目的:探究血清视黄醇结合蛋白4(RBP4)联合尿液肝型脂肪酸结合蛋白(L-FABP)在2型糖尿病(T2DM)患者合并早期肾损伤中的诊断价值。方法:根据24 h尿白蛋白排泄率(UAER)将2016年5月至2017年11月由本院确诊收治的90例T2DM患者分为T2DM组(无早期肾损伤，46例)及T2DM合并肾损伤组(合并早期肾损伤，44例)，另选取同期50例健康体检者为对照组。采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测各组患者的血清RBP4、尿L-FABP水平，并检测患者的血尿素氮(BUN)、血清肌酐(Scr)、半胱氨酸蛋白酶抑制剂C(Cys-C)、脂蛋白(a)[Lp(a)]等肾功能指标水平，分析RBP4、L-FABP与各肾功能指标间的相关性，另应用受试者工作特征(ROC)曲线分析RBP4、L-FABP对T2DM合并早期肾损伤的诊断价值。结果:T2DM合并肾损伤组患者的血清Scr、BUN、Cys-C、Lp(a)水平均显著高于T2DM组及对照组(均 P<0.05)，且T2DM组的上述各指标水平均显著高于对照组(均 P<0.05)；T2DM合并肾损伤组患者的血清RBP4、尿L-FABP水平均显著高于T2DM组及对照组(均 P<0.05)，且T2DM组的血清RBP4、尿L-FABP水平均显著高于对照组(均 P<0.05)；T2DM合并肾损伤组患者的血清RBP4、尿L-FABP均与Scr、BUN、Cys-C、Lp(a)水平呈正相关(均 P<0.05)；ROC曲线分析显示，血清RBP4、尿L-FABP诊断T2DM合并早期肾损伤的截断值分别为59.34 ng/mL、6.12 μg·[(g·Cr)] -1，曲线下面积(AUC)分别为0.828、0.753，两者联合诊断效能最优，AUC为0.874。 结论:T2DM合并早期肾损伤患者的血清RBP4、尿L-FABP水平显著上升，两者联合检测有利于T2DM合并早期肾损伤的诊断。

目的:探讨核基质蛋白22(NMP22)及E-钙黏蛋白(E-Cad)在膀胱癌早期诊断中的临床价值。方法:收集本院自2018年1月至2021年1月收治的61例确诊为原发性膀胱癌患者的尿液样本，设为膀胱癌组，并选取同期60例健康者的尿液样本作为对照组，采用酶免疫分析法测定两组NMP22表达水平及定量夹心酶免疫测定技术测定E-Cad表达水平。结果:与对照组相比，膀胱癌组的NMP22、E-Cad均升高，差异均有统计学意义(均 P<0.001)。在膀胱癌组中，淋巴结转移阳性患者的E-Cad水平显著高于淋巴结转移阴性患者，差异有统计学意义( P＝0.007)。受试者工作特征(ROC)曲线分析得出，NMP22诊断膀胱癌的灵敏度及特异度分别为84.4%和59.3%，E-Cad诊断膀胱癌的灵敏度及特异度分别为76.9%和50.0%。 结论:NMP22、E-Cad均可以作为检测膀胱癌的良好指标，联合NMP22及E-Cad检测可以弥补各指标检测的弊端，显著提高膀胱癌的早期诊断率。

目的:探讨尿液水通道蛋白2(AQP2)在肾小管功能损伤评价中的价值。方法:回顾性分析2020年1月至2021年1月本院收治的86例高血压性肾病患者的临床资料，将其设为肾病组，并根据其是否出现水肿分为水肿组(43例)与非水肿组(43例)；同时，选取同期入院进行体检的86例健康者作为研究对象，设为对照组。测定所有研究对象的尿AQP2、血清胱抑素C(Cys-C)、血清肌酐(Scr)、尿β2-微球蛋白(β2-MG)、尿α1-微球蛋白(α1-MG)水平，选取受试者工作特征(ROC)曲线评估尿AQP在肾小管功能损伤诊断中的价值。结果:通过百分位数法分析结果显示尿AQP2的参考区间<19.11 ng/mL。肾病组的尿AQP2水平为(25.89±3.84)ng/mL，对照组的尿AQP2水平为(9.41±1.53)ng/mL；与对照组比较，肾病组的尿AQP2水平更高，差异有统计学意义( P<0.001)。水肿组的尿AQP2、β2-MG、α1-MG水平高于非水肿组，差异均有统计学意义(均 P<0.01)。ROC曲线分析显示，尿AQP2诊断肾病水肿的曲线下面积(AUC)为0.82，最佳临界值为26.92 ng/mL，灵敏度为71.04%，特异度为81.24%；尿AQP2诊断肾病的AUC为0.92，最佳临界值为18.11 ng/mL，灵敏度为81.42%，特异度为92.62%；尿β2-MG诊断肾病水肿的AUC为0.68，尿α1-MG诊断肾病水肿的AUC为0.79。尿β2-MG、α1-MG、AQP2联合诊断肾病水肿的AUC、灵敏度、特异度依次为0.90、86.83%、87.49%。 结论:尿AQP2可作为肾小管功能损伤评价中的敏感指标，可提升肾小管功能损伤诊断的准确性。

目的:构建阿霉素(ADR)诱导的局灶节段性肾小球硬化(FSGS)小鼠模型，探究足细胞损伤的分子机制。方法:取24只8周龄雄性BALB/c小鼠分为生理盐水组(对照组，n＝6)和FSGS模型组(ADR组，n＝18)，分别按照10 mg/kg的剂量尾静脉注射生理盐水和ADR，采集注射ADR后的7、14、28 d小鼠以及注射生理盐水后的28 d小鼠的血液、尿液和肾组织，检测血液和尿液中血肌酐﹑尿肌酐﹑尿蛋白含量，将肾组织进行HE和MASSON染色，观察其形态变化，然后采用实时定量PCR和Western blot法检测肾皮质组织中Synaptopodin和RhoA的表达。结果:与对照组比较，注射ADR 7 d后，ADR组小鼠的尿蛋白与尿肌酐比值升高，血肌酐水平升高，差异均有统计学意义(均 P<0.05)；注射ADR 7 d后，与对照组比较，ADR组小鼠的肾皮质组织中Synaptopodin 、RhoA的mRNA和蛋白质表达量均降低，差异均有统计学意义(均 P<0.05)；注射ADR 28 d后，ADR组小鼠出现肾小球硬化程度恶化、肾小管损伤和间质病变纤维化，表现为严重的肾脏损伤。 结论:ADR可成功诱导小鼠FSGS，Synaptopodin和RhoA的表达下调可能导致足细胞损伤，进而促进小鼠形成FSGS。

目的:观察高胆红素血症对模型大鼠肾小球的影响，并探讨其量效反应及机制。方法:将24只成年雄性SD大鼠按随机数字表法分为4组，每组6只。采用每12 h腹腔注射1次胆红素、共4次制备高胆红素血症大鼠模型，小、中、大剂量胆红素组（分别为LB组、MB组、HB组）剂量分别为50、100、200 mg/kg；阴性对照组（NC组）给予不含胆红素粉末的相同溶剂。各组给药结束后收集24 h尿液，检测总蛋白（TP）水平；处死大鼠取心脏血，用全自动生化分析仪检测总胆红素（TBil）和直接胆红素（DBil）水平；取肾组织，过碘酸希夫（PAS）染色后光镜下观察肾小球形态，并进行肾小球损伤评分；醋酸铀-枸橼酸铅双染后，透射电镜下观察足细胞形态；采用比色法检测氧化应激指标超氧化物歧化酶（SOD）活性和丙二醛（MDA）含量；采用蛋白质免疫印迹试验（Western blotting）检测足细胞特异性标志物肾母细胞瘤蛋白1（WT-1）的表达水平。结果:随着胆红素剂量增加，大鼠24 h尿TP、血TBil、血DBil、肾组织MDA含量逐渐升高，肾组织SOD活性和WT-1表达量逐渐降低，LB组、MB组、HB组与NC组比较差异均有统计学意义〔24 h尿TP（mg）：24.85±2.22、52.57±3.66、56.84±3.49比7.50±1.33，血TBil（μmol/L）：37.75±2.19、81.37±2.13、125.13±9.96比5.53±0.41，血DBil（μmol/L）：15.50±1.96、37.88±1.05、64.53±2.89比2.38±0.35，肾组织MDA（μmol/g）：3.14±0.65、5.01±0.28、7.50±1.08比2.30±0.20，肾组织SOD（kU/g）：95.91±10.43、57.06±15.90、37.12±11.72比113.91±12.16，肾组织WT-1蛋白（WT-1/GAPDH）：0.280±0.006、0.239±0.006、0.198±0.001比0.361±0.005，均 P<0.05〕。光镜下显示，不同剂量胆红素各组大鼠肾小球系膜和基底膜厚度不均匀，部分伴有增生、增宽表现，且肾小球损伤评分随胆红素剂量增加而逐渐升高，LB组、MB组、HB组与NC组比较差异均有统计学意义（分：17.50±1.05、25.00±1.41、34.00±1.41比11.67±0.82，均 P<0.05）；透射电镜下显示，随着胆红素剂量的增加，肾小球足细胞损伤也逐渐加重。 结论:高胆红素血症可造成肾小球损伤，且呈剂量依赖性，在致死量范围内，剂量越高，损伤越严重，可能与胆红素通过促进氧化应激导致肾小球足细胞损伤有关。

目的:通过蛋白重组技术低成本、快速制备高浓度人视黄醇结合蛋白4（hRBP4）参考物质，解决临床hRBP4高值参考物质难以获取的需求。方法:在美国国立生物技术信息中心NCB查找hRBP4的互补DNA序列，经大肠埃希菌密码子优化后人工合成，然后将DNA片段克隆至原核表达质粒pET-28a（+）中，以构建重组hRBP4表达载体。将重组质粒转化至 E. coli BL21感受肽中，优化诱导表达条件（如温度、转速和异丙基硫代半乳糖苷IPTG浓度等）、诱导质粒表达并对重组蛋白进行His融合标签纯化，获取纯化后的hRBP4重组蛋白。 结果:DNAMAN软件对比显示编码hRBP4蛋白的碱基序列完全正确，成功构建重组hRBP4原核表达质粒；SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳结果显示亲和纯化产物中可清晰可见约相对分子质量26 000电泳条带；临床尿液和血清hRBP4常规检测系统均可检测到纯化的hRBP4蛋白，且稀释倍数与检测浓度间呈现良好线性关系。结论:成功构建重组hRBP4高水平表达系统，重组hRBP4蛋白纯度大、浓度高、生产周期短，有望在室间质量评价质控品和有证参考物质研制中发挥重要作用。

目的:探究TcpC对尿路致病性大肠埃希菌(uropathogenic Escherichia coli, UPEC)引发小鼠膀胱炎的作用，并初步了解其致病机制。 方法:从尿道向C57BL/6小鼠膀胱滴注10 9 CFU分泌TcpC的UPEC CFT073 wt或敲除 tcpc基因的CFT073 Δ tcpc，构建膀胱炎模型小鼠。3 d后处死小鼠取膀胱观察大体病理变化。膀胱4%多聚甲醛固定24 h后，包埋、切片、HE染色观察膀胱组织病理改变情况，免疫组化法对组织中TcpC进行定位。采集上述UPEC菌株感染的小鼠尿液，十倍稀释法计数尿液中细菌载量，PCR检测CFT073 wt感染组膀胱组织和尿液细菌基因组DNA中是否存在 tcpc基因。实时荧光定量PCR和Western blot检测CFT073 wt菌株感染巨噬细胞后胞内TcpC mRNA和蛋白质水平。Western blot和ELISA分别检测上述UPEC菌株对巨噬细胞NF-κB活化和促炎因子表达水平的影响，激光共聚焦显微镜和荧光显微镜分别观察上述UPEC菌株感染巨噬细胞后细菌和细胞活力。 结果:与CFT073 Δ tcpc组相比，CFT073 wt组小鼠膀胱明显肿大，膀胱组织中有大量中性粒细胞浸润和TcpC。CFT073 wt组小鼠尿液中的细菌数量显著多于CFT073 Δ tcpc组；PCR结果显示，膀胱组织和尿液中的细菌均为CFT073 wt。在CFT073 wt菌株感染巨噬细胞过程中，胞内TcpC的mRNA和蛋白质水平显著升高。CFT073 wt促进巨噬细胞NF-κB信号通路IκBα的蛋白质水平并抑制p65的磷酸化水平和促炎因子的产生。TcpC有利于CFT073 wt在巨噬细胞内的存活和侵袭。 结论:TcpC在CFT073 wt感染及引发小鼠膀胱炎过程中表达水平显著升高，并通过抑制巨噬细胞NF-κB信号通路的活化和促炎因子的产生提高CFT073 wt在巨噬细胞内的存活率，与UPEC致病及逃逸巨噬细胞固有免疫密切相关。

目的:探讨血浆和尿液中细胞外囊泡微小RNA-4639和微小RNA-210在膜性肾病中的表达、疾病监测和预后评估价值。方法:2020年9月至2021年3月期间于苏州大学附属第三医院纳入30例健康和30例膜性肾病患者，聚乙二醇(PEG)沉淀法提取血浆和尿液细胞外囊泡；电子显微镜和纳米颗粒跟踪分析仪表征形态；蛋白质印迹测定囊泡表面标志物的表达；荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)测定微小RNA的表达水平； t检验和皮尔森相关系数分析数据；受试者工作特征曲线评价微小RNAs的诊断效能。 结果:膜性肾病患者尿液细胞外囊泡的浓度及标志物的表达明显高于对照组(4.00×10 11±1.00×10 10颗粒数/毫升比2.80×10 11±1.00×10 10颗粒数/毫升，CD63：0.81±0.20比1.00±0.12，CD81：0.43±0.10比1.00±0.44， t＝14.70，1.46，1.88， F＝1.00、3.52、19.68， P均<0.05)，miR-4639和miR-210在血浆和尿液细胞外囊泡中的水平显著升高(miR-4639：1.62±1.10比0.69±0.33，2.52±0.77比1.66±0.38；miR-210：1.37±0.89比0.68±0.32，2.20±0.85比1.14±0.56， t＝4.45，5.21，4.03，5.33， F＝11.46、4.08、7.74、2.29， P均<0.05)，且分别与肾小球滤过率(eGFR)的下降和尿蛋白的升高显著相关( r＝－0.308、0.355和 r＝－0.473、0.475， P均<0.05)。囊泡内miR-4639和miR-210表达在肾功能受损个体(eGFR<90 ml/min·1.73 m 2)和严重蛋白尿的个体(≥3.5 g/24 h)中均显著高于对照组(miR-4639：1.81±1.45比1.00±0.68，2.59±0.72比1.76±0.53；miR-210：1.80±1.19比0.83±0.44，2.31±0.86比1.24±0.64， t＝2.93、4.54、4.60、4.93， F＝4.58、1.84、7.36、1.84， P均<0.05)。膜性肾病进展组患者的基线血浆细胞外囊泡miR-4639和miR-210表达量更高(miR-4639：1.91±1.12比0.93±0.48；miR-210：1.34±0.46比0.88±0.41， t＝2.58，2.47， F＝5.54、1.26， P均<0.05)。双miRNAs组合对评估肾功能水平和24 h尿蛋白水平均具有更好的诊断价值(灵敏度75.00%、93.33%，特异度79.17、85.71%，曲线下面积为0.83、0.93)。 结论:细胞外囊泡miR-4639和miR-210可作为有效生物标志物，以协助膜性肾病的诊断，评估其严重程度和疾病进展。

目的:探讨长期暴露柴油机尾气(DEE)对肺部炎症的影响以及潜在的机制。方法:30只Sprague-Dawley雄性大鼠随机分为DEE组和对照组，每组15只。DEE组暴露于含有3 mg/m 3柴油机排气微粒的DEE中12周，对照组暴露于净化空气中12周。使用酶联免疫吸附试验或高效液相色谱-串联质谱法检测尿液中2-羟基菲、9-羟基菲、8-羟基-2-脱氧鸟苷、丙二醛水平，血液和支气管肺泡灌洗液(BALF)中白细胞介素8(IL-8)、IL-6和肿瘤坏死因子α水平；肺组织病理切片观察肺炎症和重塑变化；荧光定量聚合酶链反应测定肺组织中miR-155水平；蛋白质印迹测定肺组织中沉默信息调节因子1(SIRT1)表达；通过双荧光素酶报告实验和免疫共沉淀实验验证miR-155与SIRT1的相互作用。 结果:DEE组大鼠尿中2-羟基菲、9-羟基菲、8-羟基-2-脱氧鸟苷、丙二醛水平，血清和BALF中IL-8、IL-6和肿瘤坏死因子α水平，BALF中白细胞总数、中性粒细胞、嗜酸粒细胞和淋巴细胞数均显著高于对照组( P值均<0.001)，肺组织切片中气道炎症及重塑加重。与对照组比较，DEE组大鼠肺组织中miR-155水平升高( t＝21.854， P<0.001)，SIRT1表达下降( t＝25.580， P<0.001)。miR-155模拟物下调SIRT1野生型细胞的荧光强度，而SIRT1在miR-155组中优先富集。 结论:DEE暴露加重大鼠气道炎症和氧化应激，可能与miR-155下调靶标SIRT1表达水平有关。

尿液细胞外囊泡（uEV）是近年来备受关注的尿液中的重要组成成分。随着高通量组学及单个EV研究技术的进步，人们对uEV的来源及其内容物有了更深入的认识。uEV内容物包括蛋白质、脂质、RNA和DNA等，能够直接反映其来源器官的病理生理状态。uEV兼具高稳定性、可溯源性及内容物可富集性等特点，在多系统疾病，尤其是泌尿生殖系统疾病中显示出了独特的作为生物标志物的应用前景。