目的:研究海南牛体表蜱虫的种类及蜱携带无形体属病原体的情况.方法:本研究选取海南中北部9个县市为样本采集点,从牛体表采集蜱虫样本.通过形态学观察和分子生物学技术进行蜱种鉴定,并以16S rRNA、groEL和gltA为靶基因,利用PCR方法检测蜱虫携带无形体属病原体情况.并进一步采用系统发育分析方法,揭示海南牛体表蜱虫携带的无形体属病原体种间关系.结果:本研究共采集335只蜱虫,包括血红扇头蜱(Rhipicephalus sanguineus)44只、微小扇头蜱(Rhipicephalus microplus)291只.PCR检测结果表明,该地区蜱中存在候选博莱无形体(Candidatus Anaplasma boleense)、边缘无形体(Anaplasma marginale),阳性率分别为0.60%(2/335),0.90%(3/335).系统发育分析结果表明,本实验获得的无形体与已知的无形体同源性较高.结论:海南中北部地区牛体表的优势蜱种为微小扇头蜱,并且蜱虫携带无形体属病原体,本研究为该地区无形体病的预防和治疗提供了重要的数据支撑.

目的 研究湖北省随州市不同种属的蜱虫样本携带发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒(severe fever with thrombocytopenia syndrome virus,SFTSV)情况,并探讨蜱虫与病例来源的病毒在分子进化水平上的亲缘关系.方法 于2016年、2017年连续2年在湖北省随州市采集蜱1158只,收集该地区具有发热和血小板减少症状的病例血清样本86份,检测病毒核酸.将阳性标本采用Vero细胞开展病毒分离、测定分离到毒株的全基因组序列,并开展蜱虫和病例来源SFTSV病毒株的同源性比较和系统发生研究.结果 湖北省随州市长角血蜱、中华硬蜱和微小扇头蜱为优势种(95.34％).根据蜱的种属和发育阶段合并样本,共得到832个合并样本,其中有4个检出SFTSV.该地区的总体最低感染率为0.35％.从长角血蜱中成功分离得到的1株SFTSV,命名为HB2016-P35.该毒株与湖北省已报道的16株病例来源病毒具有较高的同源性,特别是与来自于同一地区的人源毒株HB 2017-49具有高度的同源性(基因组相似度99.9％).此外,研究结果表明湖北省SFTSV病毒存在至少5个基因型,涵盖了几乎所有已报道的SFTSV基因型.结论 湖北省随州市蜱携带及传播SFTSV整体上处于较低水平.新分离自蜱虫的SFTSV毒株与周边病例携带病毒具有相似的基因型特征和较高的序列同源性.本研究结果提示蜱-人传播最有可能是人类感染SFTSV的途径,需持续在发热伴血小板减少综合征(severe fever with thrombocytopenia syndrome,SFTS)流行地区开展长期蜱虫携带 SFTSV 监测.

目的 了解微小扇头蜱丝氨酸蛋白酶抑制剂15(serine protease inhibitor 15,RmS-15)蛋白的生物学特性,并进行分子克隆和原核表达.方法 对RmS-15进行扩增测序,构建系统进化树了解进化关系;采用生物信息学手段分析其理化性质、信号肽、二级和三级结构;利用DNA star和ABCpred工具来预测RmS-15蛋白潜在的B淋巴细胞抗原表位;通过SYF-PEITHI和IEDB预测潜在T淋巴细胞抗原表位;采用大肠杆菌原核表达系统获取微小扇头蜱RmS-15重组蛋白并进行纯化.结果 成功扩增出1212bp的RmS-15基因,可编码403个氨基酸;系统发育树结果显示,RmS-15蛋白在不同蜱虫氨基酸序列中具有较高的保守性,与镰形扇头蜱和血红扇头蜱的亲缘关系最近;理化性质分析结果显示,RmS-15蛋白在N末端中存在20个氨基酸的信号肽,相对分子量大小和理论等电点分别为44 000和6.68,平均亲水性为0.001,属于亲水性稳定蛋白;抗原性分析结果表明,RmS-15蛋白B细胞抗原表位优势片段为分别为102～112 aa、147～152 aa和207～215 aa,T细胞抗原表位优势片段为分别为3～11 aa、6～14 aa、27～33 aa和34～37 aa.蛋白表达结果显示,RmS-15蛋白在0.8 mmol/L异丙基硫代半乳糖苷(isopropyl-β-D-thiogalactoside,IPTG),16 ℃条件下诱导24 h后发现在上清液中有较高的表达量,并且纯化出蛋白分子量为44000、条带单一目的蛋白.结论 成功建立微小扇头蜱RmS-15蛋白的原核表达和纯化方法,生物信息学分析提示其有较强的抗原性,具备发展为蜱虫候选疫苗的潜质.

目的 通过文献计量,比较分析国内外近20年蜱及蜱传疾病研究的现状、热点和发展前景,为我国蜱及蜱传疾病研究的发展提出建议.方法 在中国学术期刊全文数据库(CNKI)和科学引文索引数据库(WoS)检索2003年1月1日至2022年12月31日有关蜱及蜱传疾病文献,使用CiteSpace6.2.R2对关键词、作者、机构等进行可视化分析.结果 经过筛选后纳入中文文献944篇,英文文献27 428篇.国内外蜱及蜱传疾病主题文献量均呈逐年增长的趋势,英文文献数远超过中文文献.国内研究热点为森林脑炎、莱姆病、非洲猪瘟、长角血蜱、草原革蜱等;国外研究热点为莱姆病、森林脑炎、埃立克体病、无形体病、蓖子硬蜱、微小扇头蜱等.国内外研究热点整体方向一致,但又各有不同的侧重点.国内研究前沿依旧侧重于森林脑炎、巴贝虫病、非洲猪瘟等疾病,并逐渐将分子技术应用于蜱传病原体检测等;国外研究前沿侧重于分子检测、疫苗、复合感染诊断等.结论 近20年,蜱及蜱传疾病造成的疾病负担越来越重,国内外均在加强该领域的研究,将多学科前沿技术和One Health(全健康)理念应用于蜱及蜱传疾病的防控.我国在该领域的研究虽然起步较晚,但研究水平不断提升,处于世界前列.但我国的研究热点及发展趋势与国外相比,仍需扩大先进技术的应用、完善与其他各国研究机构的合作网络,以全健康理念为防治我国蜱及蜱传疾病提供新思路.

目的 了解河南省信阳地区家畜寄生蜱感染巴贝虫的情况.方法 2022年6-8月在河南省信阳市光山县和商城县采集家畜动物体表寄生蜱,采用形态学和PCR扩增蜱虫16S rDNA鉴定蜱虫种类.提取蜱虫基因组DNA,采用巢式PCR扩增巴贝虫18S rRNA基因.目的条带经测序后,进行BLAST比对分析,采用邻接法构建系统进化树,采用MEGA7.0软件进行同源性分析.结果 共采集335只蜱,形态学和PCR扩增鉴定结果显示,长角血蜱49只、微小扇头蜱208只、褐黄血蜱1只、具环扇头蜱34只、刻点血蜱43只.PCR扩增结果显示,335份蜱虫样品中有2份样品扩增出巴贝虫400 bp大小的目的条带,蜱虫巴贝虫总阳性率为0.6％.BLAST比对分析结果显示,1份样品扩增出的18S rRNA序列与GenBank中来自美国(MK609547)、泰国(MG199181)、中国(KU204794)的田鼠巴贝虫序列相似性均达99.26％;另1份样品扩增出的18S rRNA序列与GenBank中来自美国(MH620203)、印度(MN161136)和中国(KP666166)的吉氏巴贝虫序列相似性均达100％.系统进化树分析结果显示,田鼠巴贝虫阳性样品与来自俄罗斯(KX987864)、中国(KU204794)、泰国(MG199179)等地的田鼠巴贝虫聚在同一分支上,同源性较高;吉氏巴贝虫阳性样品与来自中国(FJ769386)、美国(MH620203)和印度(KF606884)等地的吉氏巴贝虫聚在同一分支上,同源性较高.结论 河南省信阳地区家畜寄生蜱存在田鼠巴贝虫和吉氏巴贝虫感染,可能对人和家畜有一定的致病风险.

目的 调查江西省蜱虫种群分布.方法 采用形态学鉴定,对于形态鉴定存在争议的,采用分子生物学鉴定.结果 在植被中采集到6种蜱虫,即长角血蜱、血红扇头蜱、越原血蜱、北岗血蜱、中华硬蜱和金泽革蜱.长角血蜱为优势种,占总蜱数的90.6％,越原血蜱和北岗血蜱是江西省新纪录种.蜱虫在草地中多见,占总采集数的68.2％,林地占9.4％,灌木丛占1.2％.从发育阶段来看,幼若蜱居多,分别占19.1％和68.2％,成虫较少,雌性占6.6％,雄性占6.0％.在宿主体表采集到1 513只蜱虫,归为4属13种,为长角血蜱、铃头血蜱、褐黄血蜱、钝刺血蜱、越原血蜱、北岗血蜱、豪猪血蜱、血红扇头蜱、镰形扇头蜱、微小扇头蜱、粒形硬蜱、中华硬蜱和龟形花蜱,龟形花蜱是江西省新纪录种.长角血蜱是江西省常见种(占总采集数的30.5％)和广布种.长角血蜱寄主广泛,其中野兔体表常见,侵害率为33.3％,犬体表较少见,侵害率为2.3％(x2=23.68,P=0.001 3).此外,侵害野兔的长角血蜱占总长角血蜱总数的64％,远高于其他寄主.侵害宿主的蜱虫中,幼虫347只,占22.9％;若虫249只,占16.5％;雄虫404只,占26.7％;雌虫513只,占33.9％,性别均匀.结论 本文首次报道了江西省蜱虫种群分布特征,将为该地区蜱虫防控提供重要参考.

目的 探讨基于线粒体细胞色素C氧化酶亚基I(COI)基因的DNA条形码技术应用于福建省蜱类鉴定的可行性.方法 蜱标本经形态学鉴定后提取基因组DNA,PCR扩增COI基因片段,并进行测序和比对,用Kimura-2-parameter模型计算种内及种间遗传距离,以邻接法构建系统发育树.结果 经形态学鉴定,97只蜱隶属于5属12种,遗传距离计算结果显示,种间遗传距离(14.65％～26.79％)显著大于种内遗传距离(0～7.14％);BLAST同源性比对发现GenBank数据库中尚无越原血蜱(Haemoph ysalis Yeni)与基刺硬蜱(Ixodes spinicoxalis)的COI基因序列,褐黄血蜱(H.flava)、台岛血蜱(H.formosensis)、豪猪血蜱(H.hystricis)、粒形硬蜱(I.granulatus)、微小扇头蜱(Rhi picephalus microplus)与血红扇头蜱(R.sanguineus)的形态学鉴定与DNA条形码鉴定结果一致,但是,龟形花蜱(Amblyomma testudinarium)、台湾革蜱(Dermacen-tor taiwanensis)、中华硬蜱(I.sinensis)的形态学鉴定与COI基因DNA条形码鉴定结果不一致;系统发育树显示,同一物种的不同个体均形成高支持率的单系,种间分支很明显.结论 COI基因DNA条形码测定是一种快速准确的蜱类鉴定新兴技术,但现阶段,COI基因DNA条形码技术尚不能完全脱离传统的形态学鉴定而独立进行,两者应有机结合.

目的 分析影响我国微小扇头蜱地理分布的环境因子及微小扇头蜱在我国的潜在适生区,分析气候变化对我国微小扇头蜱分布的影响.方法 检索我国微小扇头蜱地理分布相关的国内外公开发表文献,提取地理位置信息.结合环境因子,应用ArcGIS 10.7软件和最大熵模型,对微小扇头蜱在我国的适生区分布和影响其分布的主导环境因子进行预测.结果 影响我国微小扇头蜱地理分布的主要气候因子中,贡献率＞10％的因子主要包括年平均降水量(38.2％)、最冷季度平均温度(28.4％)和最干月降水量(14.2％).微小扇头蜱主要分布于我国南方地区,高、中、低适生区面积分别占我国国土面积的8.6％、13.1％和10.5％.最大熵模型预测结果表明,在2070年RCP 4.5气候条件下,全国微小扇头蜱适生区面积将增加39.98万km2,新增适生区主要位于甘肃省、宁夏回族自治区、青海省、河北省、陕西省、辽宁省、内蒙古自治区、山东省、四川省、西藏自治区等局部地区.质心转移结果表明,从当前到2070年,全国微小扇头蜱适生区整体向北方扩增.结论 气候变化影响我国微小扇头蜱分布区,年平均降水量可能是影响其分布的关键因素之一.

目的 对贵州省部分地区开展蜱及其携带细菌调查,为深入了解贵州省蜱及蜱传病原体情况和蜱传疾病的防控提供科学依据.方法 2017年4月和2019年4月在贵州省修文县、晴隆县、兴义市、兴仁市、望谟县、江口县的牛、羊、鼠体表捕捉寄生蜱,进行形态学鉴定;选取部分蜱,采用血平板和脑心浸液培养基(BHI)平板进行细菌培养,挑选不同菌落形态的细菌进行传代纯化,经PCR扩增16S rDNA全长序列,测序鉴定菌种.结果 共采集动物体表蜱3属6种742只,其中长角血蜱为优势蜱种,占捕获总数的69.81％;其次是微小扇头蜱,占比为23.05％;其余蜱种较少,占7.14％.共培养出细菌188株,隶属3门28属,其中变形菌门为优势菌门,其次是厚壁菌门和放线菌门.结论 贵州省调查地区蜱种丰富,蜱体内携带细菌种类繁多,含多种人兽共患病菌.为防止蜱侵害人及家畜,应加强蜱及蜱传病原体的调查、监测与防控.

目的 对浙江省2017-2020年蜱生态学监测结果进行分析,了解浙江省蜱种构成、密度及季节消长规律,为蜱的防控措施制定提供依据.方法 在浙江省设置12个蜱监测点,采用动物体表检蜱法开展寄生蜱监测,采用布旗法开展游离蜱监测.每一样地或宿主检获的蜱放入同一管内或做一致编号,带回实验室进行分类鉴定和计数.采用Excel 2010软件进行数据的整理及统计分析.结果 2017-2020年浙江省寄生蜱指数为2.25,游离蜱密度为0.48只/(布旗·100 m).寄生蜱和游离蜱的优势蜱种均为长角血蜱.不同宿主动物中,羊的蜱指数最高,为4.29,其次为牛,蜱指数为1.33.羊体表优势蜱种为长角血蜱,牛体表优势蜱种为微小扇头蜱,农村犬体表优势蜱种为长角血蜱,城镇犬体表优势蜱种为血红扇头蜱.农村外环境游离蜱密度为0.94只/(布旗·100 m),景区环境游离蜱密度为0.04只/(布旗·100 m).浙江省蜱密度未发现明显的季节消长规律.结论 浙江省优势蜱种为长角血蜱.不同宿主动物的寄生优势蜱种略有不同,其中,羊的染蜱率最高.农村外环境游离蜱密度明显高于景区生境.以上结果可为浙江省公共卫生机构制定针对性的防蜱灭蜱措施提供参考.