甲状腺癌是最常见的头颈部恶性肿瘤，发病率呈逐年上升趋势。因此探究甲状腺癌的发生、发展机制，开发甲状腺癌诊断标志物和治疗靶点，对提高甲状腺癌的疗效、延长患者生存时间具有重要意义。前期研究中发现长链非编码RNA（lncRNA）DANCR在甲状腺癌中异常高表达，可通过影响miRNA-185-5p及转录因子SMARCB1来促进富含亮氨酸重复序列激酶2（LRRK2）的表达，间接参与细胞自噬而调控甲状腺癌的发展，有望成为甲状腺癌诊断及治疗的新靶点。文章就lncRNA DANCR在甲状腺癌中的调控机制进行介绍，为甲状腺癌的基础研究和临床诊疗提供新思路。

甲状腺癌是内分泌系统最常见的恶性肿瘤，且发病率逐年上升，严重威胁人们的身体健康。自噬是一种程序性死亡方式，能够作为抗肿瘤治疗潜在的作用靶点，发挥重要的调控作用。富含亮氨酸重复序列激酶2（LRRK2）是由PARK8基因编码的一种蛋白激酶。最近研究证实，细胞自噬和甲状腺癌关系密切。文章就LRRK2通过自噬影响甲状腺癌的可能调控机制进行分析，为甲状腺癌的基础研究和临床诊疗提供新思路。

目的 研究富含亮氨酸重复激酶2(LRRK2)对神经病理性疼痛(NP)大鼠痛觉敏感性的影响,并探讨其可能的机制.方法 将48只SD大鼠随机分成4组:假手术组(Sham组)、模型组(Model组)、LRRK2抑制剂组(MLi-2组)和LRRK2抑制剂+p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)激动剂组(MLi-2+Anisomycin组),每组12只.采用坐骨神经慢性压迫损伤(CCI)诱导NP大鼠模型,术后第8天开始鞘内注射 MLi-2(1 mg/kg,10 μl)或 Anisomycin(20 μmol/L,10μl),每天1次,连续7 d.分别于术前(第0天)及术后第7、14天进行痛觉敏感性检测,分析各组大鼠机械缩足反射阈值(MWT)和热缩足反射潜伏期(PWTL)变化;ELISA检测大鼠脊髓背角中白细胞介素(IL)-1β、IL-6和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平;尼氏染色观察大鼠脊髓组织神经元病理变化;免疫荧光染色观察大鼠脊髓中小胶质细胞标志物离子化钙结合适配分子-1(Iba-1)表达水平;Western blot检测大鼠脊髓背角中 LRRK2、p-p38 MAPK、p38 MAPK 和 Iba-1 蛋白表达水平.结果 与Sham组比较,Model组大鼠右侧后肢MWT和PWTL均明显降低(P＜0.01),脊髓背角组织中IL-1β、IL-6 和 TNF-α 含量及 LRRK2、Iba-1 蛋白和 p-p38 MAPK/p38 MAPK蛋白比值水平均明显升高(P＜0.01),脊髓组织中Iba-1阳性细胞比例明显升高(P＜0.01),而尼氏小体明显减少(P＜0.01).与Model组比较,MLi-2组大鼠右侧后肢MWT和PWTL明显升高(P＜0.01),尼氏小体明显增多(P＜0.01),脊髓组织中Iba-1阳性细胞比例明显降低(P＜0.01),脊髓背角组织中IL-1β、IL-6和TNF-α水平及LRRK2、Iba-1 蛋白和 p-p38 MAPK/p38 MAPK 蛋白比值水平明显降低(P＜0.01).然而,Anisomycin干预可激活p38 MAPK信号通路,并部分逆转MLi-2对NP大鼠痛敏、神经炎症的改善作用.结论 抑制LRRK2表达可减轻由小胶质细胞活化介导神经炎症引起的NP大鼠痛觉敏感性,其作用机制可能与调控p38 MAPK信号通路有关.

目的:通过生信分析筛选脓毒症相关性脑病(sepsis associated encephalopathy,SAE)中小胶质细胞介导神经炎症的核心基因,并通过体外细胞学实验验证.方法:从基因表达综合数据库(gene expression omnibus,GEO)中获取脓毒症患者外周血全转录组测序数据集GSE65682以及体外脂多糖(lipopolysaccharides,LPS)诱导小胶质细胞活化模型基因芯片数据集GSE103156.采用加权基因共表达网络分析(weighted gene co-expression network analysis,WGCNA)筛选GSE65682数据集中与脓毒症临床诊断显著相关的模块,与GSE103156数据集中LPS处理前后小胶质细胞的差异表达基因(differentially expressed gene,DEG)相交,利用基因本体论(gene ontology,GO)和京都基因与基因组百科全书(Kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG)对DEG进行功能富集分析.采用STRING构建蛋白质-蛋白质相互作用网络、Cytoscape以及Lasso回归分析筛选核心基因.构建LPS诱导BV2小胶质细胞活化体外细胞模型,采用实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,RT-qPCR)检测基因表达;采用慢病毒载体法过表达组蛋白去乙酰化酶9(histone deacetylase 9,HDAC9),Western blot检测炎症相关分子表达.结果:WGCNA分析得到GSE65682数据集中与脓毒症临床诊断相关的9个模块、共332个基因,通过Limma分析得到GSE103156数据集中LPS刺激前后小胶质细胞的1 272个DEGs,二者取交集后得到18个交集基因,进一步采用Lasso回归分析筛选得到4个枢纽基因分别为七跨膜G蛋白偶联受体183(G protein-coupled receptor 183,GPR183)、HDAC9、烟酰胺腺嘌呤二核苷酸激酶(nicotinamide adenine dinucleotide kinase,NADK)、富含亮氨酸重复蛋白 25(leucine rich repeat containing 25,LRRC25).RT-qPCR结果证实在LPS刺激的小胶质细胞炎性活化模型中,Gpr183和Hdac9基因的mRNA表达下调、Lrrc25表达上调,而Nafk表达无明显变化;Western blot显示过表达HDAC9可促进LPS诱导小胶质细胞促炎因子白介素(interleukin,IL)-1β、诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)的表达、促进JAK1-STAT3磷酸化.结论:本研究利用生物信息学筛选得到SAE中小胶质细胞介导神经炎症的4个关键基因,并初步证实HDAC9对于小胶质细胞具有促炎活性,为SAE的机制研究提供了新的思路和数据.

目的:探讨Lrrk2 R1628P转基因小鼠尿液外泌体能否诱导帕金森病(PD)样病理改变.方法:提取野生型(WT)和Lrrk2 R1628P转基因小鼠尿液外泌体,使用免疫印迹法检测尿液外泌体标记物TSG101 和CD81,Y216位点磷酸化糖原合成酶激酶-3β(pGSK-3β-216)表达水平.在C57 小鼠纹状体中分别注射WT小鼠(C57-WT组,n = 8)和Lrrk2 R1628P小鼠尿液外泌体(C57-Lrrk2 组,n =8).注射前 3 天,注射后 1、3、6 个月,利用平衡木、挂线、转棒和旷场实验对小鼠进行行为学分析,免疫组化法分析脑组织中磷酸化α-突触核蛋白(pα-syn)的沉积情况,免疫印迹法检测脑组织中pα-syn的表达.结果:Lrrk2 R1628P小鼠尿液外泌体TSG101 和CD81 表达水平与WT小鼠比较,差异无统计学意义(P>0.05),pGSK-3β-216 表达水平高于WT小鼠(P<0.001).C57-Lrrk2 组小鼠出现PD样行为学表型(P<0.001),皮层、纹状体和黑质中有pα-syn沉积,脑组织中pα-syn表达水平为(0.44±0.06),C57-WT组则无表达(P<0.001).结论:小鼠纹状体中注射Lrrk2 R1628P转基因小鼠的尿液外泌体能够诱导PD样病理改变.

目的:观察电针对缺血性脑卒中模型大鼠miR-381、富含亮氨酸重复序列C4蛋白(LRRC4)及其下游基质细胞衍生因子1(SDF-1)/趋化因子受体4(CXCR4)信号通路的影响,探讨电针改善缺血性脑卒中神经损伤的作用机制.方法:从50只雄性SPF级SD大鼠中随机选取10只作为假手术组,剩余大鼠制备大脑中动脉栓塞(MCAO)模型,将造模成功的30只大鼠随机分为模型组、电针组和激动剂组,每组10只.电针组大鼠于"百会""大椎"行电针干预,选用疏密波,频率2 Hz/10 Hz,电流强度1 mA,每次30 min,每日1次,共干预14 d.激动剂组大鼠于侧脑室注射miR-381激动剂,每次10 μL,7 d 1次,注射2次.干预后,观察各组大鼠ZeaLonga神经功能缺损评分;HE染色法观察各组大鼠缺血侧脑组织形态;ELISA法测定血清肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)和神经生长因子(NGF)含量;Western blot法检测缺血侧脑组织LRRC4、SDF-1、CXCR4、细胞外信号调节激酶1(ERK1)蛋白表达;实时荧光定量PCR法检测缺血侧脑组织miR-381及LRRC4、SDF-1、CXCR4、ERK1 mRNA表达.结果:干预后,模型组大鼠脑组织细胞排列紊乱、数量减少,可见大量空泡,间质水肿明显;电针组和激动剂组大鼠脑组织细胞上述病理变化减轻.与假手术组比较,模型组大鼠ZeaLonga神经功能缺损评分及血清TNF-α、IL-6含量升高(P<0.01),血清NGF含量降低(P<0.01);缺血侧脑组织SDF-1、CXCR4、ERK1蛋白表达降低(P<0.01),LRRC4蛋白表达升高(P<0.01);缺血侧脑组织miR-381及SDF-1、CXCR4、ERK1 mRNA表达降低(P<0.01),LRRC4 mRNA表达升高(P<0.01).与模型组比较,电针组、激动剂组大鼠ZeaLonga神经功能缺损评分及血清TNF-α、IL-6含量降低(P<0.05,P<0.01),血清NGF含量升高(P<0.05,P<0.01);缺血侧脑组织SDF-1、CXCR4、ERK1蛋白表达升高(P<0.01),LRRC4蛋白表达降低(P<0.01);缺血侧脑组织miR-381及SDF-1、CXCR4、ERK1 mRNA表达升高(P<0.05,P<0.01),LRRC4 mRNA表达降低(P<0.01).结论:电针"百会""大椎"可通过上调miR-381靶向抑制LRRC4表达,进而激活SDF-1/CXCR4信号通路,对缺血性脑卒中后神经损伤修复起到一定的促进作用.

帕金森病是仅次于阿尔茨海默病的第二大神经退行性疾病.富含亮氨酸重复序列激酶2 (LRRK2)突变是PD发病最为常见的遗传因素,LRRK2突变所致的PD发病年龄晚,有路易小体、黑质多巴胺能神经元缺失等多种病理改变特征,在临床表现上与特发性PD更为接近.LRRK2在神经系统内广泛分布,在神经元内,LRRK2定位于多种膜结构中,包括线粒体、高尔基体、内体、自噬体以及溶酶体,参与调节囊泡运输.现对近年来研究发现的LRRK2对囊泡运输的调节及相关机制进行综述.

细胞自噬在帕金森病(PD)发病过程中起重要作用,但PD中细胞自噬的调节机制仍不明确.富含亮氨酸重复序列激酶2(LRRK2)广泛表达于中枢神经系统,研究发现在神经元的自噬泡中有LRRK2的分布,在病理情况下LRRK2通过作用于自噬过程中的多个蛋白导致细胞自噬,包括巨自噬和分子伴侣介导的自噬过程的异常.LRRK2对细胞自噬的调节可能参与PD的发病过程,因而理解LRRK2对于细胞自噬的调节功能及相关机制可以为选择治疗PD的新靶点提供指导.

目的 探讨人微小RNA(miR)-200a的生物学功能及其在结肠癌中的意义.方法 采用miRWalk在线工具筛选miR-200a靶基因,使用DAVID、京都基因和基因组百科全书数据库和STRING分别进行靶基因功能分析、信号通路分析和蛋白互作网络分析.从癌症基因组图谱(TCGA)数据库中下载结肠癌的临床数据和测序数据,包括453个癌组织样本和8个正常肠黏膜组织样本,对比癌组织和正常组织miR-200a表达水平,分析miR-200a与结肠癌患者临床病理参数、生存时间的关系.结果 共筛选出200个靶基因,这些靶基因参与的主要生物过程为氧化应激反应,主要参与的细胞成分为细胞外泌体,分子功能为SH2域结合,主要参与的信号通路为miR在肿瘤中的信号通路.蛋白互作网络显示PH区域富含亮氨酸残基的蛋白磷酸酶1(PHLPP1)、富亮氨酸重复激酶2、沉默信息调节因子α相关酶1(SIRT1)、CT10调节酶(CRK)、E2F3为网络中的核心基因.结肠癌组织miR-200a表达水平高于正常组织(P<0.05);结肠癌临床分期Ⅲ+Ⅳ期者、远处转移者的miR-200a表达水平分别高于临床分期Ⅰ+Ⅱ期者、无远处转移者(P<0.05);miR-200a高表达的患者生存时间较低表达者短(P<0.05).结论 人miR-200a通过靶基因发挥多种生物学作用,其在结肠癌组织中高表达,可能与肿瘤的发生和发展有关,或可用于评估患者预后.

目的 探讨干扰富含亮氨酸重复蛋白8A(LRRC8A)膜蛋白对心肌缺血再灌注(IR)损伤心脏功能的影响及可能机制.方法 选择SPF级健康雄性SD大鼠48只随机分为假手术组、模型组、基因沉默(LRRC8A-siRNA)组和空载体(Scrambled-siRNA)组,每组12只.模型组、基因沉默组和空载体组建立心肌IR损伤大鼠模型;假手术组不进行结扎.假手术组和模型组于术前24 h注射PBS,基因沉默组和空载体组则分别注射LRRC8A-siRNA、Scrambled-siRNA混合液;再灌注2h后检测左心室舒张期末内径(LVEDD)、左心室收缩期末内径(LVESD)、LVEF和左心室短轴缩短率(LVFS)及心肌活性氧、自噬相关蛋白LC3Ⅱ、溶酶体相关蛋白(LAMP2)、ATP、血清NF-κB、TNF-α和白细胞介素6(IL-6)、肌酸激酶(CK)、CK同工酶(CK-MB)和乳酸脱氢酶(LDH)水平;观察心肌组织病理形态学变化;免疫组织化学法检测心肌LC3Ⅱ和LAMP2表达.结果 模型组LVEDD、LVESD、血清CK、CK-MB、LDH、活性氧、NF-κB、TNF-a、IL-6水平及LC3Ⅱ表达明显高于假手术组,而LVEF、LVFS、ATP水平及LAMP2表达明显低于假手术组,差异有统计学意义(P＜0.01);与模型组比较,基因沉默组LVEDD、LVESD、血清CK、CK-MB、LDH、活性氧、NF-κB、TNF-a和IL-6水平及LC3Ⅱ表达明显降低(P＜0.01),而LVEF[(0.65±0.04)％vs (0.42±0.08)％]、LVFS[(48.91±3.01)％vs(28.63±8.17)％]、ATP水平[(11.1±0.2) ng/g vs(0.9±0.1) ng/g]及LAMP2表达(5.23±0.50 vs 0.41±0.03)明显升高(P＜o.01);空载体组各指标与模型组比较,差异无统计学意义(P＞0.05).光学显微镜下可见,基因沉默组心肌细胞形态基本正常,较少发生炎性细胞浸润.结论 干扰LRRC8A膜蛋白能够通过抑制活性氧过量产生、炎症及过度自噬,保护心肌线粒体功能,达到预防心肌IR损伤及保护心脏功能的作用.