目的:探讨微小RNA(miRNA，miR)-590-3p靶向叉头框蛋白A2(FOXA2)对肿瘤细胞增殖和转移特性的影响。方法:采用荧光定量聚合酶链反应(PCR)分析人卵巢上皮细胞HOSEpiC和卵巢癌细胞skov3中miR-590-3p水平；将人浆液性卵巢癌细胞系skov3随机分为对照组和观察组，分别采用miRNA对照和miR-590-3p抑制剂转染skov3细胞，72 h后采用细胞计数试剂盒(CCK-8)、克隆形成实验和体外移植瘤实验分析两组细胞的增殖能力；采用Transwell和蛋白质印迹法(Western blot)分析两组细胞迁移、侵袭和上皮间质转化能力；采用生物信息学和双荧光素酶报告基因分析miR-590-3p的靶基因，Western blot分析两组细胞靶基因表达以及增殖和迁移相关蛋白表达水平。计量数据比较采用 t检验。 结果:人卵巢上皮细胞HOSEpiC miR-590-3p表达水平(0.77±0.14)明显低于卵巢癌细胞skov3 miR-590-3p表达水平(1.22±0.15)，差异有统计学意义( t＝5.450， P<0.05)。对照组细胞48 h吸光度值(2.06±0.13)明显高于观察组(1.37±0.12)，差异有统计学意义( t＝9.279， P<0.05)。对照组细胞克隆形成数量[(125.83±12.19)个]明显高于观察组[(103.67±10.04)个]，差异有统计学意义( t＝3.169， P<0.05)。对照组细胞肿瘤体积[(976.68±79.77) mm 3]明显高于观察组[(718.60±52.52) mm 3]，差异有统计学意义( t＝6.619， P<0.05)。对照组细胞肿瘤肿瘤[(4.42±0.51) g]明显高于观察组[(2.74±0.33) g]，差异有统计学意义( t＝6.807， P<0.05)。对照组细胞迁移数量[(134.50±9.89)个]明显高于观察组[(108.17±7.63)个]，差异有统计学意义( t＝5.163， P<0.05)。对照组细胞侵袭数量[(93.83±5.31)个]明显高于观察组[(73.29±5.21)个]，差异有统计学意义( t＝6.414， P<0.05)。对照组细胞上皮细胞标志物E-钙黏蛋白(E-cadherin)表达水平(0.67±0.13)明显低于观察组(1.25±0.12)，差异有统计学意义( t＝7.763， P<0.05)。对照组细胞间质细胞标志物β-连环蛋白(β-catenin)和N-钙黏蛋白(N-cadherin)表达水平(1.25±0.12、1.22±0.13)明显高于观察组(0.92±0.06、0.69±0.07)，差异有统计学意义( t＝6.091、8.993， P<0.05)。FOXA2是miR-590-3p的靶基因。对照组细胞FOXA2蛋白表达水平(1.21±0.13)明显低于观察组(2.16±0.14)，差异有统计学意义( t＝12.200， P<0.05)。 结论:miR-590-3p沉默可显著促进靶蛋白FOXA2表达，抑制卵巢癌细胞增殖和转移能力。

妊娠期肝内胆汁淤积症（ICP）是一种妊娠并发症，可导致早产、死胎等严重后果，其发病机制尚不清楚。非编码RNA起重要的生理性调节作用，影响着物种之间及生物与环境之间的相互关系，参与许多疾病的发生和发展。微小RNA（miRNA）是一种由DNA转录，长度为18~24 nt的内源性非编码RNA，miRNA 34a（miR-34a）、miR-221/222、miR-148a、miR-3614-5p、miR-590-3p等miRNA在ICP孕妇的血清或胎盘组织中表达异常。长链非编码RNA（lncRNA）是一类长度大于200 nt的非编码RNA，部分lncRNA在ICP患者的胎盘中表达量异于正常产妇，如linc02527在ICP患者的血清及胎盘中表达均增加、lncRNA H19可能与雌激素相互作用从而促进ICP的发生。这些差异表达的非编码RNA通过调节胆汁酸的合成、代谢、转运及与雌激素的相互作用等，与ICP的发生、发展相关。本文综述近年来非编码RNA中的miRNA和lncRNA在ICP中的研究进展，为ICP的治疗提供新思路。

目的:探讨微小RNA(miRNA，miR)-590靶向CCNG2对神经胶质瘤细胞增殖、侵袭和干细胞特性的影响。方法:选取2017年3月至2021年3月南阳市中心医院收集的59例神经胶质瘤和癌旁组织作为研究对象，采用荧光定量聚合酶链反应(PCR)分析分析癌旁组织和肺癌组织miR-590表达水平。神经胶质瘤细胞U251分为miRNA对照组、miR-590组和miR-590 KD组，并采用转染试剂转染对照miRNA、miR-590-5p模拟物、miR-590-5p抑制剂，48 h后检测。采用细胞计数试剂盒(CCK-8)和克隆形成实验分析两组细胞增殖能力；采用Transwell实验分析两组细胞的侵袭能力。采用成球实验和流式细胞术分析两组细胞的干细胞特性；采用生物信息学和双荧光素酶报告基因分析miR-590靶基因。采用蛋白质印迹法(Western blot)分析细胞和肿瘤组织靶基因的表达水平。组间比较采用 t检验。 结果:癌旁组织中miR-590-5p表达水平(1.03±0.15)明显低于神经胶质瘤组织(2.25±0.27)，差异有统计学意义( t＝30.640， P<0.05)。对照组细胞48 h吸光度值(2.01±0.15)明显高于miR-590-5p KD组(1.37±0.11)，差异有统计学意义( t＝30.640， P<0.05)。克隆形成实验结果显示，对照组细胞克隆形成数量[(81.33±10.78)个]明显高于miR-590-5p KD组[(36.67±6.71)个]，差异有统计学意义( t＝8.614， P<0.05)。对照组细胞侵袭数量[(122.17±15.13)个]明显高于miR-590-5p KD组[(60.17±7.83)个]，差异有统计学意义( t＝8.913， P<0.05)。对照组细胞SP亚群比例[(3.67±1.04)个]明显高于miR-590-5p KD组[(0.71±0.32)个]，差异有统计学意义( t＝6.669， P<0.05)。对照组细胞成球数量[(32.33±8.09)个]明显高于miR-590-5p KD组[(13.33±2.16)个]，差异有统计学意义( t＝5.557， P<0.05)。CCNG2是miR-590-5p的靶基因。对照组细胞CCNG2蛋白表达水平(0.89±0.08)明显低于miR-590-5p KD组(2.32±0.30)，差异有统计学意义( t＝11.130， P<0.05)。 结论:miR-590靶向CCNG2调节神经胶质细胞的增殖、侵袭和干细胞特性等细胞生物学行为。

目的:探讨长链非编码RNA（lncRNA）FAM224A调控miRNA-590-3p（miR-590-3p）表达对卵巢癌细胞增殖及迁移的影响。方法:选择人卵巢癌细胞株OC3、SKOV-3、HO-8910、A2780及人正常卵巢上皮细胞株IOSE80，采用实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测FAM224A在各个细胞株中的相对表达水平，筛选FAM224A相对表达水平最低的细胞株进行后续实验。将细胞分为FAM224A组（转染FAM224A模拟质粒）和对照组（转染对照模拟质粒），分别采用CCK-8法和细胞划痕实验检测两组细胞增殖和迁移能力。采用生物信息学网站LncBase v.2预测FAM224A可能互补结合的靶基因为miR-590-3p。qRT-PCR检测miR-590-3p和叉头框蛋白A2（FOXA2）mRNA的相对表达水平，蛋白质印迹法检测相关蛋白的表达情况。结果:卵巢癌细胞株OC3、SKOV-3、HO-8910、A2780及正常卵巢上皮细胞株IOSE80中FAM224A的相对表达水平分别为0.23±0.04、0.65±0.05、0.45±0.03、0.63±0.08和1.02±0.11，差异有统计学意义（ F=14.78， P<0.01），其中FAM224A相对表达水平最低的细胞株是OC3。CCK-8法检测结果显示，培养第2、3、4、5天，FAM224A组OC3细胞增殖能力均低于对照组（均 P<0.05）。FAM224A组和对照组OC3细胞的划痕愈合率分别为（18.6±2.3）%和（71.7±7.2）%，差异有统计学意义（ t=6.99， P<0.01）。FAM224A组和对照组OC3细胞中FAM224A相对表达水平分别为12.36±1.45和1.14±0.24（ t=13.08， P<0.01）；miR-590-3p相对表达水平分别为0.19±0.06和1.04±0.20（ t=4.01， P<0.01）；FOXA2 mRNA相对表达水平分别为6.37±1.37和1.05±0.08（ t=3.86， P<0.01）。与对照组比较，FAM224A组OC3细胞FOXA2蛋白表达升高，细胞增殖蛋白细胞周期蛋白依赖激酶2（CDK2）、cyclin D3表达均降低，细胞迁移蛋白Snail表达降低。 结论:FAM224A在卵巢癌细胞株中低表达，FAM224A通过抑制miR-590-3p表达降低卵巢癌OC3细胞的增殖和迁移能力。

目的:在膀胱癌患者外周血自然杀伤(NK)细胞中探究微小RNA(miRNA)-590的表达及其对NK细胞免疫功能的调控机制.方法:收集31例膀胱癌患者(Tumor组)和相同例数健康体检者(Normal组)的外周血为研究对象,使用NK细胞分离试剂盒从两组患者外周血单个核细胞中分离原代NK细胞.qRT-PCR实验检测miR-590和信号转导和转录激活因子3(STAT3)在原代NK细胞中的表达;Pearson相关系数分析膀胱癌患者NK细胞中miR-590与STAT3 mRNA表达的相关性;采用生物信息学技术分析miR-590与STAT3的靶向结合位点,双荧光素酶基因报告实验进行检测;将miR-590的模拟物(miR-590 mimics)、miR-590的抑制剂(miR-590 inhibitor)及阴性对照miR-NC转染入人NK细胞系NK-92中,并应用白介素-2(IL-2)活化细胞.按处理方式的不同将NK-92细胞分为:Control组、IL-2组、IL-2+miR-NC组、IL-2+miR-590 mimics组和IL-2+miR-590 inhibitor组.ELISA检测各组细胞上清液中干扰素γ(IFN-γ)和肿瘤细胞坏死因子-α(TNF-α)的含量,细胞毒性实验检测各组NK-92细胞对膀胱癌细胞系T24细胞的杀伤效应;为探究STAT3在miR-590介导的NK细胞免疫功能中的作用,将NK-92细胞又分为IL-2+miR-590 mimic+pcDNA-NC组和IL-2+miR-590 mimic+pcDNA-STAT3组.再次使用ELISA和细胞毒性实验进行检测各组NK-92细胞对IFN-γ和TNF-α的分泌以及对T24细胞的杀伤作用.结果:与Normal组相比,miR-590在Tumor组中的表达明显降低(P＜0.05),而STAT3表达升高(P＜0.05),且两者在膀胱癌患者NK细胞中表达呈负相关(r=-0.641,P＜0.05);生物信息学分析结果显示,STAT3的3'UTR区具有miR-590识别的序列区,双荧光素酶基因报告实验结果表明miR-590可靶向抑制STAT3的表达.与Control组相比,IL-2组、IL-2+miR-NC组、IL-2+miR-590 mimics组和IL-2+miR-590 inhibitor组中NK-92对IFN-γ、TNF-α分泌水平和对T24细胞杀伤效应均明显升高(P＜0.05);与IL-2组相比,IL-2+miR-590 mimics中NK-92对IFN-γ、TNF-α分泌水平和对T24细胞杀伤效应明显升高(P＜0.05),IL-2+miR-590 inhibitor组中明显降低(P＜0.05),IL-2+miR-NC组无明显变化(P＞0.05).此外,与IL-2+miR-NC组相比,IL-2+miR-590 mimics组和IL-2+miR-590 mimics+pcDNA-NC组中NK-92分泌IFN-γ、TNF-α水平和对T24细胞的杀伤效应均明显升高(P＜0.05),IL-2+miR-590 mimics+pcDNA-STAT3 组无明显变化(P＞0.05);与IL-2+miR-590 mim-ics组相比,IL-2+miR-590 mimics+pcDNA-STAT3组中NK-92分泌IFN-γ、TNF-α水平和对T24细胞的杀伤效应均明显降低(P＜0.05),IL-2+miR-590 mimics+pcDNA-NC组无明显变化(P＞0.05).结论:miR-590在膀胱癌外周血NK细胞中表达降低,上调其表达可通过靶向抑制STAT3来增强了NK细胞对肿瘤细胞免疫毒性作用.

目的 观察微小RNA-590-3p(miR-590-3p)对结直肠癌(CRC)细胞顺铂(DDP)耐药的影响,并探讨其可能的机制.方法 在CRC细胞系SW480、SW620、HCT116中选择miR-590-3p表达最高的SW620细胞构建DDP耐药株(DDP/SW620).取SW620、DDP/SW620细胞,采用CCK-8法检测并计算DDP作用后的半数抑制浓度(IC50),采用实时荧光定量PCR法检测miR-590-3p表达.将DDP/SW620细胞分为miR-590-3p inhibitor组和NC组,分别转染miR-590-3p inhibitor和NC质粒,计算DDP作用后的IC50.采用TargetScan7.1软件和双荧光素酶报告实验预测miR-590-3p的靶基因为富含亮氨酸的重复序列和免疫球蛋白样结构域蛋白1(LRIG1).取miR-590-3p inhibitor组和NC组细胞,采用流式细胞术检测细胞凋亡率,采用Western blotting法检测LRIG1、耐药相关基因MDR1和凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2蛋白表达.结果 DDP/SW620细胞DDP的IC50、miR-590-3p相对表达量均高于SW620细胞,二者比较P均<0.05.miR-590-3p inhibitor组DDP的IC50、miR-590-3p相对表达量均低于NC组,两组比较P均<0.05.miR-590-3p inhibitor组细胞凋亡率及LRIG1、Bax蛋白相对表达量均高于NC组,MDR1和Bcl-2蛋白相对表达量均低于NC组(P均<0.05).结论 miR-590-3p可促进CRC细胞发生DDP耐药,其机制可能与负性调控LRIG1进而促进MDR1表达及减少细胞凋亡有关.

目的 探讨miR-590-5p与信号传导及转录激活因子3(signal transducers and activators of transcription 3,STAT3)的靶向作用关系及其对视网膜母细胞瘤(retinoblastoma,RB) Y-79细胞生长和转移能力的影响.方法 临床收集人RB组织样本和癌旁组织样本各20份,RT-PCR检测miR-590-5p和STAT3基因的转录水平,并分析两者的相关性.RT-PCR检测RB细胞株Y-79和SO-RB50及正常视网膜细胞株HREC中miR-590-5p基因的转录水平.荧光素酶报告基因试验检测miR-590-5p和STAT3的相互作用关系.将Y-79细胞分为Y-79、miR-NC、miR-590-5p mimic和miR-590-5p mimic+ STAT3组,转染相应的miRNA及载体,RT-PCR检测miR-590-5p和STAT3基因转录水平,Western blot 检测STAT3、增殖蛋白Ki67、活化半胱天冬酶(cleave caspase-3,cl-caspase-3)、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、基质金属蛋白酶-9(matrix metalloprotein-9,MMP-9)蛋白表达水平,CCK8法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡.结果 与正常视网膜组织比较,RB组织中miR-590-5p基因转录水平显著降低,STAT3基因转录水平显著升高(P＜0.01),且miR-590-5p与STAT3基因转录水平呈负相关(r=-0.883 5,P＜0.001).与正常视网膜细胞比较,SO-RB50和Y-79细胞miR-590-5p转录水平显著降低(P＜0.01),从中选取miR-590-5p转录水平最低的Y-79细胞进行后续试验.与Y-79组比较,miR-590-5p mimic组miR-590-5p表达水平显著升高,STAT3基因转录和蛋白表达水平显著降低,细胞增殖水平显著降低,细胞凋亡率显著升高,Ki67、VEGF、MMP-9蛋白表达水平显著降低,cl-caspase-3蛋白表达水平显著升高(P＜0.01);与miR-590-5p mimic组比较,miR-590-5p mimic+ STAT3组STAT3蛋白表达水平显著升高,细胞增殖水平显著升高,细胞凋亡率显著降低,Ki67、VEGF、MMP-9蛋白表达水平显著升高,cl-caspase-3蛋白表达水平显著降低(P＜0.01).与STAT3 WT+ miR-NC组比较,STAT3 WT+ miR-590-5p mimic组荧光素酶活性显著降低(P＜0.01).结论 miR-590-5p可通过靶向作用于STAT3,抑制RB Y-79细胞的生长和转移能力.

高尔基体磷蛋白3 (GOLPH3)是一种新的致癌基因,与某些恶性肿瘤的生长和转移密切相关.本研究旨在考察GOLPH3在乳腺癌细胞增殖中的作用.采用MTS和BrdU 2种方法检测GOLPH3对人乳腺癌细胞系MDA-MB-435S增殖的影响,流式细胞仪检测细胞周期,qRT-PCR检测细胞周期相关基因(Cyclin D,Cyclin E和P21)表达.研究发现,GOLPH3在乳腺癌样本中显著上调;GOLPH3的过表达显著促进MDA-MB-435S细胞的增殖;miRNA-590-3p的过表达抑制了细胞的GOLPH3 mRNA表达及增殖;过表达ATF-3通过抑制miR-590-3p来促进MDA-MB-435S细胞增殖.本研究表明抑制ATF-3/miR-590-3p/GOLPH3信号通路可抑制乳腺癌细胞的增殖,GOLPH3可能成为未来临床治疗中乳腺癌早期诊断的潜在生物标志物.

目的 探讨miR-590-3p通过调控Dicer1对鼻咽癌细胞侵袭转移的影响及其作用机制.方法 收集2017年8月-2019年2月于我院经手术切除且被证实为鼻咽癌的组织标本以及对应的癌旁组织标本各40例,RTFQ-PCR检测miR-590-3p在鼻咽癌组织及癌旁组织、人鼻黏膜上皮细胞(HNEpC)、鼻咽癌细胞株CNE-1、CNE-1-mimics-miR-590-3p及阴性对照CNE-1-mimics-NC中的表达情况.Western blot检测Dicer1在各细胞株中的表达.生物信息学预测及双荧光素酶报告基因实验验证miR-590-3p和Dicer1的靶向关系.Transwell检测miR-590-3p对鼻咽癌细胞侵袭能力的影响;划痕实验检测miR-590-3p对鼻咽癌细胞迁移能力的影响.IFA检测miR-590-3p对上皮间质转化(EMT)相关分子N-cadherin表达的影响.结果 miR-590-3p在鼻咽癌组织和鼻咽癌细胞株CNE-1中的表达水平分别低于癌旁组织和正常人鼻黏膜上皮细胞;与CNE-1及CNE-1-mimics-NC相比,稳定过表达细胞系CNE-1-mimics-miR-590-3p中miR-590-3p、Dicer1的表达水平均显著升高(P＜0.05).经Target Scan数据库分析发现miR-590-3p和Dicer1有互补结合位点,双荧光素酶报告基因实验证实两者能靶向结合.过表达miR-590-3p能显著降低鼻咽癌细胞的侵袭及转移能力,同时抑制N-cadherin的表达水平.结论 miR-590-3p在鼻咽癌中通过靶向上调Dicer1的表达,广泛促进miRNA的成熟,降低N-cadherin的表达,进而抑制鼻咽癌细胞的EMT进程以及侵袭转移能力.

目的 探讨细颗粒物2.5(PM2.5)在肾小管上皮细胞HK-2细胞氧化损伤中的作用及其调控机制.方法 将对数生长期的人肾小管上皮细胞HK-2细胞随机分为空白对照组、阴性对照组、PM2.5低剂量组、PM2.5中剂量组及PM2.5高剂量组.空白对照组HK-2细胞正常培养,无任何处理;阴性对照组HK-2细胞进行磷酸缓冲盐溶液处理;PM2.5低剂量组HK-2细胞给予50 mg·L-1的PM2.5处理24 h;PM2.5中剂量组HK-2细胞给予100 mg·L-1的PM2.5处理24 h;PM2.5高剂量组HK-2细胞给予200 mg·L-1的PM2.5处理24 h.采用流式细胞术和Edu标记实验检测各组HK-2细胞凋亡率和Edu阳性细胞率,酶联免疫吸附实验法检测各组HK-2细胞氧化应激相关指标超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性及总活性氧(ROS)、丙二醛(MDA)水平,实时荧光定量聚合酶链式反应检测各组HK-2细胞微RNA(miRNA)-590-3p水平变化.另取对数生长期的HK-2细胞随机分为miRNA类似物对照组、miRNA类似物组、miRNA抑制剂对照组和miRNA抑制剂组,miRNA类似物组和miRNA类似物对照组HK-2细胞分别转染miRNA mimics和miRNA mimics对照序列,miRNA抑制剂组和miRNA抑制剂对照组分别转染miRNA inhibitor和miRNA inhibitor对照序列.Targetscan数据库和双荧光素酶报告实验预测和验证miRNA-590-3p的靶点;应用Western blot检测各组HK-2细胞核因子-E2相关因子2(NFE2L2)表达水平,酶联免疫吸附实验法检测各组HK-2细胞中SOD、GSH-Px活性及ROS、MDA水平.结果 PM2.5低剂量组、PM2.5中剂量组及PM2.5高剂量组HK-2细胞凋亡率均显著高于空白对照组及阴性对照组(P<0.05),PM2.5中剂量组、PM2.5高剂量组HK-2细胞凋亡率均显著高于PM2.5低剂量组(P<0.05),PM2.5高剂量组HK-2细胞凋亡率显著高于PM2.5中剂量组(P<0.05).PM2.5低剂量组、PM2.5中剂量组及PM2.5高剂量组HK-2细胞Edu阳性细胞率均显著低于空白对照组及阴性对照组,PM2.5中剂量组、PM2.5高剂量组HK-2组胞Edu阳性细胞率均显著低于PM2.5低剂量组(P<0.05),PM2.5高剂量组HK-2细胞Edu阳性细胞率显著低于PM2.5中剂量组(P<0.05).PM2.5低剂量组、PM2.5中剂量组、PM2.5高剂量组HK-2细胞中ROS和MDA水平均显著高于空白对照组和阴性对照组(P<0.05),PM2.5中剂量组、PM2.5高剂量组HK-2细胞中ROS和MDA水平均显著高于PM2.5低剂量组(P<0.05),PM2.5高剂量组HK-2细胞中ROS和MDA水平显著高于PM2.5中剂量组(P<0.05).PM2.5低剂量组、PM2.5中剂量组、PM2.5高剂量组HK-2细胞中SOD和GSH-Px活性均显著低于空白对照组和阴性对照组(P<0.05),PM2.5中剂量组、PM2.5高剂量HK-2细胞中SOD和GSH-Px活性均显著低于PM2.5低剂量组(P<0.05),PM2.5高剂量组HK-2细胞中SOD和GSH-Px活性显著低于PM2.5中剂量组(P<0.05).PM2.5低剂量组、PM2.5中剂量组、PM2.5高剂量组细胞中miRNA-590-3p相对表达水平均显著高于空白对照组和阴性对照组(P<0.05),PM2.5中剂量组、PM2.5高剂量组细胞中miRNA-590-3p相对表达水平均显著高于PM2.5低剂量组(P<0.05),PM2.5高剂量组细胞中miRNA-590-3p相对表达水平显著高于PM2.5中剂量组(P<0.05).miRNA-590-3p与NFE2L2的3′非翻译区(UTR)存在结合靶点.miRNA类似物组总NFE2L2水平和核内NFE2L2水平显著低于miRNA类似物对照组(P<0.05),miRNA抑制剂组总NFE2L2水平和核内NFE2L2水平显著高于miRNA抑制剂对照组(P<0.05).与miRNA类似物对照组比较,miRNA类似物组HK-2细胞中ROS、MDA水平增高,SOD、GSH-Px水平降低(P<0.05);与miRNA抑制剂对照组比较,miRNA抑制剂组HK-2细胞中ROS和MDA水平降低,SOD和GSH-Px水平升高(P<0.05).结论 PM2.5可通过上调miRNA-590-3p表达而抑制NFE2L2表达,进而加重肾小管上皮细胞氧化损伤.