目的:探究过量氟暴露对小鼠睾丸微小RNA（microRNA，miRNA）表达谱的影响，并探讨氟的生殖毒性机制。方法:24只8周龄C57BL/6J雄性小鼠，体重为（23 ± 1）g，按体重采用随机数字表法分为对照组[0 mg/L氟化钠（NaF）]和氟暴露组（50 mg/L NaF），每组12只，处理90 d后麻醉处死小鼠，采集精子检测其数量、活率、畸形率，并对睾丸组织进行HE染色；提取小鼠睾丸组织RNA，利用高通量测序技术检测氟对小鼠睾丸miRNA表达谱的影响，并进行差异表达miRNA筛选及其靶基因预测，同时进行功能注释和通路富集分析；利用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）验证差异表达miRNA的表达量。结果:与对照组[精子数量：（11.30 ± 2.52）× 10 6/ml、活率：（90.07 ± 4.34）%、畸形率：（15.49 ± 3.25）%]相比，氟暴露组小鼠精子数量[（9.01 ± 2.25）× 10 6/ml]和活率[（84.34 ± 4.21）%]均下降（ P = 0.041、0.003），而畸形率[（22.36 ± 6.51）%]上升（ P = 0.003）；且HE染色显示，氟暴露组小鼠睾丸间质间距增大，生精小管管腔内精子数量减少，细胞排列紊乱。通过测序，发现氟暴露组小鼠睾丸中存在34个差异表达miRNA；经qRT-PCR验证，与对照组相比，氟暴露组小鼠睾丸mmu-miR-29b-1-5p（ P < 0.001）、mmu-miR-196a-5p（ P = 0.002）和mmu-miR-196b-5p（ P = 0.031）的表达量均显著上升；而mmu-let-7a-2-3p（ P < 0.001）和mmu-miR-466n-3p（ P = 0.018）的表达量均明显下降，与测序结果一致。通过对差异表达miRNA靶基因的KEGG富集，发现氟暴露可改变小鼠睾丸中轴突导向（axon guidance）信号通路、嗅觉传导（olfactory transduction）通路、神经活动配体-受体相互作用（neuroactive ligand-receptor interaction）通路和溶酶体（lysosome）信号通路等。 结论:氟暴露可能通过改变睾丸中miRNA的表达谱，以及通过介导转录后调节的信号通路进而诱导睾丸损伤。睾丸miRNA可能是氟生殖毒性的潜在生物标志物，可为氟中毒机制的探究提供新思路和观点。

目的:探讨血浆微小RNA（miR）-122和miR-33a与2型糖尿病合并冠心病患者冠状动脉病变程度的相关性。方法:回顾性分析2019年1月至2021年10月徐州市第一人民医院196例2型糖尿病患者的临床资料。其中，合并冠心病81例（合并组），未合并冠心病115例（对照组）。采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应检测血浆miR-122、miR-33a水平，采用酶联免疫吸附法检测血浆N末端B型利钠肽前体（NT-proBNP）水平。合并组患者根据冠状动脉造影结果确定冠状动脉病变支数，并进行Gensini积分评价。采用线性回归模型分析血浆miR-122、miR-33a和NT-proBNP与2型糖尿病患者发生冠心病的关系。绘制受试者工作特征（ROC）曲线，分析血浆miR-122和miR-33a预测2型糖尿病患者发生冠心病的效能。合并组采用Spearman相关法分析血浆miR-122和miR-33a与冠状动脉病变支数的关系，采用Pearson相关法分析血浆miR-122和miR-33a与血浆NT-proBNP和Gensini积分的关系。结果:合并组血浆miR-122、miR-33a和NT-proBNP明显高于对照组[5.76 ± 1.35比1.18 ± 0.33、1.39 ± 0.37比0.65 ± 0.11和（786.87 ± 156.39）ng/L比（103.45 ± 19.27）ng/L]，差异有统计学意义（ P<0.01）。线性回归分析结果显示，2型糖尿病患者血浆miR-122、miR-33a和NT-proBNP与冠心病发生呈正相关（ P<0.01）；ROC曲线分析结果显示，血浆miR-122、miR-33a单独和联合预测2型糖尿病患者发生冠心病的曲线下面积为0.816、0.845和0.912（95% CI 0.744~0.865、0.768~0.892和0.836~0.967）。冠状动脉造影结果显示，单支病变46例，2支病变25例，3支病变10例。3支病变患者血浆miR-122、miR-33a、NT-proBNP及Gensini积分明显高于2支病变患者和单支病变患者[6.52 ± 0.96比4.95 ± 0.85和3.74 ± 0.52、1.45 ± 0.31比1.06 ± 0.25和0.81 ± 0.13、（829.78 ± 62.59）ng/L比（627.48 ± 47.12）和（502.64 ± 38.24） ng/L、（63.89 ± 12.71）分比（42.18 ± 6.03）和（22.36 ± 2.41）分]，2支病变患者明显高于单支病变患者，差异均有统计学意义（ P<0.05）。Spearman相关分析结果显示，合并组血浆miR-122和miR-33a与冠状动脉病变支数呈正相关（ r = 0.879和0.825， P<0.05）；Pearson相关分析结果显示，合并组血浆miR-122和miR-33a与血浆NT-proBNP和Gensini积分呈正相关（miR-122： r = 0.896和0.788，miR-33a： r = 0.871和0.765； P<0.05）。 结论:血浆miR-122、miR-33a水平与2型糖尿病患者冠心病发生及冠状动脉病变程度均相关，可用于指导2型糖尿病患者冠心病的防治。

目的 探究microRNA-196b(miR-196b)、胰岛素样生长因子结合蛋白-3(IGFBP-3)在非小细胞肺癌(NSCLC)组织中的表达及与预后的关系.方法 选取2020年4月-2022年4月在无锡市第二人民医院手术治疗的NSCLC患者78例.收集患者的病历资料,采用实时荧光定量聚合酶链反应检测癌组织、癌旁组织中miR-196b、IGFBP-3的表达.所有患者随访12个月,根据预后结局分为进展组、稳定组.筛查NSCLC患者预后的影响因素,评估组织中miR-196b、IGFBP-3表达对NSCLC患者预后的预测效能.分析癌组织中miR-196b、IGFBP-3不同表达患者生存曲线的差异.结果 进展组临床分期Ⅲ期占比、术前淋巴结转移率均高于稳定组(P＜0.05).进展组癌组织miR-196b相对表达量高于稳定组(P＜0.05),IGFBP-3阳性表达率低于稳定组(P＜0.05).癌组织miR-196b相对表达量高于癌旁组织(P＜0.05),IGFBP-3阳性表达率低于癌旁组织(P＜0.05).多因素逐步Logistic回归分析结果显示:临床分期[(OR)=3.684(95％CI:1.259,10.778)]、术前淋巴结转移[(OR)=3.557(95％CI:1.216,10.408)]、癌组织 miR-196b表达[(OR)=3.979(95％CI:1.359,11.641)]是NSCLC 患者预后的危险因素(P＜0.05),癌组织 IGFBP-3 表达阳性[(OR)=0.220(95％CI:0.075,0.642)]是 NSCLC 患者预后的保护因素(P＜0.05).癌组织miR-196b、IGFBP-3及联合预测NSCLC患者预后的敏感性分别为66.25％(95％CI:0.512,0.797)、60.00％(95％CI:0.496,0.781)、87.50％(95％CI:0.725,0.963),特异性分别为 69.74％(95％CI:0.534,0.825)、76.32％(95％CI:0.603,0.892)、72.37％(95％CI:0.576,0.861),曲线下面积分别为 0.703、0.680、0.805.miR-196b低表达组生存情况优于高表达组(P＜0.05).IGFBP-3阳性表达组生存情况优于阴性表达组(P＜0.05).结论 NSCLC患者癌组织miR-196b、IGFBP-3表达与预后相关,且联合预测NSCLC患者预后效能良好.

目的 分析非小细胞肺癌(NSCLC)患者血清微小核糖核酸-92a(miR-92a)、微小核糖核酸-143(miR-143)、微小核糖核酸-196b(miR-196b)变化及其临床意义.方法 选取70 例NSCLC患者作为NSCLC组,同期选取 70 例肺部良性病变患者为对照组.采用实时定量RT-PCR检测血清miR-92a、miR-143、miR-196b表达量;采用单因素生存分析Ka-plan-Meier绘制3 年生存曲线,采用Pearson相关性分析NSCLC组和对照组血清miR-92a、miR-143、miR-196b水平相关性.结果 NSCLC患者中血清miR-92a、miR-196b表达水平显著高于对照组(P<0.05),血清miR-143 表达显著低于对照组(P<0.05);生存分析显示,血清中miR-92a、miR-196b低表达患者 3 年总生存率均显著高于miR-92a、miR-196b高表达患者(P<0.05);血清miR-143 高表达患者 3 年总生存率均高于低表达组(P<0.05).Pearson相关性分析显示,NSCLC患者中血清miR-92a与miR-196b表达呈正相关性(γ =0.425,P<0.05),miR-143 与miR-92a、miR-196b表达呈负相关(γ =-0.376,-0.356,P<0.05).结论 血清miR-92a、miR-196b在NSCLC患者中表达升高,血清miR-143 表达降低,血清miR-92a、miR-143、miR-196b水平变化可作为NSCLC临床病情评估和预后的重要依据.

目的 探讨原发性肝癌(primary carcinoma of the liver)患者血清微小核糖核酸(microRNA,miR)-196b,微小核糖核酸(microRNA,miR)-520f表达水平及其临床诊断价值.方法 选择 2020 年 6 月～2022 年 6 月攀枝花学院附属医院收治的 73 例原发性肝癌患者作为研究组,患者均符合《原发性肝癌诊疗规范》中的诊断标准;选择同期医院体检的 80 例健康人群作为对照组.抽取研究对象清晨空腹外周静脉血 5ml,采用实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应(real time fluorescent quantitative reverse transcription-polymerase chain reaction,qRT-PCR)检测两组血清miR-196b和miR-520f表达水平.分析不同临床病理特征原发性肝癌患者血清miR-196b和miR-520f表达水平差异,采用Pearson相关性分析探讨血清miR-196b与miR-520f的关系,采用受试者工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线分析血清miR-196b和miR-520f对原发性肝癌的诊断价值.结果 研究组血清miR-196b表达水平(2.73±0.56)明显高于对照组(0.99±0.24),miR-520f表达水平(1.69±0.44)明显低于对照组(3.34±0.64),差异具有统学意义(t=30.578,12.690,均P＜0.05).与Ⅰ～Ⅱ期、中高分化、无淋巴结转移、肿瘤直径＜5cm患者相比,Ⅲ～Ⅳ期、低分化、淋巴结转移和肿瘤直径≥5cm患者血清miR-196b表达水平均升高,miR-520f表达水平均降低,差异具有统计学意义(tmiR-196b=6.919～13.229,tmiR-520f=3.873～7.814,均P＜0.05).Pearson相关性分析显示,原发性肝癌患者血清miR-196b表达水平与miR-520f表达水平呈负相关(r=-0.445,P=0.006).ROC曲线分析显示,血清miR-196b预测原发性肝癌的曲线下面积、截断值、敏感度、特异度及95%置信区间(95%confidence interval,95%CI)分别为0.842,2.55,91.78%,62.50%和 95%CI(0.810～0.874);miR-520f预测原发性肝癌的的曲线下面积、截断值、敏感度、特异度及95%置信区间分别为 0.872,2.43,91.78%,67.50%和 95%CI(0.848～0.906);血清miR-196b联合miR-520f预测原发性肝癌的曲线下面积、敏感度、特异度及95%置信区间分别为0.923,86.30%,87.50%和95%CI(0.891～0.955).结论 原发性肝癌患者血清miR-196b表达水平上调,miR-520f表达水平下调,其表达水平变化与肿瘤直径、临床分期、分化程度和淋巴结转移密切相关,联合检测血清miR-196b与miR-520f能有效提高原发性肝癌的诊断效能.

目的:研究微小RNA(miR)-196b在结直肠癌患者中的表达及其临床意义,探讨过表达miR-196b的结直肠癌细胞对5-氟尿嘧啶(5-FU)的敏感性.方法:在癌症基因组图谱(The Cancer Genome Atlas,TCGA)公共数据库下载结直肠癌患者miRNA测序数据及其对应的临床病理资料,运用SPSS 17.0分析miR-196b在结直肠癌患者中的表达水平以及临床特征;采用瞬时转染的方法在人结直肠癌HCT116细胞中过表达miR-196b,并用MTS法分析过表达miR-196b的细胞对5-FU药物敏感性的变化.结果:miR-196b高表达与结直肠癌患者淋巴结转移及TNM分期相关(P<0.05),与年龄和性别等无相关性.淋巴结转移和远处转移是直肠癌患者生存的独立影响因子(P<0.05),miR-196b的表达水平与患者生存状况无关.过表达miR-196b的HCT116细胞在不同浓度的5-FU作用下,细胞存活率均明显高于对照组(P<0.05).结论:miR-196b可能是结直肠癌患者肿瘤分期和淋巴结转移的分子标志物,并可降低结直肠癌细胞对5-FU的敏感性.

目的 筛选不同转移潜能肝癌细胞株的 microRNA (miRNA)差异表达谱,并预测分析差异表达miRNAs调控的靶基因与功能.方法 提取总RNA进行miRNA芯片分析,通过分析MHCC-97H(高转移)、Hep3B(不转移)两种不同转移潜能肝癌细胞株与正常肝细胞L02比较,以及两种肝癌细胞株相互比较的miRNA差异表达谱,筛选出差异表达明显的miRNAs进行qRT-PCR验证,利用4个靶基因预测软件(TargetScan、miRanda、miRWalk、miRDB)进行靶基因预测,并通过生物信息学分析来探讨候选靶基因的生物学功能.结果 与正常肝细胞 L02相比,肝癌细胞株 MHCC-97H、Hep3B中的 miR-192-5p、miR-215-5p 表达均明显上调,而miR-130a-3p、miR-196a-5p 则明显降低;与不转移肝癌细胞株Hep3B相比,miR-224-5p在肝癌细胞株 MHCC-97H中明显上调,而miR-146a-5p、miR-483-3p、miR-200b-3p则明显降低.qRT-PCR验证结果与芯片结果相一致.结论 MHCC-97H及Hep3B两种转移能力不同的肝癌细胞株的 miRNAs存在差异表达,这些差异表达的miRNAs与肝细胞癌的发生发展、转移侵袭密切相关.

目的 探讨铁蓄积小鼠骨量下降与微小RNA(miRNA,miR)差异性表达的关系.方法 12周龄雄性ICR小鼠(n=12)随机分为两组:铁蓄积组(FAC组)及对照组(Con组),分别腹腔注射枸橼酸铁胺(FAC)及等量生理盐水,干预8周后检测血清铁蛋白,微计算机断层扫描技术(Micro-CT)检测小鼠股骨骨量,并分析相关骨结构参数.小鼠全血分离白细胞提取RNA,进行TaqmanmiRNA芯片检测表达谱差异,实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)检测验证差异miRNA.利用Targetscan及miRDB数据库预测差异miRNA的下游靶基因,并对预测的下游靶基因进行生物信息学分析,包括细胞成分、生物过程、分子功能和京都基因和基因组百科全书(KEGG)通路分析.结果 FAC组干预8周后,血清铁蛋白[(218.2 ±29.5) μg/L]相较于对照组[(30.6±9.9)μg/L]明显升高(P =0.000).股骨三维重建示铁蓄积小鼠骨质结构破坏,骨量、骨小梁厚度(Tb.Th)及骨体积分数(BV/TV)显著下降(P=0.001、0.005、0.021),而骨小梁间隙(Tb.Sp)升高(P=0.000).miRNA芯片结果:初步筛选出20个miRNA表达上调:mmu-miR-29b-3p、mmu-miR-324-3p、mmu-miR-133a-5p、mmu-miR-214-5p、mmu-miR-22-3p、mmu-miR-34a-5p、mmu-miR-31-5p、mmu-miR-143-5p、mmu-miR-423-3p、mmu-miR-223、mmu-miR-155、mmu-miR-106a、mmu-miR-2861、mmu-miR-148a、mmu-miR-96、mmu-miR-449a-5p、mmu-miR-423-Sp、mmu-miR-204-5p、mmu-miR-211、mmu-miR-23b及7个miRNA表达下调:mmu-miR-1 8a-3p、mmu-miR-223-3p、mmu-miR-199a-5p、mmu-miR-196a-5p、mmu-miR-30c-5p、mmu-miR-15b、mmu-miR-130b.其中mmu-miR-423-5p表达差异最为显著,q-PCR验证结果显示miR-423-5p的表达趋势与测序结果一致.Targetscan和miRDB预测并筛选miR-423-5p下游靶基因共91个.生物信息学分析表明miR-423-5p的靶基因在磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)-蛋白激酶B(Akt)、Rap1、Ras及丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路上出现聚集.结论 铁蓄积导致的骨量下降可能与miR-423-5p差异性表达相关.

目的 检测胰腺导管腺癌组织中微小RNA (microRNA,miR)-196b、miR-217与转化生长因子β受体l(transforming growth factor β receptor 1,TGFβR1)蛋白的表达水平,并探讨其临床意义.方法 前瞻性收集2014年3月到2017年3月期间在重庆医科大学附属第二医院行胰腺癌根治术的30例胰腺导管腺癌患者的组织标本(包括胰腺导管腺癌组织及其癌旁组织),利用实时荧光定量聚合酶链反应法检测miR-196b和miR-217的表达水平,采用Western blotting法检测TGFβR1蛋白的表达水平.结果 胰腺导管腺癌组织中miR-196b和TGFβR1蛋白的表达水平均高于癌旁组织(P＜0.001),而miR-217的表达水平低于癌旁组织(P=0.001).胰腺导管腺癌组织中miR-196b的表达水平与TGFβR1蛋白的表达水平呈正相关(r=0.803,P＜0.001),而miR-217的表达水平与TGFβR1蛋白的表达水平呈负相关(r=-0.839,P＜0.001).结论 胰腺导管腺癌组织中TGFβR1蛋白的表达可能同时受miR-196b和miR-217的双向调控,这种双向调控机制可能是制约胰腺导管腺癌发生和发展的重要机制之一,也可能是治疗胰腺导管腺癌的潜在靶点.

目的 探讨微小RNA-20b(miR-20b)对胃癌MGC-803细胞侵袭和迁移的影响.方法 采用脂质体Lipo-fectamine 2000法向MGC-803细胞分别转染miR-20b抑制剂(inhibitor转染组)和miR-20b抑制剂阴性对照(NC组),设不行转染的细胞为未转染组;采用实时荧光定量PCR(QPCR)检测各组转染48 h后的miR-20b水平以评估转染效率,分别采用Tran-swell实验和划痕实验比较各组细胞的侵袭和迁移情况,Western blotting检测基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、磷酸化信号转导激活转录因子-3(p-STAT3)和磷酸化酪氨酸蛋白激酶-1(p-JAK1)的表达情况.结果 QPCR结果显示,未转染组、NC组和inhib-itor转染组的miR-20b水平分别为1.054±0.123、0.987±0.085和0.506±0.092,与未转染组和NC组相比,inhibitor转染组的miR-20b水平降低(P ＜0.05);未转染组、NC组和inhibitor转染组的划痕愈合率分别为(60.21±1.16)％、(62.57±2.06)％和(25.17±2.69)％,穿膜细胞数目分别为(448±39)个、(415±33)个和(196±29)个,与未转染组和NC组相比,inhibitor转染组的划痕愈合率和穿膜细胞数目均降低(P ＜0.05).转染miR-20b抑制剂可降低MMP-9、p-JAK1和p-STAT3的表达水平(P＜0.05).结论 下调miR-20b水平可抑制胃癌细胞侵袭和迁移能力,可能与降低MMP-9表达及抑制JAK/STAT信号通路活性有关,在胃癌靶向治疗中有一定应用前景.