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先天性肝纤维化临床及病理学特点分析
编辑人员丨6天前
目的:探讨先天性肝纤维化(congenital hepatic fibrosis,CHF)的临床和病理特征。方法:收集2014—2021年中山大学附属第三医院病理科CHF病例12例,进行临床及病理特征分析。结果:12例患者中,男性6例,女性6例,年龄5~24岁,中位发病年龄13岁。临床表现为发热、呕血/便血、牙龈/鼻腔出血、黄疸、乏力。病理特征为肝组织被大小不等的纤维间隔分隔成结节状,汇管区纤维组织明显增生,汇管区中央的胆管扩张,周边小胆管增生,炎细胞浸润不明显。结论:CHF好发于儿童或年轻人,以汇管区纤维化扩大及胆管增生、扩张为主要病理学改变。肝活检是诊断CHF的首选方案。
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编辑人员丨6天前
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下调G蛋白偶联受体C家族5A表达抑制脂多糖诱导的人牙龈成纤维细胞炎症反应
编辑人员丨6天前
目的:探究下调G蛋白偶联受体C家族5A(GPRC5A)表达对脂多糖诱导的人牙龈成纤维细胞(GFs)炎症反应的影响并探索其机制,为深入探讨G蛋白偶联受体(GPCR)在牙周炎中的调控作用及其机制奠定基础。方法:于2022年12月至2023年2月在山东大学口腔医学院·口腔医院口腔颌面外科、牙周科收集3名牙周健康者(牙周健康组)和3例牙周炎患者(牙周炎组)的牙龈组织,采用免疫组化染色检测两组牙龈组织中GPRC5A的表达。收集健康牙龈组织提取GFs,健康牙龈组织来自2022年12月至2023年2月在山东大学齐鲁医学院口腔医学院·口腔医院口腔颌面外科招募的6例16~20岁需拔除埋伏阻生齿的患者。应用胶原酶消化法提取并培养GFs,设置30、50和80 μmol/L浓度转染GPRC5A小干扰RNA(siGPRC5A)的实验组和阴性对照小干扰RNA(siNC),利用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测siGPRC5A的沉默效率;设置阴性对照、脂多糖、siGPRC5A+脂多糖和siGPRC5A 4个组,通过RT-qPCR和蛋白质印迹法分别验证应用siGPRC5A对1 mg/L脂多糖诱导的GFs炎症状态下GPRC5A在基因和蛋白水平的表达;下调GPRC5A表达后,RT-qPCR检测脂多糖诱导的GFs白细胞介素(IL)-1β、IL-6、IL-8、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、前列腺素内过氧化物合酶2(PTGS2)基因的表达;通过蛋白质印迹法、免疫荧光染色检测核因子-κB(NF-κB)信号通路的激活情况。结果:免疫组化结果显示,牙周炎组牙龈组织中GPRC5A表达(0.132±0.006)显著高于牙周健康组(0.036±0.019)( t=8.24, P=0.001)。RT-qPCR结果显示,在脂多糖作用2、6、12和24 h时,脂多糖组GPRC5A基因水平表达量(分别为0.026±0.002、0.042±0.005、0.004±0.000、0.016±0.000)均分别显著高于阴性对照组(分别为0.004±0.000、0.004±0.000、0.002±0.000、0.007±0.000)(均 P<0.001),且6 h时达峰值。50 μmol/L siGPRC5A(31.16±3.29)与siNC组(100.00±4.88)相比能有效沉默GFs中GPRC5A的表达( F=297.98, P<0.001)。RT-qPCR和蛋白质印迹法结果显示,脂多糖组GPRC5A在基因和蛋白水平的表达(分别为1.30±0.10、1.43±0.03)均显著高于阴性对照组(分别为1.00±0.01、1.00±0.00)(均 P<0.001),siGPRC5A组(分别为0.27±0.03、0.71±0.00)均显著低于阴性对照组(分别为1.00±0.01、1.00±0.00)(均 P<0.001),siGPRC5A+脂多糖组(分别为0.39±0.03、1.06±0.16)均显著低于脂多糖组(分别为1.30±0.10、1.43±0.03)(均 P<0.001)。RT-qPCR结果显示,脂多糖组IL-8、IL-1β、IL-6、TNF-α、PTGS2基因表达水平均显著高于阴性对照组,siGPRC5A+脂多糖组均显著低于脂多糖组(均 P<0.001)。蛋白质印迹法结果表明,脂多糖组p65和IκBα蛋白磷酸化水平均显著高于阴性对照组,而siGPRC5A+脂多糖组均显著低于脂多糖组(均 P<0.01)。免疫荧光染色结果显示,对照组NF-κB p65集中表达于胞质,在脂多糖刺激下p65部分向核内转位,应用siGPRC5A后能一定程度上抑制脂多糖诱导的p65核内转位。 结论:GPRC5A在GFs炎症状态下表达增加,下调GPRC5A的表达能抑制脂多糖诱导的炎症反应,且GPRC5A可通过NF-κB信号通路发挥炎症调控的作用。
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编辑人员丨6天前
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S100A8、S100A9蛋白在健康和实验性牙周炎组织中的表达分布初探
编辑人员丨6天前
目的:观察S100A8、S100A9蛋白在比格犬健康及实验性牙周炎组织中的表达分布特点。方法:将6只比格犬的一侧下颌第二磨牙通过拴线法诱导实验性牙周炎模型(结扎组),另一侧下颌第二磨牙保持口腔卫生(健康对照组),应用免疫组化法检测S100A8、S100A9在6只比格犬健康及实验性牙周炎组织中的表达;免疫细胞化学法检测两种蛋白亚基在人牙龈成纤维细胞(human gingival fibroblasts,hGF)(来自3例牙冠延长术切除的牙龈组织)、人牙周膜细胞(human periodontal ligament cells,hPDLC)(来自3例因正畸拔除的前磨牙或第三磨牙的牙周膜细胞)中的表达。结果:实验性牙周炎诱导第12周,结扎组探诊深度[(3.86±0.14)mm]显著高于健康对照组[(2.11±0.28)mm, P<0.01];比格犬健康牙周组织中S100A8、S100A9主要表达于牙龈上皮细胞、中性粒细胞,且在结合上皮处呈强阳性表达;实验性牙周炎组织中除牙龈上皮、中性粒细胞外,两种蛋白还诱导表达于牙龈成纤维细胞、牙周膜细胞、微血管内皮细胞及骨髓成纤维细胞;hGF及hPDLC中均可检测到S100A8、S100A9的表达。 结论:实验性牙周炎使S100A8、S100A9的表达范围更大,表达S100A8、S100A9的细胞类型更多。
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编辑人员丨6天前
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基于单细胞转录组测序对牙周炎小鼠脑膜生物学改变与认知障碍相关性的研究初探
编辑人员丨6天前
目的:运用单细胞转录组测序分析牙周炎小鼠脑膜的生物学改变,探讨牙周炎小鼠脑膜生物学改变与认知障碍的相关性。方法:将30只C57BL/6小鼠按随机数字表法随机分为2组(每组15只),在对照组小鼠上颌双颊侧局部涂抹不含牙龈卟啉单胞菌(Pg)的2%羧甲基纤维素(CMC),在实验组小鼠上颌双颊侧局部涂抹Pg W83和2%CMC的混合物,3次/周,持续16周。观察对照组和实验组小鼠上颌牙槽骨吸收情况、自主活动能力与认知功能的变化、大脑皮层中小胶质细胞和星形胶质细胞激活情况、检测小鼠脑膜和大脑内紧密连接蛋白Occludin mRNA表达情况。然后使用统一流形逼近与投影(UMAP)算法对单细胞转录组各细胞亚群数据进行降维整合处理。对内皮细胞差异基因进行基因本体(GO)和京都基因和基因组数据库(KEGG)富集分析,进一步采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)验证差异基因转录激活因子3(Atf3)、含载脂蛋白L域1(Apold1)的表达情况。结果:亚甲蓝染色实验显示,实验组小鼠上颌颊、腭侧釉质牙骨质界到牙槽嵴顶的距离[分别为(185.60±17.60)、(206.90±13.37)μm]均显著大于对照组[分别为(135.33±9.57)、(163.05±14.98)μm]( t=5.02, P=0.002; t=4.37, P=0.005)。旷场实验显示实验组小鼠的总路程和平均速度[(971.88±164.57)cm和(3.25±0.55)cm/s]与对照组[(914.24±278.81)cm和(3.05±0.93)cm/s]相比差异均无统计学意义( t=0.65, P=0.525; t=0.65, P=0.520)。新物体识别实验中实验组小鼠相对辨别指数[(48.02±16.92)%]显著低于对照组[(66.27±17.90)%]( t=2.40, P=0.027)。Y迷宫实验显示,实验组小鼠的自发交替率[(50.99±14.17)%]显著低于对照组[(63.56±11.88)%]( t=2.33, P=0.030)。免疫组化染色结果显示,实验组小鼠脑内小胶质细胞和星形胶质细胞被激活。RT-qPCR结果显示,实验组小鼠脑膜和大脑中紧密连接蛋白Occludin mRNA的表达(分别为0.61±0.10、0.64±0.20)均显著低于对照组(分别为1.02±0.25、1.04±0.31)( t=3.47, P=0.010; t=2.66, P=0.024)。单细胞转录组测序显示,脑膜存在11种细胞类型,包括内皮细胞、成纤维细胞、免疫细胞等,其中内皮细胞占比最大[对照组为26.47%(1 589/6 004),实验组为26.26%(807/3 073)],是脑膜中最主要的细胞类型;实验组小鼠脑膜组织中粒细胞比例[11.65%(358/3 073)]较对照组[5.56%(334/6 004)]增加。进一步聚类分析内皮细胞,GO富集分析显示差异基因与血管生成、细胞黏附、细胞凋亡等有关;KEGG分析显示差异基因与白细胞介素-17信号通路、松弛素信号通路等相关。RT-qPCR显示,实验组小鼠脑膜组织中Atf3和Apold1 mRNA表达(分别为0.42±0.24、0.54±0.27)均显著低于对照组(分别为1.03±0.26、1.02±0.23)( t=3.88, P=0.005; t=3.02, P=0.017)。 结论:Pg W83慢性感染的牙周炎小鼠认知能力下降,存在神经炎症,屏障功能改变;单细胞转录组测序发现脑膜组织存在免疫细胞浸润,Atf3和Apold1基因表达下调,提示脑膜免疫和屏障功能的改变在牙周炎导致的认知障碍中发挥作用。
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编辑人员丨6天前
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低能量激光对重度牙周炎治疗效果的临床研究
编辑人员丨6天前
目的:评估牙周基础治疗联合低能量激光照射对需要拔除患牙的重度牙周炎患者的治疗效果。方法:选取2018年6月至2019年5月于天津市第一中心医院口腔科就诊的重度牙周炎患者18例(共43颗患牙,每例均有2颗及以上牙周炎患牙需要拔除),按随机数字表法分为对照组和试验组,其中对照组9例(20颗患牙),试验组9例(23颗患牙)。对照组和试验组均进行牙周基础治疗,试验组在牙周基础治疗后的第1、2、7天进行低能量激光照射治疗(808 nm Ga·Al·As半导体连续激光,输出功率80 mW,能量密度4 J/cm 2,光斑面积0.28 cm 2,患牙每个牙周袋内照射时间15 s)。治疗前、治疗后1周和4周,分别检测对照组和试验组的牙周探诊深度(PD)、临床附着水平(CAL)、龈沟出血指数(SBI),同时收集两组患者的龈沟液,采用酶联免疫吸附测定法检测龈沟液中的碱性成纤维细胞生长因子(b-FGF)水平,采用免疫散射比浊法检测患者的血清超敏C反应蛋白(hs-CRP)水平。 结果:治疗前两组重度牙周炎患者的年龄、PD、CAL、SBI、b-FGF和hs-CRP水平差异均无统计学意义(均 P>0.05)。治疗后1周,两组间PD、CAL、b-FGF和hs-CRP水平差异均无统计学意义(均 P>0.05);试验组的SBI低于对照组,差异具有统计学意义(2.43±0.97比4.13±0.78, P<0.05)。治疗后4周,试验组的SBI低于对照组,差异具有统计学意义(2.26±0.96比3.75±0.72, P<0.01);两组间PD、CAL差异均无统计学意义(均 P>0.05);试验组的b-FGF水平较对照组升高[(35.28±5.41) pg/30 s比(33.45±2.37) pg/30 s],血清hs-CRP水平较对照组明显降低[(3.23±1.73) mg/L比(5.79±0.63) mg/L],差异均具有统计学意义(均 P<0.05)。 结论:低能量激光疗法可短期内有效降低需要拔除患牙的重度牙周炎患者的SBI,但对减少PD、改善CAL意义不大;同时可降低患者的血清hs-CRP水平,升高患牙龈沟液中的b-FGF水平,有利于重度牙周炎症的控制。
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编辑人员丨6天前
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软组织再生用液态血浆基质离心时间初探
编辑人员丨6天前
目的:从力学性能、生物学性能、促进软组织再生效果等方面探讨水平离心制备的软组织再生用液态血浆基质的最佳离心时间,以期为液态血浆基质的临床应用提供参考。方法:2021年9至11月采集武汉大学口腔医学院6名健康医师志愿者[男性3名,女性3名,年龄(26±2)岁]静脉血,以500 × g离心力分别离心3、5、8和12 min,获取液态血浆基质。测量并记录各液态血浆基质的体积、质量、凝固时间以及凝块的力学性能(各时间点样本量均为3)。用扫描电镜观察各液态血浆基质凝块的微观结构;流变学测试检测各液态血浆基质凝块的流变性能;使用全血细胞计数检测全血以及各液态血浆基质中细胞数量和浓度;通过HE染色观察各液态血浆基质凝块中细胞分布;利用细胞迁移法检测对照组(含20%胎牛血清的高糖达尔伯克改良伊格尔培养液)以及3、5、8、12 min组(每组3个复孔)液态血浆基质凝块渗出液对牙龈成纤维细胞迁移的影响;用荧光显微镜观察对照组以及各组液态血浆基质凝块渗出液对牙龈成纤维细胞形态的影响。 结果:离心3、5、8和12 min的液态血浆基质体积分别为(2.47±0.12)、(2.67±0.12)、(3.53±0.12)、(3.73±0.12)ml,质量分别为(0.35±0.01)、(0.46±0.02)、(0.88±0.06)、(1.03±0.01)g,相应液态血浆基质凝块的最大拉伸力分别为(0.55±0.03)、(0.56±0.03)、(1.31±0.05)、(1.38±0.02)N。扫描电镜显示,随离心时间增加,液态血浆基质凝块内部纤维越来越致密。与全血及其他时间点相比,离心8 min的液态血浆基质白细胞、中性粒细胞、单核细胞和淋巴细胞浓度最大,且细胞分布较均匀。相比其他组,8 min组牙龈成纤维细胞迁移率(1.60±0.01)最大。荧光染色显示,与对照组相比,液态血浆基质凝块渗出液培养的牙龈成纤维细胞更舒展。结论:以500 × g离心力离心8 min制备的液态血浆基质具有较高的活细胞浓度以及促牙龈成纤维细胞迁移的能力。
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编辑人员丨6天前
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TDP-43对LPS刺激下小鼠牙龈成纤维细胞影响的实验研究
编辑人员丨6天前
目的:探究 TARDNA 结合蛋白-43(TARDNA binding protein-43,TDP-43)对脂多糖(lipopolysaccharides,LPS)诱导的炎症微环境中小鼠牙龈成纤维细胞(mouse gingival fibroblasts cells,MGFs)的影响.方法:分离培养野生型C57BL/6J小鼠的牙龈成纤维细胞.设置不同浓度及处理时间的LPS刺激,通过实时定量聚合酶链反应(real-time quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)技术检测相关炎症因子的mRNA表达量,筛选出最佳处理条件.对细胞进行免疫荧光染色,观察炎症微环境下MGFs中TDP-43的变化.使用小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)转染技术敲低MGFs中的TDP-43,并测定转染效率.设置3个实验组:阴性对照组(NC组)、LPS诱导对照组(NL组)和TDP-43敲低+LPS诱导组(SL组).利用RT-qPCR技术检测部分炎症因子、基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases,MMPs)、黏附相关因子mRNA的表达情况.应用蛋白质印迹法(western blotting)检测部分炎症因子、黏附相关因子蛋白表达情况.使用天狼星红染色法探究细胞内胶原沉积情况.结果:最佳LPS刺激的浓度为100 ng/mL,时间为6 h;在无LPS刺激的状态下,MGFs中的TDP-43基本在细胞核内,LPS刺激后,TDP-43出现在细胞核和细胞质中;成功使用siRNA转染MGFs构建敲低TDP-43的细胞模型,转染效率接近50%;在LPS刺激下,TDP-43敲低的实验组(SL组)与对照实验组(NL组)相比,炎症因子、基质金属蛋白酶、黏附相关因子mRNA的表达量出现下调(P<0.05),且部分黏附相关蛋白及炎症因子蛋白的表达量也显著下调;在胶原沉积方面,SL组和NL组相较于NC组都有减少(P<0.05),但NL组和SL组差异不大,无统计学意义(P>0.05).结论:当LPS诱导MGFs处于炎症微环境时,TDP-43出现由核内向核外移动的趋势;且TDP-43对LPS诱导的MGFs炎症微环境下炎症因子、黏附相关因子及基质金属蛋白酶表达起正向调控作用,对胶原沉积的影响不明显.
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编辑人员丨6天前
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不同管径二氧化钛纳米管对人牙龈成纤维细胞生物学行为的影响
编辑人员丨6天前
目的:探讨不同管径二氧化钛纳米管对人牙龈成纤维细胞(human gingival fibroblast,HGF)生物学行为的影响,以筛选具有良好软组织封闭效果的二氧化钛纳米管。方法:在10、30和60 V电压下,利用阳极氧化法在钛表面制备管径分别为30、100和200 nm的二氧化钛纳米管,分别计为30、100和200 nm纳米管组,以未经处理的光滑纯钛片作为对照组。在各组试件表面培养HGF,免疫荧光染色观察2 d后各组细胞黏附形态,甲基噻唑基四唑法检测2 h后细胞黏附情况及培养1、3和7 d时细胞增殖情况,酶联免疫吸附测定检测各组培养7 d后的Ⅰ型胶原分泌量(每组每种实验各3个试件)。结果:对照组HGF蜷缩成圆形,30和100 nm纳米管组HGF均呈现明显的同向伸展,200 nm纳米管组HGF分布稀疏且没有伸展。30和100 nm纳米管组细胞黏附 A值(分别为0.603±0.021和0.773±0.045)及Ⅰ型胶原分泌量[分别为(36.5±9.5)和(47.7±4.5)μg/ml]均显著大于对照组[细胞黏附 A值:0.427±0.057;Ⅰ型胶原分泌量:(22.2±5.9)μg/ml]( P<0.05),且100 nm纳米管组细胞黏附 A值显著大于30 nm纳米管组( P<0.05);200 nm纳米管组细胞黏附 A值(0.250±0.046)及Ⅰ型胶原分泌量[(10.1±3.7)μg/ml]均显著小于对照组( P<0.05)。各时间点100 nm纳米管组细胞增殖 A值均为最大,均显著大于相同时间点200 nm纳米管组和对照组( P<0.05),且培养3 d时亦显著大于30 nm纳米管组( P<0.05);各时间点200 nm纳米管组细胞增殖 A值均为最小,除培养1 d时与对照组差异无统计学意义( P>0.05)外,均显著小于相同时间点其他组( P<0.05)。 结论:钛表面管径为100 nm的二氧化钛纳米管较适合HGF的黏附、增殖和Ⅰ型胶原分泌。
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编辑人员丨6天前
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异基因造血干细胞移植治疗Shwachman Diamond综合征伴骨髓增生异常综合征1例
编辑人员丨6天前
患者,女,27岁,主因"反复血细胞减少15年,发热、牙龈肿痛1周"于2020年6月以"全血细胞减少待查"收住院。血常规示WBC 1.44×10 9/L、RBC 2.22×10 12/L、HGB 75 g/L、红细胞平均体积(MCV)99.7 fl、平均红细胞血红蛋白浓度(MCHC)356 g/L、平均红细胞血红蛋白含量(MCH)35.6 pg、PLT 13×10 9/L。入院查体:贫血貌。全身浅表淋巴结未触及。左侧牙龈可见肿胀、出血。心肺腹未见明显异常。血糖(空腹)6.57 mmol/L,乳酸脱氢酶346.45 U/L,血钾3.34 mmol/L,钠136 mmol/L,氯98 mmol/L,尿酸478 μmol/L;余肝肾功能、心肌酶谱指标正常;纤维蛋白原4.14 g/L;血清铁蛋白(SF)1691.47 μg/L,C反应蛋白89.9 mg/L,降钙素原、免疫球蛋白、肿瘤标志物、叶酸、维生素B12、淋巴细胞亚群、尿便常规均正常;类风湿因子、抗核抗体、狼疮全套、血及尿免疫固定电泳、EB病毒、巨细胞病毒、呼吸道腺病毒、甲乙流感病毒均阴性。骨髓象:骨髓增生明显活跃,原始中性粒细胞占6.5%,粒、红系可见病态造血。骨髓活检:骨髓增生活跃,可见不成熟前体细胞异常定位现象。免疫分型:可见幼稚细胞分布,约占有核细胞5.14%,表达CD34 +、CD117 +、CD13p +、CD33 +、HLA-DRdim +,不表达CD11b、CD4、CD2、CD5、CD3、CD15、CD8、CD7、CD64、CD33、CD16、CD1a、CD14、CD20、CD38、CD138、CD10、CD19、CD22、CD56,部分粒细胞考虑表型异常。染色体核型:41~48,XX,-5,-6,del(7)(q32),+8,-10,-21,-22,+2~5mar,inc[cp7]/46,XX[3]。心脏彩超:三尖瓣轻度返流,左心功能测值正常;头胸腹增强CT未见异常。患者父母非近亲结婚,家族史及遗传史无异常。
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编辑人员丨6天前
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LncRNA LINC01133在侵袭性牙周炎中的表达及作用
编辑人员丨2周前
目的:探讨lncRNA LINC01133在侵袭性牙周炎中的作用及机制.方法:用qRT-PCR检测不同正常人群及侵袭性牙周炎患者中不同炎症状态下牙龈组织中LINC01133、基质金属蛋白酶9(MMP-9)的表达,并用ELISA法检测其白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)炎症细胞因子.构建侵袭性牙周炎细胞模型,通过大肠杆菌脂多糖刺激人牙龈成纤维细胞(HGFs),体外培养检测 HGFs 细胞中LINC01133表达水平的变化.构建LINC01133过表达载体,转染HGFs,用qRT-PCR和免疫印迹检测载体相关mRNA及蛋白表达水平的变化.结果:侵袭性牙龈炎患者牙龈组织中LINC01133呈现低表达,MMP-9、IL-6、TNF-α呈现高表达,且LINC01133、MMP-9两者呈负相关.经过炎症细胞模型构建,HGFs LINC01133呈现低表达,且经过转染后上调LINC01133的表达,可以抑制MMP-9、IL-6、TNF-α的表达,从而减轻炎症的发生,改善侵袭性牙周炎的进展.结论:炎性牙龈组织中的 LINC0113低表达,提示其参与侵袭性牙周炎的发病过程,且LINC01133可调控MMP-9、IL-6、TNF-α的表达,以调控侵袭性牙周炎的变化.
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编辑人员丨2周前
