目的:探讨微小RNA-139-5p（miR-139-5p）在食管鳞状细胞癌（ESCC）发生发展中的作用及其对ESCC细胞增殖和侵袭的影响和分子机制。方法:收集2017年2月至2018年3月在郑州大学第一附属医院胸外科手术获得的75例ESCC组织和癌旁正常食管组织标本。实验分2组：ESCC（ n=75）和正常食管组织（ n=75）。采用GEO数据集和实时荧光定量PCR（qRT-PCR）检测ESCC组织和细胞中miR-139-5p的表达。将miR-139-5p抑制剂、miR-139-5p模拟物、阴性对照、对照siRNA、T盒转录因子1（TBX1） siRNA、pcDNA3.1和pcDNA3.1-TBX1转染ESCC Eca109和TE1细胞，用qRT-PCR检测转染后ESCC细胞中miR-139-5p和TBX1的表达水平，分别用细胞计数试剂盒8（CCK-8）和Transwell小室检测ESCC细胞的增殖和侵袭。双荧光素酶报告实验分析miR-139-5p与TBX1的相互作用，qRT-PCR、Western印迹法和免疫组织化学检测TBX1在ESCC组织中的表达，Western印迹法检测转染后E-钙黏蛋白、N-钙黏蛋白和波形蛋白的表达。 结果:ESCC组织中miR-139-5p水平明显低于正常组织（1.17±0.43比5.16±3.62， P<0.001）。Log-rank检验发现，高miR-139-5p表达水平的ESCC患者（ n=43）生存率显著高于低miR-139-5p水平的ESCC患者生存率（ n=32）（67.44%比25.00%， P=0.005）。ESCC细胞中miR-139-5p的表达水平均显著低于正常食管上皮细胞Het-1A（均 P<0.001）。miR-139-5p高表达的Eca109和TE1细胞的增殖和侵袭能力明显低于阴性对照（NC）转染的Eca109和TE1细胞（均 P<0.05）。双荧光素酶报告实验表明，miR-139-5p能结合致TBX1的3′-非翻译区。miR-139-5p模拟物或抑制剂分别抑制或促进Eca109和TE1细胞TBX1蛋白表达（均 P<0.05）。TBX1下调显著抑制Eca109和TE1细胞的增殖和侵袭，而TBX1的过表达显著促进Eca109和TE1细胞的增殖和侵袭（均 P<0.05）。此外，pcDNA3.1-TBX1能部分逆转miR-139-5p介导的细胞侵袭能力的抑制（均 P<0.05），而TBX1 siRNA能部分逆转miR-139-5p抑制剂介导的侵袭能力的增强（均 P<0.05）。 结论:miR-139-5p通过靶向TBX1抑制ESCC细胞的增殖和侵袭。

目的:通过生物信息学方法挖掘与卵巢上皮性癌（卵巢癌）耐药相关的可作为竞争性内源RNA（ceRNA）的长链非编码RNA（lncRNA），并进行临床验证。方法:（1）挖掘与卵巢癌相关的lncRNA并构建ceRNA调控网络：综合应用文本挖掘、数据预测和网络构建等生物信息学方法，建立与卵巢癌耐药相关的潜在ceRNA调控网络，即lncRNA-微小RNA（miRNA）-mRNA调控网络。（2）临床验证：收集2008年6月至2016年10月在广西医科大学附属肿瘤医院行肿瘤细胞减灭术的卵巢癌患者共95例，其中铂类药物耐药患者54例（耐药组），铂类药物敏感患者41例（敏感组），采用实时荧光定量PCR技术检测两组卵巢癌组织中lncRNA的表达，分析lncRNA表达对卵巢癌患者预后的影响，并分析lncRNA表达对卵巢癌耐药的诊断效能。结果:（1）文本挖掘初步筛选出25个与卵巢癌发生、发展相关的差异表达lncRNA；亚细胞定位分析发现，有8个lncRNA存在于细胞质中；通过进一步数据挖掘、共线文献分析，预测其中的两个lncRNA分子［即生长阻滞特异性转录因子5（GAS5）和HOXC基因座转录因子（HOTAIR）］可作为关键ceRNA分子；构建ceRNA调控网络，GAS5与miRNA（即miR139-5p、miR-24-3p）及mRNA［即乳腺癌易感基因1（BRCA1）、肿瘤蛋白p53（TP53）、表皮生长因子受体（EGFR）、B细胞淋巴瘤2基因（BCL-2）、细胞癌基因（FOS）、H-Ras蛋白（HRAS）］组成ceRNA调控网络，HOTAIR与miRNA（即miR-30a-5p）及mRNA［即磷酸肌醇3激酶调控亚基2（PIK3R2）、TP53、丝蛋白（VIM）］组成ceRNA调控网络。（2）实时荧光定量PCR技术检测显示，与敏感组（设为1.0）比较，耐药组卵巢癌组织中GAS5的表达水平为2.1±1.6，HOTAIR的表达水平为3.5±1.9，两组分别比较，差异均有统计学意义（ P=0.011， P<0.01）；Cox回归模型多因素分析显示，GAS5、HOTAIR表达为影响卵巢癌患者无病进展生存率和总生存率的独立危险因素（ P<0.05）。GAS5与HOTAIR联合检测诊断卵巢癌的受试者工作特征（ROC）曲线下面积（AUC）为0.871，显著高于GAS5单独检测和HOTAIR单独检测（AUC分别为0.678、0.863），分别比较，差异均有统计学意义（ P均<0.05）。 结论:GAS5与HOTAIR高表达与卵巢癌耐药密切相关，可作为卵巢癌化疗反应的潜在预测指标；GAS5与HOTAIR联合检测对卵巢癌患者具有一定的诊断效能。这种利用ceRNA调控网络预测关键分子的方法，为卵巢癌的诊断和治疗提供了新的思路。

目的:探索SOX13基因来源的环状RNA hsa_circ_0004777的特征分析及功能预测。方法:探究了hsa_circ_0004777的基本特征，包括验证反向剪接位点，RNase R消化实验，细胞内RNA的胞质胞核分布，蛋白翻译潜能的预测。此外，使用生物信息学方法，预测hsa_circ_0004777结合的微小RNA（microRNA，miRNA）以及miRNA的靶基因，并且构建了circRNA-miRNA-mRNA的网络图。再对预测到的miRNA的靶基因进行基因本体论（gene ontology，GO）功能富集分析和信号通路富集分析。结果:hsa_circ_0004777的形成是由SOX13基因第4号外显子反向剪接至第2号外显子，hsa_circ_0004777能抵抗RNase R处理，主要分布在细胞质。生信预测hsa_circ_0004777通过作为hsa-miR-1225-3p、hsa-miR-637、hsa-miR-139-5p、hsa-miR-145-5p、hsa-miR-384、hsa-miR-660-5p、hsa-miR-942-5p、hsa-miR-331-3p这8个miRNA的海绵来发挥作用；hsa_circ_0004777潜在结合的8个miRNA的靶基因在对聚合酶Ⅱ启动子转录的正调控、DNA模板、骨骼肌细胞分化等生物过程显著富集。结论:成功探索了SOX13基因来源的环状RNA hsa_circ_0004777的特征，并且从circRNA-miRNA-mRNA网络图中预测了它的功能，为进一步研究hsa_circ_0004777奠定了基础，也为更深入研究SOX13提供了思路。

目的 分析血清微小核糖核酸(micro RNA,miR)-139-5p,组蛋白去乙酰化酶 4(histone deacetylase 4,HDAC4)和胶质纤维酸性蛋白(glialfibrillary acidic protein,GFAP)与新生儿缺氧缺血性脑病(hypoxic-ischemic encephalopathy,HIE)脑损伤严重程度的关系.方法 选取 2017 年 1 月～2022 年 3 月广元市中心医院分娩的HIE新生儿 72 例为研究对象(研究组);同期健康的足月新生儿 75 例为对照组.实时荧光定量PCR检测血清中miR-139-5p,HDAC4 表达水平.酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清GFAP水平.Logistic回归分析影响HIE患儿重度脑损伤发生的因素.结果 与对照组相比,研究组血清GFAP(1.30±0.37ng/L vs 0.50±0.15ng/L),HDAC4 相对表达水平(2.05±0.39 vs 1.02±0.21)升高,miR-139-5p相对表达水平(0.63±0.14 vs 1.01±0.22)和NBNA评分(33.20±1.43分 vs 39.85±2.23分)降低,差异具有统计学意义(t=17.304,20.046,12.436,21.424,均P＜0.05);与轻中度组相比,重度组血清GFAP(1.61±0.47ng/L vs 1.16±0.33ng/L),HDAC4(2.43±0.37 vs 1.87±0.40)相对表达水平升高,miR-139-5p相对表达水平(0.38±0.10 vs 0.74±0.16)和NBNA评分(30.52±1.54分 vs 34.46±1.38 分)降低,差异具有统计学意义(t=4.690,5.669,9.900,10.884,均P＜0.05).Logistic回归分析显示,miR-139-5p低表达,HDAC4高表达,低NBNA评分,低出生后 1 min内Apgar评分是影响HIE患儿重度脑损伤发生的危险因素(Wald χ2=5.772～6.969,OR=1.519～1.709,均P＜0.05).Pearson分析显示,血清miR-139-5p表达水平与GFAP,HDAC4 呈负相关(r=-0.416,-0.579,均P＜0.05),血清HDAC4表达水平与GFAP呈正相关(r= 0.437,P＜0.05).Spearman分析显示,血清miR-139-5p表达水平与NBNA评分、出生后1 min内Apgar评分、出生后5 min内Apgar评分呈正相关(r= 0.398,0.367,0.348,均P＜0.05);血清HDAC4 表达水平与NBNA评分、出生后 1 min内Apgar评分、出生后 5 min内Apgar评分呈负相关(r=-0.364,-0.345,-0.332,均P＜0.05).结论 HIE患儿血清中miR-139-5p表达降低,HDAC4 表达升高,miR-139-5p,HDAC4与HIE患儿脑损伤严重程度有关.

目的 探究微小RNA(miR)-139-5p靶向受体相互作用蛋白激酶(RIPK)1/RIPK3/混合系列蛋白激酶结构域蛋白(MLKL)信号通路对慢性脑低灌注(CCH)大鼠认知障碍的影响.方法 将60只SPF级SD大鼠采用随机数字表法分为假手术组(Sham组)、模型组(Model组)、miR-NC组、miR-139-5p mimic组、miR-139-5p mimic+RIPK1抑制剂Nec-1组(miR-139-5p mimic+Nec-1组),每组12只.除Sham组外,其余组均采用永久性结扎双侧颈总动脉构建CCH模型.采用新物体识别实验、Morris水迷宫实验评价大鼠的认知功能;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测大鼠海马组织谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素6(IL-6)水平.实时荧光定量PCR(qPCR)法检测大鼠海马组织miR-139-5p及RIPK1、RIPK3、MLKL mRNA表达.Western blot法检测大鼠海马组织RIPK1、RIPK3、MLKL、突触素(SYP)、突触后密度蛋白95(PSD95)、α-突触核蛋白(α-SYN)蛋白的表达.双萤光素酶报告基因实验验证miR-139-5p和RIPK1的靶向关系.结果 与Sham组相比,Model组大鼠分辨系数降低,目标象限停留时间缩短,海马组织miR-139-5p、GSH-Px、SOD水平降低,SYP、PSD95蛋白表达降低(P＜0.05),逃避潜伏期延长,海马组织MDA、TNF-α、IL-6水平升高,RIPK1、RIPK3、MLKL mRNA和蛋白、α-SYN蛋白表达升高(P＜0.05).与Model组、miR-NC组相比,miR-139-5p mimic组相关指标的表达趋势与上述相反(P＜0.05).Nec-1进一步促进了上调miR-139-5p表达对CCH大鼠认知功能的恢复(P＜0.05).miR-139-5p和RIPK1存在结合位点.结论 上调miR-139-5p可能通过靶向抑制RIPK1/RIPK3/MLKL信号通路减轻CCH大鼠的认知障碍.

目的:探讨精神分裂症患者及正常人群血浆外泌体微小RNA(miRNA)的差异表达,初步了解差异表达miRNA在精神分裂症病程发展中的作用.方法:采用高通量测序技术检测48 例精神分裂症患者和48 名健康对照者的血浆外泌体miRNA的表达水平,构建miRNA差异表达谱.预测表达差异显著的miRNA的靶基因,再对靶基因进行GO功能注释和KEGG通路分析,确定差异表达miRNA的主要生物学功能及其可能参与的信号通路.结果:与对照组相比,精神分裂症患者血浆外泌体共筛选出353 个miRNA显著异常表达,其中157 个表达上调,196 个表达下调.通过GO富集和KEGG分析,上述差异表达的miRNAs主要涉及神经元细胞体、谷氨酸能突触、神经元间突触、突触前和突触膜等细胞组成,并主要参与轴突新生、化学突触传递调节、跨突触信号调节等生物过程,可能通过MAPK信号通路、PI3K Akt信号通路、TNF信号通路、Wnt信号通路、FoxO信号通路、多巴胺能突触及Hippo等信号通路参与精神分裂症的发生和发展过程.结论:经药治疗精神分裂症患者血浆外泌体中miRNAs存在显著的差异性表达,miRNA-206、miR-142-5p、miR-139-5p、miR-133b等miRNA可能通过MAPK信号通路、PI3K Akt信号通路等在精神分裂症的发生发展过程中发挥重要作用.

目的 探讨微小RNA-34家族(miR-34s)对结直肠癌细胞同源重组修复的作用及调控机制.方法 分别在2种结直肠癌细胞系(HCT116和HT29细胞)和2种非结直肠癌细胞系(HeLa和U2OS细胞)中过表达miR-34c-5p,应用蛋白质印迹法检测polo样激酶1(PLK1)蛋白表达水平.过表达miR-34a-5p、miR-34b-5p和miR-34c-5p以及回转PLK1,应用蛋白质印迹法检测PLK1和第139位丝氨酸磷酸化的组蛋白H2AX(γH2AX)蛋白表达水平,分析miR-34s与PLK1以及DNA损伤的关系.使用DR-GFP/Ⅰ-SceI报告质粒检测miR-34a-5p、miR-34b-5p和miR-34c-5p对同源重组修复效率的影响.qRT-PCR法检测miR-34a-5p、miR-34b-5p和miR-34c-5p对PLK1 mRNA表达水平的影响.生物信息学预测和双荧光素酶报告基因实验验证miR-34a-5p、miR-34b-5p和miR-34c-5p与PLK1 mRNA的结合位点.分别在p53wt和p53-/-HCT116细胞中过表达miR-34a-5p、miR-34b-5p和miR-34c-5p,分析p53在PLK1调控过程中的作用.结果 miR-34c-5p在HCT116、HT29、HeLa、U2OS细胞中均可抑制PLK1蛋白表达,t值分别为13.317、8.129、6.802和15.934,均P<0.001.过表达miR-34a-5p、miR-34b-5p和miR-34c-5p可抑制PLK1蛋白(F=44.191,P<0.001)和mRNA(F=26.076,P<0.001)表达水平以及上调γH2AX蛋白表达水平(F=5.368,P=0.026),回转PLK1可部分逆转DNA损伤.过表达miR-34a-5p、miR-34b-5p和miR-34c-5p可降低结直肠癌细胞同源重组修复效率,F=200.739,P<0.001.双荧光素酶报告基因分析显示,miR-34a-5p可靶向结合PLK1 mRNA 3′-UTR.过表达miR-34a-5p、miR-34b-5p和miR-34c-5p均能明显上调p53蛋白(F=6.100,P=0.018)以及mRNA(F=17.401,P=0.001)表达水平.在HCT116 p53-/-细胞中,miR-34a-5p对PLK1 mRNA及蛋白的抑制作用明显减弱,t值分别为-6.471和-4.056,均P<0.05;而miR-34b-5p和miR-34c-5p对PLK1 mRNA及蛋白的抑制作用消失,均P>0.05.结论 miR-34s可通过下调PLK 1表达水平抑制结直肠癌细胞同源重组修复以及诱导DNA损伤的积累.

目的 检测大鼠H9C2心肌细胞缺氧后细胞水平和培养液中循环微小RNA(miRNA,miR)-19a-3p的表达,并探讨其与可能靶基因低密度脂蛋白受体相关蛋白2(LRP2)的关系.方法 对 H9C2心肌细胞进行缺氧(37 ℃,5% CO2,1% O2)0、4、8、12、16、20、24 h处理,采用荧光实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测其在不同时间点细胞水平和培养液中循环 miR-19a-3p的表达水平,使用ELISA、qRT-PCR、Western Blot 检测LRP2在培养液和细胞中mRNA和蛋白表达.结果 H9C2细胞培养液中miR-19a-3p的表达在缺氧0、4、8、12、16 h差异无统计学意义(P>0.05),在缺氧20 h与24 h时,H9C2细胞培养液中miR-19a-3p的表达与缺氧0 h比较,明显高表达(P<0.05);在缺氧20 h与24 h时,H9C2细胞中miR-19a-3p的表达与缺氧0 h比较,明显下降(P<0.05);H9C2细胞培养液中LRP2的表达在缺氧16 h后表达明显升高,缺氧16 h[(675.2 ± 42.4) ng/mL,n=3]、缺氧20 h[(979.4 ± 204.2)ng/mL,n=3]和缺氧24 h[(1456.0 ± 363.6)ng/mL,n=3]较0 h [(245.0 ± 10.84)ng/mL,n=3]明显升高(P<0.05);H9C2细胞中LRP2 mRNA表达水平在缺氧16 h后表达明显升高,缺氧16 h[(0.000503 ± 0.000100)ng/mL,n=3]、缺氧20 h[(0.001303 ± 0.000090)ng/mL,n=3]和缺氧24 h[(0.001617 ± 0.000110)ng/mL,n=3]较0 h[(0.0001394 ± 0.0000600)ng/mL,n=3]明显升高(P<0.05);20 h[(0.235000 ± 0.003427)ng/mL,n=3]与24 h[(0.535000 ± 0.003427)ng/mL,n=3]LRP2蛋白表达与0 h[(0.14010 ± 0.01821)ng/mL,n=3]比较,差异有统计学意义(P<0.01).结论 miR-19a-3p可能参与大鼠H9C2心肌细胞的缺氧坏死过程,并且可能通过调控LRP2而发挥作用.

目的 探讨微小RNA-139-5p(miR-139-5p)在卵巢癌患者血清中的表达及其在诊断和预后判断中的临床价值.方法 选取本院2009年3月至2011年12月收治的34例浆液性卵巢癌患者及同期34例女性健康体检者的血清样本.利用荧光定量PCR (RT-qPCR)方法分别检测34例卵巢癌患者术前术后和34例健康对照妇女血清中miR-139-5p的表达情况,采用t检验进行统计学分析,并分析miR-139-5p在诊断和预后中的临床价值.结果 miR-139-5p在卵巢癌患者术前血清中的表达(9.45±0.40)显著高于健康对照组(3.56±0.10),差异有统计学意义(t=14.340,P＜0.001).卵巢癌患者术后1个月血清miR-139-5p表达水平(5.53±0.49)与术前相比显著降低,差异有统计学意义(t=7.800,P＜0.001).术前血清miR-139-5p表达与卵巢癌患者淋巴结转移(P =0.038)相关,而与年龄(P =0.728)、临床分期(P =0.118)、肿瘤大小(P =0.732)及分化程度(P=0.071)无关.Kaplan-Meier生存曲线显示,miR-139-5p低表达的患者其中位生存时间(44.9个月)长于miR-139-5p高表达患者(25.9个月),差异有统计学意义(x2 =5.721,P=0.017).结论 miR-139-5p在卵巢癌患者血清中表达水平显著增高,可作为卵巢癌患者诊断和预后的潜在生物标志物.