目的:探讨微小RNA－17－5p(miR－17－5p)在食管鳞癌(ESCC)中的表达及其对ESCC细胞增殖和侵袭的影响。方法:采用实时荧光定量PCR(RT－qPCR)检测ESCC组织和细胞中miR－17－5p的表达。将miR－17－5p抑制剂和阴性对照转染食管鳞癌细胞EC9706和TE1，RT－qPCR检测转染后细胞中miR－17－5p的表达水平，细胞计数试剂盒8和EdU检测转染后细胞的增殖情况，Transwell小室检测细胞的侵袭能力。采用双荧光素酶报告实验分析miR－17－5p与成视网膜细胞瘤样蛋白2(RBL2)直接的相互作用，Western blot检测转染后RBL2蛋白的表达，RT－qPCR检测RBL2在ESCC组织中的表达，并分析其与miR－17－5p表达的相关性。结果:ESCC组织中miR－17－5p的相对表达水平为4.222±0.39，高于正常食管上皮组织(1.081±0.046， P<0.001)。ESCC细胞EC9706、Eca109、TE1、KYSE450、KYSE70和KYSE520中miR－17－5p的相对表达水平分别为13.84±1.266、6.453±0.293、11.41±0.520、2.613±0.548、5.251±0.239和4.251±0.195，均高于正常食管上皮细胞Het－1A(1.007±0.079，均 P<0.05)。Ⅲ＋Ⅳ期ESCC组织中miR－17－5p的表达水平(5.094±0.562)高于Ⅰ＋Ⅱ期患者(2.934±0.364)，差异有统计学意义( P<0.01)；有淋巴结转移患者中miR－17－5p的表达水平(5.523±0.634)高于无淋巴结转移患者(3.533±0.461)，差异有统计学意义( P<0.05)。miR－17－5p高表达患者的生存率低于miR－17－5p低表达患者，差异有统计学意义( P<0.05)。miR－17－5p抑制剂能下调EC9706和TE1细胞中miR－17－5p的表达，其表达下调抑制细胞的增殖和侵袭能力。双荧光素酶报告实验显示，无论是EC9706细胞还是TE1细胞，在RBL2 3′UTR－WT载体和miR－17－5p mimic共转染后，荧光素酶的活性显著降低( P<0.01)，RBL2是miR－17－5p的直接作用靶点。Western blot检测显示，miR－17－5p抑制剂组EC9706和TE1细胞中RBL2蛋白的表达量分别为0.936±0.055和0.923±0.048，明显高于对照组(分别为0.087±0.019和0.102±0.010)，差异均有统计学意义(均 P<0.001)。ESCC组织中RBL2的表达水平为0.219±0.510，低于正常食管上皮组织(0.983±0.324， P<0.001)。ESCC组织中miR－17－5p的表达水平与RBL2的表达水平呈负相关( r＝－0.462, P<0.001)。RBL2表达下调能逆转miR－17－5p抑制剂引发的细胞增殖和侵袭能力降低。 结论:miR－17－5p参与ESCC的发生、发展过程，有望成为ESCC潜在的分子治疗靶点。

目的:探讨微小RNA(miR)-151a-3p在非小细胞肺组织中的表达及其与放疗敏感性的关系。方法:选取2019年12月至2023年8月商丘市第一人民医院收治的54例非小细胞肺癌患者作为研究对象，所有患者进行三维适形调强放射治疗，评价患者放疗疗效，分为完全缓解、部分缓解、稳定和进展。完全缓解和部分缓解为有效治疗组；稳定和进展为无效治疗组。分别采用荧光定量聚合酶链反应(PCR)分析有效治疗组和无效治疗组患者肿瘤组织miR-151a-3p表达水平，根据miR-151a-3p均值，分为高表达组和低表达组，探讨miR-151a-3p表达水平与肺癌放疗敏感性的相关性。组间计量数据比较采用独立样本 t检验。 结果:54例患者，其中22例完全缓解，15例部分缓解，10例稳定，7例进展。完全缓解和部分缓解总计37例，纳入有效治疗组，稳定和进展17例患者纳入无效治疗组。放疗有效率为62.58%(37/54)。治疗有效组患者肿瘤组织miR-151a-3p表达水平(0.94±0.17)明显低于无效治疗组(1.49±0.29)，差异有统计学意义( t＝8.807， P<0.05)。直径>5 cm和直径≤5 cm患者组三维适形调强放疗有效率[69.56%(16/23)、67.74%(21/31)]比较，差异无统计学意义( χ2＝1.008， P>0.05)。肺腺癌组患者和鳞状细胞癌组患者三维适形调强放疗有效率[65.0%(13/20)、70.59%(24/34)]比较，差异无统计学意义( χ2＝1.008， P>0.05)。低分化肿瘤患者组三维适形调强放疗有效率[87.5%(21/24)]明显高于中高分化肿瘤组放疗有效率[53.33%(16/30)]，差异有统计学意义( χ2＝8.694， P<0.05)。淋巴结转移组患者三维适形调强放疗有效率[54.29% (19/35)]明显低于未淋巴结转移组患者[94.74%(18/19)]，差异有统计学意义( χ2＝8.694， P<0.05)。miR-151a-3p低表达组患者三维适形调强放疗有效率[75.00%(30/40)]明显高于miR-151a-3p高表达组患者[50.00%(7/14)]，差异有统计学意义( χ2＝8.694， P<0.05)。多因素Logistic回归分析显示，低分化程度、无淋巴结转移、miR-151a-3p低表达水平是非小细胞肺癌三维适形调强放疗敏感性的预测因素[比值比( OR)＝3.412、3.876、2.985， P<0.05]。相关性分析显示，非小细胞肺癌组织中miR-151a-3p表达水平与三维适形调强放疗敏感性呈负相关( r＝－0.479， P<0.05)。 结论:肺癌患者肿瘤组织中miR-151a-3p表达水平与放疗敏感性密切相关，可用于临床放疗效果的评价。

目的:探讨血清微小RNA(microRNA，miR)-322-5p、白细胞介素(interleukin，IL)-1β诊断不明原因复发性流产(unexplained recurrent spontaneous abortion，URSA)的临床价值及与辅助性T细胞(helper T cell，Th)17/调节性T细胞(regulatory T cells，Treg)平衡的关系。方法:选取2020年9月至2022年9月海安市人民医院收治的103例URSA患者作为URSA组。另外选取同时期来院产检的120例健康孕妇作对照组。采用实时荧光定量聚合酶链反应检测血清miR-322-5p水平；采用酶联免疫吸附法检测血清IL-1β水平；采用流式细胞仪检测Th17、Treg细胞，计算两者比值。采用Pearson相关分析探讨miR-322-5p、IL-1β与Th17/Treg的关系，采用受试者工作特征(receiver operating characteristic，ROC)曲线评估miR-322-5p、IL-1β对URSA的诊断价值。结果:与对照组相比，URSA组血清miR-322-5p表达水平明显降低，IL-1β表达水平明显升高，差异有统计学意义[(3.17±1.24)比(1.05±0.43)，(62.14±7.53)pg/L比(81.42±9.16)pg/L， t值分别为16.52，17.25， P值均<0.05]。与对照组相比，URSA组血清Th17水平及Th17/Treg值明显升高，Treg水平明显降低，差异有统计学意义[(1.52±0.42)%比(2.57±0.74)%，(0.28±0.08)比(0.65±0.12)，(6.15±1.52)%比(4.02±1.03)%， t值分别为13.26，27.42，12.04， P值均<0.05]。Pearson相关分析结果显示，URSA患者血清miR-322-5p与Th17、Th17/Treg呈负相关，与Treg呈正相关( r＝－0.41、－0.37、0.50， P值均<0.05)；血清IL-1β与Th17、Th17/Treg呈正相关，与Treg呈负相关( r＝0.37、0.49、－0.42， P值均<0.05)。miR-322-5p、IL-1β预测URSA特异度分别为61.17%、66.02%，敏感度分别为92.50%、83.33%；两者联合预测的特异度为85.44%，敏感度为85.83%。两者联合的诊断价值高于单独检测( Z＝4.102， P＝0.015)。 结论:URSA患者血清miR-322-5p水平明显降低、IL-1β水平明显升高，两者可作为辅助诊断URSA的生物学指标，且与Th17/Treg平衡密切相关。

目的:探讨慢病毒介导微小RNA(miR)-31-5p过表达对兔自身免疫性干眼模型外周血辅助性T细胞17(Th17)的免疫调控作用。方法:构建miR-31-5p重组慢病毒载体。包装miR-31-5p过表达及其对照慢病毒，进行浓缩和滴度测定。建立兔自身免疫性干眼模型，并分离模型兔外周血单个核细胞(PBMC)，分别感染miR-31-5p及阴性对照慢病毒颗粒作为miR-31-5p过表达组和对照组，采用实时荧光定量PCR法检测miR-31-5p的表达水平。将2个组PBMC与经γ射线照射后的泪腺上皮细胞共培养，采用实时荧光定量PCR法检测2个组PBMC中Th17细胞特异性转录因子维甲酸相关孤儿核受体C(RORC)、标志性细胞因子白细胞介素-17(IL-17)及Th17细胞极化相关细胞因子IL-1β、IL-6和IL-23的mRNA表达水平；采用Western blot法检测PBMC中IL-17的蛋白表达水平。结果:通过测序验证，成功构建miR-31-5p重组慢病毒载体。包装并浓缩miR-31-5p过表达和对照慢病毒颗粒，滴度测定结果分别为3.82×10 7 TU/ml和3.50×10 7 TU/ml，满足后续实验需求。实时荧光定量PCR结果显示，miR-31-5p过表达组miR-31-5p相对表达量较对照组显著升高，差异有统计学意义( t＝－9.696， P<0.001)。在兔泪腺上皮细胞与PBMC共培养体系中，miR-31-5p过表达组PBMC中的RORC、IL-17 mRNA相对表达量分别为0.33±0.03和0.28±0.09，明显低于对照组的1.00±0.00和1.00±0.00，差异均有统计学意义( t＝46.256、13.810，均 P<0.05)。Western blot检测结果显示，miR-31-5p过表达组PBMC中IL-17蛋白相对表达量较对照组明显降低，差异有统计学意义( t＝4.977， P＝0.008)。实时荧光定量PCR结果显示，miR-31-5p过表达组PBMC中IL-6、IL-23和IL-1β mRNA相对表达量较对照组显著下降，差异均有统计学意义( t＝220.076、6.641、13.271，均 P<0.05)。 结论:miR-31-5p过表达可能通过下调免疫微环境中IL-6、IL-23、IL-1β等细胞因子的表达负向调控Th17细胞免疫反应。

目的：探讨玉屏风散对支气管哮喘（哮喘）小鼠5种与 Th 细胞相关的微小 RNA（miRNA）表达调节的影响。方法40只 Balb ／c 小鼠按随机数字表法随机分为正常对照组、哮喘模型组、玉屏风散治疗组和地塞米松治疗组，每组10只。用卵清蛋白（OVA）诱导激发系统性呼吸道炎性反应模型，分别予玉屏风散和地塞米松治疗。ELISA 法测定肺组织匀浆中白细胞介素（IL）-13和 IL-17水平以及肺组织 HE 染色观察病理变化。取小鼠脾组织，采用实时定量 PCR 法检测各组 miR-146a、miR-146b、miR-210、miR-126和 miR-21 a 的表达变化。结果玉屏风散治疗组 IL-13水平[（6．382±1．690）μg／L]和 IL-17水平[（24．212±1．250）μg／L]低于哮喘模型组[（20．154±7．960）μg／L、（50．312±5．770）μg／L]，差异均有统计学意义（t ＝3．785，P ＝0．005；t ＝9．891， P ＝0．000）。地塞米松治疗组 IL-13水平[（9．366±3．460）μg／L]和 IL-17水平[（29．132±4．960）μg／L]也低于哮喘模型组，差异均有统计学意义（t ＝2．779，P ＝0．024；t ＝6.225，P ＝0．000）。玉屏风散治疗组 miR-210表达（2．052±0．871）高于哮喘模型组（4．034±1．379）（3．95倍，t ＝2．718，P ＝0．026）。玉屏风散和地塞米松治疗组 miR-126表达（分别为4．920±0．924、3．862±1．510）均高于哮喘模型组（6．024±0．447），差异具有统计学意义（分别为2．15倍，t ＝2．405，P ＝0．043和4．48倍，t ＝－3．069，P ＝0．015）。结论Th2和 Th17细胞均参与哮喘的发病机制，且能被玉屏风散所抑制。玉屏风散通过对 miR-210和 miR-126表达的影响，调节 Th 细胞而治疗哮喘。