目的:探究快速生长发育期SD大鼠颅骨的生长发育及其与颅骨和硬脑膜中局部黏着斑激酶(FAK)/Twist1信号通路的关系。方法:选取幼龄大鼠，从出生后1周开始，使用软尺记录颅骨长度(颅长)及宽度(颅宽)；分别使用电子秤和电子天平称量体质量和脑质量；使用量筒称量脑组织的容积；蛋白质免疫印迹法(WB)检测颅骨FAK和硬脑膜Twist1的表达变化；免疫组织化学(简称免疫组化)和免疫荧光染色法观察颅骨与硬脑膜组织的细胞形态及FAK/Twist1在不同部位的表达差异。结果:(1)大鼠颅长、颅宽在1～7周内均逐渐增加( F颅长＝420.20、 F颅宽＝47.27，均 P<0.001)，与第1周相比，第2周时颅长和颅宽均明显增加(均 P<0.05)，第7周时颅长和颅宽增长分别占整个发育过程(1～12周)的94.4%和90.0%。(2)大鼠的体质量和脑质量在1～7周内逐渐增加( F体质量＝485.20、 F脑质量＝126.00，均 P<0.001)，与第1周相比，第2周时体质量和脑质量均明显增加(均 P<0.05)，第7周时增加的体质量和脑质量分别占整个发育过程的60.4%和51.2%。(3)大鼠的脑容积在1～7周内逐渐增加( F＝852.80， P<0.001)，1～3周增长迅速，3周以后较为平缓，第7周时增加的脑容积占整个发育过程的60.5%。(4)WB结果显示，第1～7周时颅骨组织中FAK表达水平逐渐升高( F＝15.80， P<0.001)，第7周时FAK表达水平较第1周明显升高( P<0.01)；硬脑膜组织中FAK表达水平呈现先降低后升高的趋势，第4周FAK表达水平达到最高值，与第1周相比，差异有统计学意义( P<0.05)；颅骨组织中FAK的表达水平与颅长、颅宽的相关系数分别为0.95、0.96(均 P<0.001)，呈正相关。(5)颅骨颅缝观察结果显示，出生后第1、4、7周，大鼠的颅骨生长以纵向生长为主，且颅缝逐渐清晰，在第7周时已完全闭合。(6)免疫组化及免疫荧光结果显示，Twist1主要在硬脑膜中表达，在第1周时表达水平最高，随后逐渐下降( F组化＝22.10、 F荧光＝36.82，均 P<0.01)；FAK主要在颅骨中表达，第4周较第1周表达降低( P<0.01)，后逐渐升高。 结论:大鼠出生后1～7周，FAK在颅骨中的表达水平与颅骨的生长发育正相关，而Twist1在颅骨和硬脑膜中的表达水平则随着颅骨生长和骨缝闭合而降低，颅骨及硬脑膜中FAK/Twist1可能共同调节了幼龄大鼠颅骨的生长发育。

目的:通过分析大鼠颅盖骨生长发育过程中头颅各径线、颅骨厚度和脑容积的变化，以及局部黏着斑激酶(FAK)的表达规律，探寻颅骨快速生长期的标志物。方法:实验采用SD大鼠，自出生后1~12周，测量其头颅各径线(A线为鼻尖至枕后粗隆的连线，B线为两侧眶内缘垂直于A线的连线，C线为两下颌角的连线，D线为两侧眶外缘的连线)；将大鼠安乐死后剥离其两侧颅盖骨，分别使用量筒和游标卡尺测量其脑容积和颅骨厚度；应用实时定量PCR和蛋白质免疫印迹方法检测颅盖骨组织中FAK的mRNA和蛋白表达水平。结果:(1)头颅径线：A线变化最为明显，第1~7周时的增长速度较快；第2~7周时，与前一周相比差异均有统计学意义(均 P<0.05)，而第7周后A线的增长趋于平缓。B线的增长较为平稳。第2周时C线和D线较上一周均明显增长(均 P<0.05)，第2周后两线的增长趋于平稳。(2)颅盖骨的厚度：第1~2周时颅盖骨几乎无增厚，但在第3~8周时较前一周增厚(均 P<0.05)，而且第8周后颅盖骨的厚度增长趋于平稳。(3)脑容积：1~3周的脑容积增长较快( P<0.001)，第3周后趋于平稳。(4)脑容积与颅盖骨厚度的相关性分析结果：脑容积的增长与颅盖骨变厚呈正相关( R＝0.90， P＝0.001)。(5)FAK mRNA与蛋白表达变化情况：在大鼠脑发育过程中，FAK的mRNA和蛋白的表达量均逐渐升高，且均在第10周时达到最高值(均 P<0.05)，随后逐渐趋于平稳，蛋白与mRNA的表达趋势相一致。 结论:大鼠在出生后1~12周，FAK在颅骨组织中的表达趋势与颅骨的生长发育规律相一致。在脑完成快速生长后，FAK可能参与了大鼠颅骨的生长发育。

目的 研究儿泻康贴膜对功能性腹痛幼龄大鼠的影响,并探讨其疗效机制.方法 将出生 1 d的SD大鼠随机分为对照组和模型组,采用母婴分离联合冰水应激的方法建立功能性腹痛大鼠内脏高敏感模型.选取造模成功的大鼠随机分为模型组、丁桂儿脐贴组,儿泻康贴膜(1/24、1/12、1/6 贴)组.各组大鼠腹部贴剂给药,连续 7 d,对照组、模型组腹部给予空白模拟贴.观察给药后大鼠粪便Bristol分级评分、粪便含水率及腹壁撤退反射(AWR)评分结果;采用酶联免疫吸附实验(ELISA)法检测血清和结肠组织中 5-羟色胺(5-HT)、P物质(SP)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的含量;采用实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)测定结肠组织中囊性纤维化跨膜转运调节体(CFTR)、促肾上腺皮质激素释放因子(CRF)mRNA表达水平;Western blotting法检测CFTR、CRF蛋白表达水平.结果 与模型组相比,儿泻康贴膜各剂量组大鼠粪便Bristol评分明显降低,粪便含水量显著减少,不同注水体积下的AWR评分均显著降低,血清和结肠组织中致痛致泻相关因子 5-HT、SP、TNF-α的表达均得到显著抑制,结肠组织中CFTR和CRF mRNA和蛋白的相对表达量均显著降低(P＜0.05、0.01、0.001).结论 儿泻康贴膜对功能性腹痛大鼠有显著的治疗效果,其通过调节血清和结肠组织中腹痛腹泻相关因子的含量以及结肠组织中相关蛋白的表达以显著降低大鼠粪便Bristol评分和粪便含水量以及大鼠的内脏敏感性.

目的 研究厌食模型幼龄大鼠下丘脑、胃窦、十二指肠中β-内啡肽(β-EP)、新型神经肽-1(nesfatin-1)的含量及蛋白表达情况,以及中药复方运脾消食颗粒对两者的干预作用.方法 选取SPF级72只Wistar幼龄大鼠,雌雄各半,日龄30 d,体质量(60±10)g,随机分为空白组(12只)和造模组(60只),造模组以病因和症状模型法建立幼龄大鼠厌食症模型.造模成功后的动物随机分为模型组、阳性组(儿宝颗粒组)、运脾消食颗粒高剂量组、运脾消食颗粒中剂量组、运脾消食颗粒低剂量组,每组12只,空白组和模型组灌胃等量0.9%氯化钠溶液,其余4组分别给予等体积的儿宝颗粒混悬液(1.75 g/kg)、运脾消食颗粒高剂量混悬液(4.20 g/kg)、运脾消食颗粒中剂量混悬液(2.10 g/kg)、运脾消食颗粒低剂量混悬液(1.05 g/kg),连续给药14 d,最后一次给药结束禁食禁水24 h后,采集标本,用ELISA法和Western Blot法分别检测大鼠下丘脑、胃窦、十二指肠中β-EP、nesfatin-1的含量和蛋白表达.结果 ①模型组大鼠下丘脑、胃窦、十二指肠β-EP含量及蛋白表达降低,治疗后儿宝颗粒组大鼠下丘脑、胃窦、十二指肠β-EP含量及蛋白表达增加,运脾消食颗粒高、中剂量组大鼠下丘脑、胃窦、十二指肠β-EP含量及蛋白表达增加;②模型组大鼠下丘脑、胃窦、十二指肠nesfatin-1含量及蛋白表达增加,治疗后儿宝颗粒组大鼠下丘脑、胃窦、十二指肠nesfatin-1含量及蛋白表达降低,运脾消食颗粒高、中剂量组大鼠下丘脑、胃窦、十二指肠nesfatin-1含量及蛋白表达降低.结论 运脾消食颗粒可显著降低下丘脑、胃窦、十二指肠中nesfatin-1含量及蛋白表达水平,而增加下丘脑、胃窦、十二指肠中β-EP含量及蛋白水平;可改善模型大鼠的胃肠功能,调节脑肠肽水平,增加食欲,这可能是运脾消食颗粒治疗小儿厌食症的重要机制之一.

目的:观察振腹对厌食症模型大鼠的治疗作用及对其外周血中八肽胆囊收缩素(CCK-8)和胃动素(MTL)含量的影响.方法:按照随机数字表法将40只幼龄大鼠进行分组,分为正常组10只和造模组30只.正常组给予普通饲料喂食.造模组采用病因模拟法构建厌食症模型,造模3周后将其随机分为药物组、振腹组和模型组,每组10只.药物组按0.72 g/(kg·bw)剂量给予健胃消食片灌胃(将0.72 g药物用纯水配制成10 mL药液);正常组和模型组每天上午灌服等体积纯水1次;振腹组予以振腹治疗,每日1次,共治疗21次.检测各组大鼠体质量、摄食量、外周血CCK-8、MTL、胃泌素(GAS)及神经降压素(NT)的含量和小肠推进率.结果:与模型组相比,振腹组与药物组的体质量和摄食量、血清MTL及GAS含量和小肠推进率明显提高,血浆CCK-8、NT含量及胃残留率降低,差异具有统计学意义(P<0.05);但振腹组与药物组比较无统计学差异(P>0.05).结论:振腹可增加厌食症模型大鼠的进食量和体质量,减少胃内容物的残留,提高小肠推进率,对厌食症具有较好的治疗作用.其作用机理可能与抑制血浆CCK-8和NT分泌,促进血清MTL和GAS释放有关.

目的:从多指标观察幼龄大鼠连续灌胃给予芩暴红止咳口服液 13 周可能引起的毒性反应和毒性靶器官,为临床应用提供参考.方法:120 只雌、雄大鼠 1∶1 同笼交配,记录仔鼠出生日期,至仔鼠出生 20 d,取同日出生的仔鼠,按体质量随机分为对照组和芩暴红止咳口服液 12.3、24.6、49.2 g·kg-1(以生药量计)组,每组 40只,雌雄各半.仔鼠出生21 d开始,给予相应剂量的芩暴红止咳口服液,对照组给予超纯水,给药体积为10 mL·kg-1,每天给药 2 次,连续给药 13 周.观察动物的一般症状,进行体质量、摄食量、身体发育指标和生殖器官发育检查.分别于给药 4 周、13 周和恢复期处死大鼠,检测相关指标,包括神经行为学、骨密度、免疫、眼科、尿常规、血液学指标、血液生化学指标、脏器系数和组织病理学.结果:与对照组比较,芩暴红止咳口服液低、中、高剂量组大鼠感觉功能、运动协调能力、学习记忆能力、骨密度、免疫功能、生殖器官发育及功能、眼科、尿常规、血液学指标、血液生化学指标、脏器系数和组织病理学均未见明显异常.结论:以多时间点、多指标体系可对中药复方制剂芩暴红止咳口服液进行较为全面的非临床安全评价,高剂量暴露量可达幼儿临床剂量的 31.5 倍;重复给药 13 周,未见明显毒性反应.

目的 评价单笼饲养联合卵清蛋白致敏激发建立支气管哮喘伴抑郁样行为幼龄大鼠模型的可靠性.方法 将幼龄 SD大鼠随机分为群养对照组、孤养对照组、群养哮喘组和孤养哮喘组.采用单笼和群笼饲养结合卵清蛋白-氢氧化铝混悬液腹腔注射致敏,卵清蛋白 0.9%氯化钠溶液雾化激发制备支气管哮喘伴抑郁样行为大鼠模型.观察并记录大鼠体质量、体征、肺组织病理情况、静脉血中白细胞计数及分类、血清中 IL-4 及 BDNF 水平,同时采用糖水消耗实验及强迫游泳实验进行行为学评价.结果 与两对照组比较,群养哮喘组体质量增长缓慢(P<0.05),孤养哮喘组体质量增长明显缓慢(P<0.05);群养哮喘组及孤养哮喘组出现典型呼吸急促、抓耳挠鼻等哮喘样表现,孤养哮喘组出现活动减少、进食进水减少等抑郁样表现;肺组织出现哮喘样病理改变;全血中白细胞计数及淋巴细胞计数增高(P<0.05);血清中 IL-4 升高(P<0.05);与两对照组及群养哮喘组比较,血清中 BDNF 降低(P<0.05);糖水偏好指数降低(P<0.05);强迫游泳实验中静止不动时间延长(P<0.05).结论 单笼饲养结合卵清蛋白致敏激发可成功制备支气管哮喘伴抑郁样行为幼龄 SD大鼠复合动物模型.

目的:探讨调脾增食颗粒对幼龄厌食大鼠血浆β-EP(β-内腓肽)及CCK-8(胆囊收缩素)的影响.方法:选取60 只幼龄SD大鼠,随机分为6 组,正常对照组,模型对照组,调脾增食颗粒高、中、低剂量组及阳性对照组,每组10 只.除正常对照组喂饲常规鼠饲料外,其余各组均采用特制高蛋白高脂饲料喂养1 周,建立幼龄厌食大鼠模型.正常对照组和模型对照组给予蒸馏水,调脾增食颗粒高、中、低剂量组按33.86、16.93、8.47 g/(kg·d)剂量给药,阳性组给予健胃消食片 0.675 g/(kg·d),连续给药 4 周;记录各组大鼠进食量,应用放射免疫法测定大鼠血浆β-EP及CCK-8 的含量.结果:调脾增食颗粒中、高剂量组第3 周和第4 周的进食量明显多于模型对照组(P<0.05,P<0.01).调脾增食颗粒中、高剂量组大鼠血浆β-EP含量明显高于模型组(P<0.05,P<0.01),CCK-8 含量明显低于模型组(P<0.05,P<0.01).结论:调脾增食颗粒治疗厌食症与调节血β-EP及CCK-8 的分泌与释放有关.

目的 研究小儿化积颗粒对幼龄大小鼠胃肠功能的影响,并对其主要药效物质进行质量控制.方法 采用幼龄小鼠肠推进、胃排空实验以及大鼠胃液分泌实验进行药效学研究;采用高效液相色谱法和电位滴定法依次对小儿化积颗粒中药效物质槟榔碱和有机酸进行含量测定.结果 小儿化积颗粒能够显著延长幼龄小鼠肠推进百分率(P＜0.05),显著减少幼龄小鼠胃中酚红残留率(P＜0.001),显著增加大鼠胃液体积和胃蛋白酶活性(P＜0.05、0.01、0.001),显著提高胃酸分泌速度(P＜0.05、0.01).建立了槟榔碱以及有机酸含量测定的方法,方法学研究结果均符合规定,3批小儿化积颗粒中试样品含量稳定.结论 小儿化积颗粒能够显著促进幼龄大小鼠胃排空,增强肠推进,改善胃液分泌功能以及胃蛋白酶活性,其作用与同剂量的化积片相当;建立的药效物质质量控制方法简单、专属性强,重复性好,可为小儿化积颗粒的临床应用提供保障.

目的 基于网络药理学和动物实验验证探讨定喘颗粒干预呼吸道合胞病毒肺炎的作用机制.方法 通过TCMSP、TCMID等数据库获取定喘颗粒中各个中药的潜在活性成分及作用靶点,根据ADME药动学参数筛选定喘颗粒中药物的活性成分;通过Genecards、OMIM、DisGeNet数据库获取呼吸道合胞病毒肺炎潜在的疾病靶点;利用String平台构建蛋白互作网络对交集靶点进行可视化处理;采用David数据库对关键核心靶点进行GO功能富集分析和KEGG通路富集分析;随后利用Cytoscape软件(3.9.1)构建定喘颗粒干预呼吸道合胞病毒肺炎的相关网络.选取呼吸道合胞病毒(RSV)致呼吸道合胞病毒肺炎幼龄大鼠模型进行实验验证.结果 网络药理学结果显示定喘颗粒共177个潜在活性成分,作用于144个靶点,呼吸道合胞病毒肺炎共1075个相关靶点,得到"药物-疾病"交集靶点55个,其中核心靶点25个为ALB、IL6、CASP3、EGFR、VEGFA等;GO功能富集分析结果显示涉及的生物过程主要包括对转录的正调控、对RNA聚合酶Ⅱ启动子转录的正调控、对基因表达的正调控、对细胞凋亡过程的负调控等;KEGG通路富集主要涉及PI3K-Akt信号通路、癌症通路、肿瘤坏死因子信号通路、IL-17信号通路等.动物实验初步表明:定喘颗粒可通过调控PI3K-Akt信号通路,从而参与炎症、免疫反应发挥作用.与正常组相比,模型组幼龄大鼠肺组织中p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt的比值显著升高(P<0.05),病毒载量显著升高(P<0.05),肺组织损伤病理评分显著增高(P<0.05),肺泡灌洗液(BALF)中炎症因子IL-6、TNF-α含量明显增高(Ρ<0.05).与模型组相比,定喘颗粒各剂量组和阳性对照组幼龄大鼠肺组织中p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt蛋白表达降低(Ρ<0.05),病毒载量显著降低(P<0.05),肺组织损伤病理评分明显降低(P<0.05),BALF中炎症因子IL-6、TNF-α含量明显降低(Ρ<0.05).结论 研究揭示了定喘颗粒治疗呼吸道合胞病毒肺炎的多组分、多靶点、多通路的协同作用机制.经动物实验验证,RSV感染幼龄大鼠时很有可能激活了PI3K-Akt信号通路,引起炎症因子IL-6、TNF-α释放,定喘颗粒能够有效下调PI3K-Akt信号通路,抑制炎症因子IL-6、TNF-α释放从而达到达到抗炎的作用.