国内外相关文献,对刺五加及其复方防治帕金森病的药理作用及作用机制进行归纳梳理,旨在为刺五加治疗帕金森病的进一步开发利用提供参考.
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编辑人员丨2024/3/23
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基于miR-381调控SDF-1/CXCR4信号通路探讨电针对缺血性脑卒中后神经损伤修复的影响
编辑人员丨2024/3/16
目的:观察电针对缺血性脑卒中模型大鼠miR-381、富含亮氨酸重复序列C4蛋白(LRRC4)及其下游基质细胞衍生因子1(SDF-1)/趋化因子受体4(CXCR4)信号通路的影响,探讨电针改善缺血性脑卒中神经损伤的作用机制.方法:从50只雄性SPF级SD大鼠中随机选取10只作为假手术组,剩余大鼠制备大脑中动脉栓塞(MCAO)模型,将造模成功的30只大鼠随机分为模型组、电针组和激动剂组,每组10只.电针组大鼠于"百会""大椎"行电针干预,选用疏密波,频率2 Hz/10 Hz,电流强度1 mA,每次30 min,每日1次,共干预14 d.激动剂组大鼠于侧脑室注射miR-381激动剂,每次10 μL,7 d 1次,注射2次.干预后,观察各组大鼠ZeaLonga神经功能缺损评分;HE染色法观察各组大鼠缺血侧脑组织形态;ELISA法测定血清肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)和神经生长因子(NGF)含量;Western blot法检测缺血侧脑组织LRRC4、SDF-1、CXCR4、细胞外信号调节激酶1(ERK1)蛋白表达;实时荧光定量PCR法检测缺血侧脑组织miR-381及LRRC4、SDF-1、CXCR4、ERK1 mRNA表达.结果:干预后,模型组大鼠脑组织细胞排列紊乱、数量减少,可见大量空泡,间质水肿明显;电针组和激动剂组大鼠脑组织细胞上述病理变化减轻.与假手术组比较,模型组大鼠ZeaLonga神经功能缺损评分及血清TNF-α、IL-6含量升高(P<0.01),血清NGF含量降低(P<0.01);缺血侧脑组织SDF-1、CXCR4、ERK1蛋白表达降低(P<0.01),LRRC4蛋白表达升高(P<0.01);缺血侧脑组织miR-381及SDF-1、CXCR4、ERK1 mRNA表达降低(P<0.01),LRRC4 mRNA表达升高(P<0.01).与模型组比较,电针组、激动剂组大鼠ZeaLonga神经功能缺损评分及血清TNF-α、IL-6含量降低(P<0.05,P<0.01),血清NGF含量升高(P<0.05,P<0.01);缺血侧脑组织SDF-1、CXCR4、ERK1蛋白表达升高(P<0.01),LRRC4蛋白表达降低(P<0.01);缺血侧脑组织miR-381及SDF-1、CXCR4、ERK1 mRNA表达升高(P<0.05,P<0.01),LRRC4 mRNA表达降低(P<0.01).结论:电针"百会""大椎"可通过上调miR-381靶向抑制LRRC4表达,进而激活SDF-1/CXCR4信号通路,对缺血性脑卒中后神经损伤修复起到一定的促进作用.
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编辑人员丨2024/3/16
