目的:借助全转录组测序(RNA-seq)技术对右眼形觉剥夺模型大鼠视皮层差异表达基因进行筛选和生物学功能分析。方法:将18只14日龄SD幼鼠按照随机数字表法随机分为空白对照组和单眼形觉剥夺组，每组9只。其中单眼形觉剥夺组幼鼠采用右眼眼睑缝合方法制作单眼形觉剥夺模型，连续14 d。分别于造模前和造模后14 d记录各组大鼠右眼图形视觉诱发电位P 100波的潜伏期和振幅。分别提取各组大鼠双侧视皮质组织，通过RNA-seq技术，筛选出弱视相关发病基因，利用基因本体论(GO)富集分析对上述基因进行生物学功能描述，并进行京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路分析。 结果:与空白对照组相比，单眼形觉剥夺组P 100波潜伏期明显延长，振幅明显下降(均 P<0.05)，表明造模成功。共筛选出左侧视皮质差异表达基因40个，右侧视皮质差异表达基因63个，其中9个基因重叠。GO富集分析表明，差异表达基因主要参与转录DNA模板化、谷氨酸分泌、RNA聚合酶Ⅱ启动子的转录调控、蛋白磷酸化等生物学过程，参与DNA结合、ATP结合、蛋白丝氨酸/苏氨酸激酶活性、钙离子结合、锌离子结合、磷脂酶A 2活性、核酸绑定等分子功能，参与细胞内、内质网的膜等细胞组分。其中， Grm2、 Pla2g2a基因的异常表达可能与视功能损伤改变过程密切相关， Grm2基因主要参与谷氨酸突触、长时程增强(LTP)、长时程抑制(LTD)等视觉信号通路过程， Pla2g2a基因主要参与α-亚麻酸代谢通路和花生四烯酸代谢通路。 结论:单眼形觉剥夺大鼠视觉发育敏感期内存在双侧视皮质基因的异常表达，导致视觉信号传导功能异常。基于特定响应基因调控的代谢通路改变可能是弱视发病的重要的分子生物学机制之一。

目的 探索血管活性肠肽(VIP)对形觉剥夺性弱视大鼠视皮层脑源性神经营养因子(BDNF)的影响,探讨弱视治疗的神经保护作用机制.方法 选取3周龄健康SD大鼠36只,随机分为对照组、模型组、治疗组,各12只.采用前爪触地实验测定大鼠视敏度,图形视觉诱发电位(PVEP)测定客观视觉功能;采用Western blotting检测各组大鼠视皮层BDNF表达水平,采用免疫荧光染色观察胶质纤维酸性蛋白(GFAP)和VIP在视皮层中的表达水平和GFAP表达部位,苏木精-伊红(HE)染色观察大鼠视皮层病理学改变.结果 与模型组比较,治疗组视敏度和客观视觉功能均提高(P＜0.05),BDNF蛋白表达水平增加(P＜0.05),但仍低于对照组(P＜0.05).免疫荧光检测结果显示:GFAP阳性细胞在正常组与弱视组中主要表达在视皮层Ⅰ层和Ⅵ层,且弱视组大鼠视皮层GFAP荧光强度明显低于对照组(P＜0.05),治疗组视皮层VIP和GFAP的荧光强度均明显增加(P＜0.05).结论 VIP对弱视大鼠有治疗作用,可能与活化视皮层星形胶质细胞释放BDNF有关.这为弱视的治疗提供了新思路.

目的 观察以"开导之后宜补论"为理论基础的针刺治疗方法 对形觉剥夺大鼠闪光视觉诱发电位(F-VEP)及神经元的影响,并探讨其可能的作用机制.方法出生后14 d的健康Wistar大鼠36只,随机分为6组,除正常对照组外均予单眼睑缝合术制作单眼形觉剥夺弱视动物模型.造模动物于术后第7天开始治疗,阳性对照组予左旋多巴(20 mg/kg)灌胃;开导针刺组予开导针刺法,针刺太阳穴、上星穴;补益针刺组予补益针刺法,针刺脾俞穴、肾俞穴,并攒竹穴透刺睛明穴;开导加补益针刺组先进行开导针刺,接着进行补益针刺治疗.干预治疗7 d后对实验动物进行F-VEP检查,采用尼氏染色法对大鼠视皮层神经元进行形态学观察.结果 F-VEP:阴性对照组P2波振幅较正常对照组明显降低(P<0.05),潜伏期较正常对照组明显延长(P<0.05),阳性对照组、开导针刺组、补益针刺组及开导加补益针刺组的P2波振幅、潜伏期均明显好于阴性对照组,其中开导加补益针刺组的波形指标最好,其P2波振幅及潜伏期好于阳性对照组(P<0.05)并与正常对照组接近(P>0.05).视皮层组织切片:阴性对照组视皮层神经元数量较正常组明显减少(P<0.05),阳性对照组视皮层神经元数量较阴性对照组明显增加(P<0.05),与正常对照组接近(P>0.05);开导针刺组和补益针刺组视皮层神经元数量较阴性对照组明显增加(P<0.05),但低于阳性对照组(P<0.05);而开导加补益针刺组视皮层神经元数量明显多于阴性对照组(P<0.05),与正常对照组和阳性治疗组无明显差别(P>0.05).结论 开导加补益针刺治疗对单眼形觉剥夺性弱视大鼠F-VEP波形及神经元损伤具有明显的改善作用.

目的 探讨5-羟色胺2C受体(5-HT 2C R)对形觉剥夺性成年弱视大鼠离体脑片视皮层V1M区长时程增强(LTP)的影响.方法 将16只2周龄Spargue Dawley大鼠随机分为正常对照组和单眼形觉剥夺组,每组8只.正常对照组大鼠不做任何处理;单眼形觉剥夺组大鼠行右侧眼睑缝合术制备单眼形觉剥夺性弱视模型,造模成功后饲养6周,然后处死2组大鼠,冠状切取400μm厚视皮层脑组织切片并孵育于人工脑脊液中.根据人工脑脊液中加入的药物不同,将正常对照组大鼠视皮层切片作为A组,将剥夺眼对侧视皮层切片分为B、C、D和E组,将剥夺眼同侧视皮层切片分为F、G、H和I组.A、B、F组人工脑脊液中不加任何药物,C、G组加生理盐水,D、H组加10μmol·L-15-羟色胺盐酸盐,E、I组加10μmol·L-1 SB 242084和10μmol·L-15-羟色胺盐酸盐.采用细胞外微电极记录法对各组大鼠视皮层组织切片进行电生理学实验,记录离体组织切片视皮层V1M区LTP并计算神经元场突触后电位(fP-SP)斜率.结果 A、B、C、D、E、F、G、H、I组大鼠视皮层fPSP斜率分别为(198.1±13.5)％、(106.3±8.3)％、(106.3±8.3)％、(157.1±9.7)％、(102.6±4.7)％、(144.5±2.9)％、(144.5±2.9)％、(192.2±8.6)％和(129.7±13.5)％.A、B、F组大鼠视皮层fPSP斜率两两比较差异均有统计学意义(P<0.001),其中A组大鼠视皮层fPSP斜率高于B、F组(P<0.001),B组大鼠视皮层fPSP斜率低于F组(P<0.001).D组大鼠视皮层fPSP斜率高于C组(t=-10.833,P<0.001);H组大鼠视皮层fPSP斜率高于D、G组(t=-6.841、-10.616,P<0.001);E组大鼠视皮层fPSP斜率低于D、I组(t=11.872、-3.910,P<0.001,P<0.05);I组大鼠视皮层fPSP斜率低于H组(t=9.911,P<0.001).结论 单眼形觉剥夺可造成双侧视皮层神经元功能减退,5-羟色胺盐酸盐可通过5-HT 2C R起到一定逆转作用.

目的:利用神经电生理技术研究针刺对单眼视觉剥夺大鼠视皮层神经元电生理可塑性的干预机制.方法:14d龄SPF级幼鼠60只,随机分为空白组,模型组,早、中、末期针刺组.除空白组外,其余各组大鼠通过右眼眼睑缝合制造视觉剥夺大鼠模型,各针刺组选取双侧睛明、攒竹、风池、光明4穴针刺治疗,9d后利用视觉电生理技术及透射电镜对大鼠视皮层神经元形态结构和神经电活动水平进行检测,观察各组大鼠视皮层神经元P-VEP波幅、潜时及电信号活动特点、神经元数目、突触活动区长度等变化.结果:正常组大鼠视皮层神经元放电波形呈规则双向波,动作电位分期明显.而模型组神经元放电波型改变,活动神经元数目明显减少,动作电位分期不明显,P1波峰潜时明显延长(P＜0.01),振幅明显缩短(P＜0.01),神经元形态结构损害,突触活动区长度缩短(P＜0.01),细胞变性及胞核溶解、碎裂.各针刺组治疗后,视皮层神经元电生理活动明显增高,活动神经元数目增加,P1波峰潜时不同程度缩短(P＜0.01),P1波振幅明显增高(P＜0.05,P＜0.01),神经元形态结构向正常水平恢复,突触活性区长度增加(P＜0.01).结论:敏感期内大鼠单眼剥夺后视觉存在明显的功能和结构损伤,针刺能显著改善视觉17区神经元时空特性损害和神经编码异常改变,促进神经元形态结构的恢复,并且疗效与治疗时机密切相关,这为针刺有效干预视觉剥夺效应的神经电生理机制提供了依据.

目的 研究脑衰反应调节蛋白2(CRMP-2)在单眼形觉剥夺性弱视大鼠视皮层的表达.方法 出生后14 d的SD健康大鼠64只,采用随机数字表法分为单眼形觉剥夺性弱视组和正常对照组.单眼形觉剥夺性弱视组于出生后14d行右眼睑缘缝合术,单眼形觉剥夺性弱视组和正常对照组分别于出生后14、21、45和120 d各取8只大鼠进行观察.在出生后21 d(单眼剥夺7d)对大鼠行闪光视觉诱发电位(F-VEP)检测,记录P1波的潜伏期和波幅值.利用免疫组织化学检测法观察2个组大鼠视皮层中CRMP-2免疫阳性神经元的表达变化,通过图像分析系统测定平均吸光度(A)值.结果 F-VEP检查结果显示,与正常对照组相比,形觉剥夺性弱视组P1波潜伏期延长,波幅降低,差异均有统计学意义(t=16.760,P=0.000;t=-22.919,P=0.000).免疫组织化学检测显示,单眼形觉剥夺性弱视组和正常对照组大鼠出生后不同时间点视皮层中CRMP-2的表达量比较,差异均有统计学意义(F分组 =8.855,P=0.010;F时间=63.091,P=0.000),其中出生后21、45和120 d单眼形觉剥夺性弱视组CRMP-2的表达量较正常对照组明显降低,差异均有统计学意义(均P＜0.05).结论 CRMP-2可能参与单眼形觉剥夺性弱视的发生和发展过程,但其具体作用机制还有待进一步研究.

目的 研究丰富环境(EE)对关键期后的单眼形觉剥夺性弱视大鼠视皮层17区N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受体亚基2A(NMDA-NR2A)和NMDA-NR2B蛋白水平的影响,探讨EE对弱视视皮层突触可塑性的影响. 方法 选取出生后2周龄的Wistar大鼠80只,按照随机数字表法分为正常对照组和实验组.实验组在整个关键期内行右侧眼睑缝合,制作单眼形觉剥夺(MD)弱视模型.45日龄时按照随机数字表法将实验组大鼠分为弱视组、标准环境组(SE组)和EE组,其中SE组和EE组于46日龄时打开右侧眼睑.60、75和105日龄时各组取3只大鼠,全身麻醉后行多聚甲醛心脏灌注,剪刀于颈部端头,取左侧大脑视皮层17区.采用苏木精-伊红染色观察大脑视皮层17区的分层,并采用免疫组织化学法检测在关键期后不同时期每组大鼠NMDA-NR2A和NMDA-NR2B的蛋白在大脑视皮层中的分布及表达.应用Image-Pro plus 6.0分析软件对实验产生的阳性反应产物进行累计吸光度(A)值检测. 结果 光学显微镜下视皮层17区均可见NMDA-NR2A和NMDA-NR2B染色阳性细胞,多呈圆形或椭圆形,主要位于细胞膜.60、75和105日龄各组大鼠视皮层17区NMDA-NR2A表达总体比较,差异均有统计学意义(均P＜0.05).各时间点弱视组阳性细胞较正常对照组少;EE组阳性细胞较正常对照组少,较弱视组多.EE组60、75和105日龄NMDA-NR2A表达较SE组增强,但并未达到正常对照组水平,差异有统计学意义(均P＜0.05).60、75和105日龄各组大鼠视皮层17区NMDA-NR2B表达总体比较,差异均有统计学意义(均P＜0.05).各时间点弱视组阳性细胞较正常对照组多;60日龄EE组阳性细胞较正常对照组多,75日龄和105日龄和正常对照组接近.EE组60日龄NMDA-NR2B在视皮层的表达较SE组减弱,但并未达到正常对照组水平,差异均有统计学意义(均P＜0.05).EE组75日龄和105日龄时NMDA-NA2B表达量较SE组减弱,与正常对照组比较,差异均无统计学意义(均P＞0.05).结论 视觉系统的可塑性不但存在于视觉发育的关键期以前,且在关键期之后视觉系统的可塑性仍然存在.作为一种非侵入性的干预方法,EE能通过改变NMDA-NR2A和NMDA-NR2B在视皮层中的表达使成年弱视大鼠的可塑性得以改善和恢复.

目的 研究Wnt信号通路蛋白β-链蛋白(β-catenin)和糖原合成酶激酶3β(glycogen synthase kinase 3β,GSK-3β)在单眼形觉剥夺性弱视(monocular deprivation amblyopia,MD)大鼠视皮层的表达变化.方法 出生后14 d的健康SD大鼠64只,随机分为MD组和正常(normal postnatal,NP)组.MD组行单眼睑缘缝合术,根据剥夺时间又分为单眼剥夺7d、21 d、45 d、90 d4个小组,每小组8只;NP组不作任何处理,相应分为7d、21 d、45 d、90 d4个小组,每小组8只.行闪光视觉诱发电位检测,确定MD模型建立成功.免疫组织化学染色观察MD组和NP组大鼠视皮层β-catenin和GSK-3β的表达变化,通过图像分析系统测定平均光密度值并进行统计学分析.结果 免疫组织化学染色结果显示,与NP组大鼠相比,MD组大鼠各时间点视皮层GSK-3β的表达均明显增高,差异均有统计学意义(均为P＜0.05);且随剥夺时间延长,GSK-3β的表达逐渐增加,MD组内各时间点之间两两比较差异均有统计学意义(均为P ＜0.05).MD组各时间点大鼠视皮层β-catenin的表达比NP组均明显降低,差异均有统计学意义(均为P ＜0.05);且随剥夺时间延长,β-catenin的表达逐渐减少,MD组内各时间点之间两两比较差异均有统计学意义(均为P＜0.05).结论 Wnt信号通路蛋白可能参与了视觉发育可塑性的调控和弱视的形成,但其具体作用机制还有待进一步研究.

目的:分析氟西汀对弱视成年大鼠视皮层17区N-甲基-D-天冬氨酸受体亚基(NMDA-NR)的影响,探讨氟西汀对弱视视皮层突触可塑性的作用.方法:选取45只2周龄Wistar大鼠,其中15只大鼠不作任何特殊处理,仅给予标准饲养,作为对照组;另外30只在整个关键期内对右侧眼睑进行缝合,制作单眼形觉剥夺(MD)弱视模型.45日龄时将30只模型大鼠随机分为模型组与氟西汀组(每日喂养0.2 mg/mL氟西汀水),每组15只.上述3组大鼠均在60日龄(T1)、75日龄(T2)、105日龄(T3)时取5只处死,并观察不同时刻各组大鼠的视皮层17区NMDA-NR2A、NMDA-NR2B表达、C/I值(左眼/右眼幅值)、图形视觉诱发电位(PVEP)振幅值.结果:T1、T2、T3时刻各组的视皮层17区NMDA-NR2A、NMDA-NR2B表达量比较,差异有统计学意义(P＜0.05);同一时刻对照组和氟西汀组的视皮层17区NMDA-NR2A、NMDA-NR2B表达量均高于模型组,且对照组高于氟西汀组(P＜0.05);T1时刻对照组的C/I值低于模型组和氟西汀组,T2、T3时刻氟西汀组的C/I值均低于对照组和模型组(P＜0.05);T1时刻各组的PVEP振幅值比较,差异无统计学意义(P＞0.05);T2、T3时刻模型组的PVEP振幅值均低于对照组和氟西汀组,且氟西汀组低于对照组(P＜0.05).结论:关键期后给予弱视成年大鼠氟西汀治疗,可能通过改变视皮层中NMDA-NR2A、NMDA-NR2B的表达,激活视皮层可塑性,从而改善弱视.

目的:研究针刺对单眼形觉剥夺大鼠视皮质神经细胞突触可塑性以及对NMDAR1表达调节的影响.方法:14日龄SD初生幼鼠30只,随机分为空白组、模型组、治疗组,各10只.除空白组外其余各组均右侧眼睑缝合制作形觉剥夺弱视模型.针刺治疗组大鼠右侧睛明、风池,大椎,隔日1次,每次10min,治疗30d.采用实时定量PCR技术,检测各组幼鼠视皮质NMDAR1、PSD-95、nNOS mRNA的相对表达量.结果:与空白组比较,模型组NMDAR1、PSD-95、nNOS mRNA表达显著降低(P＜0.01),治疗组NMDR1 mRNA表达显著降低(P＜0.05).与模型组比较,治疗组NMDAR1、PSD-95、nNOS mRNA表达显著升高(P＜0.01).结论:针刺可以提高形觉剥夺性弱视大鼠视皮质NMDAR1、PSD-95、nNOS mRNA的表达,增加神经细胞突触后信号传导.