目的:观察心肌梗死(MI)大鼠心肌微小RNA(miR)-130a-3p的表达及其对心肌炎症的影响。方法:使用随机数字法将雄性SD大鼠随机分为假手术组(Sham组)、MI组、miR-130a-3p组(心肌注射miR-130a-3p mimics)和阴性对照组(心肌注射miR-130a-3p mimics阴性对照)，每组15只。心脏彩超测定左心室收缩末期内径(LVDs)、左心室舒张末期内径(LVDd)、左心室长轴缩短分数(FS)、左心室射血分数(LVEF)；原位缺口末端标记法(TUNEL)法测定心肌凋亡指数；酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清肌钙蛋白T(TnT)、肌钙蛋白I(TnI)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)、N末端B型利钠肽前体(NT-proBNP)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素(IL)-1β水平；反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法测定心肌组织miR-130a-3p、NOD样受体家族3炎症小体(NLRP3)的表达；蛋白质印迹法(Western blot)测定心肌组织B细胞淋巴瘤/白血病-2相关X蛋白(bax)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(bcl-2)和NLRP3的表达水平。各组间比较采用方差分析。结果:MI组miR-130a-3p水平明显低于Sham组( t＝4.365， P<0.05)。miR-130a-3p组大鼠LVDs和LVDd低于MI组( t＝4.475、5.172、 P<0.05)，FS和LVEF高于MI组( t＝3.679、5.442， P<0.05)。miR-130a-3p组血清TnT、TnI、CK-MB、NT-proBNP、TNF-α、IL-1β水平明显低于MI组( t＝4.265、5.382、3.976、4.436、7.246、4.854， P<0.05)。Sham、MI、阴性对照组和miR-130a-3p组凋亡指数依次为(5.14±0.62)%、(34.54±4.37)%、(35.27±4.55)%和(18.76±2.48)%，miR-130a-3p组凋亡指数低于MI组( t＝4.356， P<0.05)。miR-130a-3p组NLRP3 mRNA和bax蛋白、NLRP3蛋白相对表达量均低于MI组( t＝6.296、11.356、8.235， P<0.05)，bcl-2蛋白水平相对表达量高于MI组( t＝8.876， P<0.05)。 结论:miR-130a-3p在MI大鼠心肌组织中呈低表达，上调miR-130a-3p表达可以减轻MI大鼠心肌炎症和细胞凋亡。

目的:探讨幽门螺杆菌( H. pylori)诱导的人胃癌SGC-7901细胞源性外泌体中微小RNA(miRNA)的差异表达，为进一步阐明 H． pylori的致癌机制提供新线索。 方法:超高速离心法和试剂盒提取 H. pylori刺激组和对照组细胞释放的外泌体，采用透射电镜、纳米粒子跟踪分析和Western blot对外泌体进行鉴定；荧光染料PKH67标记的外泌体与THP-1源性巨噬细胞共孵育，共聚焦显微镜观察巨噬细胞内吞外泌体的情况；miRNA基因芯片分析两组细胞外泌体miRNA差异表达谱，采用qRT-PCR对其中4个差异表达miRNA进行验证；生物信息学软件预测、分析部分差异表达miRNA结合的靶基因及其功能和可能参与的信号通路。Cy3标记差异表达miR-382-5p，观察其能否通过外泌体传递给巨噬细胞；qRT-PCR和ELISA检测miR-382-5p mimic转染巨噬细胞表型分子CD206和细胞因子TNF-α、IL-6、IL-10的表达，流式细胞术分析表达CD206和HLA-DR的细胞比例。 结果:提取的外泌体符合外泌体形态，且高表达其表面标志蛋白CD9、CD63、TSG101；外泌体与THP-1巨噬细胞共孵育12 h后被细胞内吞；与对照组相比， H. pylori刺激组有上调miRNA 130个、下调miRNA 111个；部分差异表达miRNA预测的靶基因主要参与调节PI3K-AKT、NF-κB、JAK-STAT、干细胞多能性等炎症和肿瘤相关通路。miR-382-5p可通过外泌体传递给巨噬细胞，诱导巨噬细胞M2型表型分子CD206和细胞因子IL-10表达，并抑制TNF-α、IL-6表达，CD206 highHLA-DR low细胞比例升高。 结论:H． pylori处理SGC-7901细胞导致其外泌体miRNA表达水平发生显著改变。生物信息学预测结果显示，部分差异表达miRNA的靶基因产物在炎症和肿瘤相关信号通路调节中发挥重要作用。miR-382-5p具有诱导巨噬细胞向M2极化的潜能。

目的 分析慢性乙型肝炎(CHB)患者乙型肝炎病毒脱氧核糖酸(HBV DNA)载量与血清微小RNA-122(miR-122)、微小RNA-223(miR-223)水平的关系.方法 回顾性分析郑州市第七人民医院2022年6月-2023年3月收治的540例CHB患者的临床资料.依据血清HBV DNA载量分为低载量(＜105拷贝/mL)组(n=230)、中载量(105～107拷贝/mL)组(n=180)、高载量(＞107拷贝/mL)组(n=130),另选取同期于我院体检中心体检的健康者300名设为对照组.比较不同HBV DNA载量组血清miR-122、miR-223水平,绘制ROC曲线评价血清miR-122、miR-223诊断CHB的效能,采用多因素Logistic回归分析CHB的危险因素,采用Pearson相关性分析HBV DNA载量与血清miR-122、miR-223水平的关系.结果 三组血清 miR-122(1.45±0.37、2.84±0.72、4.11±0.90)、miR-223(1.34±0.33、1.69±0.37、1.91±0.45)比较差异有统计学意义(F=716.128、104.744,P＜0.05);CHB 组患者的血清 miR-122(2.56±0.49)、miR-223(1.79±0.42)及 HBV DNA 载量＞105 拷贝/mL 的人数占比(310/540)显著高于对照组(1.07±0.21、1.05±0.30、75/300)(t=51.844、26.935,x2=81.585,P＜0.05);经ROC分析证实,血清miR-122、miR-223水平均可用于预测CHB,曲线下面积分别为 miR-122(AUC=0.794,95％CI:0.690～0.898)、miR-223(AUC=0.813,95％CI:0.720～0.906),均有 P＜0.05;多因素logistic回归分析显示,miR-122≥1.528、miR-223≥1.210及HBV DNA载量＞105拷贝/mL是CHB的危险因素,OR 值分别为 2.011(95％CI:1.211～3.339)、1.696(95％CI:1.026～2.804)、2.117(95％CI:1.974～3.987)均有 P＜0.05;相关性分析显示,血清miR-122、miR-223水平与HBV DNA载量呈正相关(r=0.753、0.712,P＜0.05).结论 血清 miR-122、miR-223 水平与 HBV DNA 载量呈正相关,且 miR-122≥1.528、miR-223≥1.210 及 HBV DNA 载量＞105 拷贝/mL是CHB的危险因素,可将以上指标作为诊断CHB的生物学标志物,从而为临床病情评估和治疗提供参考.

目的 研究微小RNA-126(miR-126)-内皮祖细胞(EPC)-微粒(MPs)改善心肌细胞氧糖剥夺/复氧(OGD/R)损伤的分子机制.方法 采用心肌细胞建立对照(control)和OGD/R损伤模型,并分别给予EPC-MPs和miR-126 mimic EPC-MPs处理.通过透射电子显微镜评估心肌细胞细胞器的结构变化.采用ELISA检测心肌细胞中白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和高迁移率族蛋白B1(HMGB1)的表达水平.采用Western blot和实时荧光定量PCR(qPCR)检测不同处理后心肌细胞中血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-6(caspase-6)、一氧化氮合酶(eNOS)、叉头框蛋白O1(FOXO1)、髓过氧化物酶(MPO)、核因子-κB(NF-κB)、细胞外信号调节激酶1(ERK1)、肝激酶B1(LKB1)、沉默信息调节因子2相关酶1(SIRT1)、葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、130×103高尔基体基质蛋白(GM130)和过氧化物酶体增生物激活受体γ共激活因子-1α(PGC-1α)的蛋白和mRNA表达水平.结果 OGD/R+miR-126 mimic EPC-MPs组部分心肌细胞线粒体结构完整,部分线粒体大小增大,内质网表面核糖体较少,高尔基体部分囊泡聚集.与OGD/R+EPC-MPs组比较,OGD/R+miR-126 mimic EPC-MPs组IL-6、TNF-α和HMGB-1的表达水平下调.与OGD/R+EPC-MPs组比较,OGD/R+miR-126 mimic EPC-MPs组AngⅡ、caspase-6、p-ERK1/2和GRP78的蛋白表达水平下调,p-LKB1、GM130和PGC-1α的蛋白表达水平上调.qPCR结果显示,与OGD/R+EPC-MPs组比较,OGD/R+miR-126 mimic EPC-MPs组AngⅡ、MPO和GRP78的mRNA表达水平下调,eNOS、GM130和PGC-1α的mRNA表达水平上调.结论 当心肌细胞发生OGD/R损伤时,miR-126 mimic EPC-MPs调节PGC-1α/GM130表达,抑制AngⅡ诱导的应激损伤反应,减少心肌细胞的OGD/R损伤.

目的 探究miR-130b-3p调节PI3K/AKT途径对肾癌细胞生物学行为的影响及作用机制.方法 临床收集肾癌患者78例,检测肿瘤组织和癌旁组织中miR-130b-3p和PTEN蛋白水平,分析miR-130b-3p与肾癌病理特征的关系.通过相关性分析探究肾癌组织中miR-130b-3p与PTEN蛋白的相关性.786-O细胞分为NC、miR-130b-3p、PTEN 和 miR-130b-3p+PTEN 组,分别转染 NC、miR-130b-3p mimic 和/或 pcDNA 3.1 PTEN 来过表达miR-130b-3p和/或PTEN.分别检测各组细胞活力、凋亡率、侵袭能力以及PI3K/AKT通路水平.结果 肾癌组织中miR-130b-3p水平显著高于癌旁组织(P＜0.05).miR-130b-3p表达水平与性别、年龄、肿瘤直径无关,高水平的miR-130b-3p与高临床分期和淋巴转移有关(P＜0.05).miR-130b-3p与PTEN靶向结合(P＜0.05).与NC组比较,miR-130b-3p组的PTEN蛋白和凋亡率显著降低,增殖活力、侵袭能力和PI3K/AKT通路显著升高(P＜0.05);PTEN组的PTEN蛋白和凋亡率显著升高,增殖活力、侵袭能力和PI3K/AKT通路显著抑制(P＜0.05).miR-130b-3p+PTEN组的PTEN蛋白和凋亡率显著高于miR-130b-3p组且显著低于PTEN组,而增殖活力、侵袭能力和PI3K/AKT通路显著低于miR-130b-3p组且显著高于PTEN组(P＜0.05).结论 miR-130b-3p在肾癌组织中上调,高水平的miR-130b-3p与肾癌患者的高临床分期和转移有关,miR-130b-3p可调控PI3K/AKT途径,抑制PTEN蛋白表达,促进肾癌细胞的侵袭并抑制凋亡.

目的 筛选不同海拔地区生活的藏族患者的胃癌组织微小RNA(miRNA)差异表达,探讨高原地区外环境缺氧是否参与调控肿瘤的发生、侵袭和转移等.方法 选择5对不同海拔地区生活的藏族胃癌患者作为研究对象(其中海拔﹥3500 m者5例,海拔﹤2450 m者5例),对胃癌组织及其配对癌旁组织进行miRNA芯片检测,分析差异miRNA,查询差异miRNA-靶基因,预测的靶基因应用DAVID数据库进行功能富集分析(GO分析)和pathway富集分析.结果 在5对不同海拔地区生活的藏族胃癌患者的胃癌组织及其配对癌旁组织中找出16个差异表达的miRNA,在海拔﹥3500 m组均上调,仅有hsa-miR-1260b、hsa-miR-130b-3p、hsa-miR-3648、hsa-miR-4284预测到验证的靶基因,其中hsa-miR-1260b预测118个,hsa-miR-130b-3p预测151个.这些靶基因富集在细胞增殖、基因表达调控、转录调控、细胞周期、细胞内信号传导等生物学过程和功能上;pathway富集到癌症通路上.结论 在高原藏族胃癌患者的肿瘤生长、侵袭、转移及肿瘤耐药等过程中,hsa-miR-1260b、hsa-miR-130b-3p可能发挥着重要的作用.

目的 探讨环状RNA(circRNA)分子在慢性HBV感染者不同时期的差异表达及其作用.方法 收集泰州市人民医院感染病科2014年10月至2015年10月就诊的慢性HBV感染者7例,其中慢性乙型肝炎(CHB)患者4例,慢性HBV携带者3例,3名对照来自健康体检者.采集所有研究对象外周血单个核细胞(PBMC),应用新一代circRNA表达谱芯片检测PBMC中circRNA分子的表达,并通过荧光定量PCR进行验证.采用微小RNA(miRNA)靶预测软件分析circRNA和miRNA的相互作用位点.应用基因本体(GO)和京都基因与基因组百科全书(KEGG)对其靶向miRNA及调控靶基因进行分析.采用SPSS 17.0软件对数据进行分析.结果 与健康对照者比较,CHB患者表达差异的circRNA分子有137个,其中上调89个,下调48个;慢性HBV携带者表达差异的circRNA分子有444个,其中上调130个,上调5倍以上的有34个,下调314个.CHB患者与慢性HBV携带者相比,差异表达的circRNA分子有1041个,其中上调663个,下调378个,下调超过5倍以上的有54个.差异表达的circRNA上具有miRNA应答元件,可与miRNA种子区域的碱基互补配对.靶基因预测分析显示,hsa_circ_0038646相关miRNA调控的靶基因有533个,hsa_circ_0087354分子相关miRNA调控的靶基因有249个.GO分析显示,hsa_circ_0038646分子相关miRNA调控靶基因的功能主要富集于激活素结合等,hsa_circ_0087354分子相关miRNA调控的靶标富集于犰狳重复区域结合等.KEGG分析显示,hsa_circ_0038646分子相关miRNA主要参与T细胞受体结合途径、雌激素受体信号通路等,hsa_circ_0087354分子相关miRNA主要参与粘附连接、MAPK信号途径等.结论 HBV感染不同时期患者circRNA的表达存在差异,差异表达的circRNA可能通过影响相关miRNA分子的多个靶基因及其信号途径参与慢性HBV感染者的免疫调控.

微小RNA(microRNAs,miRNAs)是内源性非编码小RNA之一,通过调控基因转录后的表达水平在人体多种生物学过程中扮演着重要的角色.研究表明,miRNAs与室性心律失常的发生密切相关,诸如miR-133、miR-1、miR-17-92、miR-130a、miR-19b、miR-223-3-p均参与室性心律失常的发生发展,由于miRNAs存在于血液循环中,因此有望成为室性心律失常预警标记物之一.

目的 探讨铁蓄积小鼠骨量下降与微小RNA(miRNA,miR)差异性表达的关系.方法 12周龄雄性ICR小鼠(n=12)随机分为两组:铁蓄积组(FAC组)及对照组(Con组),分别腹腔注射枸橼酸铁胺(FAC)及等量生理盐水,干预8周后检测血清铁蛋白,微计算机断层扫描技术(Micro-CT)检测小鼠股骨骨量,并分析相关骨结构参数.小鼠全血分离白细胞提取RNA,进行TaqmanmiRNA芯片检测表达谱差异,实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)检测验证差异miRNA.利用Targetscan及miRDB数据库预测差异miRNA的下游靶基因,并对预测的下游靶基因进行生物信息学分析,包括细胞成分、生物过程、分子功能和京都基因和基因组百科全书(KEGG)通路分析.结果 FAC组干预8周后,血清铁蛋白[(218.2 ±29.5) μg/L]相较于对照组[(30.6±9.9)μg/L]明显升高(P =0.000).股骨三维重建示铁蓄积小鼠骨质结构破坏,骨量、骨小梁厚度(Tb.Th)及骨体积分数(BV/TV)显著下降(P=0.001、0.005、0.021),而骨小梁间隙(Tb.Sp)升高(P=0.000).miRNA芯片结果:初步筛选出20个miRNA表达上调:mmu-miR-29b-3p、mmu-miR-324-3p、mmu-miR-133a-5p、mmu-miR-214-5p、mmu-miR-22-3p、mmu-miR-34a-5p、mmu-miR-31-5p、mmu-miR-143-5p、mmu-miR-423-3p、mmu-miR-223、mmu-miR-155、mmu-miR-106a、mmu-miR-2861、mmu-miR-148a、mmu-miR-96、mmu-miR-449a-5p、mmu-miR-423-Sp、mmu-miR-204-5p、mmu-miR-211、mmu-miR-23b及7个miRNA表达下调:mmu-miR-1 8a-3p、mmu-miR-223-3p、mmu-miR-199a-5p、mmu-miR-196a-5p、mmu-miR-30c-5p、mmu-miR-15b、mmu-miR-130b.其中mmu-miR-423-5p表达差异最为显著,q-PCR验证结果显示miR-423-5p的表达趋势与测序结果一致.Targetscan和miRDB预测并筛选miR-423-5p下游靶基因共91个.生物信息学分析表明miR-423-5p的靶基因在磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)-蛋白激酶B(Akt)、Rap1、Ras及丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路上出现聚集.结论 铁蓄积导致的骨量下降可能与miR-423-5p差异性表达相关.

目的 探讨血清miR-155及其靶基因缺氧诱导因子1α(hypoxiainducible factor 1α,HIF1A)与急性脑梗死(acute cerebral infarction,ACI)的相关性,探寻与ACI诊断及治疗有关的潜在血清生物标志物.方法 实时荧光定量聚合酶链反应(real time-PCR)法检测ACI患者和健康对照组血清miR-23b、miR-106b、miR-130a、miR-155和miR-425的表达水平,使用miR-Base和TargetScan数据库推测靶基因,并应用双荧光素酶报告和蛋白质印迹分析的办法验证,应用多变量Logistic回归分析等进行分析.结果 与健康对照组相比,ACI患者血清miR-155水平显著上调(P<0.05);经验证HIF1A是miR-155的靶基因;ACI患者血清HIF1A mRNA的表达水平显著下调(P<0.05),与miR-155的表达呈显著负相关(P<0.05);单独或联合存在的miR-155高表达和HIF1A mRNA低表达均与ACI患者的高总胆固醇(P<0.05)、高LDL(P<0.05)和低HDL(P<0.05)有显著相关性;此外,高表达的miR-155(P<0.05)、低表达的HIF1A mRNA(P<0.05),或者高miR-155和低HIF1A mRNA的联合表达都可能是检测ACI的指标.结论 血清miR-155上调及其靶基因HIF1A的下调与ACI具有相关性,可能对开发针对ACI的miRNA定向诊断有参考意义.