目的:探讨血清微小RNA(microRNA，miR)-322-5p、白细胞介素(interleukin，IL)-1β诊断不明原因复发性流产(unexplained recurrent spontaneous abortion，URSA)的临床价值及与辅助性T细胞(helper T cell，Th)17/调节性T细胞(regulatory T cells，Treg)平衡的关系。方法:选取2020年9月至2022年9月海安市人民医院收治的103例URSA患者作为URSA组。另外选取同时期来院产检的120例健康孕妇作对照组。采用实时荧光定量聚合酶链反应检测血清miR-322-5p水平；采用酶联免疫吸附法检测血清IL-1β水平；采用流式细胞仪检测Th17、Treg细胞，计算两者比值。采用Pearson相关分析探讨miR-322-5p、IL-1β与Th17/Treg的关系，采用受试者工作特征(receiver operating characteristic，ROC)曲线评估miR-322-5p、IL-1β对URSA的诊断价值。结果:与对照组相比，URSA组血清miR-322-5p表达水平明显降低，IL-1β表达水平明显升高，差异有统计学意义[(3.17±1.24)比(1.05±0.43)，(62.14±7.53)pg/L比(81.42±9.16)pg/L， t值分别为16.52，17.25， P值均<0.05]。与对照组相比，URSA组血清Th17水平及Th17/Treg值明显升高，Treg水平明显降低，差异有统计学意义[(1.52±0.42)%比(2.57±0.74)%，(0.28±0.08)比(0.65±0.12)，(6.15±1.52)%比(4.02±1.03)%， t值分别为13.26，27.42，12.04， P值均<0.05]。Pearson相关分析结果显示，URSA患者血清miR-322-5p与Th17、Th17/Treg呈负相关，与Treg呈正相关( r＝－0.41、－0.37、0.50， P值均<0.05)；血清IL-1β与Th17、Th17/Treg呈正相关，与Treg呈负相关( r＝0.37、0.49、－0.42， P值均<0.05)。miR-322-5p、IL-1β预测URSA特异度分别为61.17%、66.02%，敏感度分别为92.50%、83.33%；两者联合预测的特异度为85.44%，敏感度为85.83%。两者联合的诊断价值高于单独检测( Z＝4.102， P＝0.015)。 结论:URSA患者血清miR-322-5p水平明显降低、IL-1β水平明显升高，两者可作为辅助诊断URSA的生物学指标，且与Th17/Treg平衡密切相关。

目的:观察氧诱导视网膜病变（OIR）小鼠视网膜组织中miRNA的表达，筛选与p21及视网膜新生血管（RNV）形成相关的miRNA。方法:实验研究。40只健康7日龄C57BL/6J小鼠随机分为正常组和OIR组，每组20只。OIR组构建氧诱导RNV模型，正常组不做任何处理。小鼠17日龄时，处死小鼠，视网膜荧光铺片观察小鼠RNV发生情况；光学显微镜下计数突破视网膜内界膜的血管内皮细胞核。取视网膜组织行miRNA芯片分析，检测正常组与OIR组之间差异表达的miRNA。所得差异miRNA靶基因分别进行基于基因注释（GO）和京都基因与基因组百科全书（KEGG）的富集分析；通过Targetscan、MiRanda、MicroT-CDS数据库比对筛选可能与p21有关的miRNA及通路。组间两两比较采用独立样本 t检验。 结果:与正常组比较，OIR组小鼠视网膜无灌注区面积、RNV及突破视网膜内界膜的血管内皮细胞核数量增加，差异均有统计学意义（ t=18.800、9.025， P<0.05）。与正常组比较，OIR组有统计学差异表达的miRNA 54个，其中，上调、下调者分别为47、7个。从3个数据库与所得差异miRNA的比对结果中共筛选到与p21相关miRNA 13个，按差异倍数从高到低分别为miR-7218-5p、miR-322-5p、miR-224-5p、miR-335-5p、miR-329-3p、miR-362-3p、miR-532-5p、miR-20b-5p、miR-20a-5p、miR-195a-5p、miR-423-5p、miR-497a-5p、miR-129-5p。差异miRNA靶基因富集分析，得到1 112个GO条目及50条KEGG通路，其中50个GO条目和13条KEGG通路与p21相关。 结论:在OIR模型中共筛选出13个与P21相关的miRNA。

目的 探讨miRNAs和CTNNB1在激素性股骨头坏死患者中的表达水平,以及miR-124-3p对骨髓间充质干细胞成骨分化的影响.方法 选择2020年9月至2022年5月就诊于新疆医科大学第五附属医院行髋关节置换术的患者30例,激素性股骨头坏死患者15例作为实验组,股骨颈骨折患者15例作为对照组.术中扩髓时收集患者的骨髓组织,提取总mRNA,应用qRT-PCR检测各组miR-322-5p、miR-124-3p、miR-125a-3p及CTNNB1的表达量,用Western Blot检测CTNNB1蛋白的表达量.在骨髓间充质干细胞(BMSCs)中转染miR-124-3p的模拟物和抑制剂来检测其对BMSCs分化的影响作用,并验证miR-124-3p与CTNNB1的靶标关系.结果 在实验组 BMSCs中miR-125a-3p、CTNNB1表达量高于对照组(P＜0.05);miR-124-3p的表达量低于对照组(P＜0.001),miR-322-5p的表达量在两组中无明显差异.转染miR-124-3p+mimics组的miR-124-3p表达量高于其他组,CTNNB1表达量低于其他组(P＜0.001),转染miR-124-3p inhibitor 组的结果则相反.分化能力评估发现过表达miR-124-3p可以促进BMSCs成骨分化能力,抑制表达则结果相反.双荧光素酶报告系统结果显示,miR-124-3p与CTNNB1有靶向结合关系.结论 miR-124-3p可以靶向CTNNB1,并且miR-124-3p可以调控骨髓间充质干细胞并促进其成骨分化.

目的·探讨miR-322-5p靶向Akt3抑制Th17分化对干扰素 β(interferon-β,IFN-β)干预实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE)的影响.方法·建立EAE小鼠模型,设IFN-β 干预组和PBS对照组.流式染色比较2组Th17的比例变化;RNA芯片检测2组小鼠miRNA的差异表达,筛选出miR-322-5p做进一步研究;软件预测miR-322-5p的靶基因为Akt3;IFN-β 干预后和过表达miR-322-5p后检测Akt3的表达水平;双荧光素酶报告实验验证miR-322-5p和Akt3的直接靶向关系;体外实验观察Akt3对Th17细胞分化的影响.结果 ·IFN-β 干预组的EAE小鼠Th17比例均显著降低,miR-322-5p的表达显著升高,而Akt3的表达明显降低;过表达miR-322-5p能显著抑制Akt3的表达,双荧光素酶报告实验显示Akt3是miR-322-5p的直接靶基因,且Akt3对Th17的体外分化有明显促进作用.结论 ·IFN-β 可通过影响miR-322-5p靶向Akt3,进而抑制Th17分化来缓解EAE的疾病进程.

目的 探讨miR322-5p干扰对小鼠Sca-1+心脏内皮祖细胞凋亡及分化的影响.方法 采用流式细胞分选仪分选小鼠CD45-Sca-1+CD31+与CD45-Sca-1+CD31-心脏内皮祖细胞,利用RNA干扰技术(RNAi)慢病毒转染,修饰miR322-5p基因在小鼠Sca-1+心脏内皮祖细胞中的表达,real-time PCR检测miR322-5p基因在小鼠Sca-1+心脏内皮祖细胞中的RNA表达,流式分析miR322-5p干扰后小鼠Sca-1+心脏内皮祖细胞的凋亡情况,免疫荧光观察miR322-5p干扰后小鼠Sca-1+心脏内皮祖细胞向心肌细胞、平滑肌细胞以及血管内皮细胞的分化情况.结果 CD45-Sca-1+CD31+、CD45-Sca-1+CD31-细胞占总细胞的比例分别为(3.53±0.47)％、(0.61±0.11)％,两者相比P<0.01;miR322-5p在CD45-Sca-1+CD31+、CD45-Sca-1+CD31-细胞中的相对表达量分别为1.00±0.03、0.04±0.00,两者相比P<0.01;慢病毒转染后,在miR322-5p基因敲低的CD45-Sca-1+CD31+细胞中,miR322-5p相对表达量为0.09±0.02;在miR322-5p基因过表达的CD45-Sca-1+CD31-细胞中,miR322-5p相对表达量为19.33±4.52.CD45-Sca-1+CD31+细胞凋亡率为0.760±0.114,miR322-5p基因被敲低的CD45-Sca-1+CD31+细胞凋亡率为0.556±0.116,两者相比P<0.05.CD45-Sca-1+CD31-细胞凋亡率为0.830±0.013,miR322-5P基因过表达的CD45-Sca-1+CD31-细胞凋亡率为0.903±0.017,两者相比P<0.05.miR322-5p基因被敲低后,CD45-Sca-1+CD31+细胞分化为血管内皮细胞的能力增强.miR322-5p基因过表达后,CD45-Sca-1+CD31-分化为心肌细胞的能力增强,分化为血管内皮细胞的能力降低.结论 miR322-5P基因可能是控制CD45-Sca-1+CD31+与CD45-Sca-1+CD31-心脏内皮祖细胞凋亡与分化的一个关键因子.

目的 探讨miR-322-5p调控烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶4(NOX4)的表达及改善细胞凋亡对大鼠神经管闭合的作用.方法 采用全反式维甲酸?(ATRA)?诱导大鼠神经管畸形?(NTDs)?模型.通过实时定量PCR检测miR-322-5p在ARTA诱导的大鼠胚胎脊髓中的表达情况;通过Western?blotting检测NOX4及凋亡蛋白的表达情况;采用免疫组织化学技术和组织免疫荧光技术观察NOX4在胚胎神经管中的定位和表达情况;通过对C17.2神经干细胞转染miRNA-空白对照?(miR-NC)、mimic-322-5p及NOX4高表达质粒,明确NOX4和miR-322-5p之间的调控作用,采用实时定量PCR检测转染后miR-322-5p的表达,并通过Western?blotting检测转染后细胞NOX4以及凋亡蛋白的表达情况.结果 在ATRA诱导的大鼠NTDs模型中,NOX4表达上调,miR-322-5p表达下调.在C17.2神经干细胞中,转染miR-322-5p抑制了NOX4的表达,也抑制了凋亡蛋白的表达.结论 miR-322-5p可抑制NOX4的表达,并抑制大鼠NTDs的发生.

目的 探讨microRNA-424(322)-5p[miR-424(322)-5p]在大鼠角膜新生血管(corneal neovascularization,Cor NV)形成中的作用及其可能机制.方法 20只雌性SD大鼠通过缝线法诱导构建大鼠Cor NV模型,左眼为实验组,右眼为正常对照组,收集建模第0、4、7、14天的角膜组织,通过HE染色、免疫组化(IHC)观察角膜结构、血管形成及蛋白表达;通过RT-PCR检测建模第4天的大鼠角膜组织中的miR-424(322)-5p及血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF) mRNA的表达.通过脂质体转染人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs),分为miR-424(322)-5p模拟物[miR-424(322)-5p mimic]组、阴性对照[miR-424(322)-5p NC]组、正常空白(CON)组,用RT-PCR检测miR-424(322)-5p转染效率,CCK-8、划痕实验、Transwell实验、Matrigel胶成管实验,分别检测各组HUVECs的增殖、迁移、成管能力;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测VEGF及Raf/MEK/ERK通路的蛋白相对表达量.结果 成功构建了大鼠Cor NV模型,HE染色切片显示:与正常对照组比较,建模后实验组第4、7、14天的大鼠角膜组织结构紊乱,角膜水肿增厚,新生血管形成,炎性细胞浸润;免疫组化(IHC)结果显示:与正常对照组比较,实验组VEGF的表达量明显增加,呈棕黄色;RT-PCR结果显示建模第4天后的大鼠角膜组织中miR-424(322)-5p及VEGF mRNA的表达显著增高(P＜0.01).通过脂质体转染HUVECs后的miR-424(322)-5p mimic组miR-424(322)-5p的表达量显著高于NC组和CON组(P＜0.01),CCK-8、划痕实验、Transwell实验及Matrigel胶成管实验结果表明miR-424(322)-5p促进HUVECs的增殖、迁移及成管能力(P＜0.01);Western blot结果显示VEGF及Raf/MEK/ERK通路的蛋白相对表达量明显上调(P＜0.01).结论 miR-424 (322)-5p可能通过激活VEGF及Raf/MEK/ERK通路,促进HUVECs的迁移、增殖及成管能力,从而参与Cor NV的形成.

目的:探究氯化锂-匹罗卡品诱导癫痫大鼠海马组织差异表达共价闭合、单链环状RNA(circRNA)及功能分析.方法:通过构建氯化锂-匹罗卡品癫痫大鼠模型,取癫痫大鼠及对照大鼠海马组织通过Illumina高通量测序平台进行转录组测序,并通过EdgeR包对circRNA进行差异分析、通过R语言进行GO及KEGG信号通路富集分析,通过Targetscan与miRanda软件进行circRNA与miRNA互作分析寻找circRNA核心调控靶标.结果:对照组及癫痫组大鼠海马的circRNA进行差异分析获得的262个差异表达circRNA,信号通路富集分析发现与胞蛋白修饰过程、蛋白质变性过程、树突形态调控、神经元分化调节、离子跨膜转运的调节等生物过程相关.并进一步确定了可能与circRNA存在互作的核心调控miRNA,包括miR-322-5p、miR-322-3p、miR-323-5p、miR-323-3p、miR-301a-5p、miR-301a-3p、miR-324-5p、miR-324-3p等.结论:本研究筛选了氯化锂-匹罗卡品点燃癫痫大鼠与正常大鼠脑组织差异circRNA,系统地分析了其可能的作用功能机制,为癫痫诊断或治疗寻找到可靠的生物标志物.

目的 研究miR-322-5p对缺氧/复氧(H/R)诱导的大鼠心肌细胞H9c2损伤的影响及潜在的分子机制.方法 对H9c2细胞进行H/R处理,qRT-PCR检测H/R诱导后H9c2细胞miR-322-5p和PRMT5 mRNA的表达,Western印迹测定PRMT5蛋白、凋亡相关蛋白B细胞淋巴瘤(Bcl)-2和Bcl-2相关X蛋白(Bax)的表达,测定H9c2细胞H/R后丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性,流式细胞术测定细胞凋亡率,双荧光素酶报告系统验证miR-322-5p与PRMT5的调控关系.结果 H9c2细胞经H/R处理后,细胞中PRMT5 mRNA和蛋白表达均显著升高,miR-322-5p表达显著降低(均P<0.05).过表达miR-322-5p和敲减PRMT5均可显著降低H/R诱导的H9c2细胞凋亡率、Bax蛋白表达及MDA含量,而显著提高Bcl-2蛋白表达及SOD和GSH-Px活性(均P<0.05).miR-322-5p靶向负调控PRMT5的表达.上调PRMT5逆转了过表达miR-322-5p对H9c2细胞氧化应激和凋亡的作用.结论 miR-322-5p通过靶向下调PRMT5抑制H/R诱导的大鼠心肌细胞H9 c2氧化损伤和凋亡.

目的 探讨AK001058在胃癌发生发展中的上下游调控机制.方法 利用生物信息学分析的方法,于多个数据库或网站(lncLocator、UCSC、lncatlas、ensembl、Genome Browser、NCBI、CHIP-Seq及AnnoLnc)进行数据搜索汇总.结果 AK001058全长1631bp,是位于编码蛋白基因之间的LncRNA,定位于染色体5 p13.3(chr5:33,523,536-33,525,166),亚细胞定位主要在胞浆;与AK001058有有相互作用的基因有ADAMTS12和FOXC2-AS1,均与胃癌发生密切相关;与AK001058有相互作用的蛋白有CTCF和HNRNPA2B1,而HNRNPA2B1与胃癌关系密切;在上游调控中AK001058受5个转录因子的调控:EBF1、Egr-1、MafF、MafK和FOXA1,FOXA1亚细胞定位主要在细胞浆,与胃癌的关系更加密切;多种miRNA家族(miR-15abc/16/16abc/195/322/424/497/1907、miR-218/218a、miR-101/101ab、miR-144等)可与AK001058的不同位点相结合发生相互作用.结论 AK001058受多种转录因子的调控,多个miRNA参与AK001058的基因表达或功能调节,AK001058也调控了部分与胃癌关系密切的基因及蛋白;AK001058可能广泛参与胃癌发生发展,具体作用机制有待进一步研究.