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TcpC在尿路致病性大肠埃希菌引发小鼠膀胱炎中的作用及致病机制研究
编辑人员丨1天前
目的:探究TcpC对尿路致病性大肠埃希菌(uropathogenic Escherichia coli, UPEC)引发小鼠膀胱炎的作用,并初步了解其致病机制。 方法:从尿道向C57BL/6小鼠膀胱滴注10 9 CFU分泌TcpC的UPEC CFT073 wt或敲除 tcpc基因的CFT073 Δ tcpc,构建膀胱炎模型小鼠。3 d后处死小鼠取膀胱观察大体病理变化。膀胱4%多聚甲醛固定24 h后,包埋、切片、HE染色观察膀胱组织病理改变情况,免疫组化法对组织中TcpC进行定位。采集上述UPEC菌株感染的小鼠尿液,十倍稀释法计数尿液中细菌载量,PCR检测CFT073 wt感染组膀胱组织和尿液细菌基因组DNA中是否存在 tcpc基因。实时荧光定量PCR和Western blot检测CFT073 wt菌株感染巨噬细胞后胞内TcpC mRNA和蛋白质水平。Western blot和ELISA分别检测上述UPEC菌株对巨噬细胞NF-κB活化和促炎因子表达水平的影响,激光共聚焦显微镜和荧光显微镜分别观察上述UPEC菌株感染巨噬细胞后细菌和细胞活力。 结果:与CFT073 Δ tcpc组相比,CFT073 wt组小鼠膀胱明显肿大,膀胱组织中有大量中性粒细胞浸润和TcpC。CFT073 wt组小鼠尿液中的细菌数量显著多于CFT073 Δ tcpc组;PCR结果显示,膀胱组织和尿液中的细菌均为CFT073 wt。在CFT073 wt菌株感染巨噬细胞过程中,胞内TcpC的mRNA和蛋白质水平显著升高。CFT073 wt促进巨噬细胞NF-κB信号通路IκBα的蛋白质水平并抑制p65的磷酸化水平和促炎因子的产生。TcpC有利于CFT073 wt在巨噬细胞内的存活和侵袭。 结论:TcpC在CFT073 wt感染及引发小鼠膀胱炎过程中表达水平显著升高,并通过抑制巨噬细胞NF-κB信号通路的活化和促炎因子的产生提高CFT073 wt在巨噬细胞内的存活率,与UPEC致病及逃逸巨噬细胞固有免疫密切相关。
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编辑人员丨1天前
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尿路致病性大肠埃希菌通过TcpC抑制巨噬细胞吞噬的信号通路研究
编辑人员丨1天前
目的:探究尿路致病性大肠埃希菌TcpC N端泛素连接酶片段抑制巨噬细胞吞噬的信号通路。方法:生物信息学软件分析TcpC N端泛素连接酶片段氨基酸序列结构与功能,并预测其功能位点。PCR扩增 tcpc N端不同长度片段 tcpc-330、 tcpc-450和 tcpc-510基因并构建其原核表达系统。Ni-NTA亲和层析法纯化目的重组蛋白rTcpC-N110、rTcpC-N150和rTcpC-N170;Detoxi-Gel层析柱去除目的重组蛋白中可能含有的LPS。Western blot和实时荧光定量RT-PCR检测rTcpC-N110、rTcpC-N150、rTcpC-N170和rTcpC-TIR分别孵育巨噬细胞后胞内MyD88蛋白水平和mRNA水平。Western blot检测上述蛋白质孵育巨噬细胞后NF-κB信号通路活化情况。ELISA检测上述蛋白质孵育巨噬细胞后促炎因子水平。 结果:TcpC N端片段氨基酸序列中第12位半胱氨酸、第104位色氨酸和第106位色氨酸是其泛素连接酶活性的功能位点。所构建的原核表达系统在IPTG诱导下能够有效表达rTcpC-N110、rTcpC-N150和rTcpC-N170,Ni-NTA亲和层析法提纯后均仅见单一蛋白质条带。Detoxi-gel亲和层析柱处理后rTcpC-N110、rTcpC-N150和rTcpC-N170中LPS为阴性。TcpC泛素连接酶片段能够抑制MyD88蛋白水平但不影响其mRNA水平。TcpC泛素连接酶片段显著抑制LPS诱导的NF-κB信号通路p50和p65的磷酸化。TcpC泛素连接酶片段显著抑制LPS诱导的巨噬细胞促炎因子的产生。结论:rTcpC-N110、rTcpC-N150和rTcpC-N170具有抑制MyD88蛋白水平和NF-κB信号通路活化功能,与抑制巨噬细胞固有免疫活性密切相关。
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编辑人员丨1天前
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尿路感染中病原体致病因素的研究进展
编辑人员丨1天前
尿路感染(UTIs)是一种常见的复发性感染,可以表现为临床症状轻微也可以严重到危及生命。尿路感染的高复发率和日益增加的细菌耐药性可能会大大加重这些感染患者的经济负担。因此,它越来越成为一个严重的公共卫生问题。在本综述中,我们介绍了病原菌是如何在宿主细胞黏附和定植,细菌菌毛在尿路感染发生发展中的重要作用,以及不同病原菌在UTIs及导管相关性尿路感染(CAUTIs)中的致病机制。阐明尿路感染中发生在宿主-病原体层面相互作用上的分子机制,以及这些相互作用在感染中导致的病理生理学后果,有助于我们进一步全面深刻理解尿路感染的发病机制。
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编辑人员丨1天前
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尿路致病性大肠埃希菌毒力因子TcpC在其免疫逃逸中的作用及致病机制研究
编辑人员丨1天前
目的:探究尿路致病性大肠埃希菌(uropathogenic Escherichia coli, UPEC)毒力因子TcpC在其免疫逃逸中的作用,并初步了解其相关致病机制。 方法:从C57BL/6小鼠的尿道插管至膀胱,滴注分泌TcpC的UPEC CFT073野生株(CFT073 wt)或 tcpc基因敲除株(CFT073 Δ tcpc)悬液10 9菌落形成单位,构建肾盂肾炎小鼠模型。5 d后处死小鼠取肾脏,观察大体形态变化。HE染色观察肾脏组织病理变化,免疫组织化学法对肾组织中TcpC进行定位。采集感染后的小鼠尿液,十倍稀释法计数尿液中细菌载量,PCR检测小鼠肾脏组织和尿液细菌基因组DNA中的 tcpc基因。实时荧光定量PCR检测CFT073 wt菌株感染树突状细胞后胞内TcpC mRNA水平。Western blot和ELISA分别检测CFT073 wt和CFT073 Δ tcpc菌株对树突状细胞NF-κB活化和促炎因子水平的影响,激光共聚焦显微镜观察UPEC菌株感染树突状细胞后的细菌活力。 结果:与CFT073 Δ tcpc组相比,CFT073 wt组小鼠肾脏有明显脓肿产生,肾脏组织中有大量中性粒细胞浸润和TcpC。CFT073 wt组小鼠尿液中的细菌载量显著高于CFT073 Δ tcpc组;PCR结果显示,肾脏组织和尿液中细菌均能扩增出 tcpc基因。在CFT073 wt菌株感染树突状细胞过程中,胞内TcpC的mRNA和蛋白质水平显著升高。CFT073 wt抑制树突状细胞NF-κB信号通路p50的磷酸化水平和促炎因子的产生。TcpC有利于CFT073 wt在树突状细胞内的存活。 结论:TcpC在CFT073 wt感染及引发小鼠肾盂肾炎过程中表达水平显著升高,并通过抑制树突状细胞NF-κB信号通路的活化和促炎因子的产生有利于CFT073 wt在树突状细胞内的存活,与UPEC致病及抗树突状细胞免疫密切相关。
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编辑人员丨1天前
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尿路致病性大肠埃希菌的耐药和毒力全基因组分析
编辑人员丨1天前
目的:从基因组水平上探讨尿路致病性大肠埃希菌UPEC132株的耐药性和致病机制。方法:采用MIC法测定菌株UPEC132对16种抗菌药物的敏感性,多位点序列分型(MLST)方法对其分型,利用三代测序平台对其进行全基因组测序和组装,并用Prodigal软件预测和数据库筛选进行耐药和毒力基因功能注释,然后收集GenBank上23株UPEC菌株的染色体基因组序列,利用RAxML软件对UPEC132进行系统进化分析并构建系统进化树。结果:UPEC132菌株对氨苄青霉素、氨苄青霉素/舒巴坦、四环素、红霉素、氯霉素、头孢唑林耐药,其MLST分型为ST10522型。该株全基因组包括一条完整的基因组(染色体)序列及两条质粒序列,染色体、质粒P1和P2的序列大小分别为5 234 468 bp、117 139 bp和101 356 bp,鸟嘌呤-胞嘧啶(GC)含量分别为50.48%、49.05%和54.04%。该株染色体、质粒P1和P2分别有4 856、140和116个基因。其耐药基因多位于染色体,主要为耐多药外排泵基因簇,P2仅携带β-内酰胺酶基因 blaTEM-1和四环素耐药基因 tetG。UPEC132毒力基因也位于染色体,主要为菌毛黏附素9种、铁摄取系统5种和分泌性毒素3种。Afa菌毛和Ⅳ型菌毛基因簇分别位于质粒P1和P2上。系统进化树分析显示UPEC132与23株UPEC均不在同一分支。 结论:UPEC132株的ST10522型为国内外首次报道的大肠埃希菌新ST型,其全基因组遗传信息被全面揭示,耐药性和致病性与其携带的多种耐药基因和毒力基因相关。
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编辑人员丨1天前
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尿路感染患者常见病原菌分布及耐药性分析
编辑人员丨2023/9/16
目的 分析徐州医科大学附属医院尿路感染患者尿液标本的病原菌分布及大肠埃希菌对常用抗菌药物的耐药情况,为合理选用抗菌药物提供指导依据.方法 收集2021 年8 月—2022 年7 月徐州医科大学附属医院送检的 3 882 份自行收集或无菌导出的尿液标本,并进行中段尿培养,分析尿培养阳性标本病原菌分布结果、大肠埃希菌检出科室分布情况及其抗菌药物敏感性.结果 3 882 份送检尿培养标本中尿培养阳性标本共 881份(22.69%),其中由单一菌株引起的有 846 份,由 2 种混合菌株引起的有 35 份;共分离出 916 株病原菌,其中检出512 株革兰阴性菌(55.90%),以大肠埃希菌(306 株,33.41%)和肺炎克雷伯菌(75 株,8.19%)为主;检出革兰阳性菌 188 株(20.52%),以屎肠球菌(80 株,8.73%)和粪肠球菌(27 株,2.95%)为主;检出 216 株真菌(23.58%),以白假丝酵母菌(77 株,8.41%)和热带假丝酵母菌(58 株,6.33%)为主.尿路致病性大肠埃希菌(UPEC)分离株中 8.50%(26/306)分离自门诊患者,91.50%(280/306)分离自住院患者,其中泌尿外科、肾脏内科、风湿免疫科、神经内科和重症监护室(ICU)的检出率依次为 32.68%、20.92%、8.50%、6.86%、6.21%.UPEC对替卡西林(88.24%)、头孢呋辛(61.49%)、头孢呋辛酯(62.94%)、左氧氟沙星(72.46%)和复方新诺明(58.03%)的耐药性较高,耐药率均高于 50%;对其他抗菌药物较为敏感.结论 该院尿路感染标本中病原菌构成复杂、种类多样,其中革兰阴性菌是尿路感染的主要致病菌,以大肠埃希菌占比最多,部分病原菌呈现高水平耐药.患者应积极配合医生开展病原菌鉴定及药物敏感试验,以便合理选用抗菌药物,避免多重耐药菌和新型耐药菌的出现.
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编辑人员丨2023/9/16
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尿路致病性大肠埃希菌1型菌毛黏附特性与分子流行病学分析
编辑人员丨2023/8/19
目的 了解尿路致病性大肠埃希菌(UPEC)1型菌毛黏附特性、耐药表型及分子流行病学特征,为临床诊疗提供理论基础.方法 收集2020年1-11月广东省中医院大学城医院临床分离的80株UPEC,利用Vitek Ⅱ细菌鉴定药敏分析仪鉴定细菌并进行药敏实验.利用PCR方法检测UPEC的1型菌毛fimH基因的携带情况,酵母细胞黏附实验检测UPEC的黏附特性,比较黏附阳性UPEC和黏附阴性UPEC菌株间的抗生素耐药差异.通过随机扩增多态性DNA(RAPD)法分析黏附阳性UPEC间的亲缘关系.结果 80株UPEC中1型菌毛fimH基因阳性菌株为74株,占94.5%,其中黏附阳性菌株为37株,占50.0%.黏附阳性UPEC头孢呋辛耐药率(45.9%)和产超广谱β内酰胺酶(ESBL)阳性率(45.9%)均高于黏附阴性UPEC(21.6%、21.6%),差异均有统计学意义(P均<0.05).37株黏附阳性UPEC可基因聚类,分为18个基因型,其中以R010基因型为主,包含11株UPEC,占29.7%;另外R006基因型包含4株UPEC,占10.8%;其余基因型均包含1~2株菌.结论 临床分离的UPEC 1型菌毛fimH基因携带率高,黏附能力强,应用头孢呋辛抗感染治疗时应注意耐药.黏附阳性菌株虽可聚类,但未出现院内流行性感染趋势.
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编辑人员丨2023/8/19
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尿路致病性大肠埃希菌多位点序列分型与耐药谱型的相关性
编辑人员丨2023/8/6
目的 探讨尿路致病性大肠埃希菌(UPEC)的多位点序列分型(MLST)与抗菌药物耐药的关系.方法 以上海中医药大学附属普陀医院2015年3月至2016年12月住院患者为研究对象,收集清洁中段尿样本中分离培养的大肠埃希菌,应用MLST方法进行菌株分型研究.采用Vitek-2 Compact全自动微生物分析系统检测UPEC对17种常用抗菌药物的敏感性及超广谱β-内酰胺酶(ESBLs).结果 93株UPEC对亚胺培南耐药率为0%,对厄他培南、阿米卡星、哌拉西林/他唑巴坦耐药率为1.1%~3.2%,保持高度敏感性.对头孢他啶、头孢吡肟、氨曲南、庆大霉素和妥布霉素均有一定敏感性,耐药率低于50%.对头孢曲松、环丙沙星、左氧氟沙星和复方SMZ耐药率>50%.产ESBLs菌株59例(63.4%),ESBLs阴性菌株34株(36.6%).分离株共有33个已知序列型(STs),1例未知ST型,其中最多的克隆群为ST131(23/93、24.7%),ST648(9/93、9.7%),ST405(7/93、7.5%)和ST1193(7/93、7.5%).结论 UPEC具有多药耐药性,MLST分型提示UPEC菌株具有多样性,ESBLs与UPEC抗菌药物耐药有一定相关性,ST型与耐药谱型无相关性.
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编辑人员丨2023/8/6
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磷霉素氨丁三醇对尿路致病性大肠埃希菌的体外抗菌活性研究
编辑人员丨2023/8/6
目的 了解磷霉素氨丁三醇对尿路感染患者大肠埃希菌的体外抗菌活性,为临床诊治提供参考依据.方法 采用VITEK2 Compact进行细菌鉴定,药物敏感性试验采用VITEK2 Compact或纸片扩散(K?B)法,按美国临床和实验室标准化协会2016年标准判读药物敏感性试验结果,用WHONET 5.6软件进行数据统计分析.结果 1125株病原菌中共分离出522株大肠埃希菌,其中产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)的大肠埃希菌251株(48.1%),其对磷霉素氨丁三醇的敏感率为96.6%;非产ESBLs大肠埃希菌271株(51.9%),其对磷霉素氨丁三醇的敏感率为99.6%.大肠埃希菌对碳青霉烯类抗菌药物(亚胺培南、厄他培南)均保持很好的敏感性(>99%),产ESBLs菌株对大多数抗菌药物的耐药率明显高于非产ESBLs菌株.结论 尿路感染以大肠埃希菌为主,磷霉素氨丁三醇对产ESBLs的大肠埃希菌具有良好的体外抗菌活性.
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编辑人员丨2023/8/6
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尿路致病性大肠埃希菌qseC基因在细菌生物膜形成中的作用
编辑人员丨2023/8/6
[目的]构建尿路致病性大肠埃希菌(uropathogenic Escherichia coli,UPEC)的群体感应系统基因qseC缺陷株,分析qseC基因缺失对UPEC形成细菌生物膜的影响.[方法]利用3种质粒(pKD46、pKD3、pCP20)组成的Red重组系统对UPEC W140菌株的qseC基因进行敲除.通过绘制生物膜生长曲线,对基因缺失株与原始菌株的生物膜形成能力进行比较.[结果]PCR检测证实UPEC W140菌株染色体上的qseC基因被成功敲除,得到的基因缺陷株命名为UPEC W140ΔseC.与野生菌株相比,基因缺陷菌株在生物膜形成过程中细菌数量增加不显著,吸光度A550值最高为(0.37±0.02),明显小于野生菌株的相应值(1.12±0.02)(P<0.01).[结论]qseC基因与UPEC生物膜的形成过程密切相关,通过对该基因及其表达产物的阻断有望为控制尿路感染提供新的治疗策略.
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编辑人员丨2023/8/6
