目的:研究垂体瘤病灶内LRIG1 、Gadd45g表达量与肿瘤细胞自噬、凋亡、侵袭的相关性.方法:选择2014年6月～2017年12月期间在我院接受手术切除的垂体瘤患者并留取侵袭性垂体瘤组织、非侵袭性垂体瘤组织,另取同期因颅脑外伤在我院接受手术治疗的患者作为对照并留取正常脑组织;测定组织样本中LRIG1 、Gadd45g及自噬、凋亡、侵袭基因的mRNA表达量.结果:侵袭性垂体瘤病灶和非侵袭性垂体瘤病灶组织中LRIG1 、Gadd45g 、Beclin1 、LC3-II 、Bax 、NKG2D 、E-cadherin的 mRNA 表达量均显著低于正常脑组织,PTTG1 、c-Myc 、Gal-3 、Bcl-2 、EphA2 、HSP27 、MMP14 、VEGF的mRNA 表达量均显著高于正常脑组织且侵袭性垂体瘤病灶组织中 LRIG1 、Gadd45g 、Beclin1 、LC3-II 、Bax 、NKG2D E-cadherin的mRNA表达量均显著低于非侵袭性垂体瘤病灶组织,PTTG1 、c-Myc 、Gal-3 、Bcl-2 、EphA2 、HSP27 、MMP14 、VEGF的 mRNA 表达量均显著高于非侵袭性垂体瘤病灶组织;LRIG1 、Gadd45g的mRNA表达量与Beclin1 、LC3-II 、Bax 、NKG2D 、E-cadherin的mRNA表达量呈正相关,与PTTG1 、c-Myc 、Gal-3 、Bcl-2 、EphA2 、HSP27 、MMP14 、VEGF的 mRNA 表达量呈负相关.结论:垂体瘤病灶内LRIG1 、Gadd45g的低表达能够抑制肿瘤细胞的自噬及凋亡、促进肿瘤细胞的侵袭.

目的 探讨富含亮氨酸重复序列免疫球蛋白样蛋白结构域1(LRIG1)在人垂体瘤组织中表达情况,并观察过表达LRIG1后对顺铂(DDP)诱导的垂体瘤细胞增殖、凋亡的影响.方法 采用免疫组织化学染色法检测45例垂体瘤患者肿瘤组织及瘤旁组织中的LRIG1表达,分析LRIG1阳性表达与患者临床病理指标的相关性.选取原代分离培养的人垂体瘤细胞,采用脂质体介导的基因转染技术将LRIG1基因过表达质粒pEGFP-N1-LRIG1转染进细胞中,筛选LRIG1过表达的细胞,同时选取转染空质粒pEGFP-N1的细胞作为对照组.两组细胞均经20 μg/mL DDP诱导48 h,流式细胞术检测细胞凋亡情况,平板克隆实验检测细胞的增殖能力,Western blot法检测细胞中凋亡相关蛋白BAX、胱天蛋白酶3(caspase-3)和Bcl2的相对表达量.结果 垂体瘤患者肿瘤组织中LRIG1阳性率显著低于瘤旁组织,且LRIG1在侵袭性肿瘤表达显著降低.与对照组相比,过表达LRIG1后,DDP诱导的细胞凋亡率显著增加、细胞增殖显著降低、BAX、caspase-3的水平显著增加,而Bcl2水平显著降低.结论 过表达LRIG1增加DDP诱导的人垂体瘤细胞凋亡并抑制其增殖.

目的 观察富含亮氨酸重复序列免疫球蛋白样蛋白2(LRIG2)在小鼠胃肠道中分布特点,并探讨LRIG2在胃肠动力调控以及胃肠道肿瘤发生中所起的作用. 方法 采用Western blotting检测LRIG2蛋白在成年小鼠胃、小肠、结肠中的表达水平,免疫荧光法检测LRIG2在胃肠道黏膜层、黏膜下层、肌层的分布特点,以及LRIG2在Caja1间质细(interstitial cells of CajaI)、PDGFRα阳性细胞或肠内胶质细胞的表达情况. 结果 LRIG2蛋白在胃、小肠、结肠均有表达,而且表达水平三者差异有统计学意义(P＜0.05);其中结肠最高,小肠次之,胃最低.肠道切片免疫荧光染色结果提示,LRIG2阳性细胞主要分布于胃、小肠、结肠肌间神经丛;LRIG2阳性细胞在小肠黏膜下层也有分布.肠道全层铺片免疫荧光染色结果提示,LRIG2阳性细胞广泛分布于肌间神经丛中,细胞呈卵圆形,并团簇状紧密排列.肠内胶质细胞并不表达LRIG2,但是包绕于LRIG2阳性细胞周围.LRIG2在Cajal间质细胞以及PDGFRα阳性细胞上也均不表达,但是LRIG2阳性细胞和二者紧密相邻. 结论 LRIG2在胃肠道中分布广泛,并且和胃肠动力以及胃肠道细胞增殖的调控密切相关.LRIG2可能是研究胃肠动力紊乱性疾病以及肠道肿瘤的发病机制的一个新靶点.

目的 探讨干扰富含亮氨酸重复序列免疫球蛋白样蛋白2(LRIG2)基因表达对人胶质母细胞瘤细胞U87增殖的影响及其机制.方法 构建LRIG2干扰(LRIG2sh)及对照(scr)慢病毒载体质粒并感染U87细胞,筛选获得稳定细胞株;CCK8检测细胞增殖及软琼脂克隆形成实验检测细胞克隆形成能力;流式细胞术检测细胞周期;裸鼠皮下成瘤实验检测在体成瘤能力;Western Blotting检测信号通路蛋白表达.结果 LRIG2干扰组中LRIG2 mRNA水平及蛋白表达水平均明显低于对照组,免疫荧光示干扰组中PDGFR β荧光强度明显弱于对照组.PDGF-BB刺激下LRIG2干扰组细胞增殖率明显低于对照组(P＜0.05),且呈浓度和时间依赖性.PDGF-BB刺激下LRIG2干扰组中软琼脂克隆形成能力明显低于对照组,G0/G1期细胞数百分比明显高于对照组,S期及G2/M期细胞数百分比明显低于对照组(P＜0.01).LRIG2干扰组裸鼠皮下成瘤体积和重量明显小于对照组(P＜0.01).PDGF-BB刺激下LRIG2干扰组中pPDGFRβ及其下游pAkt、pStat3表达水平明显低于对照组,且LRIG2干扰后PDGFRβ抑制剂对其信号通路的抑制水平明显减弱.结论 LRIG2下调通过抑制PDGFRβ信号通路抑制胶质母细胞瘤细胞离体和在体增殖,LRIG2有望成为胶质细胞瘤治疗的新靶点.

目的 探讨富含亮氨酸重复序列免疫球蛋白样蛋白2(LRIG2)调控血小板源性生长因子受体p(PDGFRp)信号通路促进胶质母细胞瘤(GBM)细胞周期进展的机制.方法 免疫组织化学法检测肿瘤组织中蛋白表达;流式细胞术检测细胞周期进展;裸鼠皮下移植瘤模型检测细胞在体成瘤能力;免疫荧光共聚焦及免疫共沉淀检测蛋白结合;Western blot检测信号通路蛋白表达.结果 人GBM组织中LRIG2与PDGFRβ蛋白表达呈正相关(x2=6.411,P＜0.05).PDGF-BB刺激下,LRIG2过表达组S期及G2/M期细胞百分比均明显高于对照组[(22.74±1.23)％比(11.60±0.82)％,t=13.052,P＜0.05;(19.06±1.04)％比(9.36±0.65)％,t=13.699,P＜0.05].裸鼠皮下移植瘤LRIG2过表达组肿瘤体积明显高于对照组[(1372.56±167.88) mm3比(413.34±76.79) mm3,t=11.619,P＜0.05].GBM细胞中LRIG2蛋白与PDGFRp蛋白存在共表达,且存在物理性结合.PDGF-BB刺激下,LRIG2过表达组U87细胞中PDGFRβ、磷酸化PDGFRβ(p-PDGFRβ)、磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)、磷酸化信号转导与转录激活因子-3(p-STAT3),细胞周期蛋白(Cyclin) B1和Cyclin D1表达水平均明显高于对照组.结论 LRIG2通过调控PDGFRp信号通路促进GBM细胞周期进展.

目的 观察微小RNA-590-3p(miR-590-3p)对结直肠癌(CRC)细胞顺铂(DDP)耐药的影响,并探讨其可能的机制.方法 在CRC细胞系SW480、SW620、HCT116中选择miR-590-3p表达最高的SW620细胞构建DDP耐药株(DDP/SW620).取SW620、DDP/SW620细胞,采用CCK-8法检测并计算DDP作用后的半数抑制浓度(IC50),采用实时荧光定量PCR法检测miR-590-3p表达.将DDP/SW620细胞分为miR-590-3p inhibitor组和NC组,分别转染miR-590-3p inhibitor和NC质粒,计算DDP作用后的IC50.采用TargetScan7.1软件和双荧光素酶报告实验预测miR-590-3p的靶基因为富含亮氨酸的重复序列和免疫球蛋白样结构域蛋白1(LRIG1).取miR-590-3p inhibitor组和NC组细胞,采用流式细胞术检测细胞凋亡率,采用Western blotting法检测LRIG1、耐药相关基因MDR1和凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2蛋白表达.结果 DDP/SW620细胞DDP的IC50、miR-590-3p相对表达量均高于SW620细胞,二者比较P均<0.05.miR-590-3p inhibitor组DDP的IC50、miR-590-3p相对表达量均低于NC组,两组比较P均<0.05.miR-590-3p inhibitor组细胞凋亡率及LRIG1、Bax蛋白相对表达量均高于NC组,MDR1和Bcl-2蛋白相对表达量均低于NC组(P均<0.05).结论 miR-590-3p可促进CRC细胞发生DDP耐药,其机制可能与负性调控LRIG1进而促进MDR1表达及减少细胞凋亡有关.

目的:探究川芎挥发油(LCH)通过富含亮氨酸重复序列和免疫球蛋白样结构域2(LRIG2)调控表皮生长因子受体(EGFR)/血管内皮生长因子A(VEGF-A)通路对胶质瘤血管生成的影响.方法:体外培养人恶性胶质瘤U87 MG细胞,分别采用低(L-LCH)、高(H-LCH)剂量LCH进行处理,检测LCH对U87 MG细胞恶性生物学行为(CCK-8检测增殖能力,Transwell实验检测迁移、侵袭能力)及血管生成(三维培养实验)的影响;体外培养U87 MG细胞及正常人星形胶质细胞(HA1800细胞),Western blot检测LRIG2、EGFR、VEGF-A在两者中的表达情况及L-LCH、H-LCH对LRIG2、EGFR、VEGF-A表达的影响;向U87 MG细胞转染LRIG2过表达[LRIG2(+)]质粒,检测U87 MG细胞LRIG2、EGFR、VEGF-A表达变化,以及恶性生物学行为与血管生成情况;U87 MG细胞在H-LCH处理的同时亦给予转染LRIG2(+)质粒处理,观察其恶性生物学行为与血管生成情况.结果:L-LCH、H-LCH处理后U87 MG细胞增殖率,迁移、侵袭细胞数及小管数量均减少(P＜0.05);U87 MG细胞LRIG2、EGFR、VEGF-A 蛋白表达较之 HA 1800 细胞均增加(P＜0.05);L-LCH、H-LCH 处理后 U87 MG 细胞 LRIG2、EGFR、VEGF-A 蛋白表达均减少(P＜0.05);增加转染LRIG2(+)质粒处理可部分逆转H-LCH对U87 MG细胞增殖、迁移、侵袭和血管生成的影响.结论:LCH能抑制U87 MG细胞恶性生物学行为及血管生成,可能通过下调LRIG2表达,进而下调EGFR、VEGF-A表达而实现.