目的:筛选与新生儿支气管肺发育不良(BPD)发病相关的关键转录因子(TF)、微小核糖核酸(miRNA)和信使核糖核酸(mRNA)，并构建了调控网络。方法:从高通量基因表达数据库GEO获取mRNA芯片数据集GSE108756，筛选出的差异表达基因(DEGs)进行京都基因和基因百科全书(KEGG)、基因本体注释(GO)功能富集分析；参照HumanTFDB数据库获取与DEGs对应的TF后利用cytoHubba插件筛选出degree值前10的Hub TF；通过hTFtarget数据库找出Hub TF中7个TF所对应的靶基因；在GSE108756中获取7个TF及其靶基因所对应的探针表达量后做相关性分析，筛选出最终纳入研究的6个Hub TF及所对应的正相关TF-mRNA关系队；利用Targetscan Human数据库获取靶向调控6个Hub TF的miRNAs，并与miRNA芯片数据集GSE166762差异miRNAs取交集后匹配出负向调节的miRNA-TF关系队，最后构建BPD患儿潜在miRNA-TF-mRNA调控网络，进一步筛选出关键miRNA、mRNA。结果:共筛选出201个差异表达基因，KEGG富集结果主要涉及B细胞受体信号通路、造血系统、原发免疫缺陷等作用，GO功能富集分析主要富集在B细胞增殖活化及免疫应答调节细胞表面受体等生物学过程中。与Hub TF(EBF1、TCF4、JUN、BCL11A、SPIB、E2F1)表达谱强关联的正相关下游靶基因有159个，负相关的上游miRNA有120个。BPD患儿发病潜在的关键miRNA-TF-mRNA网络包括has-miR-217-TCF4-Pou2AF1、has-miR-150-5p-E2F1-ADM。结论:本研究构建了新生儿BPD的miRNA-TF-mRNA共调控网络，从转录调控的崭新视角为揭示BPD发病机制奠定理论基础。

目的:探讨骨保护素(OPG)/细胞核因子-κB受体活化因子(RANK)/细胞核因子-κB受体活化因子配体(RANKL)信号通路介导的自噬及微小RNA(miRNA，miR)-217的靶向调控在骨巨细胞瘤(GCT)中作用。方法:在建立肿瘤异种移植模型和体外培养GCT0404细胞的基础上，分为空白对照组，神经钙黏蛋白(N-cadherin)组(miR-217类似物组)，转染miR-217组。评估各组骨巨细胞瘤的活性、增殖及迁移水平；检测miR-217、OPG、RANK、RANKL、自噬相关蛋白5(ATG5)、自噬相关蛋白7(ATG7)、Beclin-1和微管相关蛋白轻链3(LC3)在骨巨细胞瘤细胞中的mRNA和蛋白表达变化；多组间均数比较采用单因素方差分析(ANOVA)，组间比较采用多重极差最小显著性差异(LSD)。结果:(1)miR-217在肿瘤异种移植模型和体外培养GCT0404细胞的调控都显著抑制GCT细胞的增殖和肿瘤细胞的发生[对照组吸光度( A)值为0.620±0.019，inhibitor NC组为0.640±0.019，miR-217 inhibitor组为0.950±0.030，inhibitorNC组和对照组比较，差异无统计学意义( P>0.05)，而miR-217 inhibitor组与inhibitor NC组比较，差异有统计学意义( F＝128.600， P<0.01)]。(2)miR-217抑制GCT细胞的碱性磷酸酶(ALP)活性，并抑制OPG/RANKL/RANK信号通路相关因子及自噬相关蛋白表达(OCN 1.41±0.06，OPG 1.41±0.04，RANKL 0.54±0.01，ATG 50.65±0.12，ATG 70.67±0.03，Beclin-1 0.56±0.10，LC3 0.83±0.04， F＝265.100， P<0.01)。 结论:miR-217可能通过抑制OPG/RANKL/RANK信号通路相关因子表达来抑制GCT自噬，从而抑制GCT的发生。

目的:探讨微小RNA-217(miR-217)对结直肠癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响途径。方法:采用反转录实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测人正常结肠上皮细胞NCM460和人结直肠癌细胞SW620、RKO、HT-29、HCT116中miR-217表达水平。将miR-217模拟物(mimic)与阴性对照(mimic NC)分别转染于RKO细胞系，检测miR-217表达水平。采用细胞计数试剂盒(CCK-8)与平板克隆实验检测细胞增殖活力；采用划痕愈合实验、Transwell实验检测细胞迁移及侵袭能力；采用RT-qPCR与蛋白质印迹法(Western blot)检测沉默信息调节因子1(SIRT1) mRNA与蛋白表达水平。两组间比较采用 t检验，多组间比较采用单因素方差分析(ANOVA)。 结果:miR-217在人结直肠癌细胞系中表达水平降低，其中RKO细胞系明显低于NCM460细胞系[(0.286±0.022)倍比(1.000±0.090)倍， t＝13.360， P<0.01]，差异有统计学意义。RKO细胞系转染miR-217 mimic后，miR-217表达水平高于NC组[(5.276±0.437)倍比(1.000±0.168)倍， t＝15.820， P<0.01]，差异有统计学意义。CCK-8实验表明miR-217 mimic组细胞24、48、72 h吸光度值低于NC组[(0.867±0.030)倍比(1.260±0.0222)倍， t＝18.440， P<0.01]，差异有统计学意义。平板克隆实验表明miR-217 mimic组细胞集落形成能力低于NC组[(80.570±43.320)倍比(116.600±81.230)倍， t＝3.823， P<0.01]，差异有统计学意义。划痕实验及Transwell实验证实miR-217 mimic组细胞迁移及侵袭能力低于NC组[划痕实验：(0.133±0.009)倍比(0.365±0.010)倍， t＝29.960， P<0.01；Transwell迁移实验：(157.000±3.000)倍比(248.300±13.580)倍， t＝11.380， P<0.01；Transwell侵袭实验：(149.000±7.937)倍比(287.000±5.568)倍， t＝24.650， P<0.01]，差异有统计学意义。通过生物信息学分析并筛选出miR-217靶基因人SIRT1，RT-qPCR结果表明miR-217 mimic组细胞中SIRT1 mRNA表达水平低于NC组[(0.682±0.162)倍比(1.000±0.075)倍， t＝3.090， P<0.05]，差异有统计学意义。Western blot表明，转染miR-217 mimic后，结直肠癌细胞中SIRT1蛋白表达水平发生显著下降。 结论:miR-217在人结直肠癌中低表达，且可能通过SIRT1抑制结直肠癌细胞增殖、迁移、侵袭能力。

目的:评价沉默调节蛋白(SIRT1)及其相关微小RNA(miRNAs)在右美托咪定减轻糖尿病小鼠肾损伤中的作用。方法:SPF级雄性C57小鼠，8周龄，腹腔注射1%佐链脲菌素制备糖尿病肾损伤模型。取造模成功的小鼠30只，采用随机数字表法分为5组( n＝6)：糖尿病组(D组)、糖尿病＋右美托咪定组(DD组)、糖尿病＋右美托咪定＋EX527组(DDE组)、糖尿病＋右美托咪定＋miR-34a-3p-agomir组(DDH组)和糖尿病＋右美托咪定＋miR-34a-3p-agomirNC组(DDC)。另取正常小鼠6只作为对照组(C组)。DD组、DDE组、DDH组和DDC组腹腔注射右美托咪定40 μg/kg，每2 h 1次，共3次；DDH组和DDC组右美托咪定给药前72 h分别尾静脉注射miR-34a-3p-agomir、miR-34a-3p-agomirNC 2.5 nmol，每3 d 1次，共2次；DDE组右美托咪定给药前1 h腹腔注射SIRT1抑制剂EX527 10 mg/kg。给药结束后24 h，检测血清IL-6、IL-18、Cr和BUN浓度；取肾组织，检测一氧化氮(NO)及总抗氧化能力(T-AOC)含量、ROS活性，采用Western blot法和RT-PCR法分别检测SIRT1、叉形头转录调节因子3(FoxO3a)、P53及其mRNA表达水平，RT-PCR法检测miR-217、miR-138和miR-34a表达水平。 结果:与C组比较，D组血清IL-6、IL-18、Cr、BUN浓度、肾组织T-AOC和NO含量、ROS活性升高，P53及其mRNA、miR-34a、miR-217和miR-138表达上调，SIRT1及其mRNA、FoxO3a及其mRNA表达下调( P<0.05)。与D组比较，DD组血清IL-6、IL-18、Cr、BUN浓度、肾组织ROS活性和NO含量降低，T-AOC含量升高，SIRT1及其mRNA、FoxO3a及其mRNA表达上调，miR-34a表达下调( P<0.05)。与DD组比较，DDE组和DDH组血清IL-6、IL-18、Cr、BUN浓度、肾组织NO含量和ROS活性升高，T-AOC含量降低，SIRT1及其mRNA、FoxO3a及其mRNA表达下调( P<0.05)，DDE组P53及其mRNA、miR-217、miR-34a和miR-138表达差异无统计学意义( P>0.05)，DDH组P53及其mRNA、miR-34a表达上调( P<0.05)。 结论:右美托咪定减轻糖尿病小鼠肾损伤的机制可能与下调miR-34a表达，进而上调SIRT1/FoxO3表达，降低氧化应激水平有关。

目的 研究桃红四物汤(Taohong Siwu Decoction,THSWD)对缺血性脑卒中的微小RNA(microRNA,miR-NA)表达谱的影响,探讨THSWD治疗缺血性脑卒中的分子机制.方法 建立大脑中动脉闭塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)诱导的局灶性脑缺血大鼠模型,采用单细胞RNA测序技术检测THSWD治疗后MCAO大鼠miRNA表达谱.采用GO和KEGG富集分析方法分析miRNA作用于靶基因的功能.对表达差异显著的miRNA进行RT-qPCR实验验证.结果 THSWD干预后,MCAO大鼠脑梗死区有13个miRNA表达发生变化,其中6个miRNA表达上调,7个miRNA表达下调.利用miRanda进行预测,确定了这13个miRNA的靶基因,构建了miRNA-mRNA网络,通过RT-qPCR验证了其中6个差异表达的miRNA(rno-miR-653-5 p、rno-miR-216 b-5 p、rno-miR-3547、rno-miR-217-5p、rno-miR-758-3p和rno-miR-223-3p).结论 THSWD可以通过逆转某些miRNA的异常表达来治疗缺血性脑卒中.

目的 探究微小RNA 217(miRNA-217)对口腔癌细胞中内质网应激介导的自噬与凋亡的影响及其分子机制.方法 培养人口腔癌细胞和人正常口腔角质形成细胞,实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测细胞中miR-217与高迁移率族蛋白 A2(HMGA2)表达水平;将人口腔癌细胞系SAS分为对照组、miR-NC组、miR-217 mimic组和miR-217 mimic+4-PBA组4组,脂质体法进行转染和内质网应激抑制剂4-苯丁酸处理后,流式细胞术检测细胞凋亡率,Hoechst33342染色观察细胞凋亡情况,细胞免疫荧光染色检测细胞中微管相关蛋白1轻链3(LC3)表达,蛋白质免疫印迹(Western Blot)测定细胞中自噬相关蛋白LC3I、LC3II及Beclin-1的表达水平,RT-qPCR和 Western Blot测定细胞内质网应激相关分子CCAAT/增强予结合蛋白同源蛋白(CHOP)、葡萄糖调节蛋白78(GRP78)及天冬氨酸蛋白水解酶-12(Caspase-12)的表达水平;双荧光素酶报告基因检测实验和 Western Blot验证 miR-217对 HGMA2的靶向作用.结果 与人正常口腔角质形成细胞HNOK比较,人口腔癌细胞HSC3、SAS、SCC15、FaDu中miR-217相对表达量下调而HMGA2相对表达量上调(P<0.05);与对照组比较,miR-217 mimic组SAS细胞凋亡率升高,有大量呈亮蓝色高荧光的凋亡细胞,LC3荧光强度升高,LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值与Beclin-1蛋白相对表达量均上调,GRP78、CHOP、Caspase-12 mRNA相对表达量与蛋白相对表达量均上调(P<0.05);而与 miR-217 mimic组比较,miR-217 mimic+4-PBA组SAS细胞凋亡率下降,呈亮蓝色高荧光的凋亡细胞明显减少,LC3荧光强度降低,LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值与Beclin-1蛋白相对表达量均下调,GRP78、CHOP、Caspase-12 mRNA相对表达量与蛋白相对表达量也均下调(P<0.05);HM-GA2与miR-217在特定区域存在碱基互补现象,且miR-217靶向负调控HGMA2表达.结论 miR-217可能通过促进内质网应激途径诱导口腔癌细胞发生自噬与死亡,其机制可能与靶向负调控HMGA2表达相关.

目的:基于网络药理学筛选中药桑黄治疗肺炎的活性成分,分析桑黄治疗肺炎的有效成分和靶点.方法:利用中药系统药理学数据库和分析平台(TCMSP)软件搜索中药桑黄的成分和作用靶点;通过Uniprot数据库得到基因名称(Gene Name);通过GeneCards找出肺炎对应的靶点,将桑黄和肺炎的靶点进行比对,得到关键靶点.利用Cytoscape 3.9.1软件绘制出桑黄化学成分-肺炎-靶点网络图;通过String平台构建蛋白-蛋白互作(PPI)网络图,采用Cytoscape软件中ClueGo插件对桑黄关键基因进行基因本体论(GO)生物功能富集分析和京都基因和基因组百科全书(KEGG)信号通路富集分析.结果:桑黄主要活性成分有21种,(E)-4-(3,4-dihydroxyphenyl)but-3-en-2-one成分所含靶点最多,包括细胞色素P450家族(CYP450)、人表皮生长因子受体(EGFR)和基质金属蛋白酶(MMP)等.筛选出桑黄的化合物靶点358个,其中217个基因为桑黄-肺炎共同靶点,与肺炎有关的关键基因包括含铜胺氧化酶 3(AOC3)、DNA连接酶1(LIG1)、谷氨酰胺肽酶(ENPEP)、乙醛脱氢酶2(ALDH2)、组蛋白甲基化酶8(PHF8)、基因-溶质载体家族11成员2(SLC11A2)和CYP50等.GO和KEGG富集分析,桑黄主要通过17条代谢途径发挥作用,包括磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号通路、癌症中的微小RNA(miRNA)、化学致癌-受体激活、前列腺癌、癌症中蛋白多糖和脂质、动脉粥样硬化及化学致癌物-活性氧(ROS)等相关途径.结论:(E)-4-(3,4-dihydroxyphenyl)but-3-en-2-one是桑黄成分中对肺炎治疗最有效的化学物质,其作用机制主要与CYP450家族有关.

目的 检测胰腺导管腺癌组织中微小RNA (microRNA,miR)-196b、miR-217与转化生长因子β受体l(transforming growth factor β receptor 1,TGFβR1)蛋白的表达水平,并探讨其临床意义.方法 前瞻性收集2014年3月到2017年3月期间在重庆医科大学附属第二医院行胰腺癌根治术的30例胰腺导管腺癌患者的组织标本(包括胰腺导管腺癌组织及其癌旁组织),利用实时荧光定量聚合酶链反应法检测miR-196b和miR-217的表达水平,采用Western blotting法检测TGFβR1蛋白的表达水平.结果 胰腺导管腺癌组织中miR-196b和TGFβR1蛋白的表达水平均高于癌旁组织(P＜0.001),而miR-217的表达水平低于癌旁组织(P=0.001).胰腺导管腺癌组织中miR-196b的表达水平与TGFβR1蛋白的表达水平呈正相关(r=0.803,P＜0.001),而miR-217的表达水平与TGFβR1蛋白的表达水平呈负相关(r=-0.839,P＜0.001).结论 胰腺导管腺癌组织中TGFβR1蛋白的表达可能同时受miR-196b和miR-217的双向调控,这种双向调控机制可能是制约胰腺导管腺癌发生和发展的重要机制之一,也可能是治疗胰腺导管腺癌的潜在靶点.

目的 探讨微小RNA(miRNA)-155对喉鳞状细胞癌( LSCC) Hep2细胞侵袭能力的影响及其机制.方法 培养LSCC Hep2细胞,分为miRNA-155组、miRNA-155 NC组,分别转染miRNA-155抑制剂(miRNA-155 inhibitor)及miRNA-155阴性对照(miRNA-155 NC).收集两组转染48 h的LSCC Hep2细胞,采用实时荧光定量PCR( qPCR)检测miRNA-155 的表达,CCK-8 法检测细胞活力, Transwell小室检测细胞侵袭能力,Western blot检测细胞中基质金属蛋白酶2(MMP-2)、MMP-9、钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(vimentin)、磷脂酰肌醇-3-羟激酶(PI3K)蛋白、蛋白激酶B(AKT)、p-AKT的表达变化.结果 转染后的LSCC Hep2细胞中,miRNA-155组中miRNA-155相对表达量0. 44 ± 0. 04、光密度(OD)值0. 38 ± 0. 04、细胞侵袭数目(39. 4 ± 4. 3)个,均明显低于miRNA-155 NC组的1. 52 ± 0. 15、0. 68 ± 0. 07、(157. 8 ± 12. 6)个,差异均有统计学意义( t=34. 082、18. 229、43. 531, P值均<0. 01). miRNA-155 组 Hep2 细胞 PI3K/AKT 信号通路中 MMP-2、MMP-9、vimentin、PI3K、AKT、p-AKT蛋白相对表达量分别为0. 38 ± 0. 03、0. 25 ± 0. 02、0. 29 ± 0. 02、0. 28 ± 0. 03、0. 99 ± 0. 05、0. 24 ± 0. 02,均低于miRNA-155 NC组的1. 78 ± 0. 15、1. 56 ± 0. 16、1. 34 ± 0. 12、1. 04 ± 0. 09、1. 17 ± 0. 08、0. 83 ± 0. 08;而E-cadherin表达量为1. 13 ± 0. 10,高于miRNA-155 NC组的0. 31 ± 0. 02:两组比较,差异均有统计学意义(t=29. 345、46. 745、59. 436、34. 217、15. 936、30. 129、44. 621, P值均<0. 01).结论 下调LSCC Hep2细胞中miRNA-155的表达,可降低Hep2细胞的活力和侵袭能力,其机制可能与调控PI3K/AKT信号通路相关蛋白的表达有关.

目的 基于生物信息学分析胃腺癌组织中微小RNA(miRNA)差异表达情况,寻找可作为胃腺癌生物标记物的miRNA.方法 利用癌症基因组图谱(TCGA)数据库下载胃腺癌相关数据集,分析肿瘤组织与正常组织之间miRNA的表达差异.利用Kaplan-Meier曲线进行患者生存分析,筛选具有潜在生物标记物性质(高表达、预后差)的miRNA.利用生物信息学预测miRNA的靶基因,通过基因本体(GO)和京都基因与基因组百科全书(KEGG)进行基因富集分析,以判定差异基因主要影响的生物学功能或者通路.结果 TCGA数据库分析结果发现,相对于45份正常组织,446份胃腺癌组织中存在319个差异表达miRNA,其中下调95个、上调224个.进一步通过生存分析筛选出6个高表达、与预后有关的miRNA(miR-217、miR-216a、miR-200b、miR-1911、miR-675、miR-96),其中miR-217高表达者预后差.胃腺癌组织中miR-217表达量为303.2±55.16,高于正常组织中的84.82±13.42(P ＜0.001).通过Targetscan和miRDB生物信息预测软件对miR-217潜在靶基因取交集,获得151个有效靶基因;GO和KEGG分析结果显示,miR-217的这些靶基因与调节细胞凋亡、细胞周期、大分子代谢、蛋白酶的活性密切相关.结论 利用生物信息学分析发现,与正常组织比较,胃腺癌组织中存在miRNA的差异表达;其中miR-217在胃腺癌组织中表达上调,通过调控靶基因参与相关的信号通路而导致患者预后不良,可成为胃腺癌的生物标记物.