目的:探讨小泛素样修饰特异性蛋白酶1(SENP-1)/低氧诱导因子1α(HIF-1α)通路对慢性间歇性低氧(CIH)诱导大鼠血管内皮损伤的影响,阐明其相关作用机制.方法:SD大鼠随机分为对照组和CIH组,再将每组分为2、4和6周3个时间点亚组,每亚组8只.CIH组大鼠暴露于CIH舱中进行CIH诱导,制备阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征(OSAHS)模型,对照组大鼠暴露于常氧环境中.于各时间点收集各组大鼠血清和胸主动脉组织.HE染色观察各组大鼠胸主动脉血管损伤情况,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测各组大鼠血清中一氧化氮(NO)、内皮素1(ET-1)、血管性血友病因子(vWF)和血栓调节蛋白(TM)水平,Western blotting法检测各组大鼠胸主动脉组织中SENP-1、HIF-1α和血管内皮生长因子A(VEGFA)蛋白表达水平.体外培养大鼠主动脉内皮细胞(rAECs),经SENP-1 shRNA腺病毒(sh-SENP-1)感染构建SENP-1基因低表达的rAECs细胞株,采用CIH诱导建立血管内皮细胞损伤模型,分为CIH组、CIH+sh-NC组和CIH+sh-SENP-1组,另设对照组.CCK-8检测各组细胞增殖活性,ELISA法检测各组细胞培养上清中乳酸脱氢酶(LDH)活性及细胞中NO、ET-1、丙二醛(MDA)水平和超氧化物歧化酶(SOD)活性,流式细胞术检测各组细胞凋亡率,Western blotting法检测各组细胞中SENP-1、HIF-1α和VEGFA蛋白表达水平.结果:随着CIH诱导时间的延长,与对照组比较,CIH组大鼠胸主动脉内膜逐渐粗糙并明显增厚,血清中NO水平逐渐减低(P＜0.05),血清中ET-1、vWF和TM水平及胸主动脉组织中SENP-1、HIF-1α和VEGFA蛋白表达水平逐渐升高(P＜0.05).与对照组比较,CIH组细胞增殖活性降低(P＜0.05),细胞培养上清中LDH活性及细胞中ET-1、MDA水平和细胞凋亡率升高(P＜0.05),细胞中NO水平和SOD活性降低(P＜0.05),SENP-1、HIF-1α和VEGFA蛋白表达水平升高(P＜0.05);与CIH组比较,CIH+sh-SENP-1组细胞增殖活性升高(P＜0.05),细胞培养上清中LDH活性及细胞中ET-1、MDA水平和细胞凋亡率降低(P＜0.05),细胞中NO水平和SOD活性升高(P＜0.05),SENP-1、HIF-1α和 VEGFA蛋白表达水平降低(P＜0.05).结论:SENP-1/HIF-α通路在CIH诱导的大鼠胸主动脉损伤组织中高度活化,沉默SENP-1表达可减轻CIH诱导的血管内皮细胞损伤,其作用机制可能与下调SENP-1/HIF-α通路活化水平有关.

阿尔茨海默症(Alzheimer's diseases,AD)是一种常见的神经退行性疾病,俗称老年性痴呆.脑内Aβ过度聚集、Tau蛋白过度磷酸化和神经元凋亡是AD的主要病理特征.小泛素样修饰蛋白(small ubiquitin-like modifier,SUMO)通过与底物蛋白结合参与蛋白质翻译后修饰,己被发现可通过以下方式参与AD的病理过程,主要有:(1) SUMO修饰BACE1,促进Aβ产生;(2) SUMO修饰Tau蛋白,促进其磷酸化并抑制其被泛素蛋白酶系统降解;(3)AD脑内SUMO化异常导致神经元过度凋亡.运动已被证实可改善AD病理特征,调节体内SUMO化水平,这提示运动缓解AD可能存在SUMO化机制.现通过综述SUMO与AD,以及运动对SUMO的影响,阐述SUMO介导的运动抗AD的可能机制.

目的 利用小泛素相关修饰体(SUMO)特异性蛋白酶1(SENP1)解离过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅激活因子1α(PGC-1α)的小泛素样修饰蛋白1(SUMO1)修饰.方法 人脐静脉内皮细胞培养传代后分对照组、高糖组及SENP1组;Western blot法检测SENP1、SUMO1、PGC-1α和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Caspase-3)水平;实时荧光定量PCR检测线粒体转录因子A(TFAM)、核呼吸因子2α(NRF-2α)和雌激素受体相关受体α(ERRα)的mRNA表达;ELISA测定乳酸脱氢酶(LDH);细胞划痕愈合方法、Transwell方法和体外血管模拟形成实验分别检测细胞自愈、迁移和形成血管拟态的能力.结果 与对照组比较,高糖组共价SUMO1、PGC-1α和活化Caspase-3蛋白表达明显升高,SENP1蛋白表达明显降低,TFAM、NRF-2α和ERRα的mRNA表达明显降低,细胞划痕修复能力及模拟血管形成能力下降(P＜0.05,P＜0.01).与高糖组比较,SENP1组SENP1蛋白表达明显升高,共价SUMO1、PGC-1α和活化Caspase-3蛋白表达明显降低,TFAM、NRF-2α和ERRα的mRNA表达明显升高,细胞划痕修复和迁移能力及模拟血管形成能力明显改善(P＜0.05,P＜0.01).对照组、高糖组和SENP1组细胞上清液中LDH水平比较,差异有统计学意义[(24.66±6.39)ng/ml vs (302.45±30.54)ng/ml vs (174.08±21.03)ng/ml,P＜0.01].结论 SENP1能够诱导PGC-1α发生去SUMO修饰,解除其对PGC-1α下游转录因子的抑制作用,改善线粒体功能,抑制高糖诱导的血管内皮细胞功能损伤作用.

类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)是一种系统性、慢性、炎性的自身免疫性疾病.骨破坏在RA的发生和发展中占有重要地位,是RA致残致畸的主要原因.破骨细胞(osteoclast,Oc)的异常增生与活化对RA骨侵蚀的发病进展具有重要作用.近年来,RA患者骨破坏的研究逐渐增多.本丈结合国内外研究对核因子-κB受体活化因子配体(receptor activation for nuclear factor-κB ligand,RANKL)/核激活因子受体(receptor activator for nuclear factor-κB,RANK)/骨保护素(orthopantomography,OPG)信号通路、Wnt信号通路、抗瓜氨酸蛋白抗体(anti-citrulline protein antibody,ACPA)、基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases,MMPs)、14-3-3η蛋白、基质细胞衍生因子-1 (stromal cell derived factor-1,SDF-1)、小泛素样修饰物蛋白(small ubiquitin-like modifier protein,SUMO)、分泌型卷曲相关蛋白(secreted frizzled-related protein,SFRP)、骨转换标志物等作一阐述,旨在为RA早期骨破坏诊断提供相关依据.

目的 探讨小泛素样修饰物(small ubiquitin-like modifier,SUMO)特异性蛋白酶3(SUMO-specific protease 3,SENP3)对小鼠肺组织细胞自噬的调控作用及分子机制.方法 应用免疫荧光技术检测SENP3在肺组织细胞中的定位;对SENP3基因野生型C57BL/6J小鼠(SENP3+/+)和SENP3基因敲除杂合子小鼠(SENP3+/-)进行饥饿处理,诱导细胞自噬;应用免疫印迹法评估细胞自噬水平;应用电子显微镜观察和免疫荧光技术分析发生自噬的细胞类型;应用免疫共沉淀方法检测自噬相关分子卷曲螺旋状Myosin样Bcl-2相互作用蛋白1(coiled-coil myosin-like Bcl-2-interacting protein 1,BECN1)的SUMO化修饰.结果 SENP3在肺泡Ⅱ型上皮细胞中高表达.小鼠经饥饿处理后,肺泡Ⅱ型上皮细胞出现自噬现象,且SENP3+/-小鼠较SENP3+/+小鼠更明显.同时,肺组织样品中BECN1的SUMO2/3化修饰被SENP3去除.结论 SENP3抑制饥饿应激时小鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞的自噬,并可对细胞自噬程度进行精细调控.

目的 探讨小泛素样修饰蛋白特异性蛋白酶3(SENP3)在光化学栓塞法缺血性脑卒中小鼠小胶质细胞中的表达变化,以及与光化学法栓塞缺血性脑卒中疾病进展的关系.方法 实验小鼠分对照组、缺血性脑卒中1d组和缺血性脑卒中7 d组(每组3只),应用Western blotting检测各组纹状体诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、精氨酸酶1(ARG-1)和SENP3的表达和c-Jun氨基末端激酶(JNK)磷酸化水平;应用免疫荧光双标法检测小鼠纹状体小胶质细胞中iNOS和ARG-1的表达.结果 与对照组相比,缺血性脑卒中1 d组SENP3的表达与JNK的磷酸化水平均显著上升,同时M1型小胶质细胞的标志物iNOS的表达水平显著上升;缺血性脑卒中7 d组M2型小胶质细胞的标记物ARG-1的表达显著增高.纹状体小胶质细胞特异性抗体1(Iba1)与iNOS、Iba1与ARG-1的免疫荧光双标结果与免疫印迹结果一致.结论 光化学栓塞法缺血性脑卒中早期,小胶质细胞SENP3表达增加,进而影响JNK磷酸化的水平和小胶质细胞的极化,促进大脑炎症反应,参与缺血性脑卒中的疾病进展.

目的 探究丙型肝炎病毒(HCV)感染细胞小泛素样修饰物特异性蛋白酶3(SENP3)对脂滴水平的调节及其对HCV复制的影响.方法 以感染性HCV病毒颗粒感染人HepG2细胞,采用Western blot法检测感染前后SENP3蛋白表达水平.采用脂质体法转染SENP3-siRNA至HepG2细胞,在感染HCV后采用Western blot法检测HCV核心蛋白表达量,采用qRT-PCR法检测HCV RNA水平,采用油红O染色观察细胞脂滴水平.以软脂酸处理敲低SENP3后的HepG2细胞,采用qRT-PCR法检测感染HCV后HCV RNA水平.结果 在HCV感染HepG2细胞后1 d、3 d和6 d,HCV核心蛋白相对表达量分别为0.01±0.00、0.17±0.02和0.43±0.04,SENP3蛋白相对表达量分别为0.23±0.04、0.42±0.03和0.46±0.04,差异显著(P<0.05);转染SENP3-siRNA可有效降低SENP3表达并降低HCV感染后细胞HCV核心蛋白表达水平;SENP3敲低细胞HCV RNA相对水平为54.2±11.4％,较转染非特异性siRNA细胞显著降低(P<0.01);敲低SENP3蛋白表达后细胞脂滴数量显著减少;敲低SENP3的HepG2细胞感染HCV后HCV RNA相对水平为58.2±5.2％,较转染非特异性siRNA细胞显著降低(P<0.01),而以软脂酸处理敲低SENP3的HepG2细胞,在感染HCV后HCV RNA相对水平为74.6±6.4％,较未经软脂酸处理细胞显著升高(P<0.01).结论 在HCV感染肝细胞时SENP3可通过调节脂滴代谢促进HCV复制.

探讨芍药苷对人急性B淋巴细胞白血病(B-cell acute lymphoblastic leukemia,B-ALL)细胞凋亡、周期的影响及作用机制.体外培养Nalm-6和SUP-B15细胞,设对照组(0 μg·mL-1)及芍药苷不同剂量组(200、400、800 μg·mL-1).细胞计数试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8)检测Nalm-6和SUP-B15细胞活力;流式细胞术分析细胞凋亡和细胞周期分布;免疫印迹法检测活化的半胱氨酸蛋白酶-3(cleaved caspase-3)、活化的多聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(cleaved poly ADP-ribose polymerase,cleaved PARP)、c-Myc和小泛素样修饰物特异性蛋白酶1(small ubiquitin-like modifier-specific protease 1,SENP1)蛋白的表达情况;基于Oncomine数据库分析急性淋巴细胞白血病(acute lymphoblastic leukemia,ALL)患者中c-Myc和SENP1基因mRNA的表达水平;采用AutoDock软件进行分子对接分析芍药苷与c-Myc和SENP1蛋白的相互作用关系.结果显示,芍药苷抑制Nalm-6和SUP-B15细胞活力,并呈浓度和时间依赖性;与对照组比较,芍药苷显著上调凋亡相关蛋白cleaved caspase-3、cleaved PARP的表达,诱导Nalm-6和SUP-B15细胞凋亡;显著增加Nalm-6和SUP-B15细胞G2/M期细胞比例,诱导G2/M期阻滞;显著下调Nalm-6和SUP-B15细胞c-Myc和SENP1蛋白的表达水平.ALL患者中c-Myc和SENP1基因mRNA表达水平较正常组显著增加.分子对接显示,芍药苷与c-Myc和SENP1蛋白均具有良好的结合作用.综上,芍药苷通过诱导细胞凋亡和G2/M期阻滞抑制Nalm-6和SUP-B15细胞增殖,其机制可能与c-Myc和SENP1蛋白下调有关.