目的:评价肥胖因素对小鼠心肌缺血再灌注损伤的影响及瞬时受体电位锚蛋白1(TRPA1)表达在其中的作用。方法:SPF级健康雄性C57BL/6J小鼠24只，6～7周龄，体质量18～21 g。采用随机数字表法分为2组( n＝12)：普通饲料组(CD组)和高脂饲料组(HFD组)。CD组喂养普通饲料，HFD组喂养60%脂肪供能的高脂饲料，持续12周并每周记录小鼠体质量。随后将CD组小鼠随机分为2组( n＝6)：CD＋溶剂组(CD＋C组)和CD＋AITC组(CD＋A组)；HFD组小鼠随机分为2组( n＝6)：HFD＋溶剂组(HFD＋C组)和HFD＋TRPA1激动剂组(HFD＋A组)。第13周，CD＋A组和HFD＋A组在原先饲料喂养基础上使用TRPA1激动剂异硫氰酸烯丙酯25 mg·kg －1·d －1进行灌胃，CD＋C组和HFD＋C组给予等量溶剂。第14周小鼠心肌缺血30 min再灌注120 min，记录小鼠体质量、附睾脂肪、肠系膜脂肪和肾周脂肪的质量，检测血清LDH、甘油三酯和胆固醇水平，计算心肌梗死体积百分比，采用Western blot法检测心肌组织TRPA1、Bax和Bcl-2的表达，计算Bax/Bcl-2比值。 结果:与CD＋C组比较，CD＋A组小鼠心肌组织TRPA1表达上调( P<0.05)，其余各指标差异无统计学意义( P>0.05)，HFD＋C组小鼠血清甘油三酯、胆固醇浓度、体质量、附睾脂肪、肠系膜脂肪、肾周脂肪质量和心肌梗死体积百分比增加，心肌组织TRPA1表达下调，LDH浓度和Bax/Bcl-2比值升高( P<0.05)；与HFD＋C组相比，HFD＋A组小鼠血清甘油三酯和胆固醇浓度降低，体质量、附睾脂肪、肠系膜脂肪、肾周脂肪质量和心肌梗死体积百分比减少，心肌组织TRPA1表达上调，LDH浓度和Bax/Bcl-2比值降低( P<0.05)。 结论:肥胖因素可加重小鼠心肌缺血再灌注损伤，TRPA1表达下调参与了这一过程。

为探讨异硫氰酸烯丙酯(Allylisothiocyanate,AITC)调控肠嗜铬细胞(Enterochromaffin cells,EC)中血清素(5-hydroxytryptamine,5-HT)的合成及其对EC生物学功能的影响,使用食用级AITC对RIN-14B细胞(大鼠胰腺内分泌细胞系)进行干预处理,采用FLUO-8 AM检测RIN-14B细胞内钙离子浓度,qRT-PCR分析 5-HT合成相关基因表达,UPLC测定 5-HT含量,以及RNA-seq检测AITC处理后的RIN-14B细胞转录组,并对其结果进行生物信息学分析.结果表明,AITC通过激活离子通道TRPA1 使胞内钙离子浓度升高,上调Tph1(色氨酸羟化酶)和Ddc(5-羟色氨酸脱羧酶)的表达,从而促进 5-HT合成及分泌.此外,GO和KEGG功能富集分析AITC处理后的RIN-14B细胞差异表达基因发现,AITC主要调控谷胱甘肽代谢和抗氧化、炎症调节等相关通路,提示AITC可能通过刺激EC促进谷胱甘肽代谢来调节肠道稳态,同时参与肠道的炎症调节.以上结果为研究AITC影响EC及肠道更深入的生物学功能提供实验数据与研究思路.

目的 利用高通量的高内涵筛选(high-content screening,HCS)技术,从天然黄酮类化合物中筛选出对大鼠生长激素腺瘤GH3细胞具有生长抑制作用的化合物并对其作用机制进行初步探讨.方法 HCS技术检测13种天然黄酮类化合物处理GH3细胞24、48 h后细胞的生长形态及增殖活力.不同浓度的黄酮类化合物处理GH3细胞24 h后经Annexin V-FITC/PI双染,流式细胞仪分析化合物诱导细胞凋亡的情况.结果 利用HCS技术从13种化合物中筛选出了对GH3细胞生长抑制效果最显著的化合物异硫氰酸烯丙酯,该化合物能够时间依赖性地抑制GH3细胞增殖,并显著呈剂量依赖性地诱导GH3细胞凋亡.结论 HCS技术能直观清晰地观察药物对GH3细胞形态和细胞生长的影响,是一种体外大规模药物筛选的可靠技术方法.筛选出的化合物异硫氰酸烯丙酯可通过诱导细胞凋亡,抑制GH3细胞增殖.

目的 利用量化成像流式法筛选抑制催乳素腺瘤MMQ细胞生长的天然药物,观察候选药物对MMQ细胞分泌催乳素能力的影响.方法 10种天然化合物处理MMQ细胞24 h,量化成像流式法检测细胞形态和凋亡水平,ELISA法观察细胞培养上清的催乳素含量,Western blot试验观察剪切Caspase 3的水平.结果 利用成像流式法筛选出异硫氰酸烯丙酯、橘皮素和黄腐酚3种天然化合物对MMQ细胞有诱导细胞凋亡、抑制增殖的作用,处理24 h后对照组催乳素为107.3±22.7 pg·mL-1,异硫氰酸烯丙酯组为48.3±13.2 pg·mLq,橘皮素组为52.7±12.6 pg· mL-1,黄腐酚组为34.7±8.2 pg·mL-1.蛋白印迹试验显示橘皮素和黄腐酚活化caspase3能力显著(P＜0.01).结论 利用成像流式法进行药物筛选,能够兼顾成像和量化分析特点,异硫氰酸烯丙酯、橘皮素和黄腐酚有作为催乳素腺瘤治疗候选化合物的潜能.

目的 初步探讨和厚朴酚对瞬时受体电位通道(TRP)活化的影响和抗瘙痒作用.方法 用4～6周龄健康雄性ICR小鼠分别建立组胺诱导和乙醚/丙酮/水(AEW)诱导的瘙痒模型,将小鼠随机分为正常对照组、模型组、3种剂量和厚朴酚组(50、25和12.5 mg/kg)、溶媒组及氯苯那敏组(仅在组胺诱导实验中设置).正常对照组和模型组给予生理氯化钠溶液灌胃,溶媒组给予羧甲基纤维素钠溶液灌胃,氯苯那敏组给予氯苯那敏灌胃,和厚朴酚组用不同浓度和厚朴酚灌胃.在组胺模型实验中,给予小鼠灌胃24 h后注射组胺;在AEW模型实验中,先用乙醚/丙酮/水处理小鼠4d后再予不同药物灌胃.通过计数30 min内动物的搔抓次数评价各处理的抗瘙痒作用.分离培养原代大鼠脊髓背根神经元(DRG)细胞,将其分成6组,即辣椒素或异硫氰酸烯丙酯(AITC)诱导的模型组、辣椒平(500 μmol/L)或HSC030031(10μmol/L)组、溶媒组、3种浓度(7.81、15.63、31.25 mg/L)和厚朴酚组:辣椒素或AITC诱导的模型组预先用Hanks平衡盐溶液孵育,辣椒平或HSC030031组、溶媒组、和厚朴酚组分别预先加入辣椒平或HSC030031、二甲基亚砜、不同浓度的和厚朴酚孵育,用Ca2+荧光成像技术观察辣椒素或AITC诱导后Ca2+细胞内流的变化.用SPSS 20.0软件进行单因素方差分析和Dunnett-t检验.结果 组胺诱导小鼠瘙痒模型经50 mg/kg和25 mg/kg和厚朴酚处理后,搔抓次数显著低于模型组(21.88和21.14比63.70,t值分别为3.48、3.49,P值均为0.003),12.5 mg/kg和厚朴酚组与模型组差异无统计学意义(t=2.01,P=0.062).AEW诱导的小鼠瘙痒模型经50 mg/kg和厚朴酚处理后搔抓次数显著低于模型组(61.4比101.17,t=0.45,P=0.009),但25 mg/kg和12.5 mg/kg和厚朴酚组与模型组相比差异无统计学意义(均P＞ 0.05).31.25 mg/L和厚朴酚处理组与辣椒素或AITC诱导的模型组相比,DRG细胞内Ca2+荧光信号的升高受到显著抑制:辣椒素模型组第45秒时相对荧光强度变化率(△F/F0)为1.11,而31.25 mg/L和厚朴酚处理组为-0.11;AITC模型组第45秒时△F/F0为0.56,而31.25 mg/L和厚朴酚组为0.00.结论 和厚朴酚对组胺因素与非组胺因素诱导的瘙痒动物模型均具有瘙痒抑制作用,可能与其抑制DRG细胞TRPV1和TRPA1通道活化后Ca2+细胞内流有关.

瞬时受体电位锚蛋白1(TRPA1)离子通道是温度感受器,在人体内低于17℃可被激活,但其激活阈值与物种相关.异硫氰酸烯丙酯、肉桂醛、香烟浓集物等激动剂可以通过调节TRPA1离子通道进而引发咳嗽,并且G蛋白偶联受体在其激活过程中起着重要作用.辛温类中药方剂应用于冷过敏咳嗽疗效确切,推测其治疗机制可能是通过抑制TRPA1通道开放实现的.目前针对咳嗽的TRPA1拮抗剂主要是HC-030031和GRC-17536,辛温类中药作为止咳药的开发或可一定程度弥补西医治疗的不足,但仍需深入研究.

目的 从血清脂肪酸代谢轮廓的角度评价四氯化碳(carbon tetrachloride,CCl4)和α-异硫氰酸萘酯(α-naphthalene iso-thiocyanate,ANIT)诱导的化学肝损伤.方法 采用气相-质谱联用技术测定CCl4对照组、CC14给药组、ANIT对照组和ANIT给药组的大鼠血清中15种游离脂肪酸和酯化脂肪酸的含量,该定量方法的主要参数为毛细管色谱柱DB-225MS、程序升温、电子轰击离子源(70eV)和选择离子扫描模式(监测m/z55、67、74、79).采用偏最小二乘法-判别分析和主成分分析等方法分析大鼠肝损伤后血清脂肪酸代谢轮廓的变化,运用Pearson和典型相关分析方法分析化学肝损伤与脂肪酸代谢的相关性.结果 CCl4给药组和ANIT给药组的大鼠血清脂肪酸代谢轮廓明显偏离对照组,且能完全互相区分开;亚油酸、二十二碳六烯酸、油酸、花生四烯酸和硬脂酸对CC14和ANIT诱导的化学肝损伤具有重要贡献,且这5个游离脂肪酸与丙氨酸氨基转移酶、天冬氨酸氨基转移酶和碱性磷酸酶具有良好的正相关性(P＜0.05,P＜0.01).结论 血清脂肪酸代谢轮廓与CC14和ANIT诱导的化学肝损伤密切相关.

目的 通过比较栀子不同乙醇洗脱部位对肝内胆汁淤积大鼠的保护作用,筛选出栀子抗肝内胆汁淤积有效部位,并对有效部位的化学成分进行鉴定分析.方法 56只SD大鼠随机分为空白组、模型组、阳性药组(熊去氧胆酸,100 mg/kg)及栀子不同乙醇洗脱部位组(4 g生药/kg),分别给予相应药物灌胃,连续7d.给药后第5天,灌胃α-萘异硫氰酸酯,诱导急性肝内胆汁淤积模型.第7天给药1h后进行胆管插管手术,记录各给药组在2h内的胆汁流量,并且取血清测定其中的总胆汁酸(TBA)、谷丙转氨酶(ALT)、总胆红素(TBIL)、直接胆红素(DBIL)水平,HE染色法观察大鼠肝组织病理形态,并采用UPLC-LTQ-Orbitrap对30％乙醇洗脱部位进行定性分析.结果 与模型大鼠比较,栀子不同洗脱部位均能在120 min中内的各个时间点增加肝内淤积大鼠的胆汁流量,其中栀子30％乙醇洗脱部位最大程度增加胆汁流量(P＜0.05,P＜0.01);栀子30％、70％、95％乙醇洗脱部位组能降低肝内淤积大鼠血清中TBIL、TBA水平(P＜0.05,P＜0.01),栀子30％乙醇洗脱部位组能降低肝内淤积大鼠血清中DBIL、ALT水平(P＜0.05,P＜0.01).病理切片结果表明,栀子30％乙醇洗脱部位对模型大鼠肝组织病理症状具有明显改善作用.栀子30％乙醇洗脱部位共鉴定出12个化合物.结论 栀子30％乙醇洗脱部位具有较好的改善肝内胆汁淤积的作用,其主要活性成分为环烯醚萜苷类.

目的 观察异氰酸烯丙酯对大鼠垂体腺瘤细胞(GH3细胞)生物活性的影响,并探讨其作用机制.方法 常规培养大鼠GH3细胞,将细胞随机分为0.1、1、10μmol/L实验组及对照组,分别给予终浓度0.1、1、10μmol/L异硫氰酸烯丙酯及等体积DMSO继续培养.用细胞增殖试验检测细胞活力,流式细胞术检测细胞周期,ELISA法检测细胞培养上清液中生长激素(GH)、胰岛素样生长因子-1(IGF-1),Western blotting法检测细胞内细胞周期相关蛋白[周期蛋白激酶-4(CDK-4)、p21、p27蛋白]表达.结果 培养24、48、72 h,对照组及0.1、1、10μmol/L实验组增殖能力(OD值)逐渐降低(P均<0.05),G1期细胞比例逐渐升高、S期细胞比例逐渐降低(P均<0.05),细胞培养上清液中GH、IGF-1水平逐渐降低(P均<0.05),CDK4蛋白相对表达量逐渐降低、p21和p27蛋白相对表达量逐渐升高(P均<0.05).结论 异硫氰酸烯丙酯素可抑制GH3细胞生物活性,其机制可能与调控细胞周期相关蛋白(CDK4、p21、p27蛋白)表达有关.

[目的]探究土霉素残留对蔬菜自然发酵过程中微生物群落演替和代谢产物动力学的影响,为评估抗生素残留对蔬菜发酵的影响提供理论基础.[方法]超高效液相色谱-串联质谱法测定土霉素残留;高效液相色谱法测定有机酸、电子鼻和气相色谱-质谱联用测定挥发性成分和高通量技术测定微生物种类.[结果]蔬菜自然发酵过程中,土霉素残留从4.00 mg/L下降到2.53 mg/L;不含抗生素残留的蔬菜发酵含有同型和异型乳酸发酵,而土霉素残留的蔬菜发酵仅含有同型乳酸发酵;同时,其特征微生物由 Lactobacillus pentosus 和 Lactobacillus plantarum 转变为 Lactobacillus paratarrginis、Lactobacillus buchneri和Lactobacillus kisonensis;土霉素残留明显影响了 乳酸、柠檬酸、乙酸、香茅醇、3-辛醇、异硫氰酸烯丙酯、乙酸香叶酯、乙烯基硬脂醚和异硫氰酸苯乙酯等代谢产物的含量.[结论]土霉素残留影响了蔬菜乳酸发酵的类型、微生物群落的演替、有机酸和挥发性化合物的形成过程,因此应将抗生素残留纳入发酵蔬菜原料的质量控制指标.