目的:探讨胃癌组织微小RNA-181d-5p(miR-181d-5p)和三基序蛋白22(TRIM22)表达与患者术后5年内生存的关系.方法:收集110例胃癌患者(均是胃腺癌)术中切除的胃癌组织标本及癌旁组织标本.荧光定量PCR和免疫组织化学法分别检测miR-181d-5p和TRIM22蛋白表达.患者术后随访5年,记录生存情况.Star-base数据库预测miR-181d-5p与TRIM22结合位点,并验证miR-181d-5p与TRIM22的靶向关系.比较癌旁和胃癌组织miR-181d-5p、TRIM22表达,不同临床病理特征患者胃癌组织miR-181d-5p、TRIM22表达差异.分析胃癌组织miR-181d-5p、TRIM22表达与患者预后的关系,胃癌患者预后的影响因素,以及胃癌组织miR-181d-5p与TRIM22及它们与不同临床病理特征的相关性.结果:与癌旁组织比较,胃癌组织miR-181d-5p表达升高,TRIM22阳性率降低(均P＜0.05).肿瘤低分化、肌层或外膜浸润、有淋巴结转移、TNM分期Ⅲ期在miR-181d-5p高表达和TRIM22阴性表达患者中的比例分别高于肿瘤高分化、黏膜或膜下层浸润、无淋巴结转移、TNM分期Ⅰ-Ⅱ期(均P＜0.05).miR-181d-5p 与 TRIM22 具有靶向结合位点,miR-181d-5p 可负向调控 TRIM22 表达.miR-181d-5p 高表达和TRIM22阴性表达患者5年总生存率分别低于miR-181d-5p低表达和TRIM22阳性表达患者(均P＜0.05).影响胃癌患者术后5年内生存的独立危险因素有miR-181d-5p高表达、TRIM22阴性表达、肿瘤低分化、肌层或外膜浸润、有淋巴结转移和TNM分期Ⅲ期(均P＜0.05).胃癌组织miR-181d-5p与TRIM22、肿瘤分化程度呈负相关,与浸润深度、淋巴结转移、TNM分期呈正相关(均P＜0.05);TRIM22与肿瘤分化程度呈正相关,与浸润深度、淋巴结转移、TNM分期呈负相关(均P＜0.05).结论:胃癌组织miR-181d-5p表达升高,TRIM22阳性率降低,两者与患者临床病理特征和术后5年内生存有密切关系.

目的 探讨乌头碱通过调控微小RNA-181d-5p(miR-181d-5p)/DEAD-box RNA解旋酶3(DDX3)轴对宫颈癌HeLa细胞增殖、凋亡的影响.方法 使用不同剂量乌头碱处理宫颈癌HeLa细胞,四甲基偶氮唑盐法检测细胞增殖确定给药剂量.将HeLa细胞分为对照组(正常培养,不进行处理),乌头碱低剂量组(4 mg/L)、中剂量组(8 mg/L)、高剂量组(16 mg/L),顺铂组(5 mg/L),乌头碱高剂量+miR-NC组[16 mg/L乌头碱+转染miR-181d-5p siRNA阴性对照(miR-NC)质粒]及乌头碱高剂量+miR-181d-5p低表达组[16 mg/L乌头碱+转染miR-181d-5p小干扰RNA(siRNA)质粒].平板克隆形成实验及流式细胞仪分别检测各组HeLa细胞克隆形成数与凋亡情况;实时荧光定量PCR检测HeLa细胞中miR-181d-5p和DDX3 mRNA表达水平;蛋白免疫印迹法检测HeLa细胞中DDX3、细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、增殖细胞核抗原(PCNA)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、胱天蛋白酶-3(Caspase-3)蛋白表达水平;双萤光素酶报告基因实验验证miR-181d-5p与DDX3的靶向关系.结果 以0.5～64 mg/L的乌头碱分别处理HeLa细胞24 h、48 h、72 h后,对HeLa细胞均有不同程度的抑制作用,选择剂量为4 mg/L、8 mg/L、16 mg/L的乌头碱用于后续实验.与对照组比较,乌头碱低、中、高剂量组及顺铂组HeLa细胞克隆形成数、DDX3 mRNA和蛋白、Cyclin D1、PCNA、Bcl-2 蛋白表达水平依次降低(P＜0.05),凋亡率、miR-181d-5p、Bax、Caspase-3蛋白表达水平依次升高(P＜0.05);与乌头碱高剂量组和乌头碱高剂量+miR-NC组比较,乌头碱高剂量+ miR-181d-5p低表达组HeLa细胞克隆形成数、DDX3 mRNA和蛋白、Cyclin D1、PCNA、Bcl-2蛋白表达水平升高(P＜0.05),凋亡率、miR-181d-5p、Bax、Caspase-3蛋白表达水平降低(P＜0.05);双萤光素酶报告基因检测证实miR-181d-5p与DDX3存在靶向关系.结论 乌头碱可调控miR-181d-5p/DDX3轴,促进miR-181d-5p表达,抑制DDX3表达,进而抑制宫颈癌HeLa细胞增殖,促进细胞凋亡.

目的:探讨微小RNA-181a-5p(miR-181a-5p)靶向BTB与CNC同源基因 2(BACH2)对急性淋巴细胞白血病(ALL)细胞凋亡和侵袭的调控作用,并阐明其作用机制.方法:体外构建BACH2过表达重组质粒(overExpBACH2)、miR-181a-5p inhibitor和inhibitor-NC,转染人ALL T淋巴细胞CCRF-CEM,实时荧光定量 PCR(RT-qPCR)法和免疫荧光染色检测转染效果.将CCRF-CEM 细 胞 分 为 对 照 组、inhibitor-NC 组、miR-181a-5p inhibitor 组、BACH2 过 表 达(overExpBACH2)组、miR-181a-5p inhibitor+ 空 载 体(EV)组 和 miR-181a-5p inhibitor+ overExpBACH2组.CCK-8法检测各组细胞增殖活性,流式细胞术检测G2 期细胞百分率和细胞凋亡率.Western blotting法检测各组细胞中细胞周期蛋白D3(CyclinD3)、B细胞淋巴瘤2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)和含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Caspase-3)蛋白表达水平,Transwell小室实验检测各组细胞中侵袭细胞数,RT-qPCR法检测各组细胞中基质金属蛋白酶9(MMP-9)、基质金属蛋白酶 14(MMP-14)和BACH2 mRNA及miR-181a-5p表达水平.结果:miR-181a-5p inhibitor和overExpBACH2 质粒均成功转染 CCRF-CEM 细胞.与对照组比较,miR-181a-5p inhibitor 组、overExpBACH2组、miR-181a-5p inhibitor+EV组和miR-181a-5p inhibitor+overExpBACH2组细胞增殖活性明显降低(P<0.05),G2 期细胞百分率和细胞凋亡率明显升高(P<0.05),细胞中CyclinD3蛋白表达水平明显降低(P<0.05),Caspase-3蛋白表达水平和Bax/Bcl-2比值明显升高(P<0.05),侵袭细胞数明显减少(P<0.05),细胞中MMP-9和MMP-14 mRNA及miR-181a-5p表达水平明显降低(P<0.05),BACH2 mRNA 表达水平明显升高(P<0.05).与miR-181a-5p inhibitor组和overExpBACH2组比较,miR-181a-5p inhibitor+overExpBACH2组细胞中上述指标变化趋势更明显.结论:miR-181a-5p可靶向BACH2进而调控ALL细胞侵袭和凋亡,为临床靶向治疗ALL提供了新的靶点.

目的 筛选早期甲状腺乳头状癌(PTC)特征性微小RNA(miRNAs,miR)表达谱,旨在寻找一种无创早期诊断PTC标志物.方法 采用基于实时荧光定量聚合酶反应(PCR)的miRNA芯片分析10例早期PTC特征性miRNAs表达谱,采用10例甲状腺结节组织作对照鉴定和验证PTC特征性标记;同时在100例早期PTC患者术前和术后7d外周血、100例甲状腺结节患者外周血、以及100例健康人外周血标本中进行验证分析.结果 与癌旁正常组织比较,早期甲状腺乳头状癌组织中有20种miRNAs表达存在差异,其中11种miRNAs(hsa-miR-21-5p、hsa-miR-31-5p、miR-34a等)上调、9种miRNAs(hsa-miR-15a-Sp、hsa-miR-16-5p 、hsa-miR-26a-5p等)下调;hsa-miR-181 b-5p在良性甲状腺结节标本中表达上调.hsa-miR-21-5p、hsa-miR-146a-5 p、hsa-miR-155-5p、hsa-miR-221-3p、hsa-miR-222-3p、hsa-miR-181b 6种miRNAs在PTC患者术前血清中的表达显著高于健康对照组(六者在PTC组和健康对照组表达中位数分别为:hsa-miR-21-5p(8.25比3.38)、hsa-miR-146a-5p(13.63比3.42)、hsa-miR-155-5p(10.83比3.49)、hsa-miR-221-3p(18.63比3.82)、hsa-miR-222-3p(22.74比3.92)、hsa-miR-181b(9.52比3.43),均P=0.000.术后7d血清hsa-miR-146a-5p、hsa-miR-221-3 p、hsa-miR-222-3p水平均显著下调(均P=0.000).结论 筛选出hsa-miR-146a-5p、hsa-miR-221-3p、hsa-miR-222-3p 3种miRNAs分子组合作为早期PTC外周血循环miRNAs指纹图谱,有助于PTC早期诊断.

巨噬细胞按表型和分泌的细胞因子主要分为两种不同的极化类型,即发挥"促炎和杀伤"作用的M1型极化和主导"抗炎和修复"功能的M2型极化.越来越多的研究发现,非编码RNA可靶向调控巨噬细胞极化通路中的关键蛋白而影响巨噬细胞极化状态,介导多种疾病的发生发展.非编码RNA(miRNA、lncRNA和circRNA)在调控巨噬细胞极化中发挥重要作用.其中,促进M1型巨噬细胞极化的miRNA主要有miR-27a、miR-223及let-7d-3p,促进M2型巨噬细胞极化的miRNA主要有miR-181、miR-93、miR-1246及miR-26a.lncRNA E330013P06、TCONS_00019715及基因间转录超保守RNA uc.306在M1巨噬细胞中高表达,lncRNA KCNQ1OT1、lncRNA Mirt2、lncRNA GAS5、、lncRNA cox-2及lncRNA MALAT1主要影响M2型巨噬细胞极化.circHECTD1、circZC3H4 RNA及mcircRas-GEF1B亦可调节M1/M2平衡,是肿瘤研究的热点.

目的:探讨微小RNA-181d-5p(microRNAmiR-181d-5p)对人结肠癌细胞凋亡的影响及机制.方法:采用miR-181d-5p抑制物转染人结肠癌细胞系HCT116细胞,流式细胞术检测细胞凋亡情况,Real-time PCR和Western blot技术检测细胞miR-181d-5p、第10染色体同源缺失性磷酸酶-张力蛋白基因(PTEN)、黏附斑激酶(FAK)、B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、半胱天冬蛋白酶3(Caspase-3)mRNA和PTEN、FAK、p-FAK、Bcl-2、激活型Caspase-3(cleaved Caspase-3)蛋白表达,Targetscan软件在线预测及双荧光素酶实验分析miR-181d-5p和PTEN的调控关系.结果:与阴性对照组比较,miR-181d-5p抑制物组miR-181d-5p mRNA表达明显下调(P＜0.01),凋亡细胞明显增加(P＜0.01),PTEN mRNA表达水平明显上调(P＜0.01),Bcl-2 mRNA表达水平明显下调(P＜0.01),PTEN、cleaved Caspase-3蛋白表达水平明显升高(P＜0.01),p-FAK、Bcl-2蛋白表达水平显著下调(P＜0.01),其余各组之间差异均无统计学意义(P＞0.05);Targetscan软件预测显示PTEN基因3'UTR含有miR-181d-5p的结合位点,双荧光素酶结果显示与突变型PTEN 3'UTR联合miR-181d-5p模拟物组相比,野生型PTEN3'UTR联合miR-181 d-5p模拟物组荧光素酶活性明显降低,差异有高度统计学意义(P＜0.01).结论:miR-181d-5p可通过靶向调控PTEN抑制人结肠癌细胞凋亡,可成为结肠癌临床分子靶向治疗的潜在靶点.

目的 通过分析缺氧缺血性脑病(HIE)动物模型中信使RNAs(mRNAs)及微小RNAs(miRNAs)差异表达谱明确HIE发病过程中关键miRNAs及其调控途径.方法 18只新生7 d SD大鼠按随机数字表法分为缺氧缺血组及假手术组,每组9只;并进一步按照造模后不同时间分为0 h、1 d、7 d 3个亚组,每个亚组3只.缺氧缺血组大鼠采用改良Rice法制作HIE模型,假手术组大鼠仅分离左侧颈总动脉,不行血管结扎等操作.取2组大鼠大脑皮层120 mg行总RNA提取及质检、测序,建立mRNAs及miRNAs表达谱;同时应用在线靶基因预测软件TargetScan,miRanda和PITA对差异miRNAs和与之对应的同组mRNAs进行匹配,预测其信号通路和相关靶基因.结果 (1)对各组mRNAs测序结果进行富集分析发现,与同时间段假手术组比较,0 h组缺氧缺血大鼠mRNAs的生物学特征主要体现在细胞定位,细胞增殖迁移以及血管发育等方面,与补体、抗原呈递,肿瘤坏死因子信号通路以及细胞因子受体作用有关;1 d组缺氧缺血大鼠生物学特征主要体现在单一生物体信号,应对外界刺激以及血管发育等方面,与补体、抗原呈递,粘附以及细胞外基质受体作用有关;7 d组缺氧缺血大鼠生物学特征主要体现在细胞定位,单一生物体信号以及细胞粘附等方面,与补体、抗原呈递以及细胞因子受体作用相关.(2)将miRNAs测序中差异表达的miRNAs与同组mRNAs测序结果比对后发现rno-miR-181b-5p,rno-miR144-3p,rno-miR-873-5p,rno-miR-411-5p,rno-miR-132-3p,rno-miR-486,rno-miR-127-5p,rno-miR-6321的表达存在差异,且这些miRNAs主要参与HIE不同阶段的炎症反应及神经功能调节.结论 miRNAs可能通过复杂的负性调控网络调节炎症反应和神经功能,进而参与HIE的发生发展.

目的 探讨脑梗死病人血清微小RNA(miR)-181水平与神经功能转归的关系及其靶向调控的细胞因子.方法 选择2017年1月—2018年12月我院收治的130例急性脑梗死病人,根据治疗后30 d改良Rankin量表(mRS)评分将病人分为预后良好组(mRS评分0～4分)与预后不良组(mRS评分5～6分);另选取同期体检的60名健康志愿者作为对照组.收集病人临床特征及实验室指标数据,检测血清miR-181及血管内皮生长因子(VEGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、胰岛素样生长因子-1(IGF-1)、脑源性神经营养因子(BDNF)含量.结果 脑梗死病人血清miR-181、VEGF、bFGF水平均明显高于对照组,血清IGF-1、BDNF水平均明显低于对照组(P<0.05);预后良好组基线美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)评分、血清miR-181水平、合并糖尿病比例、同型半胱氨酸(Hcy)、C反应蛋白(CRP)水平明显低于预后不良组,VEGF、bFGF、IGF-1、BDNF水平均明显高于预后不良组(P<0.05).Logistic回归分析结果显示,合并糖尿病、Hcy及miR-181升高、VEGF及BDNF水平降低是脑梗死病人神经功能预后不良的危险因素.结论 急性脑梗死病人血清miR-181水平降低与神经功能预后不良有关.

目的:利用生物信息学方法分析与葡萄膜恶性黑色素瘤转移相关的非编码RNA,以及它们作为竞争性内源RNA的作用机制.方法:从癌症基因组图谱(The Cancer Genome Atlas,TCGA)数据库下载80例葡萄膜恶性黑色素瘤患者的RNA测序数据和临床资料,采用edgeR算法分析转移与非转移患者组织中差异表达(differentially expressed,DE)的长链非编码RNA(lncRNA)、微小RNA(miR)和mRNA,并构建lncRNA-miR-mRNA的竞争性内源RNA(competing endogenous RNA,ceRNA)调控网络,基因富集分析和通路分析研究网络中mRNA的生物学功能.Kaplan-Meier生存曲线分析ceRNA网络中核心RNA与生存率的关系.结果:从发生远处转移的葡萄膜恶性黑色素瘤样本中,共鉴定出346个上调的mRNA,118个下调的miR和45个上调的lncRNA.其中67个mRNA,7个miR和30个lncRNA相互组合形成616个ceRNA单元,并形成了一个具有181条边线ceRNA网络.基因富集分析表明:网络中的mRNA富集在肿瘤生成和转移相关的几个基因本体(Gene Ontology)和信号通路.拓扑分析确定了6个核心lncRNA(LINC00861、LINC02421、BHLHE40-AS1、LINC01252、LINC00513和LINC02389)和3个核心mRNA(UNC5D、BCL11B和MTDH).所有核心lncRNA、核心mRNA的表达水平和5个miR(miR-221、miR-222、miR-506、miR-507、miR-876)的表达水平均与总体生存率显著相关(均P<0.05).结论:本研究揭示了几种lncRNA及其相关的ceRNA网络在葡萄膜恶性黑色素瘤转移中的作用,为进一步研究葡萄膜恶性黑色素瘤的发生和/或转移提供了新的方向.

目的 观察长链非编码RNA(LncRNA)LINC00641(LINC00641)在宫颈癌细胞中的表达特征,探讨LINC00641通过微小RNA-181 d-5p(miR-181 d-5p)/真核细胞翻译起始因子4A2(EIF4A2)对宫颈癌细胞增殖的调节作用.方法 选择宫颈癌Hela细胞株,建立空白对照组,构建转染pc-DNA3.1的无关序列组、转染pc-DNA3.1-LINC00641的pc-DNA-LINC00641组、转染pc-DNA3.1-LINC00641-siRNA的si-LINC00641组,转染miR-181 d-5 p inhibitor的miR-181 d-5 p inhibitor组、转染miR-181 d-5 p mimic的miR-181 d-5p mimic组、转染siRNA-EIF4A2的si-EIF4A2组.采用CCK-8实验检测细胞增殖活性,采用双荧光素酶报告基因实验观察LINC00641和miR-181 d-5p、miR-181 d-5p、EIF4A2的靶向关系.选取2019年12月至2021年1月陕西中医药大学第二附属医院诊治的45例宫颈鳞癌且未行术前新辅助放、化疗的女性患者作为研究对象,留取其术后肿瘤组织(宫颈鳞癌组织).另选取45例因子宫肌瘤行子宫全切术,且经病理确诊为慢性宫颈炎的患者,留取其宫颈组织(慢性宫颈炎组织).采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)法检测LINC00641和miR-181 d-5p的表达,采用免疫组化SP法检测EIF4A2和Ki67的表达,采用Pearson检验分析其相关性.结果 生物信息分析显示,LINC00641与miR-181 d-5 p、miR-181 d-5p、EIF4A2具有可能的结合位点.与空白对照组和无关序列组比较,pc-DNA-LINC00641组、miR-181 d-5p mimic组、si-EIF4A2组细胞增殖活性下降,si-LINC00641组、miR-181 d-5p inhibitor组细胞增殖活性升高.双荧光素酶报告基因实验显示,LINC00641与miR-181 d-5p、miR-181 d-5p、EIF4A2具有靶向关系.挽救实验显示,沉默EIF4A2可部分逆转沉默LINC00641和沉默miR-181 d-5p对细胞增殖的促进作用.与慢性宫颈炎组织比较,宫颈鳞癌组织中LINC00641、miR-181 d-5p低表达,EIF4A2高表达(P<0.05).Pearson相关分析显示,LINC00641与miR-181 d-5p、EIF4A2、Ki67呈正相关性,miR-181 d-5p与EIF4A2呈负相关性.结论 LINC00641通过miR-181 d-5p/EIF4A2抑制宫颈癌细胞的增殖,调控肿瘤的形成和进展.