目的:研究血清中微小核糖核酸(miRNA)的特异性表达与儿童扩张型心肌病(DCM)发生的相关性。方法:收集2013年11月至2016年3月就诊于北京安贞医院小儿心脏中心且被确诊为DCM的儿童血清(DCM组，16例)及同期于北京安贞医院体检的年龄性别匹配的健康儿童血清(健康对照组，12例)，并进行miRNA测序。后期扩大样本量(DCM组扩大为30例，对照组扩大为16例)，对测序结果中有统计学意义的11种miRNAs行实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)验证。结果:血清miRNA测序结果，DCM组患儿较健康对照组儿童有172个miRNAs上调(fold change>2， P<0.001)，未发现下调的miRNAs。选择显著上调的top11miRNAs进行qRT-PCR试验验证，发现DCM组患儿血清中8个miRNAs(let-7f、let-7g、miR142-5p、miR143-3p、miR26a、miR27a-3p、miR27b-3p、miR126-3p)显著上调，差异均有统计学意义(均 P<0.05)。在诊断DCM的受试者工作特征(ROC)曲线中，血清miR142-5p、miR143-3p、miR27b-3p、miR126-3p的曲线下面积分别为0.983、0.992、0.915、0.950，差异均有统计学意义(均 P<0.05)。 结论:本研究发现4个血清miRNAs(miR-142-5p、miR-126-3p、miR-143-3p和miR-27b-3p)可用来区分DCM患儿和健康儿童。循环miRNAs可作为有效的儿童DCM筛查工具。

目的 探究强直性脊柱炎(ankylosing spondylitis,AS)模型小鼠和临床患者外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)中微小 RNA-142-5p(miR-142-5p),细胞因子信号转导抑制因子 1(suppressor of cytokine signaling 1,SOCS1)mRNA表达及其对免疫功能的影响.方法 通过实时荧光定量(quantitative real time PCR,qRT-PCR)检测2022年1月～2023年3月商丘市第一人民医院收治的30例确诊的AS患者(患者组)和30例健康体检者(健康组)的PBMC中miR-142-5p和SOCS1 mRNA水平.采用牛蛋白聚糖联合完全弗氏佐剂诱导AS小鼠模型,然后将小鼠分为对照组、模型组、阴性组和拮抗剂组.对照组和模型组小鼠尾静脉注射生理盐水,阴性组和拮抗剂组小鼠分别尾静脉注射NC-antagomir和miR-142-5p-antagomir.治疗2周后,分别评估各组小鼠的关节炎症状评分.通过苏木精伊红(hematoxylin eosin,HE)染色评价踝关节形态.采用ELISA法检测小鼠血清中Th1细胞因子干扰素γ(IFN-γ)、Th2细胞因子白细胞介素-4(IL-4)、Th17细胞因子白细胞介素-17(IL-17)和Treg细胞因子叉头盒蛋白P3(FOXP3)的表达水平.通过 qRT-PCR 和 Western blot 检测 PBMC 和踝关节组织中 miR-142-5p,SOCS1,IFN-γ,IL-4,IL-17和FOXP3的mRNA和蛋白表达水平.结果 与健康组比较,患者组PBMC中miR-142-5p水平升高(3.03±0.99 vs 1.00±0.21),SOCS1 mRNA 水平降低(0.41±0.09 vs 1.00±0.18),差异具有统计学意义(t=10.997,15.956,均P＜0.001).与对照组比较,模型组小鼠踝关节组织中miR-142-5p水平(4.00±0.52 vs 1.00±0.04)升高,IFN-γ和IL-17的mRNA和蛋白水平均升高,SOCS1,IL-4和FOXP3的mRNA和蛋白水平均降低,差异具有统计学意义(t=23.356,31.420,48.056,47.224,38.035,29.007,54.183,28.123,55.155,26.758,45.346,均 P＜0.05);关节炎症状评分升高(7.83±0.94 vs 0.00±0.00,t=22.212,P＜0.05),踝关节结构破坏明显;血清中 IFN-γ,IL-17 水平以及 IFN-γ/IL-4 比值(0.81±0.08 vs 2.08±0.33)和 IL-17/FOXP3 比值(0.41±0.03 vs 1.27±0.10)均升高,差异具有统计学意义(t=15.382,35.779,15.412,35.130,均P＜0.05).与阴性组比较,拮抗剂组小鼠踝关节组织中miR-142-5p水平(1.47±0.10 vs 3.89±0.33)降低,IFN-γ 和 IL-17 的 mRNA 和蛋白水平均降低,SOCS1,IL-4 和 FOXP3 的 mRNA 和蛋白水平均升高,差异具有统计学意义(f=18.846,22.969,43.454,32.617,23.259,20.881,41.832,11.994,32.977,15.190,35.834,均 P＜0.05);关节炎症状评分降低(7.42±1.24 vs 2.75±0.75,t=13.233,P＜0.05),踝关节形态明显改善;血清中 IFN-γ,IL-17 水平以及IFN-γ/IL-4 比值(1.22±0.11 vs 1.91±0.19)和IL-17/FOXP3 比值(0.69±0.05 vs 1.23±0.12)均降低,差异具有统计学意义(t=8.688,22.972,8.377,22.007,均 P＜0.05).结论 miR-142-5p 在AS中高表达,使用拮抗剂下调miR-142-5p可能通过上调SOCS1进而降低Th1/Th2和Th17/Treg比值,从而改善AS小鼠的免疫平衡并抑制AS的进展.

目的 分析溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)患者血清长链非编码核糖核酸牛磺酸上调基因 1(long non-coding RNA taurine upregulated gene 1,LncRNA TUG1)、微小核糖核酸(microRNA,miR)-142-5p表达水平与UC疾病活动度及预后的关系.方法 选取 2017 年 1 月～2020 年 5 月期间海南省第三人民医院收治的UC患者 108 例为UC组,根据改良Mayo评分将UC患者分为缓解期组(Mayo评分在 2 分及以下而且无单个分项评分在 1 分,n=42)、轻度活动组(3 分≤Mayo评分≤5 分,n=21)、中度活动组(6 分≤Mayo评分≤10 分,n=24)和重度活动组(11 分≤Mayo评分≤12 分,n=21).对UC患者随访2 年,记录其复发情况.另选取同期体检健康者108 例为健康组.实时荧光定量PCR法测定血清LncRNA TUG1 和miR-142-5p表达水平;比较UC组和健康组、不同疾病活动度UC患者、不同预后UC患者血清LncRNA TUG1 和miR-142-5p表达水平;分析UC患者血清LncRNA TUG1 表达水平与miR-142-5p的相关性及影响UC患者预后的因素.结果 与健康组相比,UC组患者血清LncRNA TUG1 表达水平(0.45±0.15 vs 1.04±0.35)降低,miR-142-5p表达水平(1.76±0.32 vs 1.01±0.18)升高,差异均有统计学意义(t=16.102,21.229,均P＜0.05).UC患者血清LncRNA TUG1 表达水平与miR-142-5p呈负相关(r=-0.558,P＜0.05);缓解期组、轻度活动组、中度活动组和重度活动组血清LncRNA TUG1表达水平依次降低(0.68±0.23,0.48±0.16,0.29±0.09,0.13±0.05),miR-142-5p表达水平依次升高(1.48±0.27,1.55±0.28,1.97±0.36,2.30±0.42),差异有统计学意义(F=59.475,35.716,均P＜0.05).108 例UC患者随访 2 年,复发 51 例(复发组),未复发 57 例(未复发组),与未复发组相比,复发组UC患者血清LncRNA TUG1表达水平(0.38±0.13 vs 0.51±0.17)降低,miR-142-5p表达水平(1.93±0.35 vs 1.61±0.29)和有肠外表现患者占比(21/30 vs 9/48)升高,差异均有统计学意义(t=4.424～8.647,均P＜0.05);肠外表现(OR=2.366,95%CI=1.558～3.592,P＜0.001)和miR-142-5p(OR=2.563,95%CI=1.649～3.984,P＜0.001)是影响UC患者预后的危险因素,而LncRNA TUG1(OR=0.680,95%CI=0.557～0.830,P＜0.001)是影响UC患者预后的保护因素.结论 UC患者血清LncRNA TUG1 呈低表达而miR-142-5p呈高表达,均与UC疾病活动度、预后密切相关,测定二者水平有助于临床评估UC患者病情及预后.

目的 探讨微小核糖核酸(micro RNA,miR)-452靶向PH结构域富含亮氨酸重复序列的蛋白磷酸酶1(PHLPP1)抑制结直肠癌细胞的增殖、迁移和侵袭的作用.方法 选取142例结直肠癌组织及癌旁组织.体外培养结直肠癌细胞株SW480细胞(SW480癌细胞组),并以miR-452模拟物(miR-452模拟物组)、miR-452抑制剂(miR-452抑制剂组)转染SW480细胞.噻唑蓝(MTT)法检测各组细胞活力、癌细胞单克隆形成数目.流式细胞术检测凋亡率及细胞周期,Transwell细胞迁移实验检测穿膜细胞数,实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测miR-452-5、PHLPP1 mRNA表达水平,酶联免疫吸附法测定培养液中基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、细胞周期蛋白(Cyclin) D1、血管内皮生长因子(VEGF)在培养液中水平.结果 结直肠癌组miR-452-5p相对表达水平(1.25±0.65)低于癌旁组(3.76 +0.43,t=17.04,P＜0.01).依miR-452模拟物组→SW480癌细胞组→miR-452 inhibitor组之序,癌细胞单克隆形成数目、穿膜数(P＜0.01)升高,细胞凋亡率、G1期比例降低(P＜0.01);miR-452-5p、PHLPP1 mRNA表达水平降低(P＜0.01),MMP-9、Cyclin D1、VEGF蛋白表达水平升高(P＜0.01).miR-452与PHLPP1表达水平呈明显正相关(P＜0.01),与MMP-9、Cyclin D1、VEGF表达水平分别呈负相关(P＜0.01).结论 miR-452通过靶向降低PHLPP1的表达而抑制结直肠癌细胞增殖、迁移浸润,其机制与miR-452诱导结直肠癌细胞低表达MMP-9、Cyclin D1、VEGF有关.

目的 探讨自身免疫糖尿病患者(ADM),包括经典1型糖尿病(T1DM)和成人隐匿性自身免疫糖尿病(LADA),以及2型糖尿病患者(T2DM)和健康对照外周血单个核细胞(PBMC)的microRNA(miRNA)表达水平.方法 收集2015年1月至2016年12月在中南大学湘雅二医院就诊的糖尿病患者及健康体检中心体检的健康对照人群,研究对象分为两批,分别进行高通量测序初筛差异表达的miRNA,以及对miR-142和miR-143的表达进行实时定量聚合酶链反应(RT-qPCR)验证.结果 (1)T1DM患者、LADA患者、T2DM患者以及健康对照的PBMC中miRNA的表达存在差异;(2)与T2DM患者和健康对照相比,LADA和T1DM患者PBMC中的miR-142-5p表达下调,而miR-143-3p表达上调;(3)RT-qPCR验证实验显示,miR-142-5p在LADA患者中表达水平较T2DM患者显著下调.miR-143-3p在T1DM患者和LADA患者中表达量较T2DM患者和健康对照有升高趋势,但差异无统计学意义.结论 (1)T1DM患者、LADA患者、T2DM患者以及健康对照的PBMC中miRNA的表达存在差异;(2)miR-142-5p和miR-143-3p的异常表达可能通过影响细胞凋亡和免疫细胞分化参与ADM发生发展.

目的 了解单纯性肥胖儿童体循环微小RNA(miRNA)表达变化的特点,分析其与肥胖相关指标的关系.方法 选取8～10岁单纯性肥胖儿童18例设为肥胖组,年龄分布、性别组成比例一致的正常体质量儿童18名设为正常对照组,测量体格数据及生化指标.2组均随机选取3例个体行miRNA基因芯片检测,筛选差异性miRNA,剩余15例行miRNA验证,并分析差异性miRNA表达量与体格数据、生化指标的相关性.结果 基因芯片筛选出表达差异的miRNA 67个,通过靶基因预测挑选miRNA-142-3p、miRNA-142-5p、miRNA-133b、miRNA-486-3p进行验证.肥胖儿童体循环中miRNA-142-5p表达上调,且表达量与体质量、腰围、腰围/身高、BMI、血压、甘油三酯、总胆固醇、非HDL呈正相关,与胰岛素敏感指数(ISI)呈负相关(P均<0.05).miR-133b表达下调,且表达量与体质量、腰围、腰围/身高、BMI等指标呈负相关,与ISI呈正相关(P均<0.05).结论 单纯性肥胖儿童体循环中miRNA的表达谱与正常儿童存在差异,且与代谢异常相关;miRNA有望成为筛查肥胖儿童、代谢综合征易患人群的分子标志物.

目的 观察疏肝解郁胶囊联合中药灌肠治疗溃疡性结肠炎患者的临床疗效.方法 选取2017年3月—2021年3月期间内蒙古医科大学附属医院收治的溃疡性结肠炎患者96例,按随机数字表方法分为治疗组和对照组,每组各48例.两组患者均给予中药灌肠治疗,对照组采用西医常规治疗方案,治疗组在对照组基础上加用疏肝解郁胶囊治疗.治疗3个月后,观察比较两组患者临床疗效,中医证候评分,组织病理学Geboes指数,疾病活动指数评分、梅奥(Mayo)评分,血清炎症指标即肿瘤坏死因子-α(Tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白介素-6(Interleukin-6,IL-6)、白介素-8(Interleukin-8,IL-8),血清血管活性肠肽(Vasoactive intestinal peptide,VIP)、P物质(Substance P,SP)、五羟色胺(5-Hydroxytryptamine,5-HT),血清微小核糖核酸-142-5p(MicroRNA-142-5p,miR-142-5p)相对表达量.结果 治疗后治疗组总有效率87.50％(42/48)明显高于对照组70.83％(34/48),差异有统计学意义(P<0.05).治疗后两组患者中医证候评分较治疗前降低,差异有统计学意义(P<0.05);且治疗组中医证候评分明显低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05).治疗后两组患者Geboes指数、疾病活动指数评分、Mayo评分均较治疗前降低,差异有统计学意义(P<0.05);且治疗组Geboes指数、疾病活动指数评分、Mayo评分均低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05).治疗后两组患者血清TNF-α、IL-6、IL-8水平均较治疗前降低,差异有统计学意义(P<0.05);且治疗组血清TNF-α、IL-6、IL-8水平均明显低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05).治疗后两组患者血清VIP、5-HT水平均较治疗前降低,血清SP水平均较治疗前升高,差异有统计学意义(P<0.05);且治疗组血清VIP、5-HT水平均较对照组降低,血清SP水平较对照组升高,差异有统计学意义(P<0.05).治疗后两组患者血清miR-124-5p水平均较治疗前降低,差异有统计学意义(P<0.05);且治疗组血清miR-124-5p水平明显低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05).结论 疏肝解郁胶囊联合中药灌肠治疗溃疡性结肠炎临床疗效显著.

目的 研究微小核糖核酸(microRNA,miRNA)基因在骨肉瘤患者外周血中的差异表达.方法 收集郑州大学第一附属医院2013年3月至2015年4月收治的40例股骨远端和胫骨近端骨肉瘤患者,同期选择40例健康体检者.分别收集两组患者空腹静脉血,肿瘤组织及对照组相应部位组织,利用miRNA基因芯片对其进行分析,观察miRNA在外周血及骨肉瘤组织中的差异表达.结果 筛查出骨肉瘤肿瘤组织中相关异常表达基因270个,上调miRNA基因15个,下调miRNA基因255个.上调及下调倍数大于2.5的miRNA 19个,上调大于2.5倍的miRNA基因8个:miR-21、miR-451、miR-218、miR-18a、miR-148a、miR-198、miR-195、miR-497.下调大于2.5倍11个:miR-29、miR-223、miR-183、miR-31、miR-654、miR-495、miR-493、miR-410、miR-409-5p、miR-409-3p、miR-382.外周血中异常表达基因178个,上调19个,下调159个.上调及下调倍数大于2.5的miRNA 21个,上调大于2.5倍的miRNA基因12个:miR-21、miR-451、miR-199a、miR-18a、miR-18b、miR-148a、miR-195、miR-497、miR-130b、miR-182、miR-374a、miR-301b.下调大于2.5倍的有9个:miR-29、miR-223、miR-410、miR-133b、miR-31、miR-206、miR-144、miR-493、miR-142-3p.两组结果有较高的重合性.其中表达特异性最明显的是miR-21(上调),miR-29(下调).结论 骨肉瘤肿瘤组织与外周血在miRNA表达上存在一定程度相关性和一致性,其中miR-21和miR-29特异性最明显,并预测其作为生物学标志物的可能性.